Iresine Weberbaueri - ARTÍCULO FINAL
-
Upload
daniiel-miranda-zevallos -
Category
Documents
-
view
49 -
download
0
description
Transcript of Iresine Weberbaueri - ARTÍCULO FINAL
Artículo Científico: Iresine weberbaueri FFyB. UNMSM. 2015
DETERMINACIÓN DE CONSTITUYENTES QUÍMICOS Y PARÁMETROS FÍSICOS CUANTITATIVOS GENERALES DE LA FLOR BLANCA (Iresine weberbaueri) EN EXTRACCIÓN ETANÓLICA MIRANDA, D. PEREZ, J. SUSANIBAR, S. VILLAR, K. Laboratorio de Farmacognosia. Departamento Académico de Farmacología, Bromatología y Toxicología. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional Mayor de San Marcos ARTÍCULO CIENTÍFICO 2015 - I
Artículo Científico: Iresine weberbaueri FFyB. UNMSM. 2015
DETERMINACIÓN DE CONSTITUYENTES QUÍMICOS Y PARÁMETROS FÍSICOS CUANTITATIVOS GENERALES DE LA
FLOR BLANCA (Iresine weberbaueri) EN EXTRACCIÓN ETANÓLICA
DETERMINATION OF CHEMICAL CONSTITUENTS AND QUANTITATIVE GENERAL PHYSICAL
PARAMETERS OF THE FLOR BLANCA (Iresine weberbaueri) IN ALCOHOLIC EXTRACTION
Daniel Miranda, Jimy Perez, Sheyla Susanibar, Kaysser Villar.
Laboratorio de Farmacognosia. Departamento Académico de Farmacología, Bromatología y Toxicología.
Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional Mayor de San Marcos
RESUMEN
Se determinaron los constituyentes químicos y
parámetros físicos cuantitativos generales de
un extracto etanólico de flor blanca (Iresine
weberbaueri). Se obtuvo un extracto etanólico,
el cual se filtró para su análisis de parámetros
físicos cuantitativos y determinación de
constituyentes químicos. Se determinó el índice
de refracción, poder rotatorio, pH y se realizó
una cromatografía en capa fina. Los
metabolitos secundarios se determinaron
mediante reacciones de coloración y
precipitación siguiendo el protocolo de tamizaje
fitoquímico conocido. Con los resultados se
evaluaron las posibles aplicaciones
farmacológicas de la especie, comparando con
las propiedades de la familia y género,
concluyendo que es necesario realizar otro
estudio más a fondo sobre las propiedades
farmacológicas de la Iresine weberbaueri.
Palabras clave: Iresine weberbaueri, extracto
etanólico, fitoquímica, flavonoides.
ABSTRACT
The chemical constituents and general
quantitative physical parameters of an ethanol
extract of white flower (Iresine weberbaueri)
were determined. An ethanol extract, which was
filtered for later analysis and quantitative
physical parameters determining chemical
constituents, was obtained. The refractive index
was determined, optical rotation, pH and
chromatography it followed by thin layer. The
secondary metabolites of the species were
determined by color and precipitation reactions
following the protocol known phytochemical
screening. With the results of the chemical
composition of the species, potential drug
applications that can be used, compared with
the properties of the family and gender,
concluding that another study is needed further
on the pharmacological properties they were
evaluated the Iresine weberbaueri.
Keywords: Iresine weberbaueri, ethanol
extract, phytochemical, flavonoids.
