Guia de Practicas de Analisis Clinicos i

3B-2

GUÍA DE PRÁCTICA

Unidad académica: EAP DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ANÁLISIS CLÍNICOS I

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

Autor: Dr. Juan Manuel Parreño Tipian

INTRODUCCIÓN

El laboratorio clínico dispone de los métodos de análisis clínicos, que estudia los

diversos procesos utilizados en la exploración clínica y hace la interpretación

bioquímica y patológica de los resultados.

Por su amplitud y por la evolución vertiginosa de especialización se ha dividido en:

hematología, inmunohematología, bioquímica clínica, microbiología clínica,

parasitología clínica y líquidos biológicos. Es por ello que para fines didácticos se

desarrollará dichos campos en los 2 semestres académicos que corresponden a los

análisis clínicos I y II.


I. PRÁCTICA No. 1: TOMA DE MUESTRA PARA LOS DIVERSOS LÍQUIDOS BIOLÓGICOS. SANGRE TOTAL, SUERO, PLASMA, SANGRE DESFIBRINADA. RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES EN SANGRE FRESCA Y COLOREADA. RESISTENCIA GLOBULAR

1.1 Marco TeóricoLa toma de muestra de sangre o de cualquier fluido biológico tiene importancia en la buena determinación de los análisis clínicos ya que constituyen el primer paso en todo el proceso dependiendo de una serie de factores. El reconocimiento de los elementos formes nos informa acerca de las características y diferenciaciones en una muestra de sangre fresca y sangre coloreada.

Líquidos Biológicos:

1. Sangre 2. Orina 3. Esputo 4. Jugo Gástrico 5. Contenido Duodenal 6. Líquido Cefalorraquídeo 7. Liquido sinovial 8. Lìquidos serosos (pleural, peritoneal, articular) 9. Líquido amniótico y seminal 10. Heces


Las determinaciones hematológicas y bioquímicas pueden realizarse en sangre total, suero o plasma.

1.2 Competencias

1.-Distingue los diversos métodos para la toma de muestra de los diversos líquidos biológicos2. Explica las diferencias entre los líquidos de sangre total, plasma y suero sanguíneo.3. Identifica los diversos elementos formes 4. Diferencia los elementos formes en sangre fresca y coloreada.

1.3 Materiales y Equipos

Materiales1. Agujas descartables 20 G x 1 ½2. Algodón 3. Alcohol4. Tubos de ensayo5. Viales con anticoagulantes6. Perlas de vidrio7. Matraz8. Pipetas

Reactivosa. Anticoagulantes: De Wintrobe:

Oxalato de Amonio ------ 1.2 gr.Oxalato de Potasio ------ 0.8 gr.Agua destilada ------ 100 mL.Formol al 40% ------ 1 mL.

Haskins Trotman: Oxalato de potasio al 2% Citrato Trisódico al 3.8% Oxalato de Sodio al 1.34% Heparina al 0,75% EDTA

1.4 ProcedimientoA. Toma de muestra. SANGRE VENOSA:


1. El paciente permanecerá sentado con el brazo extendido reposando sobre la mesa apoyado sobre una almohadilla.2. Se colocará una ligadura de goma a unos 7 cm. por encima del codo, teniendo la precaución de no comprimir fuertemente. Esta ligadura colocada más de 2' provoca una hemoconcentración con acumulaciones subproductos metabólicos.Se elige la vena más prominente sobre la superficie de flexión del codo (VENA MEDIANA CEFALICA)3. Se desinfecta la región con una torunda de algodón empapada al alcohol yodado.4. Se atraviesa la piel con la aguja manteniendo el bisel hacia arriba directamente sobre la vena penetrando en ella.5. Una vez lograda la cantidad de sangre necesaria se afloja la ligadura mientras la aguja permanece aun en la vena.6. Se saca la aguja y se aplica una torunda ligeramente humedecida en alcohol flexionando el codo.7. Para efectuar los frotises se tomará una gota de sangre tomada directamente de la aguja antes de mezclarla con el anticoagulante sobre para objetos desengrasados y secos. En niños que no son muy palpables las venas se tomará la sangre de la vena yugular.

SANGRE CAPILAR:Se obtiene por punción cutánea y se utiliza cuando se requieren pequeñas cantidades de sangre.Debe utilizarse una lancetaEn la yema del dedo. En los niños en el lóbulo de la oreja o bien en el talón dilatado y la sangre fluya espontáneamente.

Obtener los siguientes componentes:

1. SANGRE TOTAL Y PLASMAEn une vial con anticoagulante colocar 5 ml. de sangre, Mezclar Colocar en un tubo de ensayo y centrifugar 10 minutos a 1500 rpm.

2. SUEROEn un tubo de ensayo colocar 5 mL. de sangreCentrifugar 10 minutos a 1500 rpm.

3. SANGRE DESFIBRINADAEn un vaso pequeño o matraz que contiene perlas de vidrio, colocar 3 a 5 mL. de sangre sin anticoagulante. Se agita durante 15 minutos. La FIBRINA se deposita sobre estos cuerpos en forma de filamentos elásticos y blancos.

El líquido que queda se denomina sangre desfibrinada y está constituida por suero y glóbulos que se puede confirmar por centrifugación.


La fibrina es de color blanco y se observa lavando con agua destilada.

RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES:a. EN MUESTRA FRESCA

b. EN MUESTRA COLOREADA1. Colocar 1 gota de sangre en un porta-objeto se coloca un cubreobjeto y observar.

Elementos de forma discoidea de color amarillo: eritrocitos unidos formando pilas por el fenómeno de la tensión superficial, estos discos se observan de color rosado.Elementos transparentes e incoloros: Leucocitos.Plaquetas: no se visualizan por ser muy pequeños.Tamaño: eritrocitos: 7.2 u

leucocitos: 5 a 20 uplaquetas: 2 a 4 u

2. Otro portaobjeto: 1 gota en uno de los extremos y con otro portaobjeto haciendo un ángulo de 45 grados hacer un frotis. Secar al medio ambiente.Se lleva a colorear con colorante Wright: con 10 a 12 gotas cubriendo el frotis. Mezclar soplando por 30 segundos.Se adhiere agua destilada, nuevamente se sopla mezclando.Dejar en reposo por 10 minutos.Lavar con agua de caño escurrir la lámina en forma vertical.Una vez seco se coloca 1 gota de aceite de cedro, elevar el condensador y observa con objetivo de inmersión.Se observa: Eritrocitos en forma discoidea con un halo en la parte central

Leucocitos: Mononucleares: Monocito 16 a 22 uLinfocito 7 a 10 u

Polimorfonucleares: Neutrofilos, Eosinófilos, Basófilos: 9 a 12 u

1.5 ResultadosLos alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.

1.6 Cuestionario1. ¿Qué diferencia encuentra Ud. entre sangre capilar, sangre venosa y sangre

arterial?2. ¿Cómo se obtiene la sangre desfibrinada?3. ¿Cuál es la composición química del anticoagulante de Wintrobe y como

actua en la sangre evitando la coagulación de la misma?4. ¿Qué diferencias existen entre suero y plasma?5. ¿Cómo se observan los elementos formes en sangre fresca y sangre

coloreada? Dibuje utilizando colores.

1.7 Fuentes de información


1. Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray Masson S.A; 2001.

2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985.

3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patología estructural y funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999.

4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana; 1999.


II.PRÁCTICA No.2: HEMATIMETRIA. RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.DOSAJE DE HEMOGLOBINA.

A. HEMATIMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.

2.1 Marco teóricoLa hematimetría es un método para contar los glóbulos rojos de la sangre. La hemoglobina es una proteína que se encuentra en el interior de estos elementos y su función fundamental es la de transportar el O2 y el CO2. El concepto de anemia descansa sobre la determinación de estos componentes. Estas pruebas se realizan habitualmente como parte del hemograma completo.

2.2 Competencias1. Reconoce la cámara de Neubauer y los campos donde se efectúan los contajes

correspondientes de los elementos formes. 2. Opera con destreza el proceso del recuento de glóbulos rojos.

2.3 Materiales y equipos

MaterialesCamara de NeubauerPipeta de Thoma para glóbulos rojos

ReactivosLIQUIDO DE DILUCIÓN:Las más conocidas son las de HAYEM, GOWER y MARCANO

SOLUCIÓN DE GOWER:Sulfato de Sodio ........ 12.5 gr.Cloruro de Sodio ......... 1 g.Bicloruro de Mercurio..... 0,5 g.Agua destilada csp ....... 200 ml.

2.4 Procedimiento


1. Aspirar sangre hasta 0.5 ó 1 según la dilución 1 en 200 ó 1 en 100.2. La sangre que moja la superficie externa de la pipeta se limpia rápidamente con

papel especial o con gasa.3. Si la sangre pasa la marca de 0.5 ó 1 se retira por capilaridad tocando la punta

de la pipeta con gasa o algodón.4. Completar con el líquido de dilución hasta la marca de 1.1.5. Mientras se aspira el líquido de dilución, se hace girar la pipeta entre el pulgar y

el índice de la mano derecha.6. Retirando la boquilla se imprimen movimientos durante 1 ó 2 minutos.7. Desechar las primeras gotas y sin perdida de tiempo tocar con una gota pequeña

el borde de la superficie pulimentada en que están en contacto la cuadricular de la cámara y el portaobjeto.

8. Esta gota se insinúa por debajo del cubreobjeto por capilaridad.9. La suspensión no debe escurrirse en los surcos laterales ni debe formarse

burbujas de aire.10.Dejar transcurrir 3 minutos para que se depositen los glóbulos.11.Llevar la cámara a la platina del microscopio. Iluminar bien. Comprobar si hay

uniforme distribución de hematíes.12.Efectuar el recuento con el objetivo de gran aumento, manteniendo el

condensador bajo y el diafragma parcialmente cerrado, nunca se tocara el cubreobjeto con la lente, ello induce a groseros errores al modificar la posición de los corpúsculos.

Para evitar toda confusión al contar los glóbulos, se incluyen los hematíes que tocan las líneas divisorias izquierda y superior como i estuviera dentro de los cuadrados, los que tocan los lados derecho e inferior no se toman en cuenta.No debe haber diferencia de más de 18 unidades de número de glóbulos rojos entre los 5 cuadrados.

Cálculos:Con la dilución al 1 en 200 contar los glóbulos comprendidos en 5 grupos de 16 luego se aplica la siguiente fórmula: (Cálculo razonado)N x 10 x 200 x 400------------------------- = Hematíes por mm3 de sangre. 80De donde:

N: número total de hematíes en 80 cuadraditos.10: altura de la cámara. Para referir a 1mm3 de sangre diluida.200: dilución de la pipeta para referir al 1 m3 de sangre sin diluir.400: número total de cuadraditos.80: para referir al número de cuadraditos en el que se ha llevado acabo el

recuento.O también: los glóbulos rojos de los 5 cuadrados se le agregan 4 ceros


Cifras normales:En estado de salud existe aproximadamente 5’000,000 de hematíes por mm3 de sangre.El número es un poca menor en las mujeres 4’500,000 por mm3.

Interpretación:La disminución de hematíes se denomina ANEMIA u OLIGOCITEMIA y se da también en leucemia y después de hemorragias.El aumento se denomina POLICITEMIA o POLIGLOBULIA.Hay poliglobulia en el recién nacido hasta 7!000,000 y va descendiendo gradualmente para llegar al del adulto hacia los 15 años.La policitemia carece de importancia y en patología es infrecuente.


2.6 Cuestionario1.¿Cuál es el fundamento del proceso de la hematimetria?2.¿Cuál es la composición química de los líquidos de dilución utilizados en hematimetría?3.Explique mediante un esquema el reticulo de Thoma4.Explique la fórmula utilizada en el recuento de glóbulos rojos.

2.7 Fuentes de información1. Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona:

Toray Masson S.A; 2001.2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su

interpretación. 3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985.3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patología

estructural y funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999.4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos

Aires: Interamericana; 1999.

