La técnica de citometría de flujo

como herramienta inmunológica y su

aplicación en el diagnóstico clínico

Zaida I. FelicianoAida M. VegaYainary SegarraDavid G. MendozaBiol 4009 LB1 Dr. Anibal J. Valentín

Objetivos

• Explicar la técnica de citometría de flujo

• Aplicación de la técnica en LLA

• Explicar la importancia de CMF en la detecciónLLA

Citometría de flujo• ¿Qué es la citometría de flujo?

• Capacidad de medir múltiples párametrocelulares

• Técnica clásica utilizada.

• Amplia utilidad en las ciencias.

Citometría de flujoFluorocromos

• Absorbe luz a una determinadalongitud de onda y emite a unasuperior

• Se utilizan unidos a anticuerposespecíficos

• Células en suspensiónalineadas una a una frente a un haz luminoso

• Información:

▫ Originada por la dispersiónde la luz

▫ Generada por la emisión de la luz de los fluorocromos

Citómetro de flujo

Partes fundamentales

• Rayo láser

• Sistema de flujo

• Detectores lumínicos y fluorescentes

• Sistema electrónico de registro de información

Mecanismo de función

Análisis de datos

• Histograma

Análisis de datos

• Gráficos de puntos (Dot plots)

Análisis de datos

• Gráficos de puntos (Fluorescencia)

Parámetros Analizados por Citometría de Flujo

Rev. Inst. Nal. Enf. Resp. Mex. vol.17 no.1 México mar. 2004

Aplicaciones Clínicas

• Diagnóstico basado en el análisis celular

• Aplicaciones pronósticas

• Evaluación y monitorización del tratamiento

Citometría de flujo en la evaluación

de enfermedad mínima residual en

leucemia linfoblástica aguda

Citometría de Flujo en la evaluación de EMR

• EMR - cantidad pequeña de células malignas circulantes o en ganglios linfáticos.

• Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) Resultado: cambios moleculares y celulares

Expresan perfiles anormales de marcadores celulares

Marcadores moleculares

• Combinación de marcadoresmoleculares que identifican los inmunofenotipos en pacientescon LLA

Acta Pediátrica de México Volumen 33, Núm. 4, julio-agosto, 2012

Citometría de Flujo en la evaluación de EMR

• Las células se incuban con los anticuerpos monoclonales adecuados.

• Se reconocen los antígenos expresados (células leucémicas y células normales)

• Expresión diferencial

Acta Pediátrica de México Volumen 33, Núm. 4, julio-agosto, 2012

Acta Pediátrica de México Volumen 33, Núm. 4, julio-agosto, 2012

Aplicación de otros marcadores en la

detección de EMR

Marcadores utilizados paradetecnción EMR

Porcentaje de detección de LLA en células B

TDT/ CD10/ CD19 78%

CD10/CD20/CD19 64%

CD34/CD38/CD19 56%

CD34/CD22/CD19 46%

CD19/ CD34/ CD45 22%

Aplicación de otros marcadores en la

detección de EMR

• TdT/ CD7/cyCD3b – para LLA-T

• Permiten vigilar la presencia de EMR en cualquier fase.

• Alta especificidad de detección de célulasleucémicas.

Importancia de CMF en la detección

LLA

• Método accesible.

• Prueba específica

• Cuantificación directa y precisa de las célulasleucémicas residuales

• Identifica células muertas

• Evalúa el estado de las células hematopoyéticasnormales.

Conclusión

• Técnica rápida, altamente sensible y específica

• Permite la cuantificación directa y precisa de las células leucémicas residuales

• Es posible realizarla en todos los casos estudiados

Referencias

• Juárez-Velázquez R, Pérez-Vera P.Citometría de flujo en la evaluación de enfermedad mínima residual en leucemia linfoblástica aguda. Acta Pediatr Mex 2012;33(4):198-206.

• http://www.medigraphic.com/pdfs/iner/in-2004/in041g.pdf

• Koh DN, Park M, Kim BE, Im HJ, Park CJ, Jang S y cols. Prognostic significance of minimal residual disease detected by a simplified flow cytometric assay during remission induction chemotherapy in children with acute lymphoblastic leukemia. Korean J Pediatr 2010;53(11):957-64.

• http://www.medigraphic.com/pdfs/actpedmex/apm-2012/apm124g.pdf

• Grimwade D, Vyas P, Freeman S. Assessment of minimal residual disease in acutemyeloid leukemia. Curr Opin Oncol 2010;22(6):656-63.

• van der Velden VH, van der Sluijs-Geling A, Gibson BE, te Marvelde JG, HoogeveenPG, Hop WC y cols. Clinical significance of flow cytometric minimal residual disease detection in pediatric acute myeloid leukemia patients treated according to theDCOG ANLL97/MRC AML12 protocol. Leukemia 2010;24(9):1599-606.