AISLAMIENTO, CUANTIFICACION E IDENTIFICACION DE PROBIOTICOS A PARTIR DE UN PRODUCTO COMERCIAL

RESUMEN

La implementación de probioticos en la industria alimentaria, ha sido de gran importancia en el mundo en cuanto se refiere a la salud, al incluirlos en alimentos comúnmente consumibles como los son los yogures, los cuales poseen un alto nivel nutricional, los probióticos le permitirán aportar valor añadido a sus productos sin que se vean alteradas sus características sensoriales. Son considerados como probioticos a los microorganismos pertenecientes al grupo latobacillus y bifidobacterium, y son los más usados en la industria de los alimentos.

En la práctica desarrollada en el laboratorio de microbiología de los alimentos, se procedió a hacer un estudio de la presencia de lactobacillus en el yogur con probioticos NORMANDY, este se sometió a una serie de diluciones y a continuación, se realiza una siembra con agar MRS por profundidad, se paso a incubar y posteriormente hacer el conteo de colonias las cuales fueron adquiridas en un proceso de anaerobiosis.

Después de la obtención de las colonias, se realizaron pruebas de confirmación, por medio de pruebas bioquímicas como la tinción de Gram, catalasa, motilidad, VPRM, indol, se busco identificar la cantidad de cultivo probiotico que contenía el yogur analizado.

Palabras claves: Probioticos, yogures, agar MRS, Lactobacillus, bifidobacterium, anaerobiosis, pruebas bioquímicas.

ABSTRACT

Implementation of probiotics in the food industry, has been of great importance in the world as it relates to health, commonly included in consumables such as food are yogurt, which have a high nutritional value, will allow you to bring probiotics value to their products to be altered sensory characteristics. Probiotics are considered to belong to the group of microorganism’s lactobacillus and bifidobacterium, and are most commonly used in the food industry.

In practice developed in the laboratory of food microbiology, proceeded to make a study of the presence of lactobacillus in yogurt with probiotics NORMANDY, this was subjected to a series of dilutions and then performing a MRS agar seeded with depth, step-hatching and subsequently make counting colonies which were acquired in an anaerobic process.

After obtaining the colonies, were tested for confirmation by biochemical tests such as Gram stain, catalase, motility, VPRM, indole, we tried to identify the amount of culture yogurt containing probiotic analyzed.

Keywords: probiotics, yogurt, MRS agar, Lactobacillus, Bifidobacterium, anaerobic biochemical tests.

INTRODUCCIÓN

Los llamados productos probióticos contienen microorganismos vivos y activos una vez que colonizan el intestino. Esto a diferencia de los prebióticos, los cuales estimulan la acción bacteriana, o los simbióticos (asociados a ambas categorías).

Los probióticos son una buena alternativa, natural y sin efectos secundarios para mejorar sensiblemente el funcionamiento intestinal y, por extensión, optimizar nuestra salud, la cual se ve afectada por el estrés, los malos hábitos alimentarios y el abuso de antibióticos, sólo algunos de los factores que pueden afectar negativamente el necesario equilibrio de nuestra flora intestinal.

Estos microorganismos, son de gran aplicabilidad para la salud la implementación de estos cultivos en productos alimenticios ayudan a la prevención de enfermedades y previenen inflamaciones en el colon.

Las especies de Lactobacillus y Bifidobacterium son las más usadas como probióticos, pero la levadura

Saccharomyces cerevisiae y algunas especies de E. coli y Bacillus también pueden ser usadas para este fin, Las bacterias de ácido lácticas (LAB), entre las que se encuentra la especie Lactobacillus, se han usado para la preservación de alimentos mediante fermentación.

En cuanto a la importancia de la actividad de los probióticos cabe decir que los científicos han demostrado su efecto beneficioso en estados patológicos como diarreas, síndrome de colon irritable, vaginitis, infecciones del tracto urinario, desórdenes inmunológicos, estreñimiento, gripe, intolerancia a la lactosa, hipercolesterolemia y alergia alimentaria, entre otras dolencias. Se les atribuye incluso propiedades para frenar las recidivas de tumores malignos en el colon y en las mamas siempre que el nivel de población de microorganismos sea lo suficientemente alto -igual o superior a los 10 millones de células por gramo de contenido- para que ejerza adecuadamente su función. Por tanto, es imprescindible que la ingesta de probióticos sea diaria a fin de mantener

niveles elevados en el ecosistema digestivo.

El colon contiene, carbohidratos dietarios no digeribles y algunos almidones resistentes, prebióticos utilizados como nutrientes por los microorganismos presentes en él (Macfarlane et al., 2006).

Las bacterias que tendrían estos efectos son las que cumplen con una serie de condiciones: existen naturalmente en la flora microbiana intestinal, pueden permanecer vivas durante el tránsito por el intestino delgado y el colon, tienen buena capacidad de adherencia al epitelio intestinal y no son patógenas.

