1

2

Una dieta altoÁcido Fólico/bajaVitamina B12 durante la gestación y lactancia, afecta el estrés oxidativo y el perfil de ácidos

grasos en madres y en sus crías

Erika Castaño-Moreno1,2, Valeska Castillo2, Daphne Álvarez2, Miguel Llanos2, Ana María Ronco2

1Estudiante (c) de Doctorado en Nutrición y Alimentos – Universidad de Chile. 2Laboratorio de Nutrición y Regulación

Metabólica, Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos – Universidad de Chile.

Fondecyt #1130188 (AMR), Beca Abraham Stekel 2016 – INTA (EC-M), CONICYT-PCHA/Doctorado Nacional 2017- 21170259, Chile

3

Declaración de Intereses: - No tenemos ningún conflicto de interés que declarar

4

Ácido Fólico y Vitamina B12 en Chile

Fortificación de harina de trigo (2000) →

2.5 mg AF/kg de producto (Informe MINSAL 2011)

Más alta de la Región (David, 2004)

Suplementación con AF → 1000 µg/día (Gúia perinatal MINSAL 2015)

↑ OMS (400 µg/día)

Post-fortificación (2003) → >700 Mujeres en

edad fértl → 23% = B12 <185 pmol/L (Hertrampf, et al,

2003)

↑ Folatos/Vitamina B12 en suero de sangre de CU

de recién nacidos pre-término vs término (Castaño, et

al, 2017)

5

Desbalance ↑ Folatos ↓ Vitamina B12

↓

Castaño, et al, 2017

↓ SAM

PE-DHA

↓ PEMT

PC-DHA

↓LC-PUFA ➜

Alteraciones en el embarazo y mayor

riesgo de daño metabólico en la

descendencia

6

Diseño experimental

Cruza

Preñéz, 19 Días

Cesárea, día 18

Lactancia, 21 días

Destete, día 21

60 días

Eutanasia

Plasma Placentas

Hígado

2 meses

Acondicionamiento

Plasma Hígado

C57BL/6

Growth: Pregnancy, Lactation, young pups (<60 días). (J Nutr. 1993 Nov;123(11):1939-51)

AIN-93 G/M diet. Research Diets, Inc

Control highFA/lowB12

Growth Adults Growth Adults

Calories (Kcal/g) 4.00 3.85 3.96 3.81

Carbohydrates (%) 63.9 75.9 63.9 75.9

Fats (%) 15.8 9.4 15.8 9.4

Proteins (%) 20.3 14.7 20.3 14.7

Folic Acid (mg/kg diet) 2.0 2.0 8.0 8.0

Vitamin B12 (ug/kg diet) 25.0 25.0 5.0 5.0

Homocisteína

TBARS (MDA)

Proteínas oxidadas

Glutatión y Acidos grasos

Crías hembras: C: n= 8. altoAF/bajaB12 : n=13

Crías machos: C: n= 6. altoAF/bajaB12 : n=9

Madres C : n= 5. altoAF/bajaB12 : n=8

7

Cuál fue el efecto de la dieta

altoAF/bajaB12 sobre el estrés oxidativo en placentas e hígado de madres y crías?

8

En madres, una dieta altoAF/bajaB12 induce hiperhomocisteinemia y mayor lipoperoxidación en hígado

p = 0.033

p = 0.008 Homocisteína Malondialdehido

Proteínas oxidadas Glutatión

9

Una dieta altoAF/bajaB12 induce mayor lipoperoxidación en placentas

p = 0.027

Malondialdehido

Glutation

10

En crías, una dieta altoAF/bajaB12 induce mayor peso corporal al destetete

21 28 35 41 49 56 630

5

10

15

20

25

30

Days

Bo

dy W

eig

ht (g

ram

s)

Control highFA/lowB12

*

A

21 28 35 41 49 56 630

5

10

15

20

25

Days

Bo

dy W

eig

ht (g

ram

s)

Control highFA/lowB12

*

B

Curva de Peso

Machos Hembras

11

En crías hembras, una dieta altoAF/bajaB12 induce menor estrés oxidativo y mayor respuesta antioxidante en hígado

Homocisteína Malondialdehido Proteínas oxidadas

Glutathione (nmol/mg

protein)

Control altoAF/bajaB12 Males (n=6) Females (n=8) Males (n=9) Females (n=13)