B. DOSAJE DE HEMOGLOBINA

2.1 Marco teóricoLa Hemoglobina es una molécula formada por 2 estructuras el grupo Hemo y la Globina. Todas las moléculas de Hb se encuentran en el interior de los glóbulos rojos y su función fundamental es la de transportar el O2 y el CO2. La determinación de Hb en sangre es un parámetro que nos ayuda en el diagnóstico de una anemia.


2.2 Competencias

1. Explica bioquímicamente el proceso para la determinación de la hemoglobina.2. Determina en el laboratorio el dosaje de hemoglobina.


MaterialesPipeta de Sahli

Tubos de ensayos

Equipos Espectrofotometro

Reactivosa. REACTIVO DE DRABKIN:o Bicarbonato de Sodio 1 gr.o Cianuro de Potasio 50 mg.o Ferricianuro de potasio 200 mg.o Agua destilada csp 1000ml.o Guardar en frasco oscuro, la solución de es de color amarillo pálido. Es un

reactivo tóxico.

b. SOLUCIÓN STANDARD:o Solución de cianometahemoglobina titulada según las recomendaciones del

Comité Internacional para Estandarizar de Hematología. Contiene preservantes.

2.4 ProcedimientoMETODO DE LA CIANOMETAHEMOGLOBINA:

1. Rotular dos tubos con Problema y banco. Deben estar bien secos.2. Agregar a cada uno de ellos 5ml de reactivo de Drabkin.3. Adicionar al tubo Problema con la Pipeta de Sahlí 20µl de sangre (capilar o

venosa)

4. Mezclar y dejar en reposo por espacio de 10 minutos.5. Realizar la lectura del tubo Problema ajustando el instrumento a 0 de densidad

óptica o el tubo Blanco.6. La lectura obtenida llevar a la curva de calibración o multiplicar por el factor

para hallar la concentración de hemoglobina.7. Leer al espectrofotómetro con filtro verde ó 540 nm.

CALCULOS:FACTOR= 15 / Absorbancia del Standard


Hb (g/100ml) = Absorbancia de la muestra x FACTOR

FACTOR DE CALIBRACION:Se sigue el siguiente cuadro:TUBO# STANDARD SOL. DRABKIN CONCENTRACIÓN (mL) (mL) (gr %)

1 6.0 0.0 20 2 4.5 1.5 153 3.0 3.0 104 1.5 4.5 5Blanco 0.0 6.0 0

El quinto tubo sirve para llegar a 0 con el espectrofotómetro. Aplicando la fórmula de concentración sobre lectura para cada tubo y sacando el promedio tenemos el factor % en vista de que el standard viene en g %.SE realizan 4 divisiones y luego se obtiene el factor promedio, que en este caso es factor por 100.

VALORES NORMALES:Nacimiento 14 - 24 g/100 mL3 meses 10.5 - 14.5 g/100 mL

Adulto sexo femenino 12-16 g/100 mL sexo masculino 14-18 g/100 mL

INTERPRETACIÓN:AUMENTO: hipercromemia: niños recién nacidos, personas que viven en

altura, procesos hematopoyéticos.

DISMINUCION: Hipocromemia u oligocromemia: anemias


2.6 Cuestionario1. Explique el fundamento del dosaje de Hemoglobina2. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de la hemoglobina?3. ¿Cómo se puede hallar el valor del hematocrito a partir de la determinación de la

hemoglobina?

2.7 Fuentes de información1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 7ª ed. Buenos Aires: Panamericana; 1997.


2. Gradwhol. Métodos y diagnóstico del laboratorio clínico. 8ª ed. Buenos Aires: Médica Panamericana; 1986.

3. Guerci A. Laboratorio. Métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3ª ed. Buenos Aires: Librería El Ateneo; 1985.

4. Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México DF: Manual Moderno S.A.; 1986.


III. PRÁCTICA No. 3: VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR. HEMATOCRITO. MICROHEMATOCRITO

A. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR

3.1 Marco teórico Prueba de laboratorio inespecífico importante para evaluar el curso de una enfermedad; es inespecífico porque no sirve para el diagnóstico etiológico de una enfermedad.Esta sencilla prueba es utilizada como índice de la presencia activa de enfermedades diversas

3.2 Competencias1. Utiliza con precisión el tubo de Wintrobe para la lectura del hematocrito y la

eritrosedimentación. 2. Realiza la lectura de la velocidad de sedimentación utilizando la escala

adecuada.


MaterialesTubo de Wintrobe

ReactivosAnticoagulante de Wintrobe

3.4 ProcedimientoA. METODO DE WINTROBE Y LANDSBERG

La eritrosedimentación se determina con el tubo de Wintrobe en la siguiente forma:Recoger 5 mL. de sangre con anticoagulante.Llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca "O" de sangre utilizando la pipeta de Wright y antes de que la muestra tenga más de dos horas de extraída.Mantener el tubo en posición vertical tapar con un capuchón de goma y esperar UNA HORA para hacer una sola lectura o con intervalos frecuentes para expresar en gráficas.VALORES NORMALES:Hombre: 1 - 11 mmMujeres1 - 15 mm


Determinada la velocidad de sedimentación puede centrifugarse a 3000 rpm durante 30 minutos para comprobar el volumen globular.En esta forma se corrige la eritrosedimentación si existen alteraciones ocasionadas por anemia.En el mismo tubo puede medirse el volumen de leucocitos, plaquetas y el índice

ictérico.B. METODO DE CUTLER

Se emplea el tubo de sedimentación de Cutler que tiene 1 ml. de capacidad, 5mm de diámetro interno y está graduado en 40 divisiones con el "O" a nivel del "Y que representan milímetros.Procedimiento:Llenar el tubo con sangre con anticoagulante. Colocar en posición vertical y hacer la lectura a la hora, cada 5 minutos para construir la gráfica.Es mejor trabajar con sangre citratada en la siguiente forma:Con una jeringa de 2 mL. aspirar 0.1 mL. de solución de citrato de sodio al 3.8 g % y completar a 1 mL con sangre venosa.Mezclar llenar el tubo de Cutler, tapar con un tapón de goma y mantener en posición vertical.En el nuevo tubo modificado de Cutler, se deposita 0.5 ml de anticoagulante citrato de sodio 3.8% y se completa a 5ml con sangre venosa en la marca "O". la cantidad insuficiente de citrato aumenta la VSG y un exceso disminuye o retarda.Valores normales:Las cifras normales a la hora de lectura son de:2 - 10 mm para mujeres2 8 mm para hombres.Estas cifras deben estar en líneas casi horizontal cuando se gráfica a intervalos de 5 minutos.El carácter de la curva en estado patológico se interpreta según su forma:Si la línea es diagonal, apartándose ligeramente de la curva normal, indica proceso leve o en quietud.Cuando la curva sigue diagonal con gran descenso indica estado morboso activo o recaídas de mucho cuidado.Si la curva es caso vertical se trata de una enfermedad muy grave.Se debe indicar el método, tiempo en minutos, índice de sedimentación en mm y el carácter de la gráfica.

INTERPRETACION CLINICA:Prescindiendo del embarazo, la determinación de la VSG.Está aumentada en los estados patológicos mas dispares, sin ser esto específico de ninguno en particular.La VSG aumenta sobre todo, cuando existe un foco inflamatorio en estrecha conexión con el árbol vascular; por ello son especialmente aceleradores los focos vecinos a las serosas (Infarto al miocardio, focos pulmonares, etc.)


Todas las infecciones generales de cierta intensidad, salvo raras excepciones evolucionan con VSG aumenta principalmente cuando coinciden los períodos de fiebre y anemia.En las inflamaciones locales agudas (por ej. apendicitis) la velocidad no esta alterada, sobre todo en las fases iniciales.Las neoplasias malignas al principio no modifican la eritrosedimentación, pero si la aceleran cuando hay lísis de los tejidos derivados de la proliferación neoplásica.La VSG está más o menos aumentada en todos los tipos de anemias. En el curso del embarazo la VSG se acelera, debido a una hemodilución de la sangre circulante.En la mujer normal la menstruación produce variaciones muy ligeras de la velocidad.Por último los focos sépticos muy aislados del torrente sanguíneo (caries dentarias, sinusitis, amigdalitis crípticas) apenas aumentan la VSG.


3.6 Cuestionario1.- ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de la velocidad de

sedimentación?2.- ¿Qué diferencias existen en la utilización de los diversos métodos para

determinar la eritrosedimentación?3.- ¿Cuál es la importancia clínica de la velocidad de sedimentación?4. ¿Por qué la diferencia de valores en la eritrosedimentación en varones y en

mujeres?

3.7 Fuentes de información1. Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray Masson

S.A; 2001.2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3a ed.

Buenos Aires: El ateneo; 1985.3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patología estructural y

funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999.4. 4.Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires:

Interamericana; 1999.

B. HEMATOCRITO Y MICROHEMATOCRITO

3.1 Marco teórico


El hematocrito es otra de las pruebas de laboratorio que ayuda en el diagnóstico de las anemias corroborando los otros parámetros como el recuento de glóbulos rojos y la hemoglobina.

3.2 Competencias1.- Determina los valores del hematocrito por el método correspondiente.2.- Realiza el procedimiento en el laboratorio del hematocrito.


MaterialesTubo de Wintrobe

Equipos Centrifuga para capilares


3.4 ProcedimientoA. Toma de muestra. SANGRE VENOSA:

La Sangre venosa obtenida y que se encuentra mezclada con el anticoagulante de Wintrobe llenar con la pipeta capilar el tubo de Hematocrito hasta la marca 10.Centrifuga a 3,000 rpm durante 30 minutos.

Cálculos:Para calcular el Hc la altura de la columna de hematíes sedimentados dado en mm se multiplica por 10.Valores normales:

Mujeres: 42 mL%Hombres: 45 mL%

InterpretaciónEstán disminuidas en las anemias, en los casos de hemodilución tales como la hidremia fisiológica (exceso de agua en la sangre) del embarazo.Es alto en las poliglobulias genuina a una hemoconcentración debida a considerables perdida de agua como en la deshidratación, quemaduras y schock.

SANGRE CAPILAR:MICROHEMATOCRITO:En pediatría se esta difundiendo el uso del microhematocrito que utiliza sangre obtenida por punción digital.


Se emplea el método DE GUEST-WICHSEBAUN: se llena con sangre capilar.

MATERIALES Y REACTIVOSTubos capilares de 7 cm de largo por 1mm de diámetro interior cubiertos interiormente con heparina al 1/1000 se tapona con arcilla moldeable (plastilina).

PROCEDIMIENTO:1. Se llena con sangre por capilaridad las tres cuartas partes del capilar. 2. Centrifugar y leer sobre los normogramas que viene en cada equipo.Cuando no se dispone de centrifugadora de microhematocrito se pone el tubo dentro de un tubo de ensayo y se centrifuga por 10 minutos a 2000 rpm. Luego se aplica la siguiente formula:a- x 100 = ml%ba= longitud de la columna roja en mlb= longitud total de sangre que llena el tubo capilar100= para referirse al Hc en ml%


3.6 Cuestionario1. ¿Qué diferencias en los valores se pueden dar entre el microhematocrito y el

hematocrito de Wintrobe?2. ¿Qué diferencias existen entre la eritrosedimentación y el hematocrito?3. ¿Cómo se hallan las constantes corpusculares. Explique las fórmulas correspondientes?

3.7 Fuentes de información1. Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray Masson S.A;

2001.2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3a ed.


funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999.4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires:



IV. PRACTICA No. 4: LEUCOMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS

4.1 Marco teóricoLa leucometría es una de las técnicas para realizar el recuento de los leucocitos, que corresponde al número de elementos celulares por unidad de volumen presente en una muestra de sangre después de provocar la lisis de los hematíes. Diversas son las causas o patologías que pueden aumentar (Leucocitosis) o disminuir (Leucopenia) los glóbulos blancos e influenciar en el diagnostico clínico.

