Diagnstico Serolgico de Sfilis Tcnicas no treponmicas

T.M. Rodrigo Colina MoralesLaboratorio de Infecciones de Transmisin SexualSeccin BacteriologaMayo 2014

Generalidades: Sfilis, es una enfermedad infecciosa conocida desde el siglo

XV. No fue hasta 1905 que Fritz Shaudin y Erich Hoffmandescubrieron un microorganismo espiral en una lesinsifiltica secundaria.

Agente causal bacteria Treponema pallidum Perteneciente junto con otros treponemas, borrelias y

leptospiras, a la familia Treponemataceae (Trepo:giro; nema: hebra; hebra que gira)

Diagnstico Serolgico de Sfilis

Diagnstico Serolgico de Sfilis Espiroqueta delgada, enroscada, de 6 a 12um de longitud y

0,25um de dimetro.Mvil , reproduccin por fisin binaria No se colorea (pallidum: plido) ausencia de tincin con

colorantes convencionales Observable por microscopa de campo oscuro o mediante

tincin con Acs especficos antitreponema marcados concolorantes fluorescentes.

Estas espiroquetas son incapaces de desarrollarse en cultivos acelulares.

Diagnstico Serolgico de Sfilis

Historia Diagnstica: Test de Wasserman. (1906) Extraccin alcohlica de tejidos

sifilticos. Acs. sricos por fijacin de complemento.Inespecfica, se producan tambin con extractos de otrostejidos.

Inoculacin de animales Examen directo:Microscopa de campo oscuro Exudado de la lesin Inmediatez y bajo costo Gran rendimiento en etapas en que hayan lesiones,

primaria, secundaria, congnita precoz y recada infecciosa

Diagnstico Serolgico de Sfilis Requerimientos de personal muy capacitado Inespecificidad ante espiroquetas saprfitos presentes en

muestras de mucosa bucal, anal y genital. Fluorescencia Directa (DFA-TP) Tejidos, secreciones y fluidos de lesiones Muestra fijada + Ac monoclonal conjugado c/ FITC Cultivo celular: Slo logrado en clulas epiteliales de conejo.

Mtodo costoso y complejo. Pruebas serolgicas: Pruebas no treponmicas Pruebas treponmicas

Diagnstico Serolgico de SfilisDiagnstico a travs de serologa. Generalmente las pruebas serolgicas se hacen positivas a

las 3-4 semanas de la infeccin.

El husped produce anticuerpos: Contra material lipoidal liberado por las clulas daadas

(reaginas)

Contra material lipoproteico y cardiolipina liberada por lostreponemas (anticuerpos especficos)

Tcnicas no treponmicas

RPR Rapid Plasma Reagin

USR Unheated Serum Reagin

VDRL Venereal Disease Research Laboratory

TRUST Toluidine red Unheated Serum test (no comercializada)

ELISA Se emplea con suero. Utiliza en la fase slida, antgenos del tipo VDRL

Tcnicas no treponmicasPruebas no Treponmicas: Pruebas realizadas con antgeno de naturaleza lipoidal(cardiolipina, lecitina y colesterol). Detectan anticuerpos tipo IgG e IgM anti material lipidicoliberado por clulas del husped daadas y materiallipoproteico de la bacteria. La metodologa que usan es la floculacin en lmina otarjeta. Econmicas y fciles de realizar Nivel aceptable de especificidad y sensibilidad alta

Tcnicas no treponmicasRPR Rapid Plasma Reagin

Reaccin Antgeno-anticuerpo de floculacin en tarjeta. Muestras: suero no calentado (no inactivado), plasma. La suspensin de antgeno contiene partculas de carbn. Usado mayormente como tcnica de screening. Tcnica:

Preparacin de antgeno: no requiere Calibrar:

Rotador: 100 +/- 2 rpm.Aguja calibre 20 (suero)

Tarjetas de reaccin entregadas en el kit Lectura macroscpica

Tcnicas no treponmicasRPR Rapid Plasma Reagin

No existe correspondencia directa entre ttulos de RPR y VDRL

Los cambios en los ttulos, no han podido ser relacionados con tratamiento o las reinfecciones

Se recomienda slo determinacin Cualitativa

Tcnicas no treponmicasUSR Unheated Serum Reagin

Reaccin antgeno-anticuerpo de floculacin en lmina. No requiere inactivacin de las muestras de suero La suspensin de antgeno es estabilizada con EDTA Permite anlisis cualitativo y cuantitativo. Tcnica:

Preparacin de antgeno: No requiere Calibrar:

Rotador: 180+- 2 rpm.Aguja calibre 18 (suero)

Tcnicas no treponmicasUSR Unheated Serum Test

Materiales:Lminas de vidrio 2x3 pulgadas con 12 anillos de parafina ocermica. De 14 mm de dimetro.

