GLUCIDOS, lípidos y proteínas

5/11/2018 GLUCIDOS, l pidos y prote nas - slidepdf.com

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PRÁCTICAS DE LABORATORIO

RECONOCIMIENTO DE BIOMOLÉCULAS DPTO. BIOLOGÍA Y GEOLOGIA. IES LLERENA.

ALUMNOS COMPONENTES DEL GRUPO:



CUADERNO PRÁCTICAS LABORATORIO. BIOQUÍMICA. 1º BACHILLERATO. BIOLOGÍA Y GEOLOGÍA. IES LLERENA

2

LA SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Para garantizar tu propia seguridad y la de todos nosotros te indicamos unas sencillas normas de funcionamiento en

el laboratorio. Queremos que tu mismo comprendas su importancia y que las asumas para así poder llevar a cabo un

trabajo bien hecho y seguro.

_ Encima de la mesa tendrás únicamente el material de prácticas. Los libros y otras pertenencias los colocarás en el

cajón de la mesa.

_ Solo debes sacar un lápiz, una goma y el guión de prácticas.

_ No manipules nada que esté a tu alcance antes de empezar a trabajar. Maneja el material solo cuando sepascomo se utiliza.

_ Evita levantarte de tu sitio durante la actividad, sobre todo con material de prácticas en tus manos. Cuando

necesites alguna aclaración, llama a tu profesor y espera en tu sitio a que te atienda.

_ Comprueba que en tu puesto de trabajo tienes todo el material que necesitas y que estará señalado en tu guión

de prácticas. En caso de que notes que falta algo, comunícalo al profesor.

_ Si algún aparato no funciona evita toda manipulación. Comunícalo al profesor así como si se ha producido alguna

rotura, aunque sea insignificante.

_ Si empleas el mechero de gas o alcohol, hazlo con sumo cuidado. Regula la llama del mechero desde el mínimo y

girando muy despacio hacia el máximo

hasta alcanzar una llama de pequeño tamaño. Asegúrate de apagar el mechero en cuanto termines de calentar.

_ Los tubos de ensayo deben calentarse inclinados, moviéndolos y orientados hacia lugares donde no haya

ninguna persona. No calientes por el fondo.

_ El profesor te indicará como deshacerte de los restos de la práctica . Como norma general los residuos sólidos los

depositarás en el cubo de basura; los líquidos en las pilas de la pared manteniendo el grifo abierto.

_ Lava y limpia el material que hayas utilizado y tu mesa de trabajo antes de salir del laboratorio. La pila donde

hayas lavado tus materiales debe quedar limpia y sin obstruir.

_ Al finalizar la práctica comprueba que todo el material ha quedado en orden y desconectado. Revisa también los

interruptores de la luz y que el grifo del agua esté cerrado.

_ Lávate las manos antes de salir del laboratorio.




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PRÁCTICA 1. RECONOCIMIENTO DE GLÚCIDOS

REACTIVOS

(para todos los grupos)

MATERIALES

(por grupo)

Muestras de glúcidos al 5% (hacer 100 ml):

o glucosa

o lactosa

o sacarosa

o almidón.

Reactivo de Fehling A y Fehling B

Lugol

HCl diluido (al 10%).

NaOH (10%)

Tubos de ensayo (7)

Gradilla (1)

Pinzas (1)

Mechero(1)

Pipetas

Rotulador vidrio.

A) ESTUDIO DE AZÚCARES REDUCTORES.

FUNDAMENTO: Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos y de la mayoría de los disacáridos

(excepto la sacarosa). Esto se debe a que los monosacáridos tienen un grupo C=O que se puede oxidar a

COOH a costa de reducir a otros compuestos.