4.2 Competencias1. Conoce el procedimiento para el recuento de glóbulos blancos.2. Diferencia los recuentos de glóbulos blancos y rojos.3. Aplica formulas para el recuento de glóbulos blancos.

4.3 Material y equipos

Materiales Pipeta de Thoma para el recuento de Leucocitos

ReactivosLíquido de Turck: Violeta de genciana ...1 mL. Ácido Acético glacial .. 3 mL. Agua destilada csp. ...100 mL.

4.4 Procedimiento1. Aspirar sangre hasta 0.5 ó 1 (1:20 ó 1:10) según la dilución en la pipeta de

Thoma. Limpiar la punta para eliminar el exceso de sangre.2. Completar con diluyente hasta 11, haciendo 9 girar la pipeta.3. Dejar en reposo de 5 a 15 minutos para la completa destrucción de los

hematíes y perfecta tinción de los núcleos leucocitarios.4. Cargar la cámara cuenta glóbulos, esperar 5 minutos para que se depositen

los leucocitos sobre el retículo.


5. Llevar a la platina del microscopio, comprobar con débil aumento la uniforme distribución celular y verificar el recuento.

Con el objetivo de menor aumento contar los leucocitos contenidos en los 4 campos cuadrados situados en las esquinas de retículo.Se consideran los elementos que se encuentran en los interiores de la derecha y de arriba, pero se omiten las que se hallan sobre la línea de izquierda. Se volverá a repetir el procedimiento si la diferencia entre 2 cuadrados sea mayor de 8 células.

Cálculos:La cantidad encontrada en los 4 cuadrados se divide entre 2 y al resultado se añade 2 ceros (o se multiplica por 50)También:N x 10 x 20 = Leucocitos por mm3 de sangreN = Total de leucocitos en 4 cuadrados dividido entre 4 10 = par referir al mm3

20 =.dilución cuando se aspira sangre hasta 0.5Valores normales:6,000 a 9.000 por mm3 de sangre.Interpretación:La disminución de leucocitos se denomina LEUCOPENIA y se presenta en algunas enfermedades infecciosas como ocurre en la angina agranulocítica o granulocitopenia idiopática, anemia perniciosa, clorosis, mala nutrición, fiebre tifoidea, malta, virales: rubéola, sarampión, hepatitis, parotiditis, etc.El aumento de denomina LEUCOCITOSIS:Existe una leucocitosis fisiológica con neutrofilia entre 12,000 y 14,000 en el recién nacido, durante el embarazo en el 9º mes, durante el parto, durante la digestión.De orden patológico: la leucocitosis se debe a la quimiotaxis y al estimulo de los órganos hematopoyéticos (la quimiotaxis es la propiedad que tiene ciertos agentes de atraer o repeler células vivas) Una inflamación tiene poder quimiotáctico de atraer muchos leucocitos, lo mismo ocurre con las bacterias y alguno tóxico se que atraen leucocitos a la circulación general.


4.6 Cuestionario

1. ¿Cuál es el fundamento del reactivo de Turck en el recuento de leucocitos?2. Indique que otros líquidos de dilución se emplean para el recuento de leucocitos

y su composición química.3. ¿Qué importancia clínica tendría el recuento de leucocitos?


4.7 Fuentes de información1. Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray Masson S.A;

2001.2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3a ed.


funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999.4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires:


V. PRÁCTICA No. 5: FÓRMULA LEUCOCITARIA. HEMOGRAMA DE SCHILLING

5.1 Marco teórico Es el método analítico más frecuentemente solicitado en la práctica médica diaria, no solo para el diagnóstico, valoración y seguimiento de las diversas patologías hematológicas, sino también de las que no lo son, pero que curan con alguna alteración valorable del mismo. Su facilidad de realización y rápida modificación en muy diversas circunstancias fisiológicas y patológicas hacen también de él un método analítico de práctica casi obligada. El hemograma incluye la cuantificación de los elementos formes que contiene la sangre por unidad de volumen, recuento porcentual de los leucocitos(habitualmente compuestos sólo por linfocitos, monocitos, y granulocitos, neutrófilos, eosinófilos y basófilos), además informa sobre valores o índices relacionados con el contenido hemoglobínico de los glóbulos rojos y el tamaño de éstos y el de las plaquetas. La formula leucocitaria indica la presencia relativa de los diferentes tipos de leucocitos en la sangre periférica y se expresa en porcentajes sobre el total.

5.2 Competencia1. Utiliza el colorante adecuado para la identificación de los elementos formes en

sangre coloreada.F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

2. Identifica los diversos tipos de leucocitos de acuerdo a su forma, tamaño y color.3. Aplica el método más conveniente para el recuento de los diversos tipos de

leucocitos.


MaterialesLaminas portaobjetos

ReactivosColorantes:En general los colorantes hematológicos que más se utilizan son los derivados de Rowanowsky, entre los que tenemos el de Giemsa, Leishman, Wright y Hastings.

Colorante de Wright:Es una combinación especial a base de azul de metileno y eosina que, para los trabajos de rutina da excelentes resultados.Pesar 0,4g. de colorante Wright en polvo, agregar 194 mL de alcohol metílico libre de acetona, añadir 6 ml. de glicerina. Agitar enérgicamente. Conservar en frasco oscuro agitando un minuto diario durante una semana. Finalmente filtrar cada vez que ha de usarse, después de cumplida la semana. Dura seis meses.

5.4 Procedimiento

ESTUDIO CITOMORFOLOGICO DE EXTENDIDOS COLOREADOS:Métodos para el examen del extendido sanguíneo en el recuento diferencial:

a. Observación reglada en 4 camposb. Observación reglada en dos campos

En indispensable para obtener el porcentaje de cada tipo de leucocito que estos se hallen uniformemente distribuidos en el extendido sanguíneo. Como los granulocitos generalmente están en los márgenes del extendido y los linfocitos en el centro, se recomienda el método aconsejado por Schilling, que consiste en tomar 4 puntos marginales distintos recorriendo el campo en zigzag desde el borde hacia la parte central y contar 25 o 50 elementos en cada uno de los 4 puntos. Debe anotarse el tamaño celular; en el núcleo: forma, posición, color, estructura de la cromatina, membrana nuclear, presencia o ausencia de nucleolos; en el citoplasma: cantidad relativa(cociente núcleo citoplasma), color, presencia o ausencia de zona perinuclear clara y características de los gránulos: número, color, tamaño y distribución, granulación tóxica, vacuolas o degeneración del citoplasma.

FORMULA LEUCOCITARIA


La formula leucocitaria permite conocer la cantidad de cada tipo de célula, y para ello se procede a contar un número determinado de leucocitos (100-200 ó más), en un frotis bien coloreado, anotando por separado cada variedad celular. Procediendo en estar forma, la llamada FORMULA RELATIVA, o sea el porcentaje de cada tipo de leucocitos.La condición indispensable para justipreciar el porcentaje de cada tipo de leucocitos más bien en la mitad de la extensión la técnica más recomendable para obviar el inconveniente anotado, es de recorrer el preparado en la forma que aconseja SCHILLING, siguiendo el método serpenteando los cuatro campos.

La HEMOGRAMA DE SCHILLINGSchilling clasifica a los neutrófilos en dos grupo fundamentales: neutrófilos no lobulados e incompletamente lobulados neutrófilos completamente lobuladados (2 ó más lóbulos)En el primer grupo incluye: los mielocitos, las formas juveniles o metamielocitos y las formas en banda o cayado.El hemograma normal según Schilling es el siguiente:

Tipo de leucocitos

Porcentajes

Neutrófilos Mielocito 0Metamielocito 0-1Núcleo en cayado 3-5Núcleo segmentado 55-65

Eosinófilos 2-4Basófilos 0-1Linfocitos 20-30Monocitos 4-8

INTERPRETACION:Se habla de desviación hacia la izquierda del hemograma cuando aumentan las formas no segmentadas o inmaduras de los neutrófilos; y se dice que hay desviación hacia la derecha, cuando aumentan las células maduras o adultas.Así mismo se determinaran los posibles aumentos de los demás leucocitos denominándose eosinofilia, basofilia, linfocitosis, monocitosis.


5.6 Cuestionario:1. Esquematice a través de dibujos los diferentes tipos de leucocitos.


2. ¿En que patologías se presentan linfocitosis, monocitosis, neutrofilia, eosinofilia y basofilia?

3. ¿Cual es la diferencia entre el Hemograma de Schilling y el Esquema de Arneth?

5.7 Fuente de información:1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica

panamericana; 1999.2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio

clínico. 2a ed. Barcelona: Masson; 2005.3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y

citológicos. Madrid: Masson; 2005.4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier;

2007.5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos.

México D.F.: Manual moderno, 2006.6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en

hematología. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.


VI.PRÁCTICA No. 6: RECUENTO DE PLAQUETAS, RECUENTO DE RETICULOCITOS Y RECUENTO DE EOSINÓFILOS

A. RECUENTO DE PLAQUETAS

6.1 Marco teórico El recuento de plaquetas es el número de esos elementos (Trombocitos) por milímetro cúbico de sangre. La actividad plaquetaria esencial es la de conformar el tapón hemostático primario en los mecanismos de la coagulación (Hemostasia). La visualización de una extensión de sangre permite descubrir ciertas alteraciones de la serie plaquetaria y su cuantificación para determinar si existe una disminución (Trombocitopenia) ó un aumento (Trombocitosis).

6.2 Competencias1.- Distingue los métodos directos e indirectos para el recuento de plaquetas 2.- Aplica el método más conveniente para el recuento de plaquetas


MaterialesPipeta de Thoma para glóbulos rojosCamara de NeubauerLaminas portaobjetos

Reactivos1. Reactivo de Sulfato de Magnesio al 14%2. Colorante de Wright3. Reactivo de Rees-Ecker:

Citrato de sodio 3.8 gr. Formaldehído al 40% 0.2 mL.4. Azul brillante de cresil 0.05 gr.

Los métodos para el recuento se pueden clasificar en:


METODOS INDIRECTOS:Se basa en determinar la relación entre plaquetas y eritrocitosM. de FonioM de ClefM. de DemeshekMETODOS DIRECTOS:Se basa en contar directamente las plaquetas de la sangre diluida en una cámara hemocitométrica.M. Rees - EckerM. Wright

6.4 ProcedimientoMETODO DE FONIO:1. Sobre la yema del dedo limpio, seco y desinfectado colóquese una gota grande de solución esterilizado de sulfato de magnesio al 14% para que la sangre no tome contacto con el aire. A través de la gota puncionar la piel con una lanceta de tal manera que salga espontáneamente una pequeña gota de sangre a razón de 1:5 aproximadamente.2. Mezclar con el borde de un portaobjeto para homogeneizar e impedir la aglutinación de las plaquetas.3. Con la misma lanceta llevar una gota de la suspensión sobre un portaobjetos y verificar el frotis como si tratara de sangre sola.Al sacar la preparación toma un brillo aterciopelado y casi incoloro al trasluz, teñir con Whright en la forma habitual dejando actuar el colorante un tiempo mayor de dedicado a la formula leucocitaria.4. Con objetivo de inmersión y aceite de cedro contar en varios campos simultáneamente los glóbulos rojos y las plaquetas hasta completar 1000 a 2000 hematíes.CALCULOSPara los cálculos se multiplica el número de plaquetas, contadas en el frotis, por el número de hematíes por mmc. y dividir entre el número de eritrocitos contadas en la extensión.

Hematimetria: 4'8000,0000 por mm.c.

50 x 4'800,000----------------- = 240,000 plaquetas por mm3. 1000

METODO DE REES-ECKER:Se debe operar con suma rapidez y limpieza para evitar la aglutinación y para no confundir impurezas con los trombocitos.


