Jorge inche cabello

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICAESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y

BIOQUÍMICA

COMPARACIÓN DEL EFECTO HIPOGLUCEMIANTE DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE LAS HOJAS Smallanthus sonchifolius (Poepp) Rob “YACÓN” FRENTE A UN EXTRACTO

DE LIBRE COMERCIO, EN RATONES HIPERGLUCEMICOS

PRESENTADO POR:Br. Vanessa Jaqueline Bello Sánchez

Br. Jorge Alberto Inche Cabello

ASESOR:Mg. Ernesto Raúl Torres Veliz

Lima - Perú2015

DEDICATORIAS

A Dios, Por ser la fuente de mi vida y ayudarme a lograr alcanzar una de

mis mayores metas en mi vidaA mis Padres, Hebert y Martha quienes

me educaron con amor y ejemplo de trabajo.Me dieron lo que soy como persona mis

valores, mis principios, mi carácter y coraje para conseguir mis objetivos.

Bello Sánchez Vanessa

A Dios, Por ser quien ilumina mi camino y me guía día a día en el sendero de la vida.

A mis padres, Quienes son el motivo y el apoyo para cumplir mis metas .A ellos ¡mil gracias!

Inche Cabello Jorge

AGRADECIMIENTOS

Mg. Ernesto Raúl Torres Veliz, por todo el apoyo que nos brindó como asesor a

lo largo de toda la realización del presente trabajo por ello ¡muchas gracias!

Mg. Miguel Félix Veliz, por su asesoría y enseñanza en la obtención de la

muestra.

Dra. Juana Chávez Flores, por su orientación desinteresada y su amistad

brindada durante todos los años de nuestra formación profesional.

A todas la personas que colaboraron en la culminación de esta tesis experimental,

por su gran apoyo y su amistad.

Bello Sánchez Vanessa

Inche Cabello Jorge

INDICE GENERAL RESUMEN SUMARY Pág.

I. INTRODUCCIÓN..............................................................................................................1

1.1. Situación Problemática..........................................................................................1

1.2. Objetivos:...............................................................................................................2

1.2.1. Objetivo general:.............................................................................................2

1.2.2. Objetivos específicos:.....................................................................................3

1.3. Hipótesis................................................................................................................3

1.3.1. Variables.........................................................................................................3

II. GENERALIDADES...........................................................................................................4

2.1. Antecedentes de Investigación..............................................................................4

2.2. Aspectos botánicos de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”..................4

2.2.1. Descripción botánica......................................................................................5

2.2.1.1. Cepa o Corona.................................................................................................5

2.2.1.2. Hojas................................................................................................................5

2.2.1.3. Tallo.................................................................................................................6

2.2.1.4 La Inflorescencia...............................................................................................7

2.2.1.5. Fruto.................................................................................................................8

2.2.1.6. Biología floral y sistema reproductivo..............................................................9

2.2.2. Clasificación taxonómica..............................................................................10

2.2.3. Composición química nutricional..................................................................10

2.3.1. Composición química de las hojas...............................................................12

2.4. Diabetes mellitus..................................................................................................13

2.4.1. Descripción...................................................................................................13

2.4.2. Clasificación..................................................................................................14

2.4.3. Diabetes Mellitus tipo 1 (DM 1)....................................................................15

2.4.4. Diabetes Mellitus tipo 2 (DM 2)....................................................................15

2.4.5. Diabetes mellitus gestacional.......................................................................16

2.4.6.1. Maturity-onset diabetes of the young (MODY)...............................................17

2.5. Cuadro clínico......................................................................................................17

2.5.1. Diagnóstico...................................................................................................18

2.6. Tratamiento..........................................................................................................18

2.6.2. Diabetes tipo 2..............................................................................................19

2.7. Complicaciones....................................................................................................23

2.7.1. La retinopatía diabética................................................................................23

2.7.1.1. La neuropatía diabética.................................................................................23

2.7.1.2. Nefropatía diabética.......................................................................................23

2.7.1.3. El pie diabético...............................................................................................24

III. PARTE EXPERIMENTAL..............................................................................................25

3.1. Materiales y métodos...........................................................................................25

3.1.1. Material biológico..........................................................................................25

3.1.2. Material Farmacológico................................................................................25

3.1.3. Material de vidrio..........................................................................................25

3.1.4. Equipos.........................................................................................................25

3.1.5. Reactivos......................................................................................................26

3.2. Recolección y preparación del material vegetal..................................................27

3.3. Determinación de glucosa en vena caudal de cola de ratón...............................30

3.4. Evaluación del efecto hipoglucemiante en ratones normoglucémico..................31

3.5. Evaluación del efecto hipo glucémico en ratones con hiperglucemia transitoria por sobrecarga oral de glucosa....................................................................................33

3.6. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones con hiperglucemia por................35

IV. RESULTADOS..............................................................................................................37

4.1. Estudio taxonómico..............................................................................................37

4.2. Estudio fitoquimico...............................................................................................37

4.2.1 prueba de solubilidad............................................................................................37

V. DISCUSIÓN...................................................................................................................48

VI. CONCLUSIONES.........................................................................................................51

VII. RECOMENDACIONES................................................................................................52

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS...........................................................................53

IX. ANEXO.........................................................................................................................59

INDICE DE FIGURAS

Pág.

Figura 1. Hojas de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”.......................................6

Figura 2. Desarrollo de la planta Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”.................7

Figura 3. Fruto de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”........................................8

Figura 4. Tipos de Insulina.................................................................................................19

Figura 5. Tratamiento no farmacológico de la diabetes mellitus tipo 2..............................20

Figura 6. Tratamiento farmacológico de la diabetes mellitus tipo 2 Hipoglucemiantes....21

Figura 7. Indicaciones de terapia combinada en la diabetes mellitas tipo 2......................22

Figura 19. Recolección de hojas Smallanthus sochifol Smallanthus sochifolius (Poepp) }Rob “yacón”.......................................................................................................................27

Figura 20. Recolección de hojas Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”...............28

Figura 21. Evaporación del solvente al aire libre...............................................................28

Figura 22.Secado a menos de 40 °C grados en la estufa...............................................29

Figura 23. Almacenado en envase de vidrio extracto de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”........................................................................................................................29

Figura 24. Extracción de sangre en vena caudal de cola de ratón....................................30

Figura 25. Determinación de glucosa pre prandial............................................................31

Figura 26. Administración de los tratamientos vía intra peritoneal....................................32

Figura 27. Administración de sobre carga oral de glucosa vía oral en ratones.................34

Figura 28. Administración de aloxano via intra peritoneal en ratones...............................36

Figura 8. Resultado de la prueba de Carbohidratos con Molish........................................39

Figura 9. Resultado de la prueba de azucares reductores Fehling...................................39

Figura 10. Resultado de la prueba de taninos gelatina......................................................40

Figura 11. Resultado de la prueba de taninos tricloruro férrico.........................................40

Figura 12. Resultado de la prueba de antraquinonas Bortranger......................................41

Figura 13. Resultado de la prueba de Saponinas agua más agitación..............................41

Figura 14. Resultado de la prueba de Triterpenoides y/o eteroides..................................42

Figura 15. Resultado de la prueba de Flavonoides shinoda..............................................42

Figura 16. Resultado de la prueba de Flavonoides tricloruro férrico.................................43

Figura 17. Resultado de la prueba de Alcaloides Dragiendorf..........................................43

Figura 18. Resultado de la prueba de Alcaloides Mayer..................................................44

INDICE DE TABLAS

Pág.

Tabla 1. Composición nutricional del Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”........11

Tabla 2. Contenido de oligofructosa en algunos alimentos...............................................11

Tabla 3. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones normoglucémicos ................45

Tabla 4. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones con hiperglucémia por sobre carga oral de glucosa.........................................................................................................46

Tabla 5. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones con hiperglucémia por administración de Aloxano................................................................................................47

INDICE DE GRAFICOS

Pág.

