Práctica # 3: ACTIVIDAD DEL COMPLEMENTO

Materia: Inmunología Básica

Maestro: Patricia Margarita Garma Quen

Grado: 5to. Semestre Grupo: “B”

Equipo #1 Integrantes: Ayanegui Robles Estephanie

Cahuich Espinosa Keila Patricia

Cárdenas García Zelyna Kassandra

Rosado Morales Jorge Alejandro

Tovar León Rosita Marlene

Vázquez Mian Erika

Objetivo:

Comprender la actividad biológica del complemento y saber interpretar los resultados de la medición de su actividad in vitro.

Introducción:

El sistema del complemento es parte de la inmunidad innata y constituye uno de los principales mecanismos efectores de la inmunidad mediada por anticuerpos. El complemento constituye un puente entre la inmunidad innata y la adaptativa, ofrece protección contra la infección por bacterias piógenas y favorece la eliminación de complejos inmunes y de productos de la inflamación. (Berrón Perez, Penagos-Paniagua,,Zaragoza Benítez, Rodriguez Álvarez, & Blancas Galicia, 2003)

La función del complemento frente a infecciones son la opsonización, quimiotaxis y activación de leucocitos y lisis de bacterias y células. Frente a la mediación entre inmunidad innata y adquirida son: aumento de la respuesta de Ac y aumento de la memoria inmunológica. Por ultimo cuando hay disposición de residuos realizan eliminación de complejos inmunes de los tejidos y eliminación de células apoptoicas. (Kunzle)

Se conocen más de 30 proteínas que se activan secuencialmente unas con otras a través de tres vías fundamentales de activación: vía de las lecitinas, vía clásica y vía alternativa. Entre sus funciones está la lisis de bacterias y virus, participar en los procesos inflamatorios, facilita la quimiotaxis y la vasodilatación, opsonización de antígenos, neutralización de virus, y solubilización de inmuno-complejos. Como toda respuesta inmunológica, los efectos benéficos de la vía del complemento pueden convertirse en adversos y peligrosos dependiendo del sitio donde se ejerzan y la duración de la activación del complemento. (Jimenez Pardo, Perez Espinosa, ALberro Fernandez, &Camejo Perez, 2013)

Metodología:

Técnica: Ensayo hemolítico de la vía clásica 1.-Colocar 200 μL de la solución problema (concentraciones de o.01 a 1.0 mg mL-1) 1000 μL de la dilución del complemento y 100 μL de eritrocitos sensibilizados (2..5x108cel mL-1) incubar a 37º C por 45

Extracción de sangre.

Sin anticoagulante (tubo tapa Roja) dejar coagular

Separar el sueroCentrifugar 5 min a 3000 rmp

Dividir en 2 tubos

El volumen de suero

Obtenido

El otro tubo no se incuba (suero complementado)

Incubar un tubo a 56 °C durante 30 min (suero descomplementado)

Dilución 1: 100 de suero complementado y solución

salina 1 ml

minutos. Obtener el suero de donadores humanos sanos (DHS) y diluir 1:250.

2.-Detener la reacción en un baño de hielo y centrifugar a 480xg por 5 minutos.

3.-Medir la absorbancia del sobrenadante a 412 nm. Comparar con un control de 100% de hemólisis, un control negativo de actividad de complemento y un blanco de reactivos

Ensayo hemolítico vía alterna

1. Preincubar los Polisacáridos con el suero (DHS) concentrado a 37°C por 30 minutos. Después detener la reacción y diluir con una solución tamponada pH=7.2 de Mg (EDTA) 0.01M.2. Colocar 200 µL de la solución problema (concentraciones de 0.01 a 1.0mgmL-1), 1000 µL de la dilución del complemento (DHS 1:16) y 100 µL de eritrocitos sensibilizados (1.0x108cél mL-1) incubar a 37° C por 60 minutos.3. Detener la reacción en un baño de hielo y centrifugar a 480xg por 5 minutos.4. Medir la absorbancia del sobrenadante a 412 nm. Comparar con un control de 100% de hemólisis, un control negativo de actividad de complemento y un blanco de reactivos.

Resultados: La práctica no se pudo terminar por falta de tiempo. Se empezaron a observar pequeñas aglutinación tanto con el

suero complementado, como en el suero descomplementado.

Complementado 10 ml-suero 990 ml- solución

salina 100 ml G.R lavados tipo “A” Anti

“A”.

Interpretación:

La actividad de complemento (CH50 o las proteínas individuales de complemento) se miden para determinar si el complemento está involucrado en el origen o en el proceso de diferentes enfermedades. La actividad de complemento se mide también para controlar la gravedad o evolución de una enfermedad, tanto como diagnóstico como para comprobar la eficacia del tratamiento.

Por ejemplo, los pacientes con Lupus Eritematoso Sistémico activos pueden tener niveles bajos de C3 y C4, y estos niveles del Complemento pueden seguirse como un índice de la actividad de la enfermedad.