1. Aspirar líquido de dilución hasta la marca de 0.5 con la pipeta para glóbulos rojos

2. Llenar con sangre capilar hasta completar con líquido de dilución hasta la marca de 101.

3. Dejar en reposo por espacio de 5 minutos.4. Cargar la cámara cuenta glóbulos y dejar en reposo de 15 a 20 minutos

para que sedimente las plaquetas.5. Con el objetivo potente contar en todo el cuadrado central de retículo para

hematíes (25 cuadrados de 16 cuadraditos cada uno)CALCULOS: N X 10 x 200 = plaquetas por mm3.N : numero de plaquetas en el mm central de retículo10 : para referir al 1 mm3

200 : dilución cuando se toma sangre hasta 0.5Las plaquetas se presentan redondeadas, ovales, alargadas, en forma de cono o poliédricas e irregulares.Se las ve muy refringentes, plateada, veces de color lila.CIFRAS NORMALES: 50,000 a 400,000 plaquetas por mm3 de sangre

INTERPRETACION:Las variaciones fisiológicas se presentación la ingestión de alimentos, actividad muscular, menstruación, etc.TROMBOPENIAS: Por debajo de 30,000 dan manifestaciones hemorrágicas. Estados alérgicos, anemia aplástica, leucemia linfática, intoxicaciones crónicas, atrofia de la medula ósea, púrpura trombopénica esencial.TROMBOSIS O TROMBOCITOSIS: (escasa significación clínica)hemorragias copiosas, anemia poshemorrágica, después de las intervenciones quirúrgicas, anemia hemolítica, policitemia genuina, leucemia mieloide crónica, traumatismo, esplenomegalia, infecciones crónicas, fiebre reumática.


6.6 Cuestionario:1. Mencione los principales métodos directos e indirectos para el recuento de

plaquetas.2. Explique el fundamento del método de fonio y mencione los valores normales.3. Explique el fundamento del método de Rees-Ecker

6.7 Fuentes de información:1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica panamericana;

1999.2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a ed.

Barcelona: Masson; 2005.


3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. Madrid: Masson; 2005.

4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Manual

moderno, 2006.6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 3a ed.

Madrid: Elsevier-Masson; 2006.

B. RECUENTOS DE RETICULOCITOS

6.1 Marco teórico Son hematíes jóvenes inmaduros pero de tamaño superior (macrocitos),

reconocibles en las extensiones de sangre por tinción especial, se observa en las anemias hemorrágicas y hemolíticas.

6.2 Competencias1. Utiliza el método en forma conveniente para el recuento de reticulocitos2. Realiza el recuento de reticulocitos y aplica los cálculos correspondientes.




ReactivosSegún el método humedo en tubo:

Azul brillante de cresil 0.25 gr.Citrato de Sodio 0.1 gr.Formol al 40% 0.05 mL.Soluc. Fisiológica cps. 25 mL.

Según El método de Wolfer:Azul cresil brillante.... 0.5 gr.Alcohol absoluto........... 100 mL

6.4 ProcedimientoMETODO HUMEDO EN TUBO:En un tubo de Kahan se mezclan 2 gotas de sangre venosa o capital y 2 gts del reactivo.Se tapa el tubo y se mantiene a la temperatura ambiente por el término de 2 a 30 minutos.Luego se extrae 1 gota de la mezcla y se hace un frotis delgado, se seca al aire y se práctica el recuento.Cálculos:Se cuentan 1000 hematíes anotando todos los que tienen filamentos azules de reticulos.Dividir por 10 para obtener el porcentaje.Ej. 20/10 = 2%

METODO DE WOLFERProcedimiento:1. Sobre portaobjetos hace extensiones de la solución de azul cresil brillante.

Secar al aire.2. Depositar 1 gota de sangre capilar y hacer un frotis sobre el cresil, cuyo

alcohol se ha evaporado. Dejar en reposo 10 minutos.3. La sustancia retículo gránulo filamentoso de los reticulocitos se tiñe de

azul claro con este colorante supravital y ofrece el aspecto de madeja.4. Mientras mas tenues son las capas de la solución alcohólica y de las

sangres mejor será la lectura.5. Después del desecado las muestras son ligeramente teñidas por Wright6. Se observa con objetivos de inmersión.Valores NormalesAdultos: 0.5 -2.5%Niños: 5-10%

Interpretación:Aumento:Recién nacidos hasta 2 a 5 días después del nacimiento. Anemias

hemolíticas constitucionales Anemias que evoluciona con


regeneración por tratamiento específico de vit. B 12 en la anemia perniciosa, Acido fólico en anemia megaloblásticas del sprue Hierro, anemia microcítica e hipocrómica ferroprivas. Anemia hemolítica hereditaria (10-20%). Cuando la sangre se regenera rápidamente después de una hemorragia (aumenta hasta constituir el 50% de hematíes)

Disminución Anemia aplástica (falta absoluta) anemias que evolucionan con insuficiencia e hiperactividad funcional de la medula ósea (anemia perniciosa muy avanzada)


6.6 Cuestionario1. ¿Cuál es la importancia clínica del recuento de reticulocitos?2. ¿Cuáles son los cálculos para el recuento de reticulocitos?3. Mencione y explique los métodos para el recuento de reticulocitosis.

6.7 Fuentes de información:1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 7ª ed. Buenos Aires: Panamericana; 1997.2. Gradwhol. Métodos y diagnóstico del laboratorio clínico. 8ª ed. Buenos Aires:

Médica Panamericana; 1986.3. Guerci A. Laboratorio. Métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3ª ed.

Buenos Aires: Librería El Ateneo; 1985.4. Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México DF: Manual

Moderno S.A.; 1986.

C. RECUENTO DE EOSINOFILOSF-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

6.1 Marco teóricoSerie celular que pasa por las mismas etapas que la serie neutrófila polimorfonuclear. El recuento es de importancia clínica para determinar las eosinofilias características en enfermedades alérgicas y parasitarias.

6.2 Competencias1. Desarrolla el método de Dunger para el recuento de eosinófilos.2. Efectúa los cálculos correspondientes para el recuento de eosinófilos


MaterialesCámara de NeubauerPipeta de Thoma para glóbulos blancos

ReactivosREACTIVO DE DUNGER

Solución acuosa de Eosina al 2% ------------- 15 mL.Acetona -------------------------- 10 mL.Agua destilada csp. ----------------------- 100 mL.

Debe conservarse bien tapado y a baja temperatura.

La solución de Dunger lisa los hematíes y leucocitos pero los eosinófilos son más resistentes.La eosina tiñe de amarillo brillante los gránulos eosinófilos y la acetona disminuye la tendencia de los eosinófilos a romperse.El líquido puede conservarse durante dos semanas en la nevera.

6.4 ProcedimientoMETODO DE DUNGER:Seguir la misma técnica que para el recuento de Leucocitos con dilución 1/20 (marca 0.5) y los cálculos son iguales.CIFRAS NORMALES:Hasta 500 eosinófilos EOSINOFILIA:En infestaciones parasitarias y afecciones alérgicas, asma bronquial, urticarias se llegan a contar hasta 3000 eosinófilos raramente puede encontrarse cifras mayores de 10,000 por mm3.EOSINOPENIA:Provocada por la hormona adrenocorticotrofica (ACTH), ciertosesteroides de la corteza suprarrenal y la adrenalina.


La misión exacta de los eosinófilos en la reacción inmunológica alérgica no está determinada. Se supone que los complejos Ag-Ac o la histamina que están implicados en estas reacciones, atraen los eosinófilos por quimiotactismo.

6.5 Resultados:Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.

6.6 Cuestionario1. Explique el fundamento del recuento de eosinófilos?2. ¿Cuál es la interpretación clínica de los eosinófilos?3. ¿En que casos se solicita un recuento de eosinófilos por parte del profesional

médico?



Barcelona: Masson; 2005.3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos.

Madrid: Masson; 2005.4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Manual




VII. PRÁCTICA No. 7: TIEMPO DE COAGULACIÓN, TIEMPO DE SANGRIA, TIEMPO DE PROTROMBINA, DOSAJE DE FIBRINÓGENO

7.1 Marco teórico Debido a la enorme complejidad de todos los procesos que intervienen en el hecho hemostático, resulta imposible determinar la verdadera capacidad hemostática in vivo de un individuo mediante la realización de pruebas en el laboratorio, llevada acabo, además bajo condiciones artificiales. Sin embargo, la realización y valoración de unas cuantas técnicas puede ser suficientes muchas veces para presuponer, con un alto margen de seguridad, la existencia, o no de un riesgo hemorrágico. Atendiendo a los puntos fundamentales de la fisiología de la coagulación de la sangre, se deduce que la valoración rutinaria de la hemostasia debe englobar por lo menos la prueba de Quick, el tiempo de coagulación sanguínea, cuantificación del fibrinógeno y de las plaquetas.

7.2 Competencias1. Aplica las técnicas apropiadas para determinar el tiempo de coagulación, tiempo

de sangría y de protrombina.2. Hace la interpretación clínica y correlacionar las coagulopatias.3. Utiliza el método espectrofotométrico para el dosaje de fibrinógeno.


MaterialesLaminas portaobjetosCronometroTubos capilaresTira de papeles secantesTubos pequeñosTubo cónico graduado

EquiposEspectrofotometro



Reactivo de Tromboplastina

7.4 Procedimiento

1. TIEMPO DE COAGULACIÓN:A. METODO DE BURKER: 2' - 8' 1. En una lámina portaobjeto colocar 2 gotas de sangre2. Dejar en reposo 3'. Con el estilete a la 1ra. gota levantar c/ 30". Hasta

formar la FIBRINA.3. Luego de 30" pasar a las 2da gota. Levantar hasta formar la FIBRINA.4. Anotar dicho tiempo.NOTA: El índice de coagulación está dado por el tiempo trascurrido entre colocar la gota y la formación de fibrinaB. METODO DE SABRAZE: 3' - 8'1. 3 tubos capilares (8 en. de largo)2. Obtener sangre capilar detectar la 2 primeras gotas en la 3ra cargar los

capilares.3. Se deja en reposo 3'. Luego romper su trozo c/ 30' hasta que al romper se

forme un filamento de FIBRINA. Toma el tiempo.C. METODO DE LEE Y WHITE: 5' - 10'1. Sangre venosa (3,5 ml) verter en 2 tubos 1 mL de sangre.2. Anotar el tiempo cuando la sangre entra en la jeringa.3. La indica uno de los tubos c/ minuto. ángulo de 45° hasta que la sangre

coagulada no se desplace. Anotar el tiempo.4. Para el otro tubo hacer la misma operación. Anotar el tiempo, se

recomienda reportar la lectura del 2do tubo, porque la agitación y manipulación aceleran la coagulación.

2. TIEMPO DE SANGRIA O DE HEMORRAGIAMETODO DE DUKE:1' - 3'1. Desinfectar el lóbulo de la oreja y pinche con una profundidad de 3 mm.2. C/30" límpiese con papel de filtro la gota de sangre que fluye el papel no

debe rozar la piel.3. Cuando ya no haya hemorragia toma el tiempo no debe haber menos de

2 manchas ni más de 6.4. Se recomienda hacer 2 determinaciones.

NOTA: El lapso transcurrido entre la aparición de la 1ra. gota y la toma de la última es el tiempo de sangría.

3. TIEMPO DE PROTOMBINAMETODO ORTHO-BRAIN


1. En un tubo de prueba de 13 x 100 mm colocar 0,5 ml de solución de oxalato de sodio 0.1 M y adicionar 4.5 mL de sangre venosa recién obtenida, mezclar y separar el plasma mediante centrifugación.

2. En otro tubo de 13 x 100 mm depositar 0.2 ml de tromboplastina activada + cloruro de calcio 0.02 M.

3. Incubar los tubos del plasma y del reactivo a 37oC por 2'.4. Con una pipeta terminal de un mL graduada en décimos, medir 0.1 mL de

plasma oxalatada y agregar rápidamente al tubo que contiene el reactivo de tromboplastina, el agregado debe hacer desde una distancia de 2 cm. soplando el contenido, simultáneamente poner en marcha el cronómetro, el contenido debe mezclarse por movimientos laterales del tubo dentro del agua a 37oC.