Gráfico 1. Evaluación del efecto hipoglucemiante en ratones normoglucémicos..............45

Gráfico 2. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones con hiperglucémia por sobre carga orla de glucosa.........................................................................................................46

Gráfico 3. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones con hiperglucémia por administración de Aloxano................................................................................................47

RESUMEN

Se evaluó el efecto del hidroalcoholico de hojas de Smallanthus sochifolius

(Poepp) Rob“yacón” y de un extracto de libre comercio sobre los niveles de

glicemia de ratones de ambos sexos, normoglicémicos y con hiperglucemia

inducida por sobre carga oral de glucosa y aloxano, con el fin de observar su

posible efecto hipoglicemiante. Las medidas de glicemia se hicieron en ayunas,

en las horas 0, 2, 4, 6 y 24. El análisis de los resultados demostró que la

administración del extracto hidroalcoholico de hojas de Smallanthus sochifolius

(Poepp) Rob“yacón” y de un extracto de libre comercio en ratones

normoglicémicos no produce una disminución estadísticamente significativa

(p>0,05) de los niveles de glucosa sanguínea; sólo la glibenclamida tuvo este

efecto a la hora 24. En ratones hiperglicémicos con sobrecarga oral de glucosa,

se observó una disminución estadísticamente significativa (p<0,05) de los niveles

de glicemia con la administración del extracto hidroalcoholico de hojas de

Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob"yacon" y de un extracto de libre comercio a

la hora 6 de la medición así mismo en ratones hiperglicemicos por aloxano, se

observó disminución estadísticamente significativa (p<0,05) de los niveles de

glucosa sanguínea.

Se concluye que el extracto de hojas de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob. y el

preparado de libre comercio presentan actividad hipoglucemiante frente a una

hiperglicemia inducida. Asimismo, no presenta efecto hipoglucemiante en un

estado de normo glucemia.

Palabras clave: Smallanthus sonchifolius (Poepp) Rob. , Diabetes mellitus, Aloxano.

SUMMARY

The effect of hydroalcoholic leaves Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob "yacon"

and an extract of free trade on blood glucose levels in mice of both sexes,

normoglycemic and hyperglycemic induced on oral glucose load and alloxan was

evaluated, in order to observe their possible hypoglycemic effect. The measures

were fasting glucose, in the hours 0, 2, 4, 6 and 24. The analysis of the results

showed that administration of the hydroalcoholic extract of leaves of Smallanthus

sochifolius (Poepp) Rob "yacon" and an extract free trade in normoglycemic mice

did not produce a statistically significant (p> 0.05) in blood glucose levels;

glibenclamide only had this effect 24. In hyperglycemic mice hour oral glucose

tolerance test, a statistically significant (p <0.05) in blood glucose levels with the

administration of the hydroalcoholic extract of leaves was observed sochifolius

Smallanthus (Poepp) Rob"yacon". and an extract free trade 6 when measured in

hyperglycemic mice likewise alloxan, statistically significant (p <0.05) of blood

glucose levels was observed.

We conclude that the leaf extract Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob. and free

trade prepared exhibit hypoglycemic activity against induced hyperglycemia. Also,

no hypoglycemic effect in a state of normo glycemia.

Keywords: yacón (Poepp) Rob. Diabetes mellitus, alloxan.

I. INTRODUCCIÓN

1.1. Situación Problemática

La diabetes mellitus es una enfermedad crónica actualmente considerada

como un problema de Salud Pública (1), se puede definir como un grupo de

enfermedades metabólicas caracterizado por un estado de hiperglucemia crónica

que obedece a defectos en la secreción de insulina resistencia a esta hormona o

ambos (2,3). La diabetes mellitus (DM) es uno de los problemas más importantes de

la medicina y afecta a un alto porcentaje de la población mundial (2% -10%).

En la mayoría de los países en vías de desarrollo la Diabetes Mellitus ocupa

el tercer lugar como causa de muerte deceso, únicamente después de las

enfermedades cardiovasculares y oncológicas (4,5). En la actualidad esta patología

constituye un serio problema de salud pública ya que afecta a 194 millones de

personas alrededor del mundo y para el año 2025, se calcula serán 333 millones

las personas que desarrollarán diabetes según estadísticas de la OMS (6). El 35%

de la población diabética procede de países industrializados y un 65% viven en

países en vías de desarrollo (6). En el Perú la prevalencia de diabetes es de 1% –

8% de la población general siendo el grupo etareo más afectado el de 65 años a

más, con un incremento considerable en personas entre 20 y 49 años de edad (7).

Convirtiéndose esta enfermedad en la séptima causa de muerte en el Perú.

Los tratamientos farmacológicos para tratar la Diabetes Mellitus está basado en la

administración de antidiabéticos orales o en la administración de insulina

parenteral, con estos tratamientos se ha logrado controlar la enfermedad, pero a

la vez se han presentado muchos efectos indeseados propios de la medicación,

disminuyendo su calidad de vida. Por lo cual las personas optan por tratamientos

en base de plantas medicinales, siendo el extracto hidroalcohólico de las hojas

Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob. “yacón la más utilizada, ya que

investigaciones recientes demuestran que esta planta tiene la capacidad de

1

aumentar los niveles de insulina en sangre y consecuentemente reducir los

niveles de glucosa (8). Se cree que el extracto hidroalcohólico de las hojas

Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob., por ser preparado de una planta es inocua,

lo cual es totalmente erróneo, esto se debe a que la literatura común y corriente

sólo habla de Ias bondades de la planta. Así como el extracto hidroalcohólico de

las hojas Smallanthus sonchifolius (Poepp) Rob “yacón” ayuda en el control de Ia

Diabetes MelIitus tipo 2 (9), también se observa que la poca difusión de esta

Planta puede llevar al uso incorrecto, ya que utilizan dosis, frecuencia y tiempo

de administración incorrecto (10).

En los países en vías de desarrollo como el Perú, el uso de plantas

medicinales es más un recurso ancestral enraizado en su propio medio cultural,

teniendo una base empírica (11). Aparecen en el mercado nuevas preparaciones

comerciales del extracto hidroalcohólico de hojas de Smallanthus sonchifolius

(Poepp) Rob “yacón”que en principio no se encuentran certificadas ni controladas

rigurosamente, siendo esto necesario para verificar su eficacia como

hipoglicemiante; y que por su fácil accesibilidad a la población se realiza un uso

incorrecto.

Formulación del problema

¿Cómo se manifiesta el extracto hidroalcohólico de hojas de Smallanthus

sonchifolius (Poepp) Rob “yacón” y el preparado de libre comercio administrados

por vía oral en un modelo experimental de inducción de hiperglucemia y

normoglucemicas sobre los niveles de glucosa en sangre?

1.2. Objetivos:

1.2.1. Objetivo general:

Comparar el efecto Hipoglucemiantes del extracto hidroalcohólico de

las hojas Smallanthus sonchifolius (Poepp) Rob “yacón” frente a un extracto

de libre comercio, en ratones hiperglucemicos.

2

1.2.2. Objetivos específicos:

Evaluar el efecto hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las

hojas de Smallanthus sonchifolius (Poepp) Rob “yacón”. y del extracto

de libre comercio. sobre los niveles en sangre de glucosa en ratones

normoglucémicos.


hojas de Smallanthus sonchifolius (Poepp) Rob “yacón” y del extracto de

libre comercio sobre los niveles en sangre de glucosa en ratones

normoglucémicos en condiciones de sobrecarga oral de glucosa.


hojas de Smallanthus sonchifolius (Poepp) Rob “yacón” y del extracto

de libre comercio sobre los niveles en sangre de glucosa en ratones

hiperglucemicos por administración de aloxano.

1.3. Hipótesis

La administración aguda del extracto hidroalcohólico de hojas de

Smallanthus sonchifolius (Poepp) Rob “yacón”, así como del extracto de libre

comercio disminuyen la glucemia.

1.3.1. Variables

IndependientesExtracto hidroalcohólico de hojas de Smallanthus sonchifolius (Poepp) Rob

“yacón” con extracto de libre comercialización.

DependienteDisminución de la glucemia.

3

II. GENERALIDADES

2.1. Antecedentes de Investigación

Varios estudios han demostrado que las hojas de Smallanthus sochifolius

(Poepp) Rob “yacón” poseen diferentes efectos biológicos, entre ellos la inhibición

de la migración de los leucocitos polimorfonucleares, inmunomodulación,

antioxidante, y citoprotector(12). Además, otros estudios han informado de que el té

hecho de una infusión de hojas de yacón reduce la glucemia y aumenta la

concentración de insulina en el plasma de ratas diabéticas (13). Por otro lado,

estudios clínicos preliminares demostraron que las raíces y hojas tienen actividad

hipoglicemica (14). Así mismo otro estudio demuestra que el extracto

hidroalcoholico al 10% p/v de la hojas de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob

“yacón” tiene actividad hipoglucemiante en ratas con diabetes mellitus II (9).

