Proyecto Informe Final Biotecnología Vegetal

8/18/2019 Proyecto Informe Final Biotecnología Vegetal

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UNIVERSIDAD POLITECNICA SALESIANA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA DE LOS

RECURSOS NATURALES

BIOTECNOLOGIA VEGETAL


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INTRODUCCI2N

El mortiño (Vaccinium floribundum), de la familia Ericaceae, llamado también uva demonte, es una fruta nativa de los páramos ecuatorianos (Loján, 2003). Es un arbusto

peueño, !eneralmente de " a # m de alto. $osee flores blancas con l%neas rosadas,

de unos & mm de lar!o. 'us frutos son baas !lobosas de & a "0 mm de diámetro, de

color prpura oscuro en la madure*, con cáli* persistente en el ápice+ pulpa comestible

de sabor al!o ácido, pero a!radable, con semillas numerosas, peueñas (arc%a,

20"3).

En páramos ecuatorianos es considerada endémica -a sido utili*ada por sus -abitantes

desde tiempos inmemoriales principalmente en el %a de los ifuntos para la

elaboraci/n de la tradicional colada morada. En la actualidad aunue es poco comn se

lo emplea para consumo fresco as% como en ju!os, mermeladas dulces. 'us frutos

tienen contenidos importantes de a*cares, minerales, antioidantes, vitaminas del

complejo 1, minerales como potasio, calcio, f/sforo (orales, 20""). $or sus

propiedades f%sico u%micas presenta la ventaja de ser refri!erado sin alteraci/n de sus

caracter%sticas or!anolépticas nutricionales, variaciones en peso o volumen, para la

l b i/ i d l i d l d l l f ili d


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OBJETIVO GENERAL3

4 esarrollar un cultivo in vitro de ortiño (Vaccinium floribundum Kunth),

utili*ando dos medios de cultivo artesanales a bases de 7u!o de $iña 7u!o de

caña.

OBJETIVOS ESPEC45ICOS3

• esarrollar el protocolo de desinfecci/n /ptimo para eplantes de mortiño

(Vaccinium floribundum Kunth).• Evaluar el porcentaje de crecimiento de eplantes en funci/n del medio.• eterminar el medio de cultivo artesanal ideal para el crecimiento in vitro de

mortiño (Vaccinium floribundum Kunth).

METODOLOG4A

Pre#ara67n de Med6o de 8l*6!o3

• Etraer *umo de piña ju!o de caña.6il i b l id d d l di


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'iembra 0,",2,3,#,&:nstrumental; étodo

mero. apacidad.6rasco de loro " 300 ml6rascos de siembra "8 2&0 ml

6rasco de =lco-ol ?0@ 2&00 ml?&0 ml

ajas $etri 2 &0 ml

6rascos de a!ua -ervida &?00 ml&00 ml200 ml

etal$in*as 2 4=!uja de disecci/n " 4étodo

$ l

alor seco; Aorno de cocina a ?0B 20 min

aracter%sticas; >mero. 5amaño

$apel filtro 1& cm

2

"0 cm2

$apel cocina 1& cm

2

"0 cm2


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Pro*oolo" de de"6n9e67n3

S6e%&ra :0 (-1;-0;/0-alC) al 2.&@ por cinco minutos, reali*ar cinco

l d - id li i d i d f l


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(>alC) 2.&@ "0 min=!ua -ervida 300 ml I

l−1

& min I3

'iembra "Jemas

"8H"0H20"&

=!ua

corriente

300 ml I

l−1

DDD=lco-ol ?0@ 3 min(>alC) 2.&@ 3 min=!ua

destilada

300 ml I

l−1

3 min I3

S6e%&ra :- (=;--;/0-


7/33

$rotocolo 2 6ec-a; eactivo F G5:E$C

Eposici/n

ontaminaci/n

'iembra 2

'emillas?H""H20"&

=!ua D

7ab/n

L%uido

&00 mlI

l−1

& min D

a!itaci/n

D

=!ua -ervida &00 mlI

l−1

4

=lco-ol ?0@ & minloro "0@ & min=!ua -ervida &00 ml I

l−1

& min I3

'iembra 2?H""H20"&

=!ua D7ab/n

L%uido

&00 mlI

l−1

& min D

a!itaci/n

D

=!ua -ervida &00 ml I

l−1

4

l - l i


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-ervida cada lavado por & minutos. 'e reali*/ los cortes del tallo dentro de una soluci/n

de a!ua D ju!o de lim/n antes de introducir los eplantes en el medio.