5. Observar la formación de una masa de coagulo que es el final de la reacción de protombina.

Valores normales: 10 segundos a 12 segundos4. VALOR PROTOMBINICO O INDICE PROTROMBINICOSe obtiene dividiendo el Tiempo de Protrombina Normal entre el tiempo de Protombina encontrado y multiplicado por 100.

V.P. = T.P.N. x 100 T.P.E.

4. TIEMPO DE RETRACCION DEL COAGULOLa retracción del coagulo es la contracción espontánea de la sangre total, obteniéndose una masa sólida con todo los componentes sanguíneos y la exudación de suero; dicha actividad es función retráctil de las plaquetas y del Fibrinógeno para formar fibrina.METODO DE MAC FARLAND.El método utiliza un tubo de centrífuga graduada en divisiones de 0.1 mL; un alambre de 1 mm de espesor, 12 cm. de longitud con un ensanchamiento en forma de botón de 1.2 cm. de diámetro en un extremo; un corcho que se adapta a la boca del tubo, el corcho debe tener un orificio para dar paso al alambre del extremo opuesto al botón.

1. En un tubo de centrífuga graduado depositar 5 mL de sangre venosa recién extraída.

2. Colocar la varilla de alambre de modo que quede el ensanchamiento dentro de la sangre, adopte el corcho en la boca del tubo.

3. Llevar el tubo a un baño de agua a 37oC y observar de tiempo la coagulación de la sangre.

4. Permanezca el tubo dentro del agua a 37oC por una hora después de la formación del coagulo.


5. Con cuidado retirar el alambre con el coagulo hacia arriba, dejar escurrir el suero dentro del tubo por 1 ó 2 minutos.

6. Leer el volumen del suero que ha quedado en el tubo sobre la escala graduada.

Cálculos:El tiempo de retracción del coagulo se expresa en función del volumen del suero obtenido, multiplicado por 100 y dividido entre el volumen de sangre total obtenido.Ejemplo:Se ha obtenido 5 ml de sangre venosa y después de coagular ha dejado 3 ml de suero, la retracción porcentual será: 3 x 100 = 60% 5Valores normales: De 44 - 67%Interpretación Clínica:Está aumentada en las anemias por disminución del volumen celular, en la trombocitopenia, eritremia y en enfermos con defectos en la coagulación.

5. DOSAJE DE FIBRINOGENOConstituye el 5% de las proteínas plasmáticas.Es una proteína soluble en el plasma sanguíneo muy lábil debido a su punto isoelèctrico (pH 6,6 - 7). Un litro de plasma contiene 4 g de fibrinógeno.Precipita por el calor de 52 a 56 oC y por solución de cloruro de sodio al 0,85% a semisaturación. El fibrinógeno se origina en el hígado y en todo el sistema reticuloendotelialSe relaciona estrechamente con todo el proceso de la coagulación de la sangre.METODO DE GORNALL - BARDAWILL Y DAVIDFundamento:Por este método se determina dosando proteínas totales séricas en el plasma y el suero, la diferencia de ambas proteínas totales corresponde a la cantidad de fibrinógeno.1. Reactivo de Gornall: (Biuret)Sulfato de cobre con 5H2O . . . . . . . . . . . . . 1,5 g.Tartrato de sodio y potasio . . . . . . . . . . . . 6.0 g.Disolver en 500 mL de agua destilada, agregar 300 mL de hidróxido de sodio al 10%, enfriar y completar a 1000 mL con agua destilada.

2. Solución del Cloruro de sodio al 0.85%PROCEDIMIENTO:En tres tubos de prueba limpios y secos membretar y colocar:

S P BSuero Problema 0.1 mL - -


Plasma Problema - 0.1 mL -Cloruro de Sodio al 0.85% 1.9 mL 1.9 mL 2 mL.Reactivo de Gornall 8 mL 8 mL 8 mL.

Mezclar por inversión y dejar en reposo por 20 minutos a temperatura ambiente.

Leer a 540 nm. contra el blanco del reactivo. Cálculos. Por ejemplo si las lecturas para proteína totales en el plasma es de 130 y para el suero de 125, ambos se multiplican por el factor de proteínas (0.060), luego los resultados obtenidos se restan obteniéndose mg. % de fibrinógeno.Proteínas totales en el plasma: 130 x 0.060 = 7.80 g -Proteínas totales en el suero: 125 x 0.060 = 7.50 g = 0.30 gO sea: 300 mg. %Valores normales: 200 - 400 mg. %METODO DE STIRLAND:FUNDAMENTO:Se basa en la propiedad del fibrinógeno de coagular a 56 oC mientras que las demas proteínas plasmáticas solo coagulan por encima de los 60 oCEl fibrinógeno se precipita con solución de Cloruro de Sodio al 0.85% La intensidad del enturbamiento es proporcional a la concentración de fibrinógeno.PROCEDIMIENTO:1.En un vial con anticoagulante obtener 5mL de sangre venosa.2.Transferir a un tubo y centrifugar por 5 minutos a 3000rpm3.En 2 tubos P y B depositar 0.6ml de plasma y agregar 6ml de ClNa al 0.85%4.Mezclar ambos tubos.5.El tubo P se pone en Baño Marìa a 56 °C por 15 minutos6.el tubo B se deja a temperatura ambiente y sirve para llevar a “O” de D.O. 7.Retirar el tubo del baño y enfriar a temperatura ambiente.8.Lectura: Se lee el enturbamiento al espectrofotometro a 660 nm.9.Dicha lectura se lleva a la curva de enturbamiento del Timol. Cada unidad

de enturbamiento equivale a 29.5mg% de Fibrinógeno.INTERPRETACIÓN:Cifras altas: Hiperhinosis: Neumonía, Embarazo normal, TBC pulmonar, hepatitis tóxica, fiebre reumática, artritis reumatoidea, nefritis, tumores malignos, septicemia.Disminución: Fibrinopenia: desnutrición, fiebre tifoidea, Anemia intensa, lesiones difusas de las células hepáticas, intoxicaciones por fósforo y cloroformo.



7.6 Cuestionario1. ¿Cuál es el fundamento del tiempo de coagulación?2. ¿Cuál es el fundamento del tiempo de sangría?3. ¿Cuál es el fundamento bioquímico del proceso de retracción del coagulo?4. ¿Cuál es el fundamento del dosaje de fibrinógeno?



Barcelona: Masson; 2005.3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos.

Madrid: Masson; 2005.4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Edit.

Manual moderno, 2006.6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 3a ed.



VIII. PRÁCTICA No. 8: DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS: SISTEMA ABO, VARIANTE DU y PRUEBA DE COOMBS.

A. DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS: SISTEMA ABO Y FACTOR RH.

8.1 Marco teórico:El polimorfismo mas significativos de los eritrocitos depende de las características inmunológicas, basándose en la presencia o ausencia de las propiedades químicas en la superficie de los hematíes que permiten diferenciarlos y clasificarlos en un gran número de grupos sanguíneos bien definidos por sus reacciones con las hemaglutininas específicas.

8.2 Competencias: 1.-Distingue los diversos grupos sanguíneos del sistema ABO 2.- Diferencia el Rh positivo del negativo 3.-Aplica la Variante Du para la comprobación del Rh negativo.


MaterialesLaminas de porcelanaTubos de ensayo


8.4 Procedimiento

Método Indirecto de Beth Vincent: 1. Colocar una gota de sangre en un portaobjeto.


2. Agregar 1 gt. del suero tipificado anti-A y 1 gt. del suero tipificado anti-B, mezclar y observar.

Si no hay aglutinación el grupo será CERO.Si hay aglutinación en la gota de sangre con el suero anti-A será GRUPO ASi hay aglutinación en la gota de sangre con el suero anti-B: grupo B.Si hay aglutinación en ambos el grupo será AB.FACTOR Rh .- En un porcentaje se coloca 1 gota de sangre mas 1 gto. del anti-Rho (D). Mezclar y

observar.Si hay aglutinación es Rh positivo.


B. VARIANTE Du DETERMINACION DEL ANTIGUO Rho DEBIL O D 8.1 Marco teórico

El término Du se refiere a la expresión débil del antígeno D normal es decir, la menor concentración del antígeno D por glóbulo rojo esta es una característica heredada. Como entre los anti-D existen ligeras diferencias la potencia de la reacción de los eritrocitos Du varia con el suero utilizado.

8.2 Competencias1. Aplicar la variante Du para la comprobación del Rh negativo.2. Realiza el proceso para la determinación de la variante Du

8. 3 Materiales y equipos

MaterialesTubos de ensayo

ReactivosSuero antihumano de Coombs

8.4 Procedimiento


1. Hacer una suspensión globular al 2% en SSF.2. En un tubo pequeño depositar:

1 gota de suero anti-Rh + 2 gotas de la suspensión globular al 2%.3. Incubar a 37 oC por 60 minutos para sensibilizar a las células.4. Sacar el tubo de la incubadora y lavar las células 3 veces en tubo de ensayo

llenos de solución salina hasta cerca del borde del tubo.Decantar completamente después del último lavado, acercando a la boca

del tubo un papel de filtro para absorber el líquido. (centrifugación a 2,000rpm por 5 minutos)

5. Agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs. Agitar bien el tubo para homogenizar.

6. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto.7. Retirar el tubo y suspender nuevamente las células empaquetas mediante

agitación moderada y examinar si existe aglutinación o no.Si hay aglutinación: Du es Rh positivoSi no hay aglutinación: Du es Rh negativo

C. PRUEBA DE COOMBS

8.1 Marco teóricoSe basa en que los dos anticuerpos llamados incompletos pueden encontrarse revistiendo los eritrocitos o bien estar en suspensión en el plasma,. Como corresponden a la fracción gammaglobulínica de las proteínas séricas, un suero antigamaglobulina humana de conejo (suero de Coombs) aglutinan directamente los eritrocitos cuando están revestidos, pero no cuando los anticuerpos están en suspensión. De esta diferencia surgen dos tipos de pruebas de Coombs: la directa y la indirecta.

8.2 Competencias1. Diferencia las pruebas de Coombs directa e indirecta2. Emplea las técnicas adecuadas para determinar los anticuerpos incompletos.


MaterialesTubos de ensayo

EquiposCentrifuga

Reactivos1. Suspensión globular al 2%


2. Solución salina fisiológica3. Suero antihumano de Coombs

8.4 Procedimiento

A. PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA:Se emplea para detectar isoanticuerpo circulantes en el suero que cubren pero no aglutinan a los glóbulos suspendidos en solución Salina fisiológica.La aglutinación solo se produce al tratar los glóbulos recubiertos con suero de Coombs.

1. Prepara suspensión globular al 2% en solución salina fisiológica de la sangre del grupo O Rh positivo.

2. En un tubo de ensayo: 2 gotas de la solución preparada + 2 gotas del suero de la madre

3. Incubar en B.M. a 37 oC por 60 minutos.4. Llenar con solución salina fisiológica. Mezclar. Centrifugar a 2000 rpm por 5

minutos.5. Decantar el sobrenadante. Repetir por 3 veces dicho lavado. Absorber con papel

filtro.6. Al sedimento que queda agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs.7. Mezclar.8. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto.9. Retirar el tubo y agitar moderadamente a las células.

Examinar el Tubo: Si hay aglutinación POSITIVO (contiene anticuerpos anti-Rh incompleto o bien anticuerpos cuya especificidad y nombre está determinado por la calidad de glóbulos empleados).No hay aglutinación NEGATIVO.

