SUCCINODESHIDROGENASA
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Formacin de colores por la accin enzimtica de distintos cromgenos
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SUCCINODESHIDROGENASASccinico !Sal de tetrazolio"incoloro# $Fmarico !Formazan"azl#
%&'( Cortes en criostato)
*&'( Secar e inc+ar en mediodrante ,- min a ./& C' En elmomento de 0acer la tecnica semezclan 1'2 ml de la SO3UCION DE
4E4RA5O3IO "li6ido amarillo# 7
1'% ml del SO3UCION DE SUCCINA4OS1DICO' "li6ido +lanco#
.&'( 3a8ar +re8emente en sero
9siologico :rio',&'( Escrrir 7 9;ar en :ormol salino%-( .1 min'
-&'( 3a8ar +ien en AD'
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H*O
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=ol@clacoloreada
DA"cromgeno#
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NADPH diaforasa
%&'( Cortes por congelacinen criostato'*&'( >oner enSO3UCION INCUADORA
,- min a ./&C'.&'( 3a8ar con sero9siologico :rio',&'( ColocarSO3UCION FOR=O3 SA3INO
%-(.1 min'-&'( 3a8ar en AD'
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>ermea+ilizar el te;idocon n
disol8entede lBpidos
4ras na9;acin)pre:erent
ementepor
3a concentracin delos sstratos "NAD>H 7azl de tetrazolio#
8arBa segn el te;ido oel proceso de 9;acin'
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Esta t@cnicapermitedetectar
neronas 6eepresan laenzimasintasa delido nBtricode na :orma
sencilla 7rpida'
La reaccin es NADPH + tetrazolio =
NADP++ formazn.
Es el:ormazn elprodctocoloreado e
insol+le 6ese pedeo+ser8ar conelmicroscopioptico)
inclso con elelectrnico'
Se asocia a la enzimas sintasas del ido nBtrico en sistemaner8ioso 8asclar'
>roceso >ara3a DeteccinDe 3aActi8idadNAD>H
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DA"cromgeno#
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Formacin de colores por la accin enzimtica de distintos cromgenos
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Reaccinenzimticacon8ierte anossstratossol+les eincolorosenprodctosinsol+les7
coloreados'3os prodctos se depositan en el lgar preciso donde se
prod;o la reaccin) es decir) donde se localiza elenzima'
sstratos son especB9cos para el enzima'
En consecencia) es m7 importante conocer con
eactitd la localizacin 0isto6Bmica de las enzimas'
Se +asa en la capacidad 6e tienen algnas enzimasdel te;ido de mantener :ncional s centro acti8o tras
el proceso de 9;acin'
