Perfil mutacional de los carcinomas pulmonares no ... · Necesidad de selección de los pacientes a...
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Perfil mutacional de los carcinomas pulmonares no microcíticos
diagnosticados en el Hospital Carlos Haya de Málaga
D. Bautista, E. Prieto, M. Martínez, R. Fernández, A.I. de Hita,
C. Gastelu
Mutaciones de EGFR en el cáncer de pulmón
Mutaciones de EGFR en Cáncer de Pulmón
• 5-20% de los caucasianos con NSCLC, 20-40% de asiáticos
• Determinación por
– Secuenciación directa
– PCR a tiempo real (DxS TheraScreen) • 90% en el ATPbinding cleft del dominio tirosina quinasa (activación
constitutiva)
• 5-20% de los caucasicos con NSCLC, 20-40% de asiáticos
• Determinación por
– Secuenciación directa
– PCR a tiempo real (TheraScreen Qiagen, Cobas 4800 Roche)
• 90% en el ATPbinding cleft del dominio tirosina quinasa (activación constitutiva)
ATP
Ras-Raf-MAPK
Proliferation
Pi3K-AKT
Survival
Ligand
Extracellular domain
Trans-membrane domain
Tyrosine kinase domain
Tyrosine phosphorylation
EGFR internalisation
Degradation/recycling
EGFR signals for longer
at the cell membrane
Wild Type EGFR EGFR mutante
La mutacion de EGFR mutation produce un cambio
conformacional que aumenta la activacion
Arteaga 2006, Gadzar et al 2004, Hendricks et al 2006, Sordella et al 2004
18 19 21 20
N-lobe
Transmembrane
region
Extracellular
domain
ATP binding
cleft
C-lobe
A-loop Chelix P-loop
TK
domain
Regulatory
domain
Distribution of mutation types (% of mutations)
Literature review Asian studies Non-Asian studies
Most prevalent mutation types Literature (n=1523) Literature (n=583)
Exon 19 deletion 51% 58%
Exon 21 point mutation L858R 42% 32%
Exon 20 2% 6%
Exon 18 G719A/C 3% 2%
Exon 21 L861Q 1% 1%
La distribucion de las mutaciones activadoras es similar en series asiáticas y occidentales
Some patients had more than one mutation type
• 40% de los NSCLC tienen alterada la vía EGFR/Kras/Braf/PI3K
• Mutaciones en EGFR y Kras
• Mutaciones activadoras o sobreexpresión
• Mutaciones no solapadas o excluyentes
• “Driving mutations”
Mutaciones de EGFR en Cáncer de Pulmón
Agentes Anti-EGFR en Cáncer de Pulmón
• Anticuerpos Monoclonales
– Cetuximab
– Panitumumab
• Inhibidores de la Dimerización
• Inhibidores de la Tirosin-Quinasa
– Erlotinib
– Gefitinib
Small Molecule Tyrosine Kinase Inhibitors
– Target the tyrosine binding domain.
– Block RTK phophorylation and activation.
– Erlotinib (Tarceva® Roche)
– Gefitinib (Iressa® Astra Zeneca)
Tratamiento del Carcinoma Pulmonar de Células No-Pequeñas
Agentes Anti-EGFR en Cáncer de Pulmón
• Sólo algunos pacientes responden a la terapia anti-EGFR
– 10-20% de pacientes caucasicos con NSCLC metastásico
– 40-50% de los pacientes asiáticos • Importancia de selección adecuada de los pacientes • Predictores clínicos de respuesta
– Paciente asiático, mujer, no fumador, adenocarcinoma
– Aparición de efectos tóxicos cutáneos
Necesidad de determinación de mutaciones de EGFR
• Respuesta a la terapia Anti-EGFR
– 80% en mutados
– <10% en WT • Presencia de mutación:
– Mejor supervivencia en tratados con
Inhibidores de EGFR
– Mejor supervivencia general (¿?)