INTRODUCCIÓN
Se calcula que el Perú posee unas 25 000
especies de plantas conocidas, de las cuales
cerca de 5354 especies vegetales son
endémicas, y de éstas 1400 especies son
usadas por sus propiedades medicinales y
estas muchas se usan con solo uno
conocimiento tradicional muy pocas tienen una
descripción fisicoquímica que respalde su
actividad.1
En la actualidad hay un gran interés por el
estudio de muchas familias vegetales, donde
gran variedad de especies han sido reportadas
por la aplicabilidad que tienen en la medicina
tradicional y por el potencial farmacológico que
poseen. Esta actividad es atribuida a una gran
cantidad de compuestos químicos
denominados metabolitos secundarios.2 Para la
detección preliminar de los diferentes
constituyentes químicos en las plantas, se ha
desarrollado una serie de métodos, basados
en la extracción de estos con solventes
apropiados y en la aplicación de pruebas de
coloración y precipitación.3
01
Artículo Científico: Iresine weberbaueri FFyB. UNMSM. 2015
METODOLOGÍA
Material botánico: Conformado por las flores de
la especie Iresine weberbaueri (Flor blanca), el
cual fue secado en una estufa y, luego, molido
en un molino de discos artesanal, de forma
manual. (Figura 1)
Obtención del extracto: Se pesaron 50 mg del
polvo (Iresine weberbaueri) y se añadieron 750
mL de etanol. El extracto fue conservado
durante todo el estudio en un frasco ámbar a
temperatura ambiente. (Figura 2)
Para los análisis respectivos, el extracto fue
concentrado en Baño María a 80°C y, cuando
fue necesario, fue diluido con agua destilada.
La determinación del pH se determinó con
papel indicador (tiras reactivas), el poder
rotatorio con un polarímetro y el índice de
refracción con un refractómetro. Para la
determinación del peso específico se realizó la
metodología del picnómetro.
La cromatografía se realizó en capa fina, una
fase móvil (sistema de solventes) B:A:W
(butanol, ácido acético y agua) y como
reveladores se usó la luz ultravioleta y el
tricloruro de aluminio.
Para el análisis e identificación de metabolitos
secundarios se siguió el protocolo de tamizaje
fitoquímico descrito en la Tabla 1.
Tabla 1. Protocolo de tamizaje fitoquímico. Compuestos químicos, pruebas químicas y resultados
positivos correspondientes para la identificación de metabolitos secundarios.
COMPUESTO QUÍMICO
PRUEBA QUÍMICA RESULTADO
POSITIVO
CARBOHIDRATOS V gotas MP. + Rvo. de Molish+ H2SO4 ANILLO VIOLETA
V gotas MP. + Rvo. de Antrona + H2SO4 VERDE - ROJO
COMPUESTOS FENÓLICOS
V gotas MP. + FeCl3 VERDE O AZUL
TANINOS V gotas MP. + Rvo. gelatina PRECIPITADO
BLANCO
AMINOÁCIDOS LIBRES YGRUPOS AMINOS
V gotas MP. + Rvo. Ninhidrina COLOR
VIOLÁCEO
FLAVONOIDES V gotas MP. + Mg metalico + HCl ROJO
TRITERPENOS Y ESTEROIDES
V gotas MP + cloroformo + anhidrido acético + H2SO4 VERDE
ALCALOIDES
V gotas MP. + Rvo. Dragendorf + 0.5 HCl 10% PRECIPITADO
NARANJA
V gotas MP. + Rvo. Mayer + 0.5 HCl 10% PRECIPITADO
BLANCO
SAPONINAS V gotas MP. + dos volúmenes de H2O ESPUMA
GLICÓSIDOS V gotas MP + Rvo. Vainilina VERDE
Fig. 1 Material botánico: Flores de Iresine weberbaueri (Flor blanca)
Fig. 2 Extracto etanólico de Iresine
weberbaueri en frasco ámbar
02
Artículo Científico: Iresine weberbaueri FFyB. UNMSM. 2015
RESULTADOS
Los resultados para los parámetros
fisicoquímicos se detallan en la Tabla 2. En el
análisis del poder rotario se presentaron
dificultades, puesto que nuestro extracto estuvo
muy concentrado en principio, y luego de la
dilución con agua destilada, no presentó el
mismo comportamiento.
El análisis cromatográfico respondió
positivamente para el análisis de flavonoides
(Figura 3)
Los resultados para la identificación de
metabolitos secundarios se exponen en la
Tabla 3 y se evidencian en las Figuras 4, 5, 6,
7, 8 y 9. Se apreciaron las distintas reacciones
de coloración y precipitación.