2.2. Aspectos botánicos de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”.

El yacón es originario de la región andina y se encuentra distribuido desde

Colombia hasta el norte de la Argentina, a lo largo de los declives húmedos y

valles interandinos secos, entre los 900 a 3200 msnm. Esta es una planta que se

adapta fácilmente a espacios libres dejados en la vegetación (15). Al parecer existe

una alta posibilidad que un hibrido de dos o más especies de Smallanthus

sochifolius (Poepp) Rob “yacón” colonizadoras de habitas disturbados, dieran

lugar a una especie ancestral del yacón.

El área más probable en donde pudieron suceder esos eventos, son las

laderas húmedas de los Andes occidentales, en la región comprendida entre el

noreste de Bolivia y el centro de Perú, el área con la mayor diversidad de clones y

en donde la lengua nativa Quechua y Aymara nombra su uso (15).

4

2.2.1. Descripción botánica

Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón” (16). Es una planta

perteneciente a la familia de las Asteraceae (también denominada

Compositae) genero Smallantus. Inicialmente había sido clasificado por

Wells en 1965, dentro de Polymmia, pero Robinson en 1972 lo reclasifico en

un género que había sido creado por Mackensi en 1933 como Smallanthus,

particularmente por un patrón de estrías que se encuentran en el fruto (17).

2.2.1.1. Cepa o Corona

El aspecto más llamativo de esta especie lo constituyen sus

órganos subterraneos, conformados por un tronco engrosado y

ramificado denominado corona, que presenta brotes cortos

conocidos como propagulos o rizomas, en los cuales se almacena

sustancias de reserva en forma de carbohidratos simples y

frutoligosacaridos, los cuales posiblemente sirven de alimento a las

yemas, cuando estas van a brotar (17).

2.2.1.2. Hojas

Presenta hojas grandes, pubescentes en el haz y el envés,

de forma ovalohastadas y auriculadas en la parte basal y media, y

las superiores ovalolanceoladas, las cuales se distribuyen opuestas

y alternas a lo largo del tallo. Se producen entre 13 a 16 pares de

hojas grandes hasta la floriacion, después de esta, solo produce

hojas pequeñas. La arte superior de la hoja es triangular y hastada,

de 33 cm de largo por 22 cm de ancho, dentada, parte inferior con

raquis alado y auricolado en la base (18).

5

Figura 1. Hojas de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”

2.2.1.3. Tallo

Según (17), si la planta proviene de una semilla, posee un solo

tallo principal, a veces ramificado desde la base, otras veces, sólo

con ramas pequeñas en la parte superior. Si la planta proviene de

propagulo o semilla vegetativa, consta de varios tallos. Los tallos son

huecos, cilíndricos, de color verde a purpura, su altura varia de 1 a 3

metros. En la figura 2 se presenta el desarrollo de una planta desde

el trasplante a la cosecha.

6

Figura 2. Desarrollo de la planta Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”

a) Una planta de yacon de 45 días de transplantada, b) Planta de

yacón de 90 días de transplantada, c) Inflorescencia dicásica, d)

Flor compuesta, e) Plantas de yacón en plena floración, f) Raíces

reservantes de yacón a la cosecha fuente (17).

2.2.1.4 La Inflorescencia

La rama floral es terminal de ramificación dicásica, compuesta

de inflorescencias llamadas capítulos. Cada rama puede contar con

más de 40 capítulos. Una planta puede producir más 80 capítulos,

los cuales son de colores brillantes amarillos o anaranjados y con

pedúnculos sumamente pilosos. Cada capítulo tiene flores

femeninas y masculinas. Las flores femeninas se ubican hacia el

exterior del capítulo, cuya parte más vistosa y coloreada de amarillo

es la lígula; presentan pistilo y estambres normales pero

genéticamente están incapacitadas para producir semilla viable, y si

producen dan lugar a plantas débiles (17).

La flor masculina posee gineceo no funcional. La corola está

formada por cinco pétalos soldados formando un tubo pentadentado

(5 lobular), con una densa pilosidad en la cara externa. Presenta

cinco estambres de filamentos libres y anteras connadas a la parte

apical del estilo (estigma). En la antesis, las anteras se rompen

dejando visible el estilo, de color amarillo, que sobresale de la corola

tubular. Las anteras son de color negro, con finas líneas amarillentas

7

en la connación. El grano de polen es esférico y espinoso: a veces

tripolado, de color amarillo brillante y de consistencia pegajosa (17).

2.2.1.5. Fruto

El fruto es un aquenio, que procede de un ovario ínfero, con

más de un carpelo. El pericarpio es delgado y seco a la madurez,

externamente presenta estrías, longitudinales, que forman surcos

paralelos. La semilla se encuentra unida al pericarpio, sólo por el

funículo. El aquenio es piramidal con ángulos no muy bien definidos

y redondeados, de ápice truncado y base ensanchada. En promedio

mide unos 3,7 mm de largo y 2,2 mm de ancho. Cien semillas pesan

entre 0,6 a 1,2 gramos (17).

Figura 3. Fruto de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”

2.2.1.6. Biología floral y sistema reproductivo

El funcionamiento de las flores y la producción de semillas

son aspectos que continúan sin conocerse plenamente. Una

característica del Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón” es la

8

protoginia, es decir, la apertura y receptividad de las flores

femeninas antes de que las flores masculinas liberen el polen. Esto

implica probablemente que el yacón sea de polinización cruzada y

que necesite de agentes polinizadores (18). Esta hipótesis de

polinización cruzada del Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob

“yacón” es grandemente soportada por el hecho de que los granos

de polen posean espinas y sea consistencia pegajosa, la vistosidad

de las flores femeninas y la secreción de sustancias azucaradas,

especialmente en las flores tubulares, que hacen que los capítulos

sean visitados por varios insectos.

La floración es fuertemente influenciada por las condiciones

medioambientales en donde crece la planta. Esta puede iniciar la

floración 6 a 8 meses después de plantada. Se ha encontrado que

en áreas en donde la floración es abundante, la producción de

semillas es frecuentemente pobre o no se produce y una alta

proporción no es viable o muestra bajo vigor.

La escasa producción de semillas, se debe a la baja fertilidad

del polen (19), encontró que el polen es altamente estéril y no logró

obtener granos llenos, con clones en invernadero. Situación similar

encontró en Argentina, donde el porcentaje de fertilidad del polen

vario entre 0 y 30%. Sin embargo Soto (1998) con materiales del

Perú, encontraron en pruebas de viabilidad del polen en varios

morfotipos, promedios de 94 al 99%, lo cual sugiere que pueden

existir otros factores que provocan la escasa producción de semillas.

La semilla de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”

que se logra formar sólo alcanza entre el 15 y el 32% de

germinación (19), lo que puede estar indicando que existen problemas

en la formación del fruto y de la semilla y que podría tratarse de

frutos partenorcárpicos, en los cuales fallo la fecundación y si se

forma semilla, es estéril (19).

9

2.2.2. Clasificación taxonómica

Reino : Plantae

División : Magnoliophyta

Clase : Magnoliopsida

Orden : Asterales

Familia : Asteraceae

Subfamilia : Asteroideae

Tribu : Millerieae

Género : Smallanthus

Especie : Smallanthus sonchifolius (Poebb) Robb.

2.2.3. Composición química nutricional

A diferencia de otras raíces reservantes comestibles, el 85 al 90%

del peso fresco de este tubérculo es agua. Los carbohidratos representan el

90% del peso seco de las raíces recién cosechadas, de los cuales ente el 50

al 70% son Fructoligosacáridos (FOS), el resto de los carbohidratos lo

conforman la sacarosa, fructuosa, y glucosa (17).

Tabla 1. Composición nutricional del Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”

10

Los fructoligosacáridos están presentes en diferentes alimentos que

se consumen habitualmente, como la lechuga, el ajo, el trigo, las alcachofas

o la cebolla (Ver Tabla 2). Sin embargo, para la obtención industrial de este

producto, se han identificado como las fuentes más importantes, la raíz de

yacón, la de achicoria (17).

