MECANISMOS DE RESISTENCIA MICROBIANA Y

DETECCION FENOPICA EN LA PRACTICA CLINICA

GRAM NEGATIVOS

M. Sc. Roberto Ventura FloresBiólogo – Microbiólogo

tiernobacilo@hotmail.com

Tu F-, yo F+

¿QUE ES RESISTENCIA?

Capacidad de un Microorganismo de sobrevivir y

multiplicarse en presencia de antibiótico.

Se estima que hay 10 veces mayor bacterias que células humanas. Por lo

tanto, en la mayoría de los casos, los patógenos tienen que invadir nichos que

ya están ocupados por muchas bacterias residentes perfectamente adaptadas.

En el tracto digestivo, residen un vasto ecosistema microbiano heterogéneo

que comprende hasta 1014 bacterias de más de 400 especies

Trends in Microbiology July 2011, Vol. 19, No. 7

GRAM - NEGATIVE CELL WALL

Nature Reviews l Drug Discovery

Passivetransporter

Activetransporter

Infect Chemother. 2012 Aug;44(4):263-268. Korean.

Introduction of new clases of antibiotics for human 1930 to 2010

(Beta-lactams include Three groups: penicillins, cephalosporins,

and carbapenems)

1928

Sources and movement of antibiotic resistance genes in

the environment.

Genes de resistenciaa tetraciclina

Nature. 2011 Aug 31;477(7365):457-61

Transportador

Fusión

Canal

IMPERMEABILIDAD

EFLUJO

PBP

INACTIVACION ENZIMATICA

MECANISMOS DE RESISTENCIA A BETA LACTAMICOS

Omp F

EVOLUCIÓN DE BETA LACTAMICOS Y BETALACTAMASAS

PENICILINAS CEFALOSP.

1° GEN

CEFALOSP.

2° GEN

MONOBAC-

TAMESCEFALOSP.

3° Y 4° GEN

CARBAPENEMES

Β-lactamasa espectro reducido Hiperproducción + impermeabilidad CLAV

Β-lactamasa espectro extendido ( BLEE) CTXM+ IMPERMCLAV

Cefalosporinas tipo Amp C (BLEE) HIPERPRODUCCIÓN + IMPERMEA CLOX/APB

Carbapenemasas EXTREMAS (KPC, GES-S y otros alelos)

Transportador

Fusión

Canal

EFLUJOHidrofìlico

Hidrofóbico

MERO

C3G, C4G

PIP, AZT

FQ , CMP

TMP

Sin carga

NAL, TET

IMI

OprD OprD

+ ++

- - - -

KPC

¿TODO ESTA DEMOSTRADO?SÍ.

Atte.

tiernobacilo@Hotmail.com

GRACIAS

Está demostrado que desconocemos muchas cosas

M.SC ROBERTO VENTURA FLORESBIOLOGO-MICROBIOLOGO

tiernobacilo@hotmail.com

VISA/ H-VISA /VRSA

MECANISMOS DE RESISTENCIA MICROBIANA Y

DETECCION FENOPICA EN LA PRACTICA CLINICA

GRAM POSITIVOS

DISTRIBUCION DE CIMs VAN en VISA-h-VISA-VSSA

Problemática DE VISA/H-VISA

1. DIFICULTAD DE DETECCION

FIG. 1. Frequency distribution of vancomycin MICs in VSSA, HVISA and VISA strain.

MICROSCANSistema de Microbiología

PANEL: COMBO 33: cocos Gram positivos

BACILOS GRAM POSITIVOS

Enterococcus

Principales mecanismos de resistencia a los

antibióticos por Enterococcus

Ahora alta resistencia de los Enterococcus a los B-lactámicos por los PBP5 de baja afinidad

Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI 2014)

FIN

MECANISMOS DE RESISTENCIA MICROBIANA Y

DETECCION FENOPICA EN LA PRACTICA CLINICA

Mycobacterium tuberculosis

M. Sc. Roberto Ventura FloresBiólogo – Microbiólogo

tiernobacilo@hotmail.com

TUBERCULOSIS EN PERU A LA CABEZA DEL CONTINENTE

• Cada 3 a 4 horas alguien enferma de TB en el Perú, y cada día

se reportan 3 muertes a causa de la infección.

• Un enfermo no tratado puede infectar de 10 a 20 personas por

año.

• Somos el tercer país de América con mayor incidencia de TB y

el primero en severidad de las TB resistentes.

• En el siglo XXI es un país en crecimiento, paradójicamente al

mismo tiempo brotan cepas cada vez mas resistentes.

