Desarrollo de un sistema inmuno-diagnóstico multiplex para enfermedades infecciosas en

ganado bovino en regiones tropicales

Dr. Juan Heberth Hernández-Medrano

Departamento de Reproducción

FMVZ-UNAM

4 de Junio de 2015

Resumen

• Introducción

– Ganadería en trópico

– Enfermedades

– Métodos de Dx

• Monoplex (simplex) o Multiplex

• Objetivo

• Avances (Resultados Preliminares)

• Conclusiones

Ganadería tropical en México

• Hato nacional (SIINIGA, 2014) ~ 30M de cabezas – ~55% en regiones

tropicales

• Principales sistemas: – Doble propósito y Carne

(engorda o cría) • Bos taurus indicus y cruzas

con Bos taurus taurus

• Estatus reproductivo (Gutiérrez, Lassala & González Padilla, 2012)

– ~500d int partos = 7m abiertos

– 2-4 partos = 8 años edad

% Vacas Gx % Vacas no Gx Días a Gx

33% 67.4% > 120 d

40% Ciclando + 27% Anestro

89% (>210 = 49%)

Enfermedades abortivas y/o desgastantes

• infertilidad: nacimientos, mortalidad embrionaria

• ~ 5% abortos – normal (?)

• De importancia:

– DVB, RIB, LEB, B abortus, Camp spp, Neospora caninum, PTb (Wheelhouse &

Dagleish, 2014; Correa-Segura, 2009)

• DP y carne – Poca información

– Banco de Sueros Bovinos • ~60k a nivel nacional

Fundamento técnica luminex

Regiones

InmunoensayoLectura

Agacoplado Aglibre

Acbio nilado

~100regiones

2lasersRojo–Región/esferaVerde–An cuerpo

Sistemas de Diagnóstico

Monoplex – (ELISA)

• 20-200ul de muestra

• Prueba única por enf

• Costo - $70-$200/muestra (IDEXX®)

• Kits comerciales = variedades Mex?

Multiplex – (LUMINEX®) • ELISA en esfera!

– Varias enfermedades en una muestra (100 analitos)

– 15 de muestra

• Costo - $50-100/muestra

• Tiempo 2h por ensayo

An geno

Acdesc

Acmarcado

Objetivo

Desarrollar y validar un sistema de inmunoensayo multiplex (Luminex) para determinar la exposición a DVB, RIB y LEB en

muestras de sueros de los estados de Chiapas, Guerrero, Tabasco, Tamaulipas y Veracruz.

Banco de Sueros Bovinos

Equipo Luminex

Resultados Preliminares

• IBR (virus) & BVD (ag rec)

1

10

100

1000

10000

NSB BLK Ctrl- Ctrl+

DVB IBR

LUMINEX – Prueba con controles (+) y (-)

Inte

nsi

dad

Med

ia d

e Fl

uo

resc

enci

a (L

og1

0)

Luminex - IBR

• Num de esferas: ~ 100

• Diferentes resultados entre Luminex y IDEXX

1

10

100

1000

NSB Ctrl- Ctrl+ Baja Media Alta

IBR600 IBR300 IBR100

Inte

nsi

dad

Med

ia d

e Fl

uo

resc

enci

a (L

og1

0)

Monitoreo Preliminar

• Total de 103 granjas

• Animales muestreados: NO VACUNADOS

• Pool de muestras por rancho

– 10-12 animales por rancho

• ELISA – IDEXX

– DVB, IBR y Leucosis

• 55% sero(+) a LEB

• 90% sero(+) a DVB y RIB – ~11% sero(+) a IBR o BVD

• Un solo rancho negativo a DVB, RIB y LEB

IBR&BVDpos IBRoBVDpos Pos>3 Neg>3

% 88.3 10.7 38.8 1.0

0

20

40

60

80

100

%delTotal

DatosCombinadosResumen

Monitoreo Preliminar

Conclusiones

• Potencial diagnóstico de Luminex, depende de antígenos disponibles (int o mex) – IBR puede ser adaptable - virus completo (?)

• Presencia de BVD e IBR en la mayoría de ranchos en estado piloto – Pools – identificar individuos

– Identificar positivos y negativos (muy importantes)

– Variedades mexicanas?

Agradecimientos

Depto Reproducción

• MC Ana Rodríguez

• Dr Carlos Gutiérrez

• pMVZ Héctor Nájera

• Dra Lucía Rangel

Depto Genética

• Dr Rogelio Alonso (antígenos)

Gracias !!

Correo electrónico: jheberth@unam.mx

Departamento de Reproducción - FMVZ-UNAM

¡¡Gracias!!

Antígeno

Ac desc

Ac marcado

Sistemas de Diagnóstico • Monoplex – ELISA

– 20-200ul de mta – Prueba única por enf – Costo - $70-$200/mta (IDEXX®) – Kits comerciales = variedades Mex?

• Multiplex (xMAP Luminex®)

– ELISA en esfera! – Varias enfermedades en una muestra

(100 analitos) • 15-50ul de mta

– Costo - $50-100/mta – Tiempo 2h por ensayo

• No hay paneles dx para animales!

Antígeno acoplado

2º Anticuerpo biotinilado

Anticuerpo libre

Cortesía MC Ana D Rodríguez

• IDEXX Leucosis= ~55% (+) RIB & DVB = >90% (+)

Posi ve Nega ve

Leucosis 43.7 56.3

0

10

20

30

40

50

60

%degranjas

Leucosis

Nega vo Posi vo (?)

IBR 3.9 93.2 2.9

0

20

40

60

80

100

%degranjas

IBR

Nega vo Posi vo (?)

DVB 9.7 89.3 1.0

0

20

40

60

80

100

%degranjas

DVB

Fundamento técnica luminex

Regiones

Inmunoensayo Lectura

Ag acoplado Ag libre

Ac biotinilado

* Tomado de :http://ts2.mm.bing.net/th?id=H.4915664237298561&pid=1.7

~100 regiones

2 lasers Rojo – Región/esfera Verde – Anticuerpo

Estatus Reproductivo

• Muestreo (Gutierrez CG, Lassala A, Gonzalez Padilla E, 2012)

– 350K vacas en 8K ranchos

• 80% = 2-4 partos – Edad promedio: 8 años

• >90% empadre contínuo y MN • 33% Gx + 67% vacias – 40% ciclando! • Intervalo entre partos: 500d

– Días abiertos: 7m – Gx a > 120d pp

• Causas: – Nutrición – Macho – INFECCIOSAS – salud del hato?