B. PRUEBA DE COOMBS PRUEBA DIRECTA:Es empleada para detectar anticuerpos que se han fijado en los glóbulos del paciente in vivo, por ejemplo en la eritroblastosis hemolítica del recién nacido, en ciertas anemias hemolíticas auto-inmunes y pacientes que hay recibido transfusiones incompatibles.En los niños no tratados de eritoblastosis fetal, la reacción positiva persiste durante varias semanas, mientras que en las exanguineo - transfusión va seguida de una negativización a los pocos días.1. En un tubo de ensayo se colocan 5 gotas de la sangre en estudio y se llena con solución fisiológica.2. Mezclar invirtiendo el tubo varias veces, y centrifugar a 1500 rpm durante 5 minutos. Decantar el líquido sobrenadante.3. Repetir el lavado dos veces, retirando cada vez todo el líquido remanente.4. Luego se prepara una suspensión de hematíes al 2% en SSF.5. En un tubo se coloca: 1 gota de susp. Globular + 1 gota del suero antiglobulínico 6. Centrifugar 1 minuto a 1000 rpm y observar si hay aglutinación.


La aglutinación en el tubo contenido los hematíes problemas y su ausencia en el tubo testigo evidencia su sensibilización.Esta prueba es utilizada para el diagnóstico de la eritroblastosis fetal (ictericia hemolítica del recién nacido).Se estudia la sensibilización de los eritrocitos de la sangre umbilical.


Como profilaxis de la enfermedad, se buscan los Anticuerpos antes del parto en el suero de la madre mediante la prueba indirecta.También se emplea para el diagnóstico de algunos tipos de anemias hemolíticas.


8.6 Cuestionario1. ¿Cuál es la importancia clínica de los sistemas ABO y Rh-Hr?2. ¿Porque es importante la determinación de la Variante Du?3. Explique el fundamento bioquímico de la prueba de Coombs Directa.4. Explique el fundamento bioquímico de la prueba de Coombs Indirecta.

8.7 Fuentes de información1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica panamericana;


Barcelona: Masson; 2005.3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. Madrid:

Masson; 2005.4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Manual



IX.PRACTICA No 9: PRUEBAS SEROLÓGICAS: DETERMINACIÓN DE FIEBRE TIFOIDEA, PARATIFOIDEA, MALTA, SIFILIS

A. AGLUTINACIONES

9.1 Marco teóricoLas pruebas inmunológicas son muy útiles para el diagnóstico de muchas patologías a través de los métodos cualitativos y cuantitativos.


Los antígenos febriles se utilizan para efectuar diagnósticos rápidos de las fiebres tificas, paratificas y brucellosis. Se utilizan en la prueba rápida de aglutinación en lámina mediante la reacción antígeno-anticuerpo con el objeto de detectar la presencia en suero de anticuerpos que los pacientes producen durante las enfermedades mencionadas.

9.2 Competencias1. Realiza las determinaciones inmunológicas de las pruebas de aglutinaciones.2. Explica los resultados obtenidos a través de las pruebas cualitativas y cuantitativas.


MaterialesLamina de vidrio

Reactivosa. Antígenos febriles

o Suspensiones de cepas bacterianas estabilizadas y standarizadas: tifico o, tifico h, paratífico a, paratífico b y brucella abortus.

9.4 Procedimiento

Las determinaciones comprenden dos etapas:1. Prueba presuntiva:Con una pipeta serológica o una micropipeta depositar una gota de suero problema en cada cuadrado.A cada gota de suero se le añade una gota de cada antígeno previa agitación.Mezclar con un palillo mondadientes para cada cuadrado y leer en el término de uno a tres minutos.Lectura: La reacción es positiva cuando aparece aglutinación en uno de los 5 cuadrados.2. Prueba de titulación:Se preparan 5 cuadrados limpios y con una pipeta depositar en cada uno el volumen de suero:0,08, 0,04, 0,02, 0,01 y 0,005 mL de suero respectivamente.Los títulos serán: 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 y 1/320.Agregar a cada suero una gota del antígeno. Mezclar.Luego hacer la lectura.Los resultados se expresan en términos de la más alta dilución que presenta aglutinación.


9.6 Cuestionario1. ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de las aglutinaciones?2. ¿Cuál es la interpretación clínica de los valores TO y TH elevados?

9.7 Fuente de información1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica panamericana;

1999.


2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a ed. Barcelona: Masson; 2005.





B. DIAGNÓSTICO DE SIFLIS

9.1 Marco teóricoLa sífilis es una enfermedad de transmisión sexual causado por una bacteria espiritada, el treponema pallidum . Para el diagnóstico se emplean pruebas serológicas treponémicas y no treponémicas, dentro de las no treponémicas: VDRL y RPR.

9.2 Competencias1. Determina los anticuerpos del treponema pallidum a través de los métodos

serológicos no treponémicas.2. Realizar una correcta interpretación de los resultados de las pruebas serológicas.



EquiposRotador eléctricoMicroscópioBaño María

Reactivos1. Solución antigénica de VDRL 2. Solución salina al 0,9%3. Sueros controles

9.4 ProcedimientoA. MÉTODO DE VDRL

VDRL CUALITATIVO EN SUERO1. Numerar los anillos de la lámina2. Cargar 0.05ml de los surcos control reactivo y no reactivo al primer y

segundo anillo respectivamente3. A partir del tercer anillo cargar las muestras problemas.4. Añadir con la micro pipeta 0.017ml de solución antigénica preparada sobre el

suero contenido en cada uno de los anillos de la lámina.5. Colocar la lámina serológica con las muestras en un rotador a 1800 rpm

por 4 min.6. Terminada la rotación examinar la lámina inmediatamente usando un

microscopio con objetivo de 10x. LECTURA E INFORME


1. Reactivo (R)- grumoso grandes y medianos2. Reactivo débil (RD) grumos pequeños3. No reactivo (NR) sin grumos.

VDRL CUANTITATIVA EN SUERO Colocar 0.05ml de solución salina al 0.9% del anillo dos al anillo seis de la

lámina serológica

1. Añadir 0.05ml de suero problema en el anillo 1 y 22. Mezclar la solución salina y el suero del anillo dos y transferir de este

anillo, 0.05ml al anillo tres.3. Mezclar el contenido del anillo tres y transferir 0.05ml al anillo cuatro.4. Mezclar el contenido del anillo cuatro y transferir 0.05ml al anillo cinco y

asi sucesivamente hasta el anillo seis.5. Añadir con una micropipeta 0.017 ml de la solución antigénica sobre el

contenido de cada anillo de la lámina serológica. Del anillo 1 al 6.6. Colocar la lámina con las muestras sobre el rotador a 180 rpm por 4 min. o

rotarlo manualmente.7. Examinar al microscopio con objetivo de 10x y ocular de 10 x8. De obtener reactivo sobre el título 1/8 continuar con las diluciones.LECTURA E INFORME 1. - Reactivo.- (R) 2. - Reactivo debil (RD) 3. - No reactivo (NR)

B. MÉTODO DE RPR Es una prueba serológica plasmática de floculación macroscópica

RPR CUALITATIVO EN PLASMA1. Colocar 0.05ml de los sueros a evaluar o una gota utilizando el aplicador

del kit no olvidar colocar los sueros control.2. Con ayuda del aplicador extender la muestra dentro del círculo sin salir del

margen.3. Agregar 0.017ml del antígeno con micropipeta o una gota con el gotero del

kit sobre la muestra a evaluar.4. Colocar la tarjeta con las muestras sobre el rotador, por 8 min a 100 RPM,

o hacerlo manualmente.5. Luego de los ocho minutos hacer la lectura con ayuda de la lámpara de luz.6. - LECTURA E INFORME7. Reactivo.-(R) Grumos grandes medianos, o pequeños pero definidos8. No reactivo (NR) Sin grumos si se observa grumos definidos o pequeños

debe realizarse la prueba cuantitativa.de igual manera que para VDRL .


9.6 Cuestionario1. ¿En que se diferencian las pruebas de VDRL y RPR?

2.¿Cuáles son las pruebas confirmatorias de un VDRL positivo?

9. 7 Fuentes de información1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica panamericana;

1999.


2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a ed. Barcelona: Masson; 2005.





X. PRACTICA No 10: DETERMINACIÓN DE CRIOAGLUTININAS, PRUEBA A.R., PRUEBA DE PCR, ANTIESTREPTOLISINA (ASO)

A. DETERMINACIÓN DE CRIOAGLUTININAS

10.1 Marco teóricoLas crioaglutininas son anticuerpos que en el suero son capaces de causar la aglutinación de sus propios eritrocitos (autoaglutininas), asi como las de otras personas (isoaglutininas), a una temperatura comprendida entre o y 5 oc. Estos anticuerpos que también se les conoce con el nombre de crioaglutininas se hallan presentes en títulos muy bajos en las personas sanas.La aglutinación es de carácter reversible, es decir que desaparece a 37 oc y reaparece a baja temperatura. Este es un buen procedimiento para detectar una aglutinación auténtica al frío.

10.2 Competencias1.Determina el proceso para la determinación de crioaglutininas2.Interpreta los resultados encontrados en la prueba de crioaglutininas

10.3 Materiales y equipos Materiales

Tubos de ensayo

Reactivos:Oxalato de Potasio al 2%

Solución de citrato de sodio al 3,8%Solución de cloruro de sodio al 0,85%

10.4 Procedimiento MÉTODO DE AIQUEL

1. Extraer 10 mL de sangre: colocar 4,5mL en un tubo que contiene 0,5mL de anticoagulante y el resto de sangre colocar en otro tubo sin anticoagulante.

2. A los dos tubos llevar a la temperatura de 37 oC los dos hasta que la sangre del segundo tubo coagule.

3. Centrifugar el tubo que contiene el coagulo, a fin de separar el suero.4. Del tubo con anticoagulante tomar una cantidad determinada y lavar los

eritrocitos por 3 veces con SSF.


5. Después de eliminar el líquido del último lavado preparar una suspensión al 2% en SSF.TITULACION:

6. En 8 tubos de ensayo colocar en el primer tubo o,8mL de SSF y a los demás 0,5mL luego se agrega 0,2 mL de suero se mezcla y se pasa 0,5mL al 2do tubo y así sucesivamente hasta el séptimo tubo de donde se extraen 0,5ml que se desechan. El tubo octavo sirve de testigo.

7. Se agregan a todos los tubos 0,5mL de la suspensión de hematíes. Las diluciones serán:

8. 1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320 y 1/640.9. Colocar los tubos en la heladera a 4º hasta el día siguiente.10. Hacer las lecturas.MÉTODO DE TRÖNBERG:1. Obtener 6 mL de sangre, mezclar con 1,5mL de citrato de sodio al 3,8%2. Centrifugar a 2,000rpm durante 5 minutos.3. Separar el plasma en un tubo de ensayo.4. Con el paquete de glóbulos rojos preparar una suspensión de hematíes al

0,5% (0,05ml de glóbulos rojos y completar a 10mL de SSF)TITULACIÓN:

5. En 6 tubos de ensayo colocar en cada uno 0,3mL de SSF6. Al primer tubo colocar 0,3mL del plasma, mezclar y pasar al segundo tubo y

así sucesivamente hasta el sexto tubo del cual se desecha 0,3mL7. Las diluciones serán: ½, ¼ , 1/8, 1/16, 1/32 y 1/64.8. Adicionar 0,3mL de la suspensión de hematíes al 0,5% a cada uno de los

tubos.9. Colocar en una gradilla y llevar a refrigeración (2-5 oC por 24 horas).10. Examinar todos los tubos balanceándolos o girando ligeramente para

apreciar la intensidad de aglutinación en caso de ser positiva se considera al de mayor dilución y son negativas cuando no existe aglutinación.

SIGNIFICANCIA CLÍNICASe asocia con el síndrome clínico de la neumonía atípica primaria causado por el Micoplasma pneumoniae, así mismo en la anemia hemolítica adquirida y congénita, en el falciformismo, en la tripanosomiasis, algunas hepatitis se pueden encontrar títulos elevados.