Explante: Semillas

Las semillas se colocaron sobre una toalla de cocina, ue fue utili*ada como una bosa

de té, para poder sumer!ir las semillas en las soluciones primero se -i*o un lavado en

una me*cla de a!ua D jab/n por cinco minutos en a!itaci/n, lue!o se -i*o un lavado con

a!ua destilada para uitar toda el a!ua con jab/n, lue!o se sumer!e en alco-ol ?0@

cinco minutos, se sumer!e loro al "0@ por cinco minutos, se -ace tres lavados en

a!ua -ervida cada uno por & minutos se introduce en el medio de cultivo estéril.

$rotocolo 6ec-a; eactivo F G5:E$C

Eposici/nontaminaci/n

'iembra 2

'emillas"3H""H20"&

=!ua D

7ab/n

L%uido

&00 mlI l−1 & min D

a!itaci/n

4 4=!ua

-ervida&00 mlI l

−1

4


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'e procedi/ a filtrar el ju!o de caña puro en papel filtro -asta obtener un color másclaro, se coloc/ &00ml en una olla a la ue se añadi/ &00ml de a!ua+ para ue

!elifiue se añadi/ #&! de !elatina sin sabor (elK-ada) al final para dar lacoloraci/n deseada se utili*/ colorante ve!etal 34# !otas.

• $iña

'e procedi/ a filtrar el ju!o de piña etra%do ese momento en papel filtro -astaobtener un color más claro, se coloc/ 300ml en una olla se llev/ a ebullici/n por

poco tiempo para ue se desnaturalice la bromelina+ posteriormente se añadi/?00ml de a!ua+ para ue !elifiue se añadi/ 80! de !elatina sin sabor (elK-ada) alfinal para dar la coloraci/n deseada se utili*/ colorante ve!etal 34# !otas.

$rotocolo de desinfecci/n

Jemas ailares

$rocedimiento; Los tallos con presencia de emas ailares se lavaron en a!ua corriente para retirar restos de tierra e impure*as, lue!o se sumer!i/ en una me*cla de a!ua de lallave D jab/n l%uido a la ve* ue con auda de un cepillo dental suavementefre!ábamos el los tallos con emas, esto por cinco minutos, con la finalidad de uitar maor cantidad de impure*as tierra ue se encuentra entre ad-erida a los tallo las-ojas, lue!o a los se!mentos de tallo (3 cm), se los sumer!i/ por cinco minutos en


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=lco-ol ?0@ & minloro "0@ & min

=!ua-ervida

&00 ml I l−1 & min I3

'iembra 3Jemas 08H"2H20"&

=!ua D7ab/n

L%uido8 mlI l

−1 & min Da!itaci/n

DD

=!ua

-ervida &00 ml Il−1

4=lco-ol ?0@ & minloro "0@ & min=!uadestilada

&00 ml I l−1

& min I3

S6e%&ra :. (-/;-/;/0-


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loro "0@ & min=!ua -ervida &00 ml I

l−1

& min I3

'iembra #Jemas

2H"2H20"& =!ua D7ab/nL%uido

&00 mlI

l−1

& min Da!itaci/n

D

=!ua -ervida &00 ml I

l−1

4

=lco-ol ?0@ & minloro "0@ & min=!uadestilada

&00 ml I

l−1

& min I3

Pro*oolo de e"*er6l6a67n de %a*er6al3

$ara la esterili*aci/n del instrumental utili*ado en la siembra, tanto para semillas como para emas


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'iembra # "2H"2H20"&:nstrumental; Mtodo

mero. apacidad.6rasco de loro " 300 ml6rascos de siembra "8 2&0 ml6rasco de =lco-ol ?0@ 2 &00 ml

