Electroforesis capilar
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Electroforesis capilar
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•Alta resolución (105 a 106 platos teóricos)-HPCE •Requiere pequeño volumen de muestra (1-10 nl) •Rápida separación (1 a 45 min.) •Aplicable a todo tipo de sustancias•Automatización •Cuantificación (lineal) •Reproducibilidad•Puede acoplarse a espectrometría de masa•Datos fundamentales
Ventajas de la electroforesis capilar
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Esquema de equipo de CE
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•Proteínas •Péptidos •Amino ácidos •Ácidos nucleicos•Iones inorgánicos•Bases orgánicas•Ácidos orgánicos
Tipos de moléculas que pueden ser separadas por CE
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•Se utilizan altos voltajes 10-30kV.(>500V/cm; 10-20 mA) •Moléculas positivas, negativas o neutras puede separarse. •La separación se realiza en un tubo capilar de sílica fundida cubierta con poliamida para darle flexibilidad. • El tubo capilar tiene 30-100cm. De longitud y 25-100de diámetro interno.•Los grupos hidroxilos de la sílica se disocian dejando el tubo con una carga negativa.
Condiciones de CE
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Tubo capilar de sílica con grupos OH expuestos
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Flujo electroendosmótico
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Migración
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Movilidad en CE= v/E = Q/ 6r
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Modalidad Criterio de separación Sustancias
EC de zona
(CZE)
Densidad de carga Moléculas pequeñas, péptidos, proteínas, DNA pequeño.
Electroenfoque pl Péptidos, proteínas.
Cromatografía micelar electrocinética capilar (MECC)
Densidad de carga y coeficiente de reparto en las micelas, según la hidrofobicidad
Moléculas pequeñas, péptidos, DNA.
EC en gel
Desnaturalizante
No desnaturalizante
Masa molecular
Tamaño y densidad de carga.
Péptidos, proteínas, DNA
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Surfactantes en MECC
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Inyección de la muestra