La actividad de complemento puede variar en partes diferentes de cuerpo. Por ejemplo, actividad de complemento en la sangre de pacientes con Artritis Reumatoide puede ser normal o aumentada, pero en el líquido articular se encuentra muy baja.

Valores normales del complemento:

CH 50 75 a 160 U/mlC1 Inhibidor 16 a 33 mg/ dlC3 Hombres 88 a 252 mg/ dlC3 Mujeres 88 a 206 mg/ dlC4 Hombres 12 a 72 mg/ dl

C4 Mujeres 13 a 75 mg/ dl

Descomplementado 10-suero 990 ml-solución salina 100 ml G.R lavados tipo “A”

Anti “A”.

Patrón.

Conclusiones:Se pudo determinar la importancia que posee el sistema de complemento, ya que desempeña un papel importante en las enfermedades, neurológicas infecciosas, autoinmunes y degenerativas, donde se encuentra involucrado en su fisiopatología. Además se pudo determinar que el complemento ofrece protección contra la infección por bacterias piógenas y favorece la eliminación de complejos inmunes y de productos de la inflamación.En el proceso del sistema del complemento existen cuatro vías importante, las cuales son: la vía clásica de activación, que es estimulada por complejos inmunitarios antígeno-anticuerpo, la vía de activación de la lecitina fijadora de manosa estimulada por los microorganismos con grupos terminales de manosa, la vía alterna de activación, que es estimulada por microorganismos o células tumorales, y la vía terminal, que es común para las tres primeras vías y origina el complejo de ataque de la membrana que lisa a las células

Observaciones recomendadas:•Material limpio.

•Realizar bien la dilución del complemento, para obtener resultados correctos.•Monitorear la temperatura y el tiempo.

Cuestionario:

1. ¿Por qué se denominó Complemento (desde el punto de vista histórico-científico)? Ehrlich usaba el término “complemento para designar la actividad del suero que podía complementar la capacidad de los anticuerpos específicos de lisar bacterias.

2.¿En qué consiste y cuáles son las ventajas de un sistema biológico tipo cascada?La ventaja es la rapidez con la que actúa, ya que como lo dice el nombre es una reacción continua a la anterior. Sin embargo las

desventajas recaen en lo mismo ya que la velocidad y agresividad de dicha activación puede provocar daños en el organismo.

3. Mencione un ejemplo de respuesta en cascada, además del complemento, en el organismo.

Inmunidad humoral, cascada de coagulación.

4. ¿Cómo se inactiva el complemento?

Una vez que se han logrado los niveles necesarios de actividad, el sistema del complemento es inactivado por una serie de mecanismo enzimáticos de donde destacan la enzima inactivadora del C1, inactivadoras de las anafilotoxinas, proteínas reguladoras del complemento, etcétera.

5. Elabore un cuadro de las características físicas y químicas de las proteínas del complemento.

6.Dibuje un diagrama que muestre los cuatro segmentos del sistema de complemento (reconocimiento, activación, amplificación y efectora).

7. Elabore un cuadro en el que se indique brevemente los productos del sistema de complemento y su función biológica.

8. ¿Cuál es la función biológica del complemento y qué repercusiones ocasionaría al organismo una falta del mismo?

Eliminar microorganismos patógenos extracelulares e inducir inflamación. La falta de este provocaría una infección en el organismo a causa de los microorganismos patógenos.

Activación de leucocitos. Contracción del musculo liso.

9. ¿Cuál sería la importancia clínica de la evaluación del complemento y cuál sería la importancia de investigación farmacológica de sustancias que actúen sobre el complemento?

La evaluación del complemento permite identificar la forma en que actúa en el organismo y como actúa ante un agente adverso.La importancia refiriéndose a la investigación de sustancias farmacológicas sobre el sistema de complemento, permite

determinar la forma en que estas sustancias inhiben o aceleran la acción, así como determinar si estas son peligrosas al organismo.

Referencias:

Berrón Perez, R., Penagos-Paniagua,, M. J., Zaragoza Benítez, J. M., Rodriguez Álvarez, J., & Blancas Galicia, L. (Mayo- Agosto de 2003). Medigraphic. Recuperado el 6 de Octubre de 2015, de Medigraphic: http://www.medigraphic.com/pdfs/alergia/al-2003/al032b.pdf

Jimenez Pardo, M. L., Perez Espinosa, L. M., ALberro Fernandez, M., & Camejo Perez, Y. M. (19 de Enero de 2013). Mediagraphic. Recuperado el 6 de 10 de 2015, de Mediagraphic: http://www.medigraphic.com/pdfs/mediciego/mdc-2013/mdc131p.pdf

Kunzle, C. R. (s.f.). Institute of Management Technology. Obtenido de Institute of Management Technology: http://www.imt.edu.py/admin/uploads/Documento/complemento.pdf

http://www.ugr.es/~eianez/inmuno/cap_16.htm

epidemiologiamolecular.com_/efectos-biologicos-sistema-complemento/

Introducción a la inmunología humana. Fainboin.

http://www.microbiologybook.org/Spanish-immuno/imm-chapter2.htm