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La Enfermedad de
Gumboro Importancia del
Diagnóstico
M TAMAYO
Introducción …..
Uno de los desafíos más grandes de la industria avícola
, es el control de las enfermedades inmunodepresoras
que tienen un impacto directo o indirecto en el
desempeño del ave, así como en la parte económica..
Las enfermedades como Gumboro, Anemia y las
Micotoxinas tienen efecto en la bolsa de Fabricio que es
el principal órgano linfoide de las aves. Por lo tanto el
llevar acabo un estudio morfológico, anatómico y
funcional es extremadamente importante para mantener
la salud de las aves.
La Bursa de Fabricius
•Descubierta por Gerónimo de Fabricius
•Anatomista y Embriólogo Italiano (1537–1619)
•Paso gran parte de su tiempo observando el
desarrollo del embrión de pollo . Publicó dos
importantes obras, La formación del feto(1600) y
la formación del huevo y el pollo (1612), al hacer
estos estudios encontró el órgano que hoy lleva
su nombre.
Introducción
•La enfermedad de Gumboro se observo a partir de 1957 •Aves que adquieren la enfermedad,
– son más susceptibles a otras enfermedades – No responden adecuadamente a las vacunaciones
PRESENTACION
Variantes
Inmuno-supresión severa y no hay mortalidad
Rápida deplesión linfoidea y atrofia bursal sin inflamación previa
Hipervirulentos
Inmunosupresión y alta mortalidad
Fuerte depleción linfoide, además de lesiones histológicas en timo, bazo, médula ósea y tonsilas cecales 10 días pi. Proventriculítis
Expresión
clínica
Clásicos
Inmuno-supresión y baja mortalidad
Inflamación y deplesión linfoidea
Efectos en
Bursa
MANIFESTACION CLÍNICA
MANIFESTACION CLÍNICA
MANIFESTACION CLÍNICA
MANIFESTACION CLÍNICA
MANIFESTACION CLÍNICA
MANIFESTACION CLÍNICA
MANIFESTACION CLÍNICA
MANIFESTACION CLÍNICA
LESIONES
6/10/2015
EL VIRUS
EL VIRUS
• Familia Birnaviridae
• Tamaño: 55-65nm
• RNA: Bisegmentado
• Virión no envuelto
• Existen 2 serotipos: 1, 2
• Virus estable y persistente en campo
20
EPIDEMIOLOGIA
Diagnostico
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Prevalencia
Que tan diseminada está la enfermedad (área, zona,
país)
75000 casos de IBD ( nuevo , viejo , pasado) de 60
millones de aves =0.116% de prevalencia
Incidencia
Riesgo de la enfermedad en un período específico de
tiempo 10000 nuevos casos de IBD de 60 millones de
aves =0.01%
Desafío Riesgo
Basado en el riesgo local de la enfermedad.
Conocimiento sobre vacunas disponibles.
Monitoreo….
Procedimiento..
FTA Cards – Contienen quimicos que inactivan cualquier bacteria o virus en la tarjeta.
– Estable a temperatura ambiente
– Una muestra por circulo para evitar contaminación cruzada de las muestras
• Se realizan perforacion en las tarjetas FTA para analisis
PCR
• PCR – reacción de la polimerasa en cadena– prueba
utilizda para detectar la secuencia de la DNA
• Transcriptasa reverse PCR (RT-PCR) – utilizada para
conocer la secuencia del RNA
• Sequenciación – determina el nucleotido especifico, así
como la secuencia del aminoacido para una muestra en
particular.
• PCR cuantitativo (qPCR) o PCR – prueba que detecta y
cuantifica una secuencia en específico
INFECTIOUS BURSAL
DISEASE
Procesamiento de Imagen… (IP) Tecnología desarrollada por Bruce Stewart Brown en Solvay ( Solvay.- Fort Dodge-Pfizer-Zoetis) Nos permite contar y determinar el porcentaje de linfocitos rpresentes en las muestras de bolsa A partir de un corte histologico de bolsa, la imagen es capturada por una camara óptica conectada a un microscopio. Las imagenes son digitalizadas utilizando un SOFTWARE específico (E-Bursa). El conteo de linfocitos nos da una información muy valiosa , y que nos permite cuantificar la acción de una vacuna/virus en la bolsa .
25% linfocitos
ANALISIS DE IMAGEN
•Que se muestrea
– Bursa fijada en formalina,laminillas
en tinción H&E
•Muestras cronologicas
• Determinan momento de desafío – Colectan5-6 bursas en 3 o 4 momentos.
(21, 28 & 35 dias)
• 21 dias - Determina efectividad de
la vacuna – t 5-6 bursas por parvada a los 21 días.
site
IBD – Analisis de Imagen • Bursas tienen una escala , basada en la tinción de los
linfocitos.
• Tres secciones son analizadas en cada una de las bursas.
• Cada sección se le da un score de 1-50
• 5-6 bursas se analizan por granja y por ave.
