Determinacin de la Protena C Reactiva (PCR) Introduccin: LaProtena Creactiva(PCR) es una protena que se encuentra en la sangre como respuesta a una inflamacin, por ello se dice que la Protena C reactiva es unaprotena de fase aguda. La PCR, as nombrada debido a su habilidad para unirse al polisacrido C del Pneumococcus fue descubierta en 1930 por Atillett y Francis en el plasma de pacientes con neumona neumoccica. Una dcada despus se reconoci que esta protena estaba involucrada en los cambios sistmicos que ocurren durante la fase aguda de un proceso inflamatorio. Como muchas protenas de fase aguda, la PCR esta normalmente presente en niveles muy bajos en el suero, pero se incrementa rpida y significativamente en respuesta a una variedad de condiciones inflamatorias o infecciosas. Desde su descubrimiento la PCR ha sido utilizada como un marcador sistmico de inflamacin y daos de tejido. La emergencia de la PCR como el marcador inflamatorio ms estudiado clnicamente se debe, en parte, a sus caractersticas biolgicas, que influyen en sus propiedades analticas y pre analticas. La vida media relativamente larga de esta protena en el plasma hace ms factible su deteccin en la circulacin y como sus concentraciones no se afectan con el consumo de alimentos, no se requiere obtener la muestra de sangre en ayunas. El anlisis de sangre de protena C reactiva se utiliza para identificar inflamaciones o infecciones en el organismo. Poco despus de la aparicin de una infeccin o una inflamacin, el hgado libera protena C reactiva en la sangre. La protena C reactiva (PCR) es un indicador temprano de estos problemas porque sus niveles suelen comenzar a elevarse en la sangre antes de la aparicin de otros sntomas, como la fiebre o el dolor. Algunas causas posibles de tener altos niveles de PCR son: cncer, enfermedad inflamatoria intestinal, conectivopata, vasculitis, lupus, artritis reumatoide, neumona neumoccica, fiebre reumtica, tuberculosis y enfermedad plvica inflamatoria. Se puede dar el caso de un falso positivo en los resultados si estn presentes en el paciente infecciones bacterianas y virales, neoplasias malignas, algn dao en tejido como quemaduras e incluso si el paciente est consumiendo anticonceptivos orales; por dichas razones, se deben tener en cuenta estos factores para evitar falsos positivos.

Material y Reactivos: -Vacutainer.- 1 gradilla.-Tubos de ensaye.-Micropipetas.-Aplicadores.-Placa de reaccin. -Pipetas desechables.-Cronmetro.-Lmpara de luz intensa.-Antisuero adsorbido a partculas de ltex (LATX Anti- PCR).-Suero Control Positivo.-Suero Control Negativo.-Diluyente Glicina Salina Concentrado pH 8.2-Suero Problema del paciente.

Procedimiento realizado:-PRUEBA CUALITATIVA: Colocar en una gradilla un tubo de ensaye, luego depositar 950 L de la solucin glicina salina (ya diluida) y aadir 50 L del suero problema, esto con el fin de lograr una dilucin 1:20 del suero problema. En uno de los anillos de la placa de reaccin depositar 50 L del suero 1:20, en otro anillo depositar una gota del control positivo y finalmente en otro anillo una gota de control negativo. Posteriormente aadir a cada uno de los 3 anillos una gota de Ltex Anti- PCR y homogeneizar suavemente con aplicadores distintos para cada anillo. Mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2 minutos, una vez pasado el tiempo indicado realizar la lectura del resultado bajo una fuente de luz directa.-PRUEBA SEMICUANTITATIVA: Colocar en una gradilla 5 tubos de ensaye (correctamente enumerados), depositar en el tubo 1 950 L de la solucin glicina salina (ya diluida), en los tubos posteriores depositar 500 L de la misma solucin glicina salina. Posteriormente aadir al tubo 1 50 L de suero problema 1:20, pasar 500 L del tubo 1 al tubo 2 y continuar este proceso hasta el tubo 5, recordando siempre mezclar las soluciones antes de cada operacin. Depositar 50 L de cada una de las diluciones en anillos diferentes de la placa de reaccin, para luego aadir una gota de Ltex Anti-PCR a cada una de las diluciones. Finalmente mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2 minutos, una vez transcurrido dicho tiempo, realizar la lectura del resultado bajo una fuente de luz directa.

Resultados: el resultado obtenido en la prueba cualitativa fue positivo, esto respaldado por la aparicin de aglutinacin (Fig. 2) adems de ser comparado con los controles positivo y negativo.

Debido a que la prueba cualitativa result indudablemente positiva, se prosigui a realizar la prueba semicuantitativa, preparando diluciones: 1:40, 1:80, 1:160, 1:320 y 1:640 (Fig. 3) De dicha prueba obtuvimos un resultado notablemente positivo pero no logr identificarse el ttulo final (explicado en discusin) por lo cual se nos indic por la docente reportar un Ttulo de 1:640 (Fig. 4)

Interpretacin y discusin: El suero problema usado en esta prctica fue el otorgado por la docente. Un aspecto a destacar en la prueba cualitativa fue que la muestra problema aglutin mayormente que el control positivo, lo cual indic una gran concentracin de PCR presente en el suero del paciente. En la prueba semicuantitativa se reafirm el resultado positivo, pero no se determin el ttulo final, esto debido a que en la dilucin 1:640 (ltima preparada) an exista presencia de aglutinacin por lo cual debieron haberse preparado ms diluciones, pero por falta de reactivos se decidi reportar como resultado una titulacin de 1:640. Una vez terminadas dichas pruebas se obtuvo:PCR Positiva (+). Ttulo 1:640. 32 mg/dLEl resultado est muy por encima de lo normal lo cual nos indica que el paciente presenta una fuerte inflamacin.

Bibliografa consultada:- Fuentes Arderiu X; Castieiras Lacambra M; Quralt Compa J. Enfermedades articulares En: Bioqumica Clnica y Patologa Molecular. 2 ed. Revert. Barcelona. Pp: 1042-1043