Tabla 2. Contenido de oligofructosa en algunos alimentos

Compuesto RangoAguaOligofructuosa (OF)Azucares SimplesProteínasPotasioCalcioCalorías

85 - 90 g6 - 12 g1.5 – 4 g0.1 – 0.5 g185 – 295 mg6 – 13 mg14 – 22 kcal

11

Fuente Contenido de oligofructuosa

Yacón (Raíz)Achicoria (Raíz)Cebolla (Bulbo)AjoLechugaTrigo

3 -19 % 5 – 10 %

2 – 6 %3 – 6 %2 – 5 %1 – 4 %

Los frutooligosacáridos conocidos como oligofrútanos u

oligofructosas, pertenecen a una clase particular de azúcares conocidos

como frúctanos, son cadenas cortas de fructuosas, muy solubles en agua,

tienen un ligero sabor dulce (poseen entre el 30 y 65% del poder edulcorante

de la sacarosa) pero proporcionan tan sólo una cuarta parte del poder

calórico de los carbohidratos comunes, por lo que son utilizados como

edulcorantes, fibra dietéticos y prebióticos (20).

Cuando un FOS presenta de manera predominante o incluso

exclusiva la unión β (2−>1) fructosil fructosa (enlace inulina), recibe el

nombre genérico de inulina.

Estos enlaces son los responsables de que la inulina no sea

digestible como lo sería cualquier carbohidrato, lo que a su vez tiene como

consecuencia que tenga un bajo valor calórico y una funcionalidad

nutricional como fibra dietética (21).

La inulina se encuentra en los tubérculos de yacón, pero su

contenido decrece rápidamente una vez se cosechan, aumentándose la

fructuosa, este proceso se reduce cuando se almacenan con una humedad

relativa del 90% y temperatura menor a 8 °C (22).

2.3. Aspectos químicos

2.3.1. Composición química de las hojas

Las hojas contienen sesquiterpenos, flavonoides, lactonas y un grupo

de sustancias aún no identificadas. Varios de estos compuestos tienen

actividad antioxidante, (neutralizar la actividad oxidante de moléculas

inestables conocidas como radicales libres, que ingresan a nuestro cuerpo

como contaminantes externos). Algunos estudios han demostrado que la

12

infusión de las hojas ayuda a reducir el nivel de glucosa en la sangre de

ratas normales y diabéticas (23).Los extractos foliares de yacón tienen la

capacidad de aumentar los niveles de insulina en sangre y

consecuentemente reducir los niveles de glucosa. Esta reducción se

manifiesta positivamente, manteniendo la capacidad filtrante de los riñones,

cuya falla se evidencia por aumento en la eliminación de creatinina y de

albúmina. Aunque estos resultados son muy promisorios, es necesario

evaluar plenamente la acción farmacológica de los extractos en humanos (24).

2.4. Diabetes mellitus

2.4.1. Descripción

La Diabetes proviene del griego atravesar ya que se creía que el agua

pasaba a través del paciente como un tubo sin retención del organismo. El

agua ingerido pasaba rápidamente a los riñones siendo excretados por la

orina, es por ello los síntomas de poliuria y polidipsia (25). La Diabetes

Mellitus (DM) es una agrupación de enfermedades o trastornos metabólicos

caracterizado por el aumento de glucosa en la sangre lo que se conoce

como hiperglucemia, producido por una falta de elaboración de la hormona

insulina, o tal vez por una falta de interacción entre los carbohidratos

metabolizados y la insulina, o también con las proteínas y los lípidos (26).Los

principales síntomas de la Diabetes son: poliuria (exceso de orina), polifagia

(incremento de la necesidad de comer), polidipsia (aumento de la necesidad

de tomar agua) y disminución en el peso corporal sin motivo (4).Se

establecen 3 tipos de diabetes : Diabetes Mellitus tipo 1, Diabetes Mellitus

tipo 2 y Diabetes Gestacional (que se da en la etapa de gestación), cada una

se caracteriza por diferentes tipos de síntomas cada una con diferentes

causas y diferentes influencias (4).

Se calcula que en el año 2002 había en el mundo, por cada 100.000

habitantes, unas 3.000 personas con DM y se producían 190 nuevos casos

13

al año (5). La previsión para el año 2030 son de 366 millones de diabéticos

en todo el mundo. La mayoría de ellos serán DM tipo 2; esta afección

alcanzará dimensiones de auténtica epidemia en los países desarrollados (5).

El aumento considerable se le adjudica al sobrepeso, sedentarismo,

al incremento en las personas ancianas, y la mala alimentación. Cuantificar

la prevalencia y el número de personas afectadas por la Diabetes es, por lo

tanto, clave para la planificación y la distribución de recursos (4) .Esta

enfermedad se puede dar por diferentes causas que puede incluir por

influencia ambiental y trastornos genéticos, también se debe a los

antecedentes familiares que hayan presentado DM, sedentarismo y

sobrepeso, gestación, ansiedad o estrés (4).-

En el Perú, la diabetes mellitus es una enfermedad que afecta a casi

dos millones de peruanos con una prevalencia de 6% a nivel nacional.

Según la oficina general de estadística e informática, 550 mil casos nuevos

de diabetes se reportaron entre los años 2011 y 2013, observándose un

incremento de 225,357 casos entre enero y julio del 2013 (6).

2.4.2. Clasificación

En 1997 se, promulgó una clasificación que está en vigencia. Se basa

fundamentalmente en su etiología y característica fisiopatológica. Se

incluyen cuatro niveles de personas que padecen de la enfermedad (7).

Diabetes Mellitus tipo 1

Diabetes Mellitus tipo 2

Otros tipos específicos de Diabetes

Diabetes Gestacional

Otros tipos específicos de diabete

2.4.3. Diabetes Mellitus tipo 1 (DM 1)

14

http://www.ins.gob.pe/portal/noticias/noticia/0/1238/instituto-nacional-de-salud-organiza-ii-simposio-del-dia-mundial-de-diabetes

Diabetes Mellitus tipo 1 (DM 1) se le conocía anteriormente como

diabetes insulinodependiente o diabetes de inicio juvenil, es un trastorno

autoinmune que implica la destrucción de las células por (activado células y

macrófagos C04 + C08 + y T) que Infiltran los islotes pancreáticos (27).

En la DM 1 las células beta del páncreas se destruyen lo que induce a

la insuficiencia de producción de insulina. El diagnóstico en los pacientes se

determina en la etapa de la pubertad, y la única forma de tratamiento es la

administración de insulina para que la persona pueda vivir por un período

mayor de tiempo (27).

2.4.4. Diabetes Mellitus tipo 2 (DM 2)

Este es el tipo más común de Diabetes, que corresponde a 85-90%

de los casos en el mundo. La hiperglucemia está causada por una

combinación de deficiencia de secreción de insulina y su acción. Un fallo

progresivo de las células beta es una característica importante de la

enfermedad. Una destrucción inmunológico rara vez progresa a un punto en

el que el paciente se convierte en dependiente de insulina para sobrevivir. La

cetoacidosis es poco frecuente y por lo general asociada con la Diabetes

Mellitus. La enfermedad es más común después de los 40 años de edad,

pero hoy en día esto se encuentra aumentado en los adultos jóvenes y

adolescentes debido al incremento de la obesidad. DM 2 se asocia con

varios trastornos metabólicos incluyendo la obesidad, la hipertensión, el

aumento de los pacientes con arterioesclerosis, dislipidemias (5).

No existe marcadores clínicos en los que se pueda determinar si

existe alguna alteración tanto de la producción de insulina como los

receptores de las células que ayudan al ingreso de la glucosa al interior de la

célula, por lo que si se observa en adultos un incremento de peso (obesidad)

se sugiere que existe una alteración en los receptores insulínicos, por el

contrario una disminución del peso sería una alteración en la producción de

la hormona (3).

15

La DM tipo 2 aparece por un problema de resistencia tisular a la

acción de la insulina asociado a un defecto más o menos evidente de la

secreción de la misma (3).

