Prctica 6:

Metabolismo

de Glucosa

Prcticas de Bioqumica

Clnica

Objetivos

Aplicar la curva de calibracin para la

determinacin de glucosa en muestras

biolgicas.

Determinar la concentracin de la glucosa

en estado basal en una muestra biolgica

mediante el mtodo enzimtico

colorimtrico.

Resultados

Profesionales en formacin con destrezas

y conocimientos para la determinacin

de glucosa mediante el mtodo

colorimtrico.

Generalidades

La principal funcin bioqumica de la glucosa es la de proporcionar energa

para los procesos de la vida. El adenosn trifosfato (ATP) es la fuente de energa universal para las reacciones

biolgicas. La oxidacin de la glucosa por las vas glucoltica y del cido ctrico es la fuente principal de energa para la biosntesis del ATP.

El sistema para regular los niveles de glucosa

sangunea funciona para lograr dos fines:

1. Almacenar glucosa en exceso en relacin

a las necesidades corporales inmediatas

en un reservorio compacto (glucgeno)

2. Movilizar la glucosa almacenada de

manera que mantenga el nivel de glucosa

sangunea.

La regulacin de la glucosa sangunea es

esencial para mantener al cerebro, cuya

fuente energtica primaria es la glucosa,

abastecido por una cantidad constante de la

misma.

INSULINA

La funcin de la insulina es desviar la glucosa

extracelular a los sitios de almacenamiento

intracelular en la forma de macromolculas

(como el glucgeno, lpidos y protenas). Es as

que la glucosa es almacenada en tiempos de

abundancia para los momentos de necesidad.

Fundamento del mtodo utilizado

en esta prctica (GOD-PAP):

La glucosa se determina despus de la oxidacin

enzimtica en presencia de glucosa oxidasa. El

perxido de hidrgeno formado reacciona bajo

la catlisis de peroxidasa con fenol y

4-aminoantipirina formando un complejo

rojo-violeta usando la quinonemina con indicador.

La determinacin de glucosa se efecta segn las

siguientes reacciones:

GOD Glucosa + O2+ H2O H2O2 + Acido glucnico

POD 2 H2O2 + Fenol + 4- aminoantipirina quinoneimina + 4H2O2

GOD= Glucosa oxidasa

POD= Peroxidasa

Recomendaciones

La muestra debe recolectarse en ayuno excepto por el agua, durante ocho horas cuando menos antes de la prueba.

La muestra debe recolectarse en tubo recolector de tapn rojo para suero (sin anticoagulante) o de color lila (EDTA)

En casos de emergencia o de control de diabticos la prueba se puede realizar en cualquier momento.

La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm de 5 a 10 min. para separar el suero o plasma.

La glucosa en suero o plasma es estable al menos 3 das a 2-8 C.

Tips

Los anticoagulantes de uso corriente como la EDTA,

oxalato, heparina o fluoruro no afectan los

resultados.

La hemlisis hasta 0,3 g/dL no interfiere

La muestra es inaceptable si:

El suero se obtiene turbio

La identificacin es inadecuada

El tubo de recoleccin no es el adecuado

Cuando haya excedido el tiempo mximo de

anlisis permisible.

Tips Revisar la fecha de caducidad del reactivo, y

su correcto almacenamiento despus de abierto.

Realizar alcuotas para trabajar ya que el reactivo abierto es estable por 2 semanas de 15 a 20C (revisar condiciones fabricante).

Puede haber interferencia en los resultados en el caso de sueros lipmicos o ictricos; o con valores elevados de creatinina o galactosa.

Cuando la concentracin de la muestra excede la linearidad del reactivo, diluir el suero con agua destilada (1+2), repetir la determinacin y multiplicar el resultado por 3.

Materiales

Suero o plasma

Tubos de ensayo

Pipetas automticas de 2ml

Micropipeta de 20 l

Centrfuga

Espectofotmetro para lecturas de 540 nm

Gradilla

Kit de reactivos para determinacin de glucosa: patrn, reactivo enzimtico.

Agua destilada

Suero fisiolgico

Condiciones de ensayo:

Longitud de onda: 540 nm

Temperatura ambiente

Tiempo de reaccin: 10 minutos

Tiempo de estabilidad de color hasta 60

minutos

Cubeta: 1cm. Paso de luz

Medicin frente a blanco de reactivo

Procedimiento

Obtenido el suero o plasma y

debidamente identificado, colocar en los

tubos de ensayo numerados

Numerar los tubos que corresponden a la

prueba de glucosa

Medir en los tubos de ensayo de acuerdo

a lo siguiente:

Blanco Estndar Muestra Muestra

control

Estndar

(STD)

------- 20 l

-------

-------

Muestra ------- ------- 20 l

-------

Muestra

control

------- ------- -------

20 l

Reactivo 2 ml 2 ml

2 ml

2 ml

Mezclar, incubar por 10 min a 20-25C o 5 min a 37C.

Mida la absorbancia del estndar y las muestras frente a

un blanco de reactivo antes de 60 minutos.

Clculos:

Podemos realizar lecturas en la curva de

calibracin, considerando que la curva cumpla

con los estndares establecidos.

Se puede calcular mediante la concentracin del

patrn:

mg/dl glucosa = Abs. Muestra x concentracin STD

Abs. STD

Valores de referencia

Dependen del mtodo, reactivo y

poblacin analizada, se considera normal

en suero o plasma en ayunas 75-115 mg/dl

Informe de la prctica

Valores obtenidos en la muestra y valores de referencia.

Investigar pruebas relacionadas con el metabolismo de los carbohidratos y a qu patologas se asocian.

Investigar los mtodos para determinar hemoglobina glicosilada

Problemas y soluciones que se presentaron en la prctica.