TRASMISION DE M. tuberculosis

TB MDR se transmite de la misma manera que la

TB sensible

NO

H y EtionamidaE

Z

R

ACCION DE FARMACOS SOBRE M. tuberculosis

The cell envelope of mycobacteria

β-lactámicos

E

Lipoarabinomanano (LAM)Virulentos: residuos de manosaNo virulentos: residuos de arabinosa

RESISTENCIA EN Mycobacterium tuberculosis

• Mecanismos de generación de resistencias:

– Mutacion

– Transducción

– Transformación

– Conjugación

• El M. tuberculosis solo emplea el primero mutación)

(H)

(R)

NT-2013: 4 R3H3

Levofloxacina LfxEtionamida EtoCicloserina CsKanamicina Km

paciente de 65 años, con alto riesgo de morir por estar comprometido un 60% de su pulmón y presentar un diagnostico bacteriológico por tipificación de una tuberculosis atípico. ¿Qué criterios se debe seguir? Si:

a) Paciente se rehúsa a recibir tratamientob) Es de baja condición económicac) Prefiere dar lo poco que tiene como diezmo al pastor evangélico.

DIAGNÓSTICO DEL Mycobacterium tuberculosis

OBSERVACION DIRECTA-Baciloscopía

CULTIVO-Lowenstein Jensen-Ogawa

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD TRADICIONALES-Método de Proporciones

PRUEBAS RAPIDAS-fenotípicas: MODS, GRIESS-Genotípicas: Biología Molecular

BACILOSCOPÍA: Método de Ziehl Neelsen

• Es la herramienta fundamental rutinaria para el diagnóstico y parael seguimiento del tratamiento de los pacientes con tuberculosis.

• No tiene alta sensibilidad porque requiere 5000 a 10000

bacilos/mL de esputo para ser positivo.

LECTURA DE BACILOSCOPIA

Campo N° 1 ………………….(cero BAAR)

Campo N° 80 …………………..(47 BAAR)

Campo N° 100(cero BAAR)

Resultado …… ¿ ?

Frotis Bueno

SIZE OF 2 x 3 CM

Métodos

Aislamiento de Mycobacterium tuberculosis empleandoel Método de Ogawa (INS, 1995; OPS, 2008).

ESPUTO

HIDROXIDO DE SODIO AL 4%

IDENTIFICACION DE CULTIVO

POSITIVO A M. tuberculosis

LECTURA E INTERPRETACION

INCUBACION 37C°/30 DIAS

CULTIVO EN MEDIO OGAWA

ESPUTO: 2 TUBOS

MUESTRA EXTRAPULMONAR: 4 TUBOS

Métodos

Identificación de Mycobacterium tuberculosis empleandoel Método de proporciones (Canetti et al., 1963).

CULTIVO DE

M. tuberculosis

DILUCIONES

(10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 )

IDENTIFICACION DE CULTIVO

PANSENBLE

LECTURA E INTERPRETACION

INCUBACION 37C°/30 DIAS

SIEMBRA EN

LOWENSTEIN JENSEN

b

Fig.1. Sobrevivencia de cultivo pansensible de M. tuberculosis a

Rifampicina a. Cultivo de M. tuberculosis pansensible en medio Lowenstein Jensen.

b. Sobrevivencia M. tuberculosis pansensible en medio Ogawa.

C: control, H: isoniacida, R: rifampicina.

a

METODO DE GRIESS

Se basa en la determinación de

la actividad de reducción de

nitrato en el cultivo de M.

tuberculosis en medio sólido L - J

conteniendo NaN03 (1 g/l) con y

sin droga.

Cepa M. tuberculosis H37RV,

sensible.

C H S H R

Cepa M. tuberculosis resistente a

H y sensible al resto de drogas.

C H S H R

C H S H R

Interpretación

El reactivo de Griess (HCL+ sulfanilamida

+ n-1- naphthylethylenediamine

dihydrochloride)

Lectura

Resultado negativo: Sensible (no se

observa cambio de color)

Resultado positivo: Resistente (se

observa cambio de color de rojo o

violeta intenso)

MDR

Método MODS :

(Método Susceptibilidad Directa por

Observación Microscópica)

J. Clinic. Microbiol. p. 1093–1097 Vol. 45, Nº4

Evaluation of Microscopic Observation Drug Susceptibility Assay for detection of Multidrug-Resistant Mycobacterium tuberculosis.

Girum Shiferaw, Yimtubezinash Woldeamanue Mekdes Gebeyehu, Feven Girmachew, Daniel Demessie, and Eshetu Lemma

• 2000 A.C. - Come un trozo de esta raíz.

• Año 1000 - Comer esas raíces es una costumbre pagana. Repite esta

plegaria.

• 1850 - Esa plegaria es una nueva superstición. Bebe esta porción.

• 1920 - Esa porción está preparada con aceite de serpiente. Toma esta

pastilla.

• 1945 - Esa pastilla es ineficaz. Toma penicilina.

• 1955 - !Oh!… los microorganismos han mutado. Toma tetraciclina.

• 1960-1999 - Otros 39 «oh»… Toma este antibiótico más potente.

• ±2000 - ¡Los microorganismos nos han vencido! Come un trozo de

esta raíz.

Anónimo

«Los microbios siempre tienen la última palabra» (L. Pasteur)

«No siempre son las especies más fuertes, ni las más

inteligentes, las que sobreviven, sino aquellas que mejor

responden a los cambios» (C. Darwin).

FIN