Tabla 2. Parámetros fisicoquímicos del extracto etanólico de las flores de Iresine weberbaueri.
pH 4 – 5
PODER ROTATORIO Posiblemente DEXTRÓGIRO
ÍNDICE DE REFRACCIÓN
1.369 (26.9 °C) / Cantidad de sólidos = 23.5
PESO ESPECÍFICO
PVACIO = 18.95 g
PAGUA = 29.70 g
PMP = 28.05 g
Fig. 3 Placa cromatográfica del extracto etanólico de Iresine weberbaueri. Se evidencia la presencia de flavonoides
Tabla 3. Resultados del tamizaje fitoquímico realizado al extracto etanólico de Iresine weberbaueri.
COMP. QUÍMICO ENSAYO RESULTADO
CARBOHIDRATOS MOLISH ++
ANTRONA ++
COMP. FENÓLICOS FeCl3 ++
TANINOS GELATINA +
AMINOÁCIDOS LIBRES Y GRUPOS AMINO NINHIDRINA ++
FLAVONOIDES SHINODA ++
TRITERPENOS Y ESTEROIDES LIEBERMAN - BURCHARDT +
ALCALOIDES DRAGENDORFF ++
MAYER +
SAPONINAS H2O -
GLICÓSIDOS VAINILINA +
03
Artículo Científico: Iresine weberbaueri FFyB. UNMSM. 2015
Fig. 4 (De izquierda a derecha) Reacción de Molish, Reacción de Antrona, Reacción de FeCl3,
Reacción de Gelatina, Reacción de Ninhidrina, Reacción de Shinoda, Reacción de Liebermann – Burchardt, Reacción de Dragendorff, Reacción de Mayer, Reacción con H2O, Reacción de Vainilina.
Fig. 5 A) Reacción de Molish: reacción positiva, se observa una coloración parda luego de la formación del anillo superior violeta. B) Reacción de Antrona: reacción positiva, se observa una
coloración verde pálida. Se comprueba la presencia de carbohidratos.
04
Artículo Científico: Iresine weberbaueri FFyB. UNMSM. 2015
Fig. 6 A) Reacción de FeCl3: reacción positiva, se observa una coloración azulada. Presencia de
compuestos fenólicos B) Reacción de Gelatina: trazas, se observa una pequeña opalescencia blanca. Posible presencia de taninos.
Fig. 7 A) Reacción de Ninhidrina: reacción positiva, se observa una coloración púrpura. Presencia de aminoácidos libres y grupos amino B) Reacción de Shinoda: reacción positiva, se observa una
coloración rojiza. Se comprueba la presencia de flavonoides.
05
Artículo Científico: Iresine weberbaueri FFyB. UNMSM. 2015
Fig. 8 A) Reacción de Libermann-Burchardt: trazas, se observa una coloración verdosa. Posible presencia de triterpenos y esteroides B) Reacción de Dragendorff: reacción positiva, se observa
una coloración rojiza por el precipitado naranja. Presencia de alcaloides
Fig. 9 A) Reacción de Mayer: trazas, se observa una opalescencia blanquecina. Presencia de
alcaloides B) Reacción con H2O: reacción negativa, no hubo formación de espuma. Posible ausencia de saponinas. C) Reacción de Vainilina: trazas, se observa una coloración verdosa tenue.
Presencia de glicósidos.
06
Artículo Científico: Iresine weberbaueri FFyB. UNMSM. 2015
DISCUSIÓN
Para la obtención de nuestro extracto, el
solvente usado fue etanol el cual presenta una
constante dieléctrica de 24, en comparación
con el trabajo tesis doctoral (Guevara, 2011)
se utilizó para la extracción, etanol, n-hexano,
diclorometano.4 Esta extracción se realizó
debido a que muchos grupos flavonoides
presentan diferente grado de solubilidad en
distintos solventes, esto se debe básicamente
a la constante dieléctrica del solvente de
modo que la fuerza atractiva entre iones de
distinto carga y la repulsiva de misma carga
no es la prevista por la ley de columb.5 Basado
en esto ocurre una mejor interacción de
sustancia y solvente, y por lo tanto, una mayor
extracción lo cual se evidencia en un extracto
más concentrado y de un color diferente a la
nuestra. Tras obtener el extracto y una vez
realizado la marcha fitoquímica en la tesis
doctoral (Guevara, 2011), se reportó mayora
atracción al usar diclorometano.