La acción reductora se manifiesta mediante una solución de sulfato cúprico (SO4Cu) de color azul que

pasa a óxido cuproso (Cu2O) de color ladrillo que precipita. El reactivo utilizado es el licor de Felinhg, que

consta de dos soluciones separadas de rojo ladrillo que se mezclan en el momento de usarlas. La solución

A (azul) es de sulfato cúprico alcalino y la B (incolora) es de tartrato y sosa. Llevan NaOH para alcalinizar y

permitir la reacción.

Si el glúcido que se investiga es reductor, se oxidará dando lugar a la reducción del sulfato de cobre (II),

de color azul, a óxido de cobre (I), de color rojo-anaranjado.

o baño maría

Reacción positiva:Azúcar reductor.

Reacción negativa:Azúcar no reductor.



PROCEDIMIENTO:

1. Numeramos cuatro tubos de ensayo y añadimos en cada uno:

(primero la solución y después el reactivo)tubo 1: 2cm3 de glucosa + 1cm3 de Fehling A + 1cm3 Fehling B

tubo 2: 2cm3 de maltosa + 1cm3 de Fehling A + 1cm3 de Fehling B

tubo 3: 2cm3 de fructosa + 1cm3 de Fehling A + 1cm3 de Fehling B

tubo 4: 2cm3 de sacarosa + 1cm3 de Fehling A + 1cm3 de Fehling B

tubo 5: 2cm3 de almidón + 1cm3 de Fehling A + 1cm3 de Fehling B

OJO: CUIDA DE USAR UNA PIPETA PARA CADA MONOSACÁRIDO, SI SE CONTAMINAN DE OTROS LA PRÁCTICA NO

SALE BIEN.

2. Ponemos los tres tubos al baño María, observamos lo que ocurre y anotamos los resultados.

1. La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo-ladrillo, que con el tiempo precipita

en el fondo del tubo.

2. La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-verdoso.

Nota: también se puede calentar al mechero cuidando de aplicar lateralmente la llama, no en el fondo del

tubo, manteniéndolo inclinado y con la boca orientada hacia donde no haya nadie. Agita suavemente

mientras calienta, y si entra en ebullición rápida, apártalo de la llama.

3. Limpiad los tubos rápidamente.

RESULTADOS:

GLUCOSA MALTOSA FRUCTOSA SACAROSA ALMIDÓN

TIPO GLÚCIDO

SABOR

SE DISUELVE EN

AGUA

FEHLING

REDUCTOR

http://feling%28%29/



http://felingneg%28%29/








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CONCLUSIONES.

1. Haz un informe de las conclusiones que puedas sacar de la práctica.

2. Busca la fórmula de los compuestos con los que has trabajado.3. Investiga por qué alguno de los glúcidos no son reductores.

4. ¿Qué glúcido no se disuelve en agua? ¿Por qué?

5. ¿Por qué cuando tenemos mucho tiempo el pan en la boca acaba teniendo un sabor dulce?

2. Hidrólisis de la sacarosa.

FUNDAMENTO.

La sacarosa es un disacárido que no posee carbonos anoméricos libres, por lo que carece de poder reductor

y la reacción con el reactivo de Fehling es negativa.

Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molécula de

agua y se descompone en los dos monosacáridos que lo forman ( glucosa y fructosa).

La prueba de que se ha roto la sacarosa se hace con Fehling y si se ha producido aparecerá un precipitado

rojo: se ha convertido en reductor porque se ha transformado en glucosa y fructosa que son reductoras.

Si el resultado es negativo o aparece una coloración verdosa, la hidrólisis no se ha realizado correctamente (

se ha dejado poco tiempo en HCl) .

PROCEDIMIENTO:

1. Poner en un tubo de ensayo una solución de sacarosa y añadir 10 gotas de ácido clorhídrico al 10%.

2. Calentar a la llama del mechero o al baño maría durante 3 minutos.

3. Dejar enfriar y añadir 10 gotas de NaOH para neutralizarla.

4. Realizar la prueba de Fehling como en el ejercicio anterior:

Añadir 1 ml. De Solución A.

Añadir 1 ml. Solución B.