Más del 90% de todas las DM son del tipo 2. Por sexos predomina

ligeramente en la mujer. Como es el tipo de Diabetes más relacionada con el

envejecimiento, la obesidad, y tiene mayor predisposición genética que la

DM tipo 1, su prevalencia va en aumento. El factor hereditario es

incuestionable, por cuanto casi el 100% de los hermanos gemelos

univitelinos de pacientes diabéticos tipo 2 acabarán por ser también

diabéticos, así como más del 40% de los hermanos y gemelos no idénticos.

Para el tratamiento al inicio de la enfermedad deberá ser hipoglucemiantes

(HO) o antidiabéticos orales (ADO) (6).

2.4.5. Diabetes mellitus gestacional

Se presenta por un trastorno del metabolismo de los carbohidratos,

que se desarrolla durante el período de gestación. De acuerdo a la severidad

se determinara si requiere o no de la administración de insulina, la

enfermedad puede prolongarse después de la gestación, puede aparecer de

cada 10 mujeres en una por lo menos (7).

2.4.6. Otros tipos específicos de diabetes

16

2.4.6.1. Maturity-onset diabetes of the young (MODY)Este tipo de Diabetes se caracteriza por la enfermedad de

inicio temprano (por lo general antes de los 25 años) y un modo de

herencia autosómico dominante. Las mutaciones en ciertos genes

implicados en la regulación de la secreción de insulina han

demostrado ser la causa de la hiperglicemia y la resistencia a la

insulina es muy raro. MODY se pensaba que era raro, pero los datos

recientes sugieren que el 2-5% de todos los casos de DM2 puede ser

de tipo MODY (6).

2.5. Cuadro clínico

En el caso de que todavía no se haya diagnosticado la DM ni

comenzado su tratamiento, O que no esté bien tratada, se pueden encontrar los

siguientes signos (4).

Poliuria, polidipsia y polifagia.

Disminución de peso.

Cansancio y debilidad.

Disminución de la visión o cetonuria.

Glucosuria (presencia de glucosa en la orina).

Dolor a nivel abdominal.

Hormigueo o entumecimiento de pies y manos, ulceraciones, o heridas que

cicatrizan lentamente, piel seca.

Irritabilidad y cambios de ánimo.

Náuseas y vómitos.

Mal aliento

17

2.5.1. Diagnóstico

Se fundamenta en la revisión de los niveles de glicemia en una sola

toma o en varias. La OMS presentó diferentes pautas para poder

diagnosticar con precisión la Diabetes.

Síntomas de diabetes (poliuria, polidipsia o pérdida inexplicada de peso)

en conjunto con glicemia igual o superior a 200 mg/dl (11.1 mmol/L) en

cualquier instante del día.

Glicemia basal igual o superior a 126 mg/dl (7.0 mmol/L)

Glicemia igual o superior a 200 mg/dl (11.1 mmol/L) a las dos horas

durante la realización de un test de tolerancia oral a la glucosa (Curva de

glucemia con 75 g de Glucosa en 375 ml de agua) (6).

Hemoglobina glicosilada ≥ 6.5%(5).

2.6. Tratamiento

En cualquier tipo de Diabetes que presente el paciente, el único objetivo es

mantener los niveles de glicemia normales y es así que para cada tipo, existen

diferentes métodos para tratar de evitar el desequilibrio de glucosa en el

organismo (7).

2.6.1. Diabetes mellitus tipo 1

El tratamiento es mediante la aplicación de insulina regular por vía

intravenosa e infusión de solución salina (7).

18

TIPOS INICIO ACCIÓN

MÁXIMAACCIÓN

EFECTIVADURACIÓN

MÁXIMAUltra rápida

Lispro<0.25 horas 0.5 – 1.5 3 a 4 4 a 6

Rápidasoluble

cristalina0.5 a 1 2 a 3 3 a 6 6 a 8

IntermediaNPH 2 a 4 6 a 10 10 a 16 14 a 18

Lenta 2 a 4 6 a 12 12 a 18 16 a 20Prolongadaultra lenta 6 a 10 10 a 16 18 a 20 20 a 24

Glargina 2 a 4 No tiene 24 horas 24 horas

Mixta 70/3070% NPH

30% rápida0.5 a 1 Dual 10 a 16 14 a18

Mixta 2575% NPH

25% Lispro

2 a 4<0.25

6 a 100.5 a 1.5

10 a 163 a 4

14 a 164 a 6

Figura 4. Tipos de Insulina

2.6.2. Diabetes tipo 2

Debido a los trastornos del metabolismo que implican la enfermedad,

es necesario administrar diferentes medicamentos con la finalidad de

mantener el nivel de glicemia.

Por esta razón a más de administrar insulina al enfermo hay que

coadyuvar de algunos antidiabéticos orales como: Metformina (biguanidas),

Sulfonilureas (glibenclamida), inhibidores de la alfa-glucosidasa (acarbosa y

miglitol), thiazolidinediones, mitiglinida, inhibidores de dipeptidil peptidasa IV,

y las dosis van en dependencia de acuerdo a las necesidades del paciente

(28).

19

Figura 5. Tratamiento no farmacológico de la diabetes mellitus tipo 2.

Estructura Principios Mecanismo Ventajas del Inconvenientes

20

DIABETES MELLITUS TIPO 2

Manejo Nutricional Actividad Física

RecomendacionesDietéticas: Aspectos básicos• Moderar ingesta de carbohidratos• Fraccionar la alimentación (aumentarNúmero de comidas con porcionesmás pequeñas)• Aumentar consumo de verduras yleguminosas.• Aumentar ingesta de pescado.

Previo inicio de un programa de actividadfísica verificar:• Electrocardiograma normal• Ausencia de retinopatía avanzada, piediabético o neuropatía

Plan de alimentación individualAjustar soporte calórico según estadoNutricional y actividad física.• Carbohidratos: 50 - 60%• Proteínas: 10 – 20%• Grasas totales: 25 – 30%• Grasas saturadas: 7 – 10%• Colesterol: <300mg/día• Sal (NaCl) <6g/día

• Plan de actividad física personalizadoSegún estado físico, edad e historia médica.

• Recomendar la caminata rápida, bicicleta natación o baile (150 minutos por semana)

EDUCACIÓN ESTRUCTURADA(Individual o grupal, continua y evaluada)

Química Activos deacción fármaco del fármaco

Sulfonilureas:

1 generación

2 generación

ClorpropamidaGlibenclamida

GliclazidaGlimeripirida

GlipizidaGlisentidaGliquidona

Secretagogo de

insulina

Disminuye laglucemia en

ayunasy pos-prandiales,gran experiencia

deuso

Hipoglucemias,aumento de peso,

neuropatía,hepatopatía,reacción tipodisulfiram e

interaccionesFarmacológicas.

Biguanidas Metformina

Disminución de laproducción

hepáticade glucosa,

aumentode utilización de

glucosa

Adelgazamiento,mejora el perfil

lipídico, ausencia de

hipoglucemia

Efectos adversosgrastointestinales,acidosis láctica,

insuficiencia renal,precaución deinsuficiencia

hepática, cardiaca o

Pulmonar.

Inhibidores de las alfa-

glucosidasas

AcarbosaMiglitol

Disminución de laabsorción intestinal

de glucosa

Ausencia de riesgo

de hipoglucemia

Alteracionesgastrointestinales,

hepatopatía

Meglitinidas RepaglinidaNateglinida

Secretagogo deinsulina

Comienzo de acción

rápido, disminuye la

glucemia en ayunas

y pos prandiales.

Hepatopatía,aumento de peso

Tiazolidindionas RospiglitazonaPioglitazona

Activan receptores

en adipositos,aumentan captación

de glucosa yreducen la

gluconeogénesis

Disminución de laresistencia a

insulina, aumento de

utilización deglucosa

Hepatopatía,insuficiencia

cardiaca congestiva,

aumento de peo,edema

Figura 6. Tratamiento farmacológico de la diabetes mellitus tipo 2 Hipoglucemiantes

21

Oralmásoral

SecretagogoMásInsulinosencibilizador

Sulfoniurea másmetformina

Fracaso primario o secundario asulfoniureas o metformina

SulfonilureamásGlitasona

Fracaso primario o secundario asulfoniureas o metformina

MetforminamásRepaglinida

Fracaso primario o secundario a metformina si contraindicaciones para el uso de sulfonilureas o anteirregularidad de horarios de comida

Insulino sensibilizadoresperiféricos másinsulinos ensibilizadorhepático

MetforminamásGlitasona

Ante fracaso primario o secundario a metforminas si las sulfonilureas están contraindicadas

Otros SulfonilureamásAcarbosa

Glucemia pos-prandiales noadecuadamente controladas consulfonilureas

Oral MásInsulina

Insulino sensibilizador másinsulina

Insulina másmetforminas

En obesos tratados con insulina, con elevados requerimientos oInadecuado control. Fracaso o secundario a metformina,Como paso intermedio previo a la insulinización definitiva.