B. ANTIESTREPTOLISINAS O

10.1 Marco teórico La antiestreptolisina “o” prueba que a menudo se designa el nombre de asto , es útil para el diagnóstico y tratamiento de la fiebre reumática , la glomérulo nefritis aguda y otras infecciones por estreptococo beta hemolítico. entre los anticuerpos antiestreptococicos destaca por su interés clínico la antiestreptolisina o, cuyo título se expresa en unidades de todd, siendo la cifra normal 102 u Todd/mL. Con un límite máximo de 250u .Un título alto de antiestreptolisina o significa infección estreptocócica sobrepasada o actual y concretamente debido a estreptococos beta – hemolíticos del grupo serológico a (excepcionalmente de los grupos c y d de la clasificación de lancefield) amigdalitis, escarlatina, sepsis puerperal, erisipela etc. Pero tienen especial interés en los procesos estreptocócicos que aparecen como segunda enfermedad: fiebre reumática y glomérulo nefritis aguda. No es por, lo tanto una


prueba específica de fiebre reumática, pero apoya su diagnóstico cuando la historia y los signos clínicos la sugieren; sin embargo un título superior a 500 u solo se registran en fiebre reumática, lo cual concede su diagnóstico a esta prueba.

10.2 Competencias1.Explica el fundamento de la determinación de antiestreptolisina. 2.Realiza el proceso para determinar antiestreptolisina.3.Interpreta los resultados cuantitativos para un asto positivo.


Materiales Tubos de ensayo

Pipetas automáticas Reactivos

1. Suspensión de eritrocitos humanos lavados dos veces con solución fisiológica y una con solución buffer de ASTO, se suspende al 5% en este buffer..

2. Buffer de ASTO, cloruro de sodio 7.40 g, fosfato monopotásico 3.17g , fosfato disódico anhidro 1.81g, se disuelve c.s.p 1000cc con agua destilada conservar en heladera..

3. Antígeno de estreptolisina “O” 4. Suero del paciente no hemolisada ni contaminada debe ser inactivada a 56

oCx 30min ó 60 oC x 10min.

10.4 Procedimiento 1. Se hace una dilución del suero 1/202. En ocho tubos numerados del 1 al 8 colocar 0.20mL de buffer de ASTO. 3.En el primer tubo colocar 0.20mL del suero diluido 1/20 se mezcla bien y

de el se toma 0.20mL y pasar al siguiente tubo y así sucesivamente hasta el séptimo tubo eliminando finalmente 0.20mL del tubo siete el octavo sirve de control.

4.De esa manera obtenemos las siguientes diluciones 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280, 1/2560.A los ocho tubos se coloca 0.10 mL de antígeno y se incuban en baño maría a 37 oC durante 15 minutos, luego añadir 0.10 ml de las suspensión de eritrocitos al 5% en buffer de ASTO. Se agita para homogenizar y se incuba nuevamente a baño de agua a 37 oC por 45min.VALORES NORMALES. Por este método los valores normales van de 1/40 a 1/60 unidades Todd.INTERPRETACIÓN. La presente determinación es útil para el diagnóstico y tratamiento de la fiebre reumática y sirve para la comprobación serológica de las antitoxinas de defensa contra las toxinas bacterianas, es decir para la comprobación de una infección existente o pasada por estreptococos beta hemolítico de los grupos serológicos humanos A, C y G.



10.6 Cuestionario1. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de ASTO? 2. Mencionar los estados fisiológicos y medicamentos que interfieran con la

prueba de antiestreptolisina.3. ¿En que se diferencian las pruebas de PCR y LATEX?

10.7 Fuentes de información1. Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed.

Barcelona: Salvat Editores S.A.; 2001.2. Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de

laboratorio. 8a ed. Barcelona: Elsevier España SL; 2008. 3. Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán

libros s.l.; 2007.4. Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: JIMS;

1992.5. Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.:

McGraw –Hill Interamericana; 2002.

XI. PRACTICA Nº 11: EXAMEN DE ORINA COMPLETA: EXÁMEN FÍSICO, QUÍMICO y MICROSCÓPICO

11.1 Marco teóricoLa utilidad del análisis de orina tiene una doble vertiente: por un lado, permite la valoración directa del propio aparato urinario, por otra, más indirecta, resulta ser un reflejo de determinadas situaciones bioquímicas de la sangre. A estas ventajas hay que añadir, además la facilidad de su recogida, que habitualmente no representa ninguna molestia valorable para el paciente .el examen de orina completa significa que se realizara varias pruebas física (densidad, pH, color. Etc.), bioquímicas (glucosa, proteínas, nitritos, pigmentos biliares, etc.) Y microscópicas del sedimento urinario (leucocitos, hematíes, cilindros, bacterias ,cristales, etc.)

11.2 Competencias1.Aplica el proceso físico-químico para el examen de orina2.Identifica los diversos elementos en el examen microscópicos de la orina3.Explica la interpretación clínica de los resultados del examen de orina


Materiales Tubos de ensayo Equipos Microscopio Centrifuga Urodensimetro

Reactivos Tiras reactivas para determinaciones bioquímicas en orina


11.4 ProcedimientoSegún la finalidad del análisis y no mediando indicaciones especiales del médico se instruirá al paciente acerca de como procederá para la recolección de muestra de orina, teniendo en cuenta:

Par los exámenes de rutina, es suficiente una muestra de reciente micción salvo en los casos en que se necesario practicar determinaciones casos es preciso realizar los exámenes en un muestra correspondiente a la mezcla de la orina total de 24 horas, es decir que compensa el metabolismo de un almuerzo o de una cena. Para reunir esta muestra, el paciente iniciará la recolección a las 8 a.m. vaciando la vejiga y desechando esa primera micción. Luego las distintas micciones se recogerán en un recipiente de boca ancha y perfectamente limpio incluyendo la micción de las 8 de la mañana del día siguiente.El recipiente conteniendo la muestra deberá conservarse en un ambiente fresco como para impedir la descomposición prematura de la orina.Para el examen microscópico del sedimento, se utiliza preferentemente una muestra de reciente micción y en especial la obtenida por la mañana al levantarse el paciente.Se prefiere las primeras muestras de la mañana, que suelen ser las más concentradas.

En todo examen de orina se tomará en cuenta:1. EXAMEN FISICO:

CantidadColorOlorEspumaReacciónDensidad

2. EXAMEN QUIMICO:Determinación de:acidez total proteínascloruros glucosafosfatos cuerpos cetónicosurea pigmentos biliaresurobilinógeno hemoglobinaHoy en día existe en el mercado la utilización de papeles o tiras reactivas para el análisis de orina que facilita la determinación cualitativa y cuantitativa de los componentes químicos de la orina.

3. EXAMEN MICROSCOPICO DE SEDIMENTO:El sedimento se obtiene centrifugando 10 ml. de orina a 1500rpm durante 5 minutos, transcurrido dicho tiempo se vuelca el líquido sobrenadante y se suspende el sedimento en el liquido remanente o sea que queda adherido a las paredes del tubo de centrífuga. Se coloca entre porta y cubreobjetos se observa al microscopio con objetivo de menor aumento y luego con el de mayor aumento.Los constituyentes del sedimento urinario pueden agruparse dentro de 3 grupos: no organizados, organizados y cuerpos extraños.Sedimento no organizado:


En la orina normalmente no hay cristales y su presencia en orina no tiene significado clínico salvo si se trata de cristales de oxalato, uratos o de cistina.Sedimento organizado:

Células epitelialesEscamosas o pavimentosasCélulas redondas o poliédricasCélulas de transiciónCilindrosCilindroidesLeucocitos y PiocitosEritrocitos


11.6 Cuestionario1. ¿Cuales son las condiciones para una buena toma de muestra de orina?2. ¿En que casos se presentan proteínas positivas en un examen de orina?3. ¿En que procesos patológicos se presenta Thevenon positivo?4. ¿Cuáles son las pruebas bioquímicas que se utilizan para el examen de orina?5. ¿Cual es la importancia clínica de encontrar piocitos en una muestra de orina?.

11.7 Fuentes de información1.Aiquel f. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos aires: médica panamericana;

1999.2.Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a ed.

Barcelona: Masson; 2005.3.Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos.

Madrid: Masson; 2005.4.Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.5.Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Manual

moderno, 2006.6.Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 3a ed.



XII. PRÁCTICA No. 12 : UROCULTIVO: COLORACIÓN GRAM, PRUEBAS BIOQUÍMICAS, ANTIBIOGRAMA.

12. 1 Marco teórico El urocultivo es uno de los métodos de análisis microbiológico de suma importancia para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas del tracto urinario y asi dar un tratamiento adecuado y oportuno

12.2 Competencias1.Aplica técnicas de laboratorio para la determinación del urocultivo y coprocultivo.2.Utiliza los medios de cultivo adecuado para el desarrollo de los microorganismos3.Interpreta los hallazgos de laboratorio

12.3 Material y equipos

Materiales Tubos de ensayo

Asa de Kole Placas Petri

Reactivos1. Colorante Gram

Cristal violeta alcalino: Sol. A: cristal violeta 1g. Agua destilada csp. 100 mL.Sol. B: bicarbonato de sodio 5g. Agua destilada csp 100mL.Sol. De yodo 1g. Ioduro de potasio 2g. Agua destilada csp 200mL.


Sol. Decolorante: eter 1 vol. Acetona 3 vol.Colorante de contraste: safranina 0.5g agua destilada csp 100 mL.

2. Medios de cultivo:Agar Mac Conkey ó EMBAgar Azida SangreAgar Chapman

3. Coloración de Ziehl-Nelsen (bacilos ácido-resistente)4. Sol. A: fucsina básica 0.3g alcohol de 95º. 10ml.5. Sol. B: fenol 5ml. Agua destilada csp. 95ml.6. Mezclar las soluciones a y b 7. Sol. Alcohólica de ácido clorhídrico8. Sol. De azul de metileno

12.4 ProcedimientoRECOLECCION DE MUESTRAS:1. La muestra para cultivo debe ser material del verdadero sitio de infección

y debe recogerse con un mínimo de contaminación de tejidos, órganos o secreciones adyacentes.

2. Establecer periodos óptimos para la recolección de muestras a fin de tener la mejor oportunidad de aislar los microorganismos causantes.

3. Obtener suficiente cantidad de muestra para llevar a cabo las técnicas de cultivo solicitada.

4. Utilizar dispositivos de recolección, recipientes para las muestras y medios de cultivo adecuados para asegurar el óptimo aislamiento de microorganismos.

5. Siempre que sea posible obtener las muestras antes de la administración de antibióticos.

6. El envase recolector de la muestra debe estar correctamente rotulado.UROCULTIVO:Primer Día: Recolección de la muestra.

- Examen de orina completo: físico, químico, microscopio, sedimento.

- Coloración gram del sedimento:- Sembrar en: Agar Mac Konkey ó EMB

Agar Azida Sangre Agar Chapman

- Si el sedimento se observará además de leucocitos, bacilos y en la coloración estos últimos aparecen teñidos, entonces se práctica una coloración de Ziehl-Neelsen (bacilos ácido-resistente)

Segundo día: Lectura del recuento microbiano. Si hay mas de 100 colonias: No existe infección. Si hay entre 10 a 1000 colonias realizar nuevamente la

técnica. No. de colonias X 1000 = bacterias / mL de orina

1.Crecimiento en agar Mac Conkey:Coloración gram negativoSiembra en diferenciales: LIA,TSI,CS,SIM-INDOL, UREA.Siembra en agar MH o TSA por diseminación general.(usar discos antibióticos para gram negativos)

2. Crecimiento en Agar Azida Sangre


Coloracion gram positivoObservar si hay hemolisis.