Calentar al mechero o al baño María.




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3. IDENTIFICACIÓN DEL ALMIDÓN:

El almidón, como el resto de los polisacáridos, no es reductor, por lo que no podemos demostrar su presencia

con el reactivo de Fehling. Para detectarlo se usa la prueba del lugol. Este método se usa para identificarpolisacáridos. El almidón en contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol (disolución de yodo y yoduro potásico)

toma un color azul-violeta característico.

Fundamento:

La coloración producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras

de la molécula de almidón.

No es por tanto, una verdadera reacción química, sino que se forma un compuesto de

inclusión que modifica las propiedades físicas de esta molécula, apareciendo la

coloración azul violeta. Por tanto no es una reacción química, sino una interacción física

reversible por métodos físicos. Esto se puede comprobar fácilmente, pues al calentar la

mezcla, el color azul desaparece, y al enfriarla vuelve a aparecer.

1. Colocar en una gradilla tubos numerados con 2ml de muestras de distintos glúcidos

2. Añadir 5 gotas de Lugol en cada uno de los tubos de ensayo.

3. Observar los resultados.

4. Con este método puede identificarse el almidón.

Basándote en esta característica te voy a proponer un pequeño juego que te va a sorprender:

Una vez que tengas el tubo de ensayo con el almidón y el lugol, que te habrá dado una coloración violeta, calienta

el tubo a la llama y déjalo enfriar.




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PRÁCTICA 2. RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS

MATERIALES

- Tubos de ensayo

- Gradilla

- Mechero

- Vasos de precipitados

- Pipetas

-

- Solución de HCl concentrado

- Alcohol etílico

- Solución de SO4Cu al 1%

- NaOH al 20%

- Clara de huevo o leche o Solución de albúmina al

1-2%

2.1. COAGULACIÓN DE LAS PROTEÍNAS

FUNDAMENTO

Las proteínas debido al gran tamaño de sus moléculas forman con el agua soluciones coloidales que

pueden precipitar formándose coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70ºC o al ser

tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.

La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los

agentes indicados. Esta desnaturalización provoca la pérdida de las estructuras terciaria y

secundaria, hace que se formen agregados y precipiten.

PROCEDIMIENTO.

o Colocar en dos tubos de ensayo 2 ml de albúmina de huevo. También se puede utilizar clara de

huevo. Rotúlalos:

Tubo 1: Caliéntalos a la llama de un mechero al baño maría.

Tubo 2: Añade 2 ml de ClH concentrado.

Observa y anota los resultados.



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8PRÁCTICAS DE BIOLOGIA Y GEOLOGÍA. 1º BACHILLERATO. IES LLERENA. 2011

2.2. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)

FUNDAMENTO

Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por tanto para su

identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas,

pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye

al liberarse los aminoácidos.

El reactivo de Biuret contiene CuSO4 (CuII) y sosa. El cobre, en medio alcalino (sosa) se coordina con

los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta. Su intensidad depende de la

concentración.

PROCEDIMIENTO.

Colocar dos tubos de ensayo rotulados :

Tubo 1 control: 3ml de agua.

Tubo 2: 3ml de solución de albúmina al

1-2%.

A ambos:

Añadir 3ml de solución de NaOH al 20%.

Añadir 4-5 gotas de solución de SO4Cu al 1%. Agitar para que se mezcle bien.

Observar los resultados.

PRÁCTICA 3. RECONOCIMIENTO DE LÍPIDOS

MATERIALES

- Tubos de ensayo

- Gradilla

- Varillas de vidrio

- Mechero

- Vasos de precipitados

- Pipetas

- Solución de NaOH al 20%

- Eter, cloroformo o acetona

- Aceite de oliva



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3.1. SOLUBILIDAD

FUNDAMENTO

Los lípidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequeñísimas

gotas formando una emulsión de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo porreagrupación de las gotitas de grasa en una capa que, por su menor densidad, se sitúa sobre el agua.

Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgánicos, como el éter, cloroformo, acetona,

benceno, etc.

TÉCNICA

Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo.

Añadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de éter.

Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.

2.1. SAPONIFICACIÓN

FUNDAMENTO

Las grasas reaccionan en caliente con el hidróxido sódico o potásico descomponiéndose en los dos

elementos que las integran: glicerina y ácidos grasos. Éstos se combinan con los iones sodio o potasio

del hidróxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales sódicas o potásicas de los ácidos

grasos. En los seres vivos, la hidrólisis de los triglicéridos se realiza mediante la acción de enzimas

específicos (lipasas) que dan lugar a la formación de ácidos grasos y glicerina.

TÉCNICA

1. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.

2. Agitar enérgicamente y colocar el tubo al baño María de 20 a 30

minutos.

3. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una

inferior clara que contiene la solución de sosa sobrante junto con la

glicerina formada, otra intermedia semisólida que es el jabón

formado y una superior lipídica de aceite inalterado.



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RESULTADOS Y CONCLUSIONES.

PRÁCTICA 1: RECONOCIMIENTO DE GLÚCIDOS.

AZÚCARES REDUCTORES. PRUEBA DE FEHLING.

RESULTADOS:

GLUCOSA MALTOSA FRUCTOSA SACAROSA ALMIDÓN

TIPO GLÚCIDO

SABOR

SE DISUELVE EN

AGUA

FEHLING

REDUCTOR

CONCLUSIONES.

1. Busca la fórmula de los compuestos con los que has trabajado.

2. ¿Por qué se denomina reducción a este cambio? ¿Cuál es la sustancia reductora? ¿Cuál es la

sustancia que se oxida?

3. Investiga por qué alguno de los glúcidos no son reductores.

4. ¿Qué glúcido no se disuelve en agua? ¿Por qué?

5. ¿Por qué cuando tenemos mucho tiempo el pan en la boca acaba teniendo un sabor dulce?

b. Hidrólisis de la sacarosa

RESULTADOS.

SACAROSA SACAROSA + HCL

Fehling

CONCLUSIONES.

1. ¿Qué hace el HCl? Especifica la reacción.

2. ¿Por qué es positiva la reacción de Fehling tras añadir el clorhídrico en caliente?



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C. Identificación del almidón. Reacción con lugol.

RESULTADOS.

GLUCOSA MALTOSA SACAROSA ALMIDÓN

TIPO GLÚCIDO

COLORACIÓN

LUGOL

Conclusiones:1. ¿Cuál es el único glúcido que reacciona con el lugol? ¿Por qué?

2. ¿El almidón da positivo con la reacción de Fehling?

3. ¿La celulosa daría positiva la prueba del Lugol?

4. ¿Por qué el color azul desaparece al calentar y reaparece al enfriarse?

5. ¿El azul que aparece tras calentar y enfriar es igual de intenso? ¿Por qué?

PRÁCTICA 2: RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS.

a. Desnaturalización proteínas.

Tubo 1: calentar Tubo 2: ClH

Albúmina

1. Explica el proceso de desnaturalización en proteínas.

2. ¿En qué tubos se ha producido desnaturalización?

3. ¿Cuál de los dos agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?

B. Reacción de biuret

RESULTADOS OBTENIDOS:Control Tubo 2: albúmina

Aspecto

CUESTIONES

1. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?

2. ¿Qué coloración da la reacción del Biuret?

3. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?

4. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa?

¿Por qué?



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PRÁCTICA 3: RECONOCIMIENTO DE LÍPIDOS.

A. Solubilidad.

RESULTADOS.

DIBUJO RESULTADOS

Tubo 1: aceite + agua

Tubo 2: aceite+ acetona

CUESTIONES.

¿Cuál es la característica común a todos los lípidos?

¿Qué ocurre cuando agitas los tubos?

¿Qué ocurre al dejarlos reposar?

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