Insulina más otros Insulina másacarbosa

Para control de glucemias posprandialessi las basales sonaceptables en pacientes ya tratadosCon insulina.

Tripleterapia

Secretagogo másInsulino sensibilizadores

Sulfonilureas másmetforminas másglitasona

Escasa experiencia, podría tenerutilidad en algunos pacientes difíciles de controlar con las otras opciones, combinando fármacos de mecanismo de acción complementario

Secretagogo másInsulino sensibilizador más insulina

Repaglinida + metformina + Insulina

2.7. Complicaciones

22

Figura 7. Indicaciones de terapia combinada en la diabetes mellitas tipo 2.

2.7.1. La retinopatía diabética

La retinopatía diabética, causado por el daño a la vascularidad de la

retina, es una causa común de la ceguera y la discapacidad visual en la

población en edad de trabajar. La ocurrencia de retinopatía diabética se

puede reducir y/o prevenirse mediante el tratamiento adecuado y oportuno (28).

2.7.1.1. La neuropatía diabética

La neuropatía diabética clasificado como periférica, proximal,

focal y autonómica, es la más común de todas las complicaciones de

diabetes a largo plazo, con casi el 60% de los pacientes que suelen

tener algún tipo de daño en los nervios. Es una enfermedad

progresiva que supone la pérdida de sensación, así como el dolor y la

debilidad, y puede conducir a la amputación de extremidades (29).

2.7.1.2. Nefropatía diabética

La nefropatía diabética es la principal causa de enfermedad

renal en etapa terminal (ESRD) y la causa más frecuente de

trasplante renal en el mundo desarrollado. La presencia y aumento

progresivo de la albúmina en la orina, junto con la presión arterial

elevada son los biomarcadores glomerular de la nefropatía. En

ausencia de una intervención adecuada, la condición persiste y

conduce a la pérdida de proteína en la orina y una disminución en la

función renal en la forma de la menor tasa de filtración glomerular (29).

2.7.1.3. El pie diabético

23

La principal causa de mortalidad en los enfermos diabéticos se

debe al pie diabético, que se presenta en el 15-20% de estos

enfermos. El pie diabético constituye un grave problema de salud

pública, tanto por su alta frecuencia como por los elevados costes

sanitarios y sociales derivados de los continuos ingresos hospitalarios

y de la incapacidad laboral que ocasiona (30).

El manejo del pie diabético requiere un acercamiento

multidisciplinario que se dirija a los problemas componentes de los

sistemas nervioso, vascular, esquelético, inmune y tegumentario.37

En presencia de neuropatía o isquemia, la secuencia de un trauma

menor (evento desencadenante) que conduce a ulceración cutánea y

falla de la curación de la herida es una causa frecuente de

amputaciones de las extremidades inferiores en pacientes

diabéticos.Tanto la neuropatía como la vasculopatía son importantes

factores de riesgo para el desarrollo de úlceras de pie diabético. La

ausencia del reflejo del tendón de Aquiles, insensibilidad del pie y

tensión de oxígeno transcutánea de menos de 30 mm de Hg son

predictores independientes de úlceras del pie diabético (30).

24

III. PARTE EXPERIMENTAL

3.1. Materiales y métodos

Materiales:

3.1.1. Material biológico

40 ratones, (Mus musculus) cepa Balb/C53

3.1.2. Material Farmacológico

Extracto hidroalcohólico al 10% p/v de Smallanthus sochifolius

(Poepp) Rob (yacón)

Extracto de libre comercio Fitosana.

Glibenclamida tableta 5 mg. Marfan.

Aloxano (5,6 – dioxyuracil) Sigma.

3.1.3. Material de vidrio

Tubos de ensayos de pyrex

Embudo de pyrex

Beacker 250 mL marca pyrex

Fiola de 100 mL marca pyrex

Probeta 250 mL marca pyrex

Frascos de vidrio color ámbar

3.1.4. Equipos

Balanza analítica al 0,001g (Metter Zurich)

Estufa (Memmert)

25

Refrigerador

Glucómetro Accu-Chek Active (Laboratorios Roche)

Kit Sistemas Elecsys 1010/2010 (Laboratorios Roche)

Equipo de disección

3.1.5. Reactivos

Tiras reactivas para medición de glucosa (Laboratorios Roche)

Alcohol al 80%

Éter etílico

Benceno

n - hexano

n - butano

n - propanol

Cloroformo

Acetato de etilo

Acetona

EtOH

MeOH

H2O destilada

3.2. Recolección y preparación del material vegetal

26

Se recolectaron 15 Kilos de hojas de la especie hojas de Smallanthus

sochifolius (Poepp) Rob yacón de la comunidad de la comunidad de Tsachopen

distrito de Chonta bamba, provincia de Oxapampa región Pasco en octubre del

2014 la muestra recolectada se envolvió con papel Kraff y se rocèo alcohol de 96°

para su conservación, se embalo en bolsas negras y en cajas de cartón con su respectivo

rotulo (31).

Figura 8. Recolección de hojas Smallanthus sochifol Smallanthus sochifolius (Poepp)

Rob “yacón”

27

Figura 9. Recolección de hojas Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob “yacón”

Luego se deshidrato y micro pulverizó posteriormente se macero en

1000 mL de alcohol 80% por 7 días, luego se evaporo el solvente al aire libre

y se llevara a la estufa a menos de 40 ºC hasta la eliminación de el (31).

Figura 10. Evaporación del solvente al aire libre.

28

Figura 11.Secado a menos de 40 °C grados en la estufa.

Solvente y obtención de peso constante, luego se pesó y almaceno

en un envase de vidrio color ámbar y se coloca a refrigeración hasta su

posterior uso (31).

Figura 12. Almacenado en envase de vidrio extracto de Smallanthus sochifolius

(Poepp) Rob “yacón”

3.3. Determinación de glucosa en vena caudal de cola de ratón.

29

Para realizar la determinación de glucosa en sangre en los animales se

utilizara un kit comercial del Glucómetro Accu-Chek Active de laboratorios Roche (32) y tiras reactivas compatibles con el glucómetro que serán insertadas

apropiadamente en el glucómetro, la sangre será obtenida haciendo una pequeña

incisión en el ápice de la cola hasta obtener una gota homogénea y se aplicara

directamente sobre la tira reactiva del glucómetro. El nivel de glucosa en la sangre

se leerá en el glucómetro pantalla en mg/dL.

Figura 13. Extracción de sangre en vena caudal de cola de ratón.

30

Figura 14. Determinación de glucosa pre prandial.

3.4. Evaluación del efecto hipoglucemiante en ratones normoglucémico.

Se utilizarán 50 ratones ratones (Mus musculus) cepa Balb/C53 con 35 a 40

g de peso promedio y de 8-10 semanas de edad. Los animales fueron

suministrados por el Instituto Nacional de Salud, los cuales se mantuvieron a 22 ±

1 ºC, humedad relativa de 90 ± 5%, fotoperíodo de 12 horas luz/12 horas

oscuridad, con libre disponibilidad de alimento (Rodentina ®) y agua (33). Doce

horas antes del bioensayo evaluó la actividad hipoglucemiante retirando el

alimento y dejando solamente a disponibilidad el agua (34), se tomó las primeras

muestras de sangre y se determinó los niveles de glicemia basal en animales

normoglicémicos, aceptando como glicemia normal entre 70 mg/dL y 110 mg/dL (31).Luego se procedió a la administración de los diferentes tratamientos y control

para lo cual se distribuyó en cuatro grupos de 10 ratones cada uno y se hizo

aleatoriamente, a los cuales se les aplicara vía intraperitoneal (IP), así:

Grupo I. Extracto hidroalcoholico de hojas de Smallanthus sochifolius (Poepp)

Rob “yacón” de 1000 mg/Kg)

Grupo II. Extracto de libre comercio 30 mL/Kg),

31

Grupo III.Glibenclamida 10 mg/Kg,

Grupo IV. Control: suero fisiológico (35).