De muestra concentrada se utilizó una parte
para medir en el polarímetro el cual se basa en
el siguiente fundamento. Se argumenta en la
parte óptica, está dada por el hecho de que
solo parte de la luz que incide de soluciones
translucidas se proyecta en un prisma de
medición es transmitido debido a esto se
produce una división en 2 zonas una clara y
otra oscura.6 Teniendo conocimiento de este
fundamento la medición coloreada de nuestra
muestra va directamente contra los principios
de medición que rige el fundamento de
nuestra muestra al ser coloreado, absorbe luz
evitando la refracción en el prisma
proporcionado una mala lectura.
Las especies de la familia Amaranthaceae, a la
cual pertenece nuestra especie, poseen
saponinas.7 En nuestro tamizaje fitoquímico se
obtuvieron resultados favorables usando el
alcohol etílico dando positivo en todas las
reacciones a las cual fue sometido, a
excepción de la reacción para la identificación
de saponinas; sin embargo fue positivo para la
reacción de Libermann-Burchardt. Por la
porción esteroide que poseen las saponinas
esteroides, este ensayo puede confirmar su
presencia, pero debe tenerse en cuenta que al
igual que en el caso de los esteroles -y los
esteroides en general- solamente dan un
resultado positivo los que tengan grupos
dienos conjugados reales o potenciales. Sin
embargo otras saponinas como las
triterpenoides también dan positiva la prueba.
Así mismo se puede analizar la presencia de
saponinas mediante el ensayo de hemólisis,
que es mucho más confiable que el de la
espuma. Cuando la muestra contiene taninos,
deben eliminarse antes de realizar la prueba
ya que la interfieren.8 9
La cromatografía en capa fina realizada
comprobó la presencia de flavonoides, esto
por el sistema de solventes usados (B:A:W) y
el revelador de tricloruro de aluminio. Para la
determinación de flavonoides en extractos
crudos de plantas o en fracciones son
especialmente utilizadas la cromatografía de
papel (CP) y la cromatografía de capa fina
(CCF). Por otro lado, son indispensables para
la separación de flavonoides la CP preparativa,
la CCF, la cromatografía de columna (CC) y
especialmente la cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC).10 Se indica también que
mediante la técnica cromatográfica empleada
se pueden identificar compuestos fenólicos en
general y alcaloides, usando como revelador el
reactivo de Dragendorff.11
La presencia de flavonoides y demás
metabolitos secundarios en esta especie son
una puerta abierta a realizar una investigación
más a fondo sobre sus propiedades
terapéuticas. Los flavonoides han demostrado
poseer efectos antimutagénicos y
anticarcinogénicos. Diversos datos
experimentales han demostrado la acción
antiproliferativa y anti- carcinogénica, así como
el papel de agente quimiopreventivo de los
flavonoides.12 Los compuestos polifenólicos
(flavonoides y derivados poliprenilados del
benzoilfloroglucinol) parecen ser los
responsables de las acciones analgésicas,
antiinflamatorias y sobre el sistema nervioso
central encontradas para la especie Hypericum
grandifolium Choisy.13 Estudios presentados
ponen en evidencia que los flavonoides
pueden comportarse como antioxidantes y
prooxidantes, e influyen en ello factores como:
las condiciones del ensayo, la concentración
07
Artículo Científico: Iresine weberbaueri FFyB. UNMSM. 2015
efectiva que se alcance en el sitio donde la
ERO es formada; la estabilidad del radical del
flavonoide formado al donar un átomo de
hidrógeno al radical atacante; la lipofilicidad
para ser captados por la membrana y el pH del
medio. Por esto, a pesar de que usualmente
se asegura que los flavonoides están libres de
toxicidad y efectos secundarios, lo que permite
sus amplios usos terapéuticos, son necesarias
otras investigaciones que profundicen en este
sentido tomando en cuenta que las estrategias
de mercado, seguidas por los fabricantes de
concentrados de flavonoides, consisten en
exagerar sus efectos no tóxicos, la mayoría de
los cuales no están sustentados por ensayos
clínicos regulados, y recomiendan dosis que
pueden sobrepasar a las adquiridas a través
de una típica dieta vegetariana, conduciendo a
la generación de ERO y daño posterior al
ADN.14
CONCLUSIONES
La especie Iresine weberbaueri presenta una
gran cantidad de metabolitos secundarios,
entre ellos, los flavonoides y alcaloides, lo que
la convierte en una especie de alto potencial
terapéutico; sin embargo, es necesario
establecer un estudio a fondo sobre sus
propiedades terapéuticas y cuantificación de
metabolitos secundarios, pues una alta
dosificación de estos pueden resultar muy
tóxicos al ser humano.