Las estudiadas corresponden principalmente a las que se encuentran en las leches fermentadas, como las mencionadas anteriormente y se utilizan comercialmente dentro de preparados lácteos (Lactobacillus johnsonii La1 y Lactobacillus GG) y también en pastillas.

MATERIALES Y MÉTODOS

Se verificaron los instrumentos apropiados a usar para la elaboración del ensayo microbiológico, determinación de los microorganismos probióticos en el YOGUR DE PROBIOTICOS NORMANDY.

Al tener el material de trabajo adecuado se prosigue a tomar una muestra de 10 gramos del yogur con probióticos en 90 ml de agua peptonada y se homogenizo la mezcla.

Posteriormente se pasa a hacer las diluciones partiendo de la solución madre hasta la disolución 10-8 agregando 1 ml de la solución a 9 ml en un tubo con agua peptonada.

A partir de las disoluciones, fue sembrado en cajas de Petri totalmente esterilizadas 1 ml de las últimas dos

diluciones 10-7 y 10-8 este proceso se hizo por duplicado.

Fueron agregados a las cajas de petri 15 mL de agar MRS fundido y se realizo a hacer una uniformidad con movimientos suaves para que los microorganismos se repartieran en el área total disponible.

Posteriormente de tener todas las cajas con el cultivo y el agar listas, se esperó

unos segundos a que el medio se solidificara por para adicionar una segunda capa de agar MRS lo cual generara una condición de anaerobiosis.

Seguidamente fueron llevadas todas las placas a incubación a 37ºC durante 48 horas, en un envase completamente cerrado, pasa asi generar un ambiente de mas anaerobiosis.

Transcurrido el tiempo de incubación se hizo un análisis a los resultados obtenidos.

Disoluciones 10-7

Disoluciones 10-8

Se presumió que las colonias obtenidas en el análisis eran probioticos y fueron realizadas las pruebas bioquímicas estipuladas en la guía.

Tinción de Gram

Catalasa

Motilidad

Rojo Metilo

ANÁLISIS DE RESULTADOS

En las cajas de petri no se visualizaron colonias típicas de probioticos, aunque si

se presentaron colonias a las cuales se le realizó el conteo respectivo.

Los datos de crecimiento fueron los siguientes:

DILUCIÓN 10-7 10-7 10-8 10-8

N° DE COLONIAS

0 5 152 2

N = ∑C

v [ (1∗n1 )+(0.1∗n2 ) ]∗d

N =5+152+2

1ml [ (1∗2 )+(0.1∗2 ) ]∗0,0000001

N=9,1*106 UFC/gr

Se obtiene una cantidad estimada de microorganismos que no son probióticos de 9,1*106 UFC/gr.

A los microorganismos obtenidos se les realizó las pruebas bioquímicas obteniendo para todos los casos resultados negativos, con lo cual se corrobora la no presencia de probióticos en el yogurt analizado.

El yogurt analizado de marca comercial Normandy no cumplió con la cantidad especificada en su etiquetado de microorganismos probióticos (Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus acidophilus y Bifidubacterium) ya que no presento crecimiento de los mismos en el periodo de incubación de las muestras para las diluciones de 10-7 y 10-8.

Lo anterior se puede atribuir a varios aspectos como lo fue una posible contaminación microbiana en el ambiente o en algún utensilio al momento de sembrar las muestras.

Durante el proceso de fabricación de productos lácteos como el yogurt se desarrollan temperaturas de 75 °C o más para la homogenización de la leche, posteriormente para obtener el yogurt se agregan las bacterias probióticas con el fin de obtener éste producto fermentado. La agregación de estos microorganismos debe hacerse a una temperatura de 45 °C ya que es la óptima para su desarrollo y crecimiento. Debido a lo anterior pudo ser posible la muerte de los microorganismos probióticos en el momento de agregarlos durante el proceso a temperaturas mayores de 48 °c por tiempo prolongados.

El etiquetado de cualquier alimento es de gran importancia para el consumidor ya que en esta se puede observar la presencia o ausencia de ciertas características nutricionales que pueden llegar a ser decisivas para su salud. El hecho de que en un alimento se asegure la presencia de un componente y en estudios se compruebe que no está presente puede traer consigo múltiples demandas para la empresa productora del mismo y suspender su comercialización.

CONCLUSIONES

No se encontró microorganismos probióticos en el yogurt Normandy lo cual representa un engaño para el consumidor.

La empresa debe implementar un estudio de laboratorio, que permita estandarizar el proceso de agregación de los microorganismos probióticos en el yogurt de manera que arroje resultados positivos de presencia en cualquier momento de su vida útil.

Se presentó crecimiento de otros microorganismos no identificados en las muestras de yogurt, que pudo haber sido causado por contaminación del ambiente, contaminación de las personas implicadas en la toma de muestra y siembra de la misma y/o contaminación de los utensilios del laboratorio.

Las pruebas bioquímicas que se llevaron a cabo en los microorganismos dieron todas negativas, constatando así la ausencia de bacterias probióticas.

BIBLIOGRAFIA

PROBIÓTICOS www.conciencia-animal.cl/paginas/temas/temas.php?d=976

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