Para lo cual. Se llevará a cabo la determinación de la variación de los niveles

de glucosa sanguínea en ratones normales.

% de la variación =de glucemia

Gx-Go x100Go

Go= nivel inicial de glucemia

Gx= niveles de glucemia a las: 1, 2, 4, 6,24 horas posteriores a la administración de los tratamientos.

32

Figura 15. Administración de los tratamientos vía intra peritoneal.

3.5. Evaluación del efecto hipo glucémico en ratones con hiperglucemia transitoria por sobrecarga oral de glucosa.

Se utilizaron 50 ratones (Mus musculus) cepa Balb/C53, con un peso

promedio 40 g,de ocho semanas de edad, los cuales fueron acondicionados

durante un periodo de una semana antes del ensayo a una temperatura de 22 ± 1

ºC, con un ciclo de 12 hrs. luz y 12 hrs. de oscuridad, con agua y alimento a libre

demanda (33). Los animales fueron marcados y pesados de forma individual para

una plena identificación, posteriormente se colocaron en jaulas de acero

inoxidable, divididos al azar. Doce horas antes del bioensayo para evaluar la

actividad hipoglicemiante se retiraro el alimento dejando solamente a

disponibilidad el agua, se tomaron las primeras muestras de sangre y se

determinó los niveles de glicemia basal (T-1) en animales normoglicémicos,

aceptando como glicemia normal entre 70 y 110 mg/dL (31). Inmediatamente se

suministró los diferentes tratamientos VO así:



Grupo II.Extracto de libre comercio 30 mL/Kg),

Grupo III.Glibenclamida 10 mg/Kg,

Grupo IV.Control: suero fisiológico (35).

Una hora después se tomó las segundas muestras de sangre (T0) y se

administró la sobrecarga oral de glucosa (2.000 mg/Kg). De nuevo se midió el

nivel de glicemia a la 2 hora (T1), 4 horas (T2) , 6 horas (T3) y 24 horas(T4) (34) (35) y

33

se llevó a cabo la determinación de la variación de los niveles de glucosa

sanguínea en ratones hiperglucemicos con sobre carga de glucosa.

% de la variación =

de glucemia

Gx-Go x100

Go


Gx= niveles de glucemia a las: 2, 4, 6 y 24 horas posteriores a la

administración de los tratamientos.

34

Figura 16. Administración de sobre carga oral de glucosa vía oral en ratones.

3.6. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones con hiperglucemia por (Metodo:Zanoello AM,et al 2002),modificado en la frecuencia de administración de aloxano

Para el ensayo se utilizaron 45 ratones (mus musculus) cepa Balb/C53

suministrados por el Instituto Nacional de Salud), de 8 semanas de edad y 40 g de

peso promedio. Los animales se sometieron a un periodo de adaptación durante

una semana, en jaulas de acero inoxidable (40 x 40 x 20cm) con libre acceso de

agua y alimento a libre demanda. Las condiciones durante un periodo de una

semana antes del ensayo fueron: temperatura 22 ± 1 ºC, fotoperiodo 12 horas luz,

12 horas oscuridad (33). Previo a la aplicación de los tratamientos Inicialmente se

35

tomaron los niveles basales de glucosa en sangre (NGS) de los animales que

llevaban un periodo de ayuno de aproximadamente 12 horas, a fin de garantizar

homogeneidad de comportamiento, posibilitar la designación al azar de cualquier

individuo a un grupo experimental y posteriormente se realizó comparaciones

entre grupos. Luego se llevo a cabo la aloxanización por la inyección a ratones

vía intraperitoneal a los cuales se les administró una vez cada tres días, hasta

completar tres dosis de solución salina de aloxano 70 mg/kg de peso del animal y

se dejó descansar una semana (35), Se determinó la glucosa en sangre mediante

un kit comercial del Glucómetro Accu-Chek Active de laboratorios Roche fueron

incluidos como animales hiperglucemicos en el estudio los animales que

presentaron glucosa sanguínea superior a 200 mg/dL (31) luego se distribuyó en

cuatro grupos al azar de 10 cada uno luego se les administraran los diferentes

tratamientos:



Grupo II. Extracto de libre comercio 30mL/Kg),

Grupo III. Glibenclamida 10 mg/Kg,

Grupo IV. Control: suero fisiológico (35).

Los niveles de glicemia en sangre se determinaron a la 2 hora (T1), 4 horas

(T2) 6 horas (T3) y 24 horas (T4) y horas después se suministor los tratamientos.

Luego se llevo acabo la determinación del porcentaje de variación de glucosa

sanguínea en ratones hiperglucemicos por administración de aloxano.

% de la variación =

de glucemia

Gx-Go x100

Go


Gx= niveles de glucemia a las: 1, 2, 4 horas posteriores a la administración de los tratamientos.

36

Figura 17. Administración de aloxano via intra peritoneal en ratones.

IV. RESULTADOS

4.1. Estudio taxonómico

Fue determinada según el sitema de clasificación de cronquis (1988) (16). Dicha clasificación se realizó en el Museo de Historia Natural de la U.N.M.S.M.

4.2. Estudio fitoquimico

4.2.1 prueba de solubilidad

37

El extracto hidroalcohólico de hojas de Smallanthus sonchifolius

(poepp) Rob.”yacón”, mostro tener solubilidad en solventes polares y

ser insolubles en solventes poco polares.

Tabla 7 Prueba de solubilidad de Smallanthus sonchifolius (poepp)

Rob.”yacón”

Solventes ResultadoEter etílico -Benceno -n - hexano -n - butanol +n - propanol +Cloroformo -Acetato de etilo +Acetona +Etanol +Metanol +Agua +

Leyenda: (+) Soluble

(-) Insoluble

4.2.2 Analisis fitoquimico

Tabla 7 Analisis fitoquimico presencia de metabolitos secundarios de

smallanthus sonchifolius (poepp) rob.”Yacon” y el preparado de libre

comercio de yacón.

METABOLITO Reactivo Resultados

Smallanthus

sonchifolius

(poepp) Rob

”yacon”

Preparado de

libre comercio de

yacón Fitosana.

38

Carbohidratos Molish + +

Azucares

reductores

Fehling + +

Antraquinonas Bortranger + +

Saponinas Agua esteril

+agitación

+ +

Triterpenoides y/o eteroides

Liberman-

Burchardad

+ +

Flavonoides Tricloruro de

aluminio

+ +

Shinoda + +

Alcaloides Dragendorf - -

Mayer - -

Leyenda (+) Presencia (-) Ausencia

Figura 18. Resultado de la prueba de Carbohidratos con Molish.

Leyenda:

39

M) Smallanthus sonchifolius (poepp) Rob.”yacon”,

MF) Preparado de libre comercio de yacón Fitosana

CTRL) Control

Figura 19. Resultado de la prueba de azucares reductores Fehling.

Leyenda:



CTRL) Control

Figura 20. Resultado de la prueba de taninos gelatina.

Leyenda:


40


CTRL) Control

Figura 21. Resultado de la prueba de taninos tricloruro férrico.

Leyenda:



CTRL) Control

Figura 22. Resultado de la prueba de antraquinonas Bortranger.

Leyenda:

41



CTRL) Control

Figura 23. Resultado de la prueba de Saponinas agua más agitación.

Leyenda:



CTRL) Control

Figura 24. Resultado de la prueba de Triterpenoides y/o eteroides.

Liberman-Burchardad.

Leyenda:

42

M) Smallanthus sonchifolius (poepp) Rob.”yacon”


CTRL) Control

Figura 25. Resultado de la prueba de Flavonoides shinoda.

Leyenda:



CTRL) Control

Figura 26. Resultado de la prueba de Flavonoides tricloruro férrico.

Leyenda:

43


MF) Preparado de libre comercio de yacón fitosana

CTRL) Control

Figura 27. Resultado de la prueba de Alcaloides Dragiendorf.

Leyenda:



CTRL) Control

Figura 28. Resultado de la prueba de Alcaloides Mayer.

Leyenda:

44



CTRL) Control

4.2.2 Estudio farmacológico

Tabla 3. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones normoglucémicos.