Reduced GSH 0.13 (0.03 - 0.16) 0.08 (0.07 - 0.09) 0.09 (0.06 - 0.11) 0.18 (0.15 - 0.25)* #

GSSG 0.00 (0.00 -0.00) 0.02 (0.01 - 0.10) 0.06 (0.03 - 0.15)** 0.15 (0.13 - 0.18)

Total GSH 0.07 (0.05 - 0.08) 0.09 (0.06 - 0.39) 0.20 (0.15 - 0.31)*** 0.44 (0.43 - 0.57)

Los datos son presentados como mediana (P25-P75). * p= 0.01; ** p=0.013; *** p= 0.018; p= 0.007, Grupo altoAF/bajaB12 vs Control. # p= 0.005,

p=0.002 crías hembras vs crías machos dentro del grupo altoAF/bajaB12 . Test de Mann Whitney.

Control altoF/bajaB12

12

Cuál fue el efecto de la dieta

altoAF/bajaB12 sobre los ácidos grasos en hígado de madres y crías?

13

En madres, una dieta altoAF/bajaB12 induce menor contenido de AGS, AGM, AGPI, mayor razón n3/n6 y DHA/AαL en hígado

Fatty Acid (mg/100g tissue) Control Group (n=5) highFA/lowB12 Group (n=8) P Value

Total Saturated Fatty Acids 2606 (2283- 2786) 725 (626 - 897) 0.0281

Total Fatty Acid Monounsaturated 2752 (2674 - 2818) 350 (342 - 443) 0.0281

Total Fatty Acids Polyunsaturated 2080 (1864 -2100) 750 (690 - 1034) 0.0281

Total LC-PUFAs 901 (794 - 903) 532 (482 - 715) 0.0570

Total n3 476 (431 - 490) 237 (217 - 323) 0.0281

Total n6 1604 (1433 - 1610) 516 (471 - 711) 0.0281

n3/n6 Ratio 0.30 (0.29 - 0.30) 0.46 (0.41- 0.49) 0.0281

DHA 406.3 (372.1 - 423.3) 221 (205 - 303) 0.0570

EPA 6.4 (6.3 - 11.7) 0.0 (0.0 – 5.1) 0.0160

DHA + EPA 418 (378 - 429) 222 (206 - 305) 0.0404

DHA/Linolenic Acid 10 (9.8 - 11.1) 45 (37 - 49) 0.0446

EPA/Linolenic Acid 0.2 (0.2 - 0.3) 0.1 (0 - 1) 0.4601

AA/Linoleic Acid 0.4 (0.3 - 0.4) 1.4 (1.1 - 1.6) 0.0192

↑ Razón

Producto

Precursor

14

En madres, una dieta altoAF/bajaB12 induce mayor expresión de PPARα y CPT-1 en hígado

Control highFA/lowB120.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Re

lati

ve

Ex

pre

ssio

n (

RQ

) -

CP

T-1

* p=0.0159

n=5 n=4

Control highFA/lowB120.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Re

lati

ve

Ex

pre

ss

ion

(R

Q)

- P

PA

Ra

n=5 n=4

* p=0.0317

Figure 2. Liver of female offspring. (A) PPARα. (B) mRNA expression of CPT-1. (C) mRNA expression of ACOX1.

(D) mRNA expression of FAS.

PPARα y CPT-1 = β-Oxidación mitocondrial.

Control highFA/lowB120.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Rela

tiv

e E

xp

res

sio

n (

RQ

) -

AC

OX

-1

n=5 n=4

Control highFA/lowB120.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

Re

lati

ve

Ex

pre

ss

ion

(R

Q)

- F

AS

n=4 n=4

ACOX-1 = β-Oxidación peroxisomal (Sintesis de AGPI-CL). FAS = Síntesis de AG

15

En crías hembras, una dieta altoAF/bajaB12 induce mayor contenido de AGS, AGM, AGPI y menor razón n3/n6 y DHA/AαL en hígado