29%
Lymphocytes
41% linfocitos
IBD – Image Analysis
• Promedio de cada bursa se coloca en el reporte
• Los resultados se les da un color para rapidamente
identificar el status de la bursa
Table 1. Bursal imaging scores at selected ages
(days)
Flock Farm Name
Ag
e Avg. % B1 B2 B3 B4 B5
1 Farm 1 20 39 42 40 40 41 36
2 Farm 1 31 36 42 30 31 42 42
3 Farm 2 20 38 40 41 37 37 37
4 Farm 2 31 30 33 33 31 24 29
Azul – intacto, negro – depleción moderada , Rojo depleción importante
Muestras de bolsas
•Presionar la bursa dentro del
circulo
•Remover y dejar secar
•Almacenar a T° en un lugar seco
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Análisis PCR
•Como trabaja el análisis de PCR para IBF
•Amplifica una secuencia de 743 pares de base en
la región hipervariable de la proteína viral 2 (VP2)
–Área critica donde se encuentran las diferencias
antigénicas
–Codifica para epítopes neutralizantes
•Las enzimas de restricción,¨buscan¨ específicas
secuencias de nucleótidos cortan al DNA
–El tamaño de las bandas es el resultado del
corte de la región hipervariable..
Tabla de referencia de PCR: Virus Vacunales y de Campo Daral J. Jackwood, Ph.D. The Ohio State University
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10 Gpo 2
Gpo 3'
Gpo 4
Gpo 5
Gpo 6
New Pattern
0
2
4
6
8 172200
370424
Análisis del Arbol (Familiar) Filogénetico Clasificación de los virus por su relación genética
•Un programa de computadora compara los códigos genéticos
•Se determina la relación de los virus basada en los códigos
•Se utiliza para determinar cuando/donde los diferentes virus se separan o divergen de uno a otro
•Los IBDV cercanos estarán más cercanos en el árbol
•Los IBDV distantes estarán en ramas diferentes
Secuenciación
•Las posiciones de los Aminoacidos
•La posición de los aminoacidos 253 y 284
son importantes para la adaptación del virus.
•La gran mayoría de las cepas variantes y de
los vvIBDVs tienen una sustitución en el
aminoacido Proline en la posición p222
(Peak A).
•La falta de prolina en el sitio 222-resulta en
un cambio en la estructura de la región
Amino
Acid 3-Letter 1 letter Amino Acid
3-
Letter 1 letter
Alanine Ala A Leucine Leu L
Arginine Arg R Lysine Lys K
Asparagin
e Asn N Methionine Met M
Aspartic
acid Asp D Phenylalanine Phe F
Cysteine Cys C Proline Pro P
Glutamic
acid Glu E Serine Ser S
Glutamine Gln Q Threonine Thr T
Glycine Gly G Tryptophan Trp W
Histidine His H Tyrosine Tyr Y
Isoleucine Ile I Valine Val V
Arbol filogénetico
• El virus se enlista por Pais, posteriormente los dos siguiente s digitos corresponden al
año de aislamiento.
Analisis filogenético de los amino-ácidos de la región
híper-variable de la proteína viral VP2 de IBDV.
Amino Acid Substitutions (x100) 0
23.9
5 10 15 20
AF133904_Del_E Maternavac_28_1
IBDV_210_201_Colombia M64285_Del_A
AY918948_Lukert AF498631_Brusine_2
AF498632_Bursine_Plus NC_004178_UK661
D00869_Faragher_52-70 ABC86601_2512
D00499_STC IBU30818_Serotype2_Ohio
Ultimos hallazgos.
•Resultados de estudios realizados en Colombia, Venezuela y Mexico demostraron la presencia de diferentes virus de Gumboro, mostrando la mayoría presentaba una secuencia de amino acidos , típica de virus variantes y clásicos
Posición de aminoácidos.
Classi
c 222P Prolina
249Q Glutamina
286T Treonina
318G Glicina
Variant 222T treonina
249K Lisina
286I Isoleucina
318D Ac
Aspártico
México 222T treonina
249Q Glutamina
286T Treonina
318D Ac
Aspártico
COL &
VZLA 222P Prolina
249K Lisina
286I Isoleucina
318G Glicina
Secuenciación de virus
Posicion 253 Posicion 284
Virus Clásico Glutamina Alanina
Virus Hipervirulento
Glutamina Alanina
Vacunas adaptadas a
cultivo celular Histidina Treonina
Vacuna derivada de bolsa..
Glutamina Alanina
UK661
Brazil 90
UK661
28-1
Del-A
Del- E
28-1
Del-A
Del- E
28-1
Del-A
Del- E
28-1
Del-A
Del- E
STC
IBDV types in Latin America
UK661, 28-1
Del-A , Del- E
28-1
Del-A
Del- E
28-1
Del-A
Del- E
UK661,Del-A ,
STC
Argentina
05A17
CONTROL
PREVENCION
•Es muy claro el ver los cambios (shifts) en el virus
de Gumboro en latino america. Existe la
prevalencia de los virus virulentos en Sud
America,
•El continuar con el estudio para IBD nos dara
bases importantes para poder establecer su
control ..
• Conocer la epidemiología del IBD y de otras
enfermedades inmunodepresivas contribuira a los
programas profilácticos a la medidas de las
compañías avícolas.
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