45

Leyenda: (*) Estadísticamente significativo

Tabla 4. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones con hiperglucémia

por sobre carga oral de glucosa

46

HORA 0 HORA2 HORA 4 HORA 6 HORA 24

0

20

40

60

80

100

120

CONTTROLGLIBENCLAMIDA 10mg/kgExtracto de hojas de yaconPreparado de libre com-ercio de yacon 30mL/Kg

Gráfico 1. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones normoglucémicos.

Tabla 5. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones con hiperglucémia por administración de Aloxano.

47

HORA 0 HORA2 HORA 4 HORA 6 HORA 24

0

50

100

150

200

250

300

CONTTROLGLIBENCLAMIDA 10mg/kgExtracto de hojas de yaconPreparado de libre com-ercio de yacon 30mL/Kg


Gráfico 2. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones con hiperglucémia por sobre carga orla de glucosa

48


49

Gráfico 3. Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones con hiperglucémia por administración de Aloxano.

V. DISCUSIÓN

La diabetes mellitus es una enfermedad crónica e incurable que se

ha constituido un campo propicio para el uso de productos naturales diversos (5).

A nivel de organismos mundiales y nacionales se ha tratado de complementar y

articular la medicina tradicional con la medicina moderna y se hacen intentos por

validar científicamente las propiedades de productos a los cuales se les atribuye

propiedades antidiabéticas (4).

Estudios demuestran amplia variación en la dosis y vía de administración del

aloxano en la inducción de diabetes mellitus experimental a ratas, entre ellos

podemos mencionar que por vía intravenosa se han empleado dosis de 40

mg/kg (36), 100 mg/kg (37) , 50 mg/kg (38), 42 mg/kg en solución acuosa al 2% (39),

por vía subcutánea 175 mg/kg (40), por vía intraperitoneal dosis de 200 mg/kg en

el período neonatal (41), 100 mg/kg en buffer citrato (pH 4.75) (42). En el presente

estudio se usó dosis repetidas de aloxano vía intraperitoneal a los cuales se les

administro una vez cada tres días, hasta completar tres dosis de solución salina

de aloxano 70 mg/kg de peso del animal y se dejó descansar una semana (35).

En el presente estudio una de las limitaciones fue, la identificación de la

concentración del preparado de libre comercio (yacón) por lo que se probó

diferentes dosis hasta identificar una dosis en la cual se evidencio el efecto

hipoglucemiante del extracto de libre comercio (31).

Los resultados de nuestro estudio revelan que el extracto de hojas de

Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob ”yacon”. y preparado de libre comercio de

(yacon) en ratones normoglucemicos produjeron durante todo el experimento

una disminución continua de la glicemia comparada con la hora 0, lo cual no

produjo una disminución de la glicemia en porcentajes que fueran

estadísticamente significativos en relación con el grupo control. Por lo tanto, en

nuestras condiciones experimentales no se puede concluir que estos preparados

50

sean efectivamente hipoglicemiantes en ratones normoglicemicos.Siendo la

glibenclamida el que logró un efecto hipoglicemiante significativo (p<0,05) a la

hora 24. Los ratones hiperglicémicos por sobre carga oral de glucosa que

recibieron el extracto hidroalcoholico de hojas de Smallanthus sochifolius

(Poepp) Rob ”yacon” y preparado de libre comercio de (yacon) mostraron efectos

hipoglicemiantes en las hora 0, 2, 4, 6, y 24, pero sólo a la hora 6 en ambos

grupos estos valores de descenso fueron estadísticamente significativos

(p<0,05) ;respectivamente estos niveles no se sostienen hasta la hora 24, lo

cual puede deberse a que sólo se administró una dosis diaria, y que los

principios activos de estos preparados se metabolizan y el efecto tenga una

duración menor de 24horas.Para la glibenclamida hubo igualmente descenso de

la glucemia a las horas 4,6y 24 estos valores fueron estadísticamente

significativos (p<0,05). Lo ratones hiperglucemicos inducidos por aloxano

mostraron efectos hipoglicemiantes en las hora 2,4 y 6, pero sólo a la hora 6 en

ambos grupos estos valores de descenso fueron estadísticamente significativos

(p<0,05) los presentes resultados nos hace inferir que la diabetes lograda por el

aloxano administrado fue diabetes mellitus tipo 2 debido a que se evidencia

efecto hipogluecemiante posiblemente extrapancreático. Para la glibenclamida

no se evidencia efecto hipogluecemiante estos resultados no validan

completamente los usos empíricos de esta estos preparados para las personas.

Sin embargo, no se puede descartar un efecto hipoglicemiante del extracto

hojas de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob ”yacon” y preparado de libre

comercio de (yacon), mientras no se realicen estudios con dosis mayores o con

extractos más purificados,pues el presente se considera un estudio preliminar en

el cual se seleccionaron dosis empíricas por falta de datos sobre estudios

previos farmacológicos experimentales de de hojas de Smallanthus sochifolius

(Poepp) Rob ”yacon” y preparado de libre comercio de (yacon). De todas

maneras, a la hora 6 hubo una respuesta estadísticamente muy significativa de

efecto hipoglicemiante comparada con el grupo control. Este efecto podría ser

extrapancreático, lo cual sería de importancia terapéutica frente a las

sulfonilúreas.

51

Podría ser que el extracto hojas de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob

”yacon”. y preparado de libre comercio de (yacon), no tuviesen un efecto

hipoglicemiante mediado por la liberación de insulina, pero sí con utilidad en el

tratamiento de la diabetes a través de otros mecanismos antihiperglicemiantes

como incrementar la sensibilidad a la insulina, inhibir la gluconeogénesis,

interacción con receptores nucleares PPAR-Gamma (24,25,26) y muchos otros

posibles mecanismos de acción, que habría que dilucidar en posteriores

investigaciones.

Actividad farmacológica del extracto hojas de Smallanthus sochifolius (Poepp)

Rob ”yacon”. y preparado de libre comercio de (yacon), disminuyendo los niveles

de glicemia.

52

VI. CONCLUSIONES

El extracto hojas de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob ”yacon”. y preparado

de libre comercio de (yacon), no tienen efecto hipoglicemiante frente a ratones

normo glicémicos.


de libre comercio de (yacon), tienen en efecto hipoglucemiante frente a ratones

normo glucémicos con sobre carga oral de glucosa.


de libre comercio de (yacon), tienen efecto hipoglucemiante frente a ratones

hiperglicemicos por administración de aloxano

53

VII. RECOMENDACIONES

Realizar estudio de toxicidad aguda y crónica del extracto hojas de

Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob ”yacon”. y preparado de libre comercio de

(yacon).

Realizar estudios complementarios de dosis efectiva DE del extracto de hojas

de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob ”yacon”. y preparado de libre

comercio de (yacon)

Realizar estudios clínicos del extracto hojas de Smallanthus sochifolius

(Poepp) Rob ”yacon”. y preparado de libre comercio de (yacon) en personas

con diabetes mellitus tipo 2.

Realizar estudios que demuestren la concentración y composición del

preparado de libre comercio de (yacon).

Brindar los resultados del presente estudio a el equipo multidisciplinario de

servicios de salud, con la finalidad de incluir terapias alternativas con

productos naturales, ,para el tratamiento alternativo de diabetes mellitus tipo II

54

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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59

IX. ANEXO

ANEXO 1: Criterios de diagnóstico de diabetes mellitus tipo 2

61

ANEXO 2: Clasificación Taxonómica Del Yacón

DIVISION : MAGNOLIOPHYTA

CLASE : MAGNOLIOPSIDA

ORDEN : ASTERALES

FAMILIA : ASTERACEAE

GÉNERO : Smallanthus

ESPECIE : Smallanthus sonchifolius (Poepp) Rob

ANEXO 3: Valores descriptivos de evaluación del efecto hipoglucémico en ratones normoglucémicos.

62

ANEXO 4: Valores descriptivos de Evaluación del efecto hipoglucémico en ratones con hiperglucémia por sobre carga oral de glucosa.

ANEXO 5: Valores descriptivos de Evaluación del efecto hipoglucémico enratones con hiperglucémia por administración de Aloxano.

63

ANEXO 6: Certificado de clasificación taxonómica Smallanthus sonchifolius

(Poepp) Rob ”yacon”.

64

Jorge inche cabello

Health & Medicine

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