Literatura Paez et al., Science 2004 Lynch et al.,NEJM 2004 Pao et al.,PNAS 2004 Huang et al., CCR 2004 Tokumo et al., CCR 2005 Mitsudomi et al., JCO 2005 Han et al., JCO 2005 Kim et al., CCR 2005 Cotes-Funes et al., Ann Oncol 2005 Cappuzzo et al, JNCI 2005 Chou et al., CCR 2005 Taron et al., CCR 2005
Takano et al., JCO 2005
Tratamiento del Carcinoma Pulmonar de Células No-Pequeñas
0
10
20
30
40
50
60
70
80
EGFRMut
EGFR WT
% de respuesta tumoral
Necesidad de selección de los pacientes a tratar
77%
12%
Causas de resistencia al tratamiento Anti-EGFR
• EGFR WT
• Mutación de Kras
• Mutación de EGFR T790M (50% de resistencias adquiridas)
• Amplificación de c-met
– 10-20% de resistencia adquirida
– Activación de PI3K a través de vías alternativas
1. T790M
2. Del 19
3. L858R
4. L861Q
5. G719X
6. S768I
7. Ins 20
MUTACIONES DETECTADAS
Detección de mutaciones por PCR a tiempo real Therascreen® Qiagen
-Detecta 29 mutaciones en los exones 18, 19, 20 y 21 de EGFR -A partir de 800 ng de ADN - Sensibilidad 1 %
-Necesita interpretación de los resultados
Detección de mutaciones por PCR a tiempo real cobas® Roche
-Detecta 41 mutaciones en los exones 18, 19, 20 y 21 de EGFR
-A partir de un corte de 5 μm con > 10% de
células tumorales (180 ng) -Sensibilidad 5%
-Análisis automático e informe
0
50
100
150
200
250
2011 2012 2013
Nº de muestras analizadas210
177
43
Número de pacientes analizados n = 430
0
5
10
15
20
25
30
35
AdenocarcinomaC. EscamocelularC. de céls grandesC. Neuroendocrino
Tipo Histológico
0% 6%
0%
94%
11.18% de Adenocarcinomas contienen mutación
Tipo Histológico y Mutaciones detectadas 35 (8.14%)
Tipo Histológico y Mutaciones detectadas
Tipo Histológico Pacientes Analizados
Mutaciones Detectadas
%
Adenocarcinoma 317 33 10.41%
C. Escamocelular 62 0 0%
C. Céls. Grandes 40 2 5%
C. Neuroendocrinos 5 0 0%
Otros (Adenoescamoso, Pleomorfico, NOS)
6 0 0%
Total 430 35 8.14%
0,00%
5,00%
10,00%
15,00%
20,00%
25,00%
30,00%
Mujer Hombre
Sexo
3,81%
25,23%
Porcentaje de mutación en función del sexo
Mutaciones detectadas 35 (8.14%)
Espectro de Mutaciones detectadas
Alteración Mutaciones Detectadas
%
Delección 19 19 54%
L858R 8 23%
Inserción 20 5 14%
L861Q 3 9%
G719X 0 0%
S768I 0 0%
T790M 0 0%
Mutaciones detectadas en nuestro centro n = 35 (8.14%)
Estudio comparativo de sistemas Therascreen® Qiagen
cobas® EGFR Mutation Test Roche
-Análisis en paralelo de: -50 casos retrospectivos, previamente estudiados con Therascreen -52 casos prospectivos por orden de recepción
-A partir de ADN extraido mediante:
-Gentra® Puregene® Tissue Kit Qiagen – Therascreen -cobas® DNA sample preparation kit - cobas
-102 resultados, 7 mutaciones y 95 WT (cobas 2 casos no válidos)
Control de calidad externo
2010: K-ras y EGFR 2011: K-ras, EGFR , BRAF, y HPV 2012: K-ras, EGFR, BRAF 2013: K-ras, EGFR, BRAF
Elisa Prieto Sánchez Carmen Gastelu Cantero Anabel de Hita Santabaya Macarena Martínez Moreno Ricardo Fernández Rubia