?&0 mlajas $etri 2 &0 ml

6rascos de a!ua -ervida & ?00 ml&00 ml200 ml

etal $in*as 2 4=!uja de disecci/n " 4

Mtodo

$apel alor seco; Aorno de cocina a ?0B 20 min

aracter%sticas; >mero. 5amaño$apel filtro 8 & cm2

"0 cm2

$apel cocina 8 & cm2

"0 cm2


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S6e%&ra :< (/0;-/;/0-


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(' &.#) aña Darb/n

0,082& &,82& 0,003?& 0,082& 0,"2&

5otal de componentesutili*ados

0,2& L 22,& ! 0,0"& ! 0,2& L

Elaboraci/n edio de ultivo N7u!o de $iña D arb/nO

'e procedi/ a filtrar el ju!o de piña puro en papel filtro -asta obtener un color másclaro, se coloc/ &00ml en una olla, más ?& ! de !elatina sin sabor 0.03 ! de carb/nactivado ue es un compuesto antioidante a ue contribue a absorber compuestosfen/licos. 'e adiciona en concentraciones cercanas al 0." 4 3@ (pesoHvol), ('-arr,=dema, M =bedini, 20"&). Lue!o se añaden los &00ml de a!ua se procede a calentar -asta -omo!eni*ar la me*cla, por aproimadamente unos 20 minutos para favorecer a la

desnaturali*aci/n de la 1romelina ue no afecte a la !elificaci/n.


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de

impure*as tierra ue se encuentra ad-erida a los tallo las -ojas, lue!o a los

se!mentos de tallo (3 cm), se los sumer!i/ por " minuto en alco-ol al ?0 @, lue!o se lossumer!i/ en loro (-ipoclorito de sodio) al 20@ por "0 minutos, posteriormente sereali*/ tres lavados con a!ua -ervida cada lavado por & minutos, pare retirar totalmenteun eceso de u%micos ue afecten al eplante. 'e reali*/ los cortes del tallo dentro de

una soluci/n de a!ua D ju!o de lim/n antes de introducir los eplantes en el medio.

PROTOCOLO DE DESIN5ECCI2N YEMAS,

Eplante$C5CCLCE':>6E:Q>

=LCACL@vHv

5iempoeposici/

n

F>alCG@vHv

5iempoEposici/n

Lavado=!ua

Aervida(J &.") ?0@ " min 20@ "0 min 3(J &.2) ?0@ " min 20@ "0 min 3(J &.3) ?0@ " min 20@ "0 min 3(J &.#) ?0@ " min 20@ "0 min 3

PROTOCOLO DE DESIN5ECCI2N SEMILLAS,

Eplante$C5CCLCE':>6E:Q>

=LCACL

@vHv5iempo

eposici/n

F>alCG

@vHv

5iempo

Eposici/n

Lavado

=!uaAervida(' &.") ?0@ " min 20@ "0 min 3(' &.2) ?0@ " min 20@ "0 min 3(' &.3) ?0@ " min 20@ "0 min 3(' &.#) ?0@ " min 20@ "0 min 3


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CONCLSIONES3

4

BIBLIOGRA5IA

arc%a, 7. =. ("# de 6ebreo de 20"3). ecuperado el "" de >oviembre de 20"&, de

-ttp;HHRanobosur.blo!spot.comH20"3H02Harbol4frutal4c-ivacu.-tml

Loján, L. 2003. El verdor de los andes ecuatorianos; realidades promesas. $roecto

esarrollo 6orestal $articipativo en los =ndes, pá!. 2P8.

Luc-i, . (30 de ao de 20"2). ecuperado el "" de >oviembre de 20"&, de

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orales, =. 2002U20"". 6rutoterapia, nutrici/n salud $lus


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ANEHOS

I%ene" "6e%&ra 0 (-1;-0;/0-


18/33

Ta&la - Re"8l*ado" de la "6e%&ra 0 (-1;-0;/0-


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20/33

I%ene" "6e%&ra - (0=;--;/0-


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22/33


23/33

I%ene" "6e%&ra / (->;--;/0-


24/33

Ta&la > Re"8l*ado" de la "6e%&ra / (->;--;/0-


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I%ene" "6e%&ra > (01;-/;/0- Con*a%6na67n "e%6lla" 56. D6"*r6&867n "e%6lla"


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ANEHOS

I%ene" "6e%&ra : . (-/;-/;/0-


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56 - D6"*r6&867n "e%6lla" 56 / D6"*r6&867n "e%6lla" "6n on*a%6na67n

56 > Con*a%6na67n "e%6lla" 56 . 5ra"o" de "e%6lla" "6n on*a%6na67n


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56 - Ye%a" on*a%6nada" en %ed6o de #6a. 56 / Ye%a" on*a%6nada" en %ed6o de aa

Ta&la


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33/33

T a&la 1 Re"8l*ado" de la "6e%&ra

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