De fcil uso, econmica Lectura microscpica

No requiere inactivacin del suero No estandarizado su uso en LCR Presenta 1 a 2 ttulos de diferencia con VDRL Marca Wiener Control de tratamiento

Reaccin antgeno-anticuerpo de floculacin en lmina. Muestras: suero calentado o LCR. El antgeno es una solucin alcohlica incolora que contiene

cardiolipina, colesterol y lecitina purificada para produciruna reactividad estndar.

La solucin salina amortiguada contiene formaldehidoneutro, fosfato disdico, fosfato monopotsico y cloruro desodio.

Permite anlisis cualitativo y cuantitativo.

Tcnicas no treponmicasVDRL Venereal Disease Research Laboratory

Tcnica:Preparacin de antgeno: Laboratorio

Calibrar:Rotador: 180+- 2 rpm.Aguja calibre 18 (suero)Aguja calibre 21 (LCR)Bao termorregulado a 56CTemperatura ambiente de 23 a 29C

Materiales:Lminas de vidrio 2x3 pulgadas con 12 anillos de parafina ocermica. De 14 mm de dimetro.Frascos de vidrio fondo plano de 35 mm de dimetro.

Tcnicas no treponmicasVDRL Venereal Disease Research Laboratory

Econmica Requiere de personal muy capacitado en la preparacin delantgeno y lectura de los resultados Lectura macroscpica Puede presentar en la cuantificacin de las muestras, elfenmeno de prozona

Requiere inactivacin del suero Estandarizada y de eleccin para LCR Tcnica normada para el control de embarazadas Control de tratamiento

Tcnicas no treponmicasVDRL Venereal Disease Research Laboratory

Tcnicas no treponmicasVDRL Venereal Disease Research Laboratory

Tcnicas no treponmicasRPR USR VDRL

APLICACIN Screening ScreeningControl de tratamiento

ScreeningControl de tratamiento

REACCION Floculacin Floculacin Floculacin

EXAMEN Cualitativo Cuali y Cuantitativo Cuali y Cuantitativo

OBSERVACION Macroscpica Microscpica Microscpica

MUESTRA Suero o plasma Suero Suero y LCR

ANTIGENO Listo para usar Listo para usar Se prepara

ESTABILIDAD DEL ANTGENO

Fecha de expiracin

Fecha de expiracin 12 horas

PREPARACION DE LAS MUESTRAS

No requiere No requiere Calentar suero a 56 C por 30 minutos

Resultado ReactivoInfeccin: PresentePasadaFalso positivo

Tratada o no adecuadamente

Resultado No Reactivo

Ausencia de InfeccinInfeccin TratadaFalso NegativoNo descarta sfilis en Incubacin.

Resultado Reactivo

Tcnicas no treponmicas

Tcnicas no treponmicas

CAUSAS DE FALSOS POSITIVOS EN LAS PRUEBAS SEROLGICAS NO TREPONEMICAS PARA LA SIFILISAgudas Inmunizaciones Neumona viral Varicela Paludismo Sarampin Embarazo Herpes genitalMononucleosis Consumo de drogas por va parenteral

Tcnicas no treponmicas

Tcnicas no treponmicas HIV Leptospirosis BorreliosisCronicas Envejecimiento Trastornos autoinmunitarios Lupus eritematoso sistmico Lepra Artritis reumatoide Consumo de drogas por va parenteral NeoplasiasLa manifestacin de la falsa reactividad, generalmente no supera el ttulo de 1:4 o 1:8

Tcnicas no treponmicas

CONCLUSIONES Puesto que no miden anticuerpos especficos frente a T.

pallidum su positividad no asegura enfermedad sifiltica. Una de las grandes ventajas de estas tcnicas es que son

fundamentales para monitorear la eficacia de lostratamientos mediante el descenso de los ttulos sricos enel tiempo pudiendo hasta negativizarse.

Slo la prueba VDRL est validada para la deteccin deanticuerpos no- treponmicos en LCR y, en consecuencia, esel nico til para el diagnstico de neurosfilis, (junto a unatreponmica en suero).

Tcnicas no treponmicas

La evaluacin del tratamiento se debe realizar con lamisma tcnica, dada la diferencia de ttulos entre ellas.

Las ventajas de estas tcnicas estn asociadas a la medianacomplejidad de su realizacin y de su bajo costo.

Las desventajas van asociadas a la inespecificidad quepresenta en algunos casos, otorgando falsos positivos.

En el caso del VDRL, la mayor desventaja va asociada a laescasa disposicin en el mercado, de material de trabajo(lminas, frascos de antgenos). Lo que se contrapone conlas normativa diagnstica vigente y la importancia de statcnica.

Muchas gracias

T.M. Rodrigo Colina M.Encargado Laboratorio ITSe-mail: rcolina@ispch.clFono: 25755434 - 255434