Fatty Acid (mg/100g tissue) Control Group (n=8) highFA/lowB12 Group

(n=13) P Value

Total Saturated Fatty Acids 640 (575 - 815) 1470 (1327 - 1781) 0.0012

Total Fatty Acid Monounsaturated 442 (415 - 492) 1766 (1437 - 2158) 0.0012

Total Fatty Acids Polyunsaturated 971 (884 - 1219) 1659 (1568 - 2437) 0.0026

Total LC-PUFAs 564 (495 - 674) 766 (661 - 865) 0.0136

Total n3 237 (109 - 286) 325 (293 - 428) 0.0308

Total n6 734 (675 - 918) 1354 (1288 - 2009) 0.0020

n3/n6 Ratio 0.32 (0.29 - 0.33) 0.22 (0.20 - 0.24) 0.0026

DHA 192.8 (156.6 - 219.5) 269.8 (241.8 – 331.2) 0.0026

EPA 3.5 (0.0 – 7-4) 11.7 (9.7 – 16.6) 0.0040

EPA + DHA 219 (191 - 246) 271 (245 - 333) 0.0538

DHA/Linolenic Acid 16 (15 - 18) 5 (4 - 8) 0.0009

EPA/Linolenic Acid 0.1 (0 - 0.4) 0.2 (0.1 - 0.3) 0.5863

AA/Linoleic Acid 0.77 (0.68 - 0.81) 0.35 (0.27 - 0.49) 0.0016

↓ Razón

Producto

Precursor

16

En crías hembras con dieta altoAF/bajaB12 mayor expresión de PPARα y CPT-1 en hígado

Figure 2. Liver of female offspring. (A) PPARα. (B) mRNA expression of CPT-1. (C) mRNA expression of ACOX1.

(D) mRNA expression of FAS.

PPARα y CPT-1 = β-Oxidación mitocondrial. ACOX-1 = β-Oxidación peroxisomal (Sintesis de AGPI-CL). FAS = Síntesis de AG

Control highFA/lowB120.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Re

lati

ve

Ex

pre

ss

ion

(R

Q)

- C

PT

-1

n=5 n=4

Control highFA/lowB120.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Re

lati

ve

Ex

pre

ss

ion

(R

Q)

- P

PA

Ra

n=5 n=5

Control highFA/lowB120.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Re

lati

ve

Ex

pre

ss

ion

(R

Q)

- F

AS

n=4 n=4

Control highFA/lowB120.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Re

lati

ve

Exp

res

sio

n (

RQ

) -

AC

OX

-1

n=5 n=5

17

Madres

Crías hembras

(60 días)

Placentas

Hígado

↑ Estrés Oxidativo

dieta altoFA/bajaB12

↑ AGPI-CL (DHA y AA)

Conclusiones

Hígado ↓ AGPI-CL (DHA y AA)

↓ Estrés Oxidativo

Plasma Hiperhomocisteinemia Proteger a sus

crías y garantizar

el suministro de

AGE al feto

Crías jóvenes sanas

que no han sido

expuestas a un

desafío fisiológico o

metabólico

18

Agradecimientos

• Financiamiento e Instituciones • Ana María Ronco, PhD. Fondecyt #1130188

• Beca Dr. Abraham Stekel 2016 – INTA – Universidad de Chile

• CONICYT-PCHA/Doctorado Nacional 2017-21170259

• Beca para asistencia a eventos para estudiantes de Doctorado – CONICYT 2018

• Internacionalización: Una estrategia para el fortalecimiento del programa de Doctorado en Nutrición y Alimentos

• Beca Inscripción SLAN 2018 - IUNS

• Equipo laboratorio de Nutrición y Regulación Metabólica - INTA • Valeska Castillo, Bq

• Cynthia Barrera, ND, MSc, PhD(c)

• Nibaldo Ávila (QEPD), Bioterio

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Una dieta altoÁcido Fólico/bajaVitamina B12 durante la gestación y lactancia, afecta el estrés oxidativo y el perfil de ácidos

grasos en madres y en sus crías

Erika Castaño-Moreno1,2, Valeska Castillo2, Daphne Álvarez2, Miguel Llanos2, Ana María Ronco2

1Estudiante (c) de Doctorado en Nutrición y Alimentos – Universidad de Chile. 2Laboratorio de Nutrición y Regulación

Metabólica, Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos – Universidad de Chile.

Fondecyt #1130188 (AMR), Beca Abraham Stekel 2016 – INTA (EC-M), CONICYT-PCHA/Doctorado Nacional 2017- 21170259, Chile

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