Observar si hay crecimiento en Agar Chapman (Positivo) Si hay crecimiento en Azida Sangre y Agar Chapman es: Stf sp (si las colonias son amarillas son Stf aureus) Si hay crecimiento en Azida Sangre y no en Agar Chapman: existe hemólisis, puede ser Stp. (puede demorar 36 a 48 horas).Resembrar (cuarta parte) en agar Chapman colonias sospechosas del Azida Sangre.Diferenciales para Stp:Resembrar (en la cuarta parte) de colonias sospechosas: por diseminación y colocar discos de Optoquima y Bacitracina. Observar a las 24 horas.Sembrar por diseminación en Agar MH o TSA y usar discos de antibióticos para gram positivos.Tercer día:

1. Lectura de diferenciales: identificacion de Enterobacterias2. Lectura: sensible a la optoquima: Stp pneumoniae

Sensible a la bacitracina:Stp tipo A.3. Sea 1 o 2 leer antibiograma y definir

ANTIBIOTICOS: A: SENSIBLEB: MEDIANAMENTE SENSIBLEC: RESISTENTES


12.6 Cuestionario1. ¿Cuáles son los medios de cultivo utilizados en la identificación de

microorganismos gram negativos?2. ¿Desarrolle un mapa conceptual de un urocultivo.3. ¿Cómo es el proceso para la toma de muestra de un hemocultivo?4. ¿qué importancia tiene el antibiograma?5. ¿qué importancia tienen los medios de enriquecimiento en un coprocultivo?

12.7 Fuentes de información

1. Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed. Barcelona: Salvat Editores S.A.; 2001.

2. Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 8a ed. Barcelona: Elsevier España SL; 2008.

3. Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán libros s.l.; 2007.

4. Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: Editorial JIMS; 1992.5. Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.: McGraw –Hill



XIII. PRACTICA No. 13: ESTUDIO DE LAS HECES: EXÁMEN PARASITOLÓGICO. METODO DE FAUST

13.1 Marco teóricoEn la patología parasitaria tiene importancia la investigación de los parásitos intestinales en las heces, utilizando técnicas del laboratorio más usadas como las del método directo, método de concentración de faust,, jarabe fenolado, willis, método de sedimentación de teleman, etc. De esta manera se contribuye al mejor conocimiento de la sintomatología, diagnóstico, tratamiento y prevención de la parasitosis intestinal.

13.2 Competencias1. Identifica los parásitos mas frecuente en muestro medio utilizando las

técnicas de examen directo y concentración2. Relaciona el parásito hallado con el fármaco a utilizar para el tratamiento

13.3 Materiales y equiposCONSERVADORESCuando las muestras provienen de lugares lejanos o no van a ser examinados inmediatamente, se aconseja conservarlos mediante diversas formas:Conservación por el frío.Son para huevos de helmintos y quiste de protozoarios, así podemos mencionar:a. Solución fijadora y conservadora por el agua formolada.

La aplicación y conservación de esta solución, varía según las consistencia de las heces, así por ej:Las heces duras emplean agua formolada al 5%.Las heces pastosas emplean agua formolada al 10%Las heces conteniendo huevos de helmintos muy resistentes, emplean agua formolada al 20%. La cantidad que se utiliza para cualquiera de las 3 formas volúmenes de agua formolada por 1 volumen de muestra de heces.

b. Líquido de Deschiens:Glicerina 100 mL.Formaldehído al 40% 100 mLAgua destilada 800 mL

c. Solución de De la Plaza:Formaldehído al 40% 12.5 mLGlicerina 12.5 mLSol. de Ringer o sol. fisiológica 250 mLSol. de Ringer > ClNa 6 gClK 75 gCl2Ca 100 mgHCO3Na 100 mgAgua destilada csp 1000 mL

Existe otros conservadores tales como: Sol. MIF (Mertiolato-Yodo-Fromaldehido) de Sapreso y Lawles.


Sol de PVa (Alcohol Polivinilico)

REACTIVO DE FAUST:Sulfato de Zinc al 33% (D>1,180)

REACTIVO DEL JARABE FONOLADO:Reactivo: Azúcar granulada 400 gAgua destilada 300 mLFenol 1 gDisolver el azúcar en agua caliente de 80 a 90 oC (No debe hervir) hasta consistencia de jarabe y añadir 1g de fenol como conservador.

13.4 ProcedimientoEl estudio debe identificarse en las heces:

Las formas vegetativasHuevosLarvasQuiste de los parásitos.

RECOLECCION DE LAS MUESTRASEl paciente colocará la primera deposición sin mezclar con la orina en un recipiente de vidrio de boca ancha limpia y seca, rotulará su nombre y será remitido inmediatamente al laboratorio cerrándole herméticamente, no debe utilizar recipientes porosos; ya será de papel o de cartón.Cuando se quiere investigar protozoarios en su forma vegetativa se requiere muestra fresca. Las muestras formadas son mejores para encontrar quiste, en cambio las líquidas nos permite identificar trofozoitos y deben se examinadas de inmediato o pueden ser conservadas.Ciertos parásitos para ser investigados requieren procedimientos especiales, por ej. Por el método de Graham (cinta adhesiva) para Enterobius vermicularis.En todo examen de heces para la búsqueda de parásitos deben considerarse el siguiente orden:1. EXAMEN MACROSCOPICO:Este examen consiste en buscar por simple observación visual y minuciosa la consistencia de las heces, mucus, sangre y formas adultas de parásitos tales como: Enterobius vemincularis, Tenias, Ascaris Lumbricoides, Ancylostoma duocenales, Trichuris trichiura, etc.Cuando las heces son blancas o líquidas, las larvas o formas adultas de los parásitos pueden encontrarse ocultos en medio de la masa fecal, en esta caso se filtrarán la muestra a través de un tamiz y se hará la observación.2. EXAMEN MICROSCOPICO:En este examen parasitológico obligatoriamente debe realizarse dos procedimientos:1.Examen por el método directo de heces frescas, empleando sol. de lugol parasitológico y sol fisiológica de cloruro de sodio.2.Examen por el Método de Concentración, empleando un método de rutina.METODO DIRECTOPermite encontrar mayoría de los parásitos, quiste de protozoarios con núcleos teñido de amarillo, las vacuolas de color pardo, larvas y huevos de helmintos.En dos láminas portaobjetos limpios y secos, colocar en uno de ellos dos gotas de sol. de lugol, en la otra lámina 2 gotas de sol. fisiológica y con la ayuda de un mondadientes colocar una porción de muestra a ambas láminas preparadas,


mezclar homogéneamente, cubrir con un cubreobjeto y observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento.METODO DE CONCENTRACION:Tiene por objeto reunir en un pequeño volumen a los elementos parasitarios inicialmente dispersos en una gran masa de heces.Los métodos de concentración son muy numerosos, clasificándose en dos grupos:I. METODOS FISICOS:

A. Por sedimentación y por flotación.Método de FaustMétodo del Jarabe FenoladoMétodo de Willis

B. Método de sedimentación de Teleman METODOS DIFASICOS:Comprende dos etapas:a. Fases de separación residuos mas voluminososb. Fase de concentración y enriquecimiento de los elementos parasitarios:

Método de RitchieMétodo de Carles-Barthelemy

METODOS DE SEDIMENTACION Y FLOTACION:METODO DE FAUST:1. En un recipiente adecuado, se prepara una suspensión de materia fecal

mezclado una parte de heces con 10 partes de agua tibia.2. Filtrar la mezcla sobre una gasa en 4 dobleces colocado en un embudo y se

recoge 10 ml en un tubo de centrifuga.3. Centrifugar a 2000 rpm durante 2 minutos, retirar de la centrifugadora y

decantar el liquido sobrenadante.4. Al sedimento obtenido agregar 3 ml de agua tibia, mezclar bien.5. Centrifugar y decantar el líquido sobrenadante repitiendo la operación por 3

veces hasta que el agua del sobrenadante permanezca límpida.6. Después de la centrifugación se decanta el líquido sobrenadante, y añadir 3 a 4

ml. de; la sol de sulfato de zinc al 33% agitar bien durante un minuto y centrifugar al 2500 rpm durante 1 o 2 minutos.

7. Con el asa de platino recoger la película superficial donde se encuentra flotando los quistes de protozoario y huevos de helmintos colocar sobre un portaobjeto limpio y seco agregar una pequeña gota de lugol parasitológico y efectuar el examen al microscopio.

METODO DEL JARABE FENOLADO (Flotación)1. En un vial colocar el jarabe fenolado hasta la mitad y agregar con una bagueta

unos 2 g de heces.2. Mezclar bien las heces con el jarabe fenolado hasta observar uniforme la

suspensión.3. Adicionar mas jarabe fenolado hasta el borde del vial4. Al borde del vial aplicarle un portaobjeto y dejar en reposo por 20 minutos como

tiempo mínimo.5. Retirar el portaobjeto y sobre la muestra aplicarle un cubreobjeto efectuar el

examen microscópico.Por este método se observan larvas y huevos de los helmintos.



13.6 Cuestionario1.¿En que consiste la tecnica de Graham ?2.¿Cuales son las condiciones para la toma de muestra de heces para un paciente

que se sospecha parasitosis?3.¿Desde el punto de vista patológico como se adquiere una tricuriasis?4.¿En que consiste el método del jarabe fenolado?

13.7 Fuentes de información1.Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed. Barcelona:

Salvat Editores S.A.; 2001.2.Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 8a ed.

Barcelona: Elsevier España SL; 2008. 3.Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán libros s.l.; 2007.4.Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: JIMS; 1992.5.Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.: McGraw –Hill


XIV. PRACTICA No. 14: DOSAJE DE GLUCOSA, PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA, GLUCOSA POST PRANDIAL.

14.1 Marco teórico La determinación de glucosa sérica es útil para el diagnostico de numerosas enfermedades metabólicas (diabetes mellitus). Los niveles séricos, de glucosa deben interpretarse de acuerdo con la hora, día en la que se tomo la muestra. La concentración de glucosa en los líquidos extracelulares se mueve en una banda de tolerancia que es regulada a la baja de insulina (acción hipoglucemiante y la alza mediante el glucagón, cortisol, catecolaminas y hormona de crecimiento).las determinaciones de glucosa en pacientes recientemente diagnosticados de diabetes se deben realizar con frecuencia para controlar de cerca la dosis de insulina que debe administrarse.

14.2 Competencias1. Utiliza métodos bioquímicos para la determinación de la glucosa en sangre2. Interpreta los resultados y correlacionarlos con otras determinaciones

solicitados en análisis clínicos


Materiales1. Gradillas2. Tubos de ensayo3. Pipetas volumétricas4. Pipetas automáticas5. Baguetas6. Centrifuga7. Espectrofotómetro


Reactivos1. Reactivo enzimático2. Standard de glucosa: una solución de glucosa 100mg/dl que contiene

preservantes y estabilizadores. Mantener en refrigeración.

14.4 ProcedimientoMETODO ENZIMÁTICO COLORIMÉTRICO:Preparar 3 tubos y agregar en ellos:

BLANCO STANDARD MUESTRA(mL) (mL) (mL)

Standard - 0.01 -Suero - - 0.01Reactivo constituido 1.0 1 .0 .0

Mezclar suavemente.Incubar por 5 minutos a 37oCLeer absorbancia a 505nm contra el blanco. El color es estable por 1 hora.Cálculos:Glucosa (mg/dL) = 100 --------------------- x A muestra problema

A standard

A= valor de absorbancia obtenido.VALORES:Suero o plasma: 65 – 115 mg/dL


14.6 Cuestionario1. ¿En que consiste la prueba de la tolerancia a la glucosa?2. ¿En que consiste la prueba de la hemoglobina glicosilada?3. ¿Por qué es importante la utilización del método enzimático para determinar

glucosa en sangre ?

14.7 Fuentes de información 1.Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 8a ed.

Barcelona: Elsevier España SL; 2008. 2. Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a

ed. Barcelona: Salvat Editores S.A.; 2001.3. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su

interpretación. 3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985.4. Kumar V, Cotran R, Robbins S. Patología humana. 7a ed.

Madrid: Elsevier; 2004.5. Widmann F. Interpretación clínica de las pruebas de laboratorio.

4a ed. Barcelona: JIMS; 1997.6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en

hematología. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.


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