La familia Amaranthaceae, en general,
presenta saponinas en su estructura, por lo
que es necesario desarrollar las otras técnicas
de identificación de saponinas a la Iresine
weberbaueri.
AGRADECIMIENTOS
Al Laboratorio de Farmacognosia de la FFyB
de la UNMSM, a sus grandiosas y beneméritas
docentes y al asistente, por su paciencia y
colaboración en el desarrollo del estudio.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Blanca león, Amaranthaceae endémicas del Perú, Rev. peru biol , 2006. 13(2): 18-25
2. Cuca, E., Coy, E., and Macías, V. Análisis fitoquímico preliminar y actividad
antioxidante, antiinflamatoria y antiproliferativa del extracto etanólico de corteza de Zanthoxylum fagara (L.) Sarg. (Rutaceae). Rev Cubana Plant Med. 2011, 16 (1): 43-53.
3. Nikolai Sharapin. Fundamentos de tecnología de productos fitoterapéuticos. Convenio Andrés Bello, 2000
4. Guevara, M. Determinación de actividad
regeneradora en eritema solar de un gel
cosmético a base de extracto de di-cloro
metano. Facultad de Farmacia y
Bioquímica. UNMSM. Lima; 2011.
5. Gutiérrez, E. Química. Madrid: Editorial
Reverté S.A.; 1995. p. 189-190.
6. Aicinbure, A. Manual refractómetro
auxibal, Zuzi. Navarra; 2009. p. 6-8.
7. López, R. Silva, R. Ruiz, S. Aislamiento de
esteroles, bases de amonio y saponinas
de Amaranthus muricatus (Moquin) Gillies
ex Hicken (Amaranthaceae). Acta
Farmacéutica Bonaerense. 2003; 22(2):
101-104
8. Martínez, A. Saponinas esteroides.
Medellín: Universidad de Antioquía; 2001.
6-7
9. Hernández, R. Lugo, E. Díaz, L.
Villanueva, S. Extracción y cuantificación
indirecta de las saponinas de Agave
lechuguilla Torrey. E-Gnosis. 2005; 3(11):
1-9
10. Cartaya, O. Reynaldo, I. Flavonoides:
Características químicas y aplicaciones.
Cultivos tropicales. 2001; 22(2): 5-14
11. Bonilla, P. Pareja, B. Flavonoides de
Ephedra americana (pinco-pinco), acción
biológica sobre el sistema inmunológico
(IgE). Ciencia e Investigación. 2001; 4(1):
57-77
12. Martínez-Flores, S. González-Gallego, J.
Culebras, J. Tuñón, M. Los flavonoides:
propiedades y acciones antioxidantes.
Nutr. Hosp. 2002; 17(6): 271-278
13. Bonkanka, C. Evolución farmacológica de
terpenos y flavonoides de origen vegetal.
Tesis Doctoral. Universidad de la Laguna.
2007
14. Pérez, G. Los flavonoides: antioxidantes o
prooxidantes. Rev. Cub. Invest. Biomed.
2003; 22(1): 48-57
08