EXPLORANDO LA INTERACCION MOLECULAR DURANTE LA …
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EXPLORANDO LA INTERACCION MOLECULAR
DURANTE LA INFECCION TEMPRANA EN
LINEAS DE TRIGO EN EL PATOSISTEMA
TRIGO-Fusarium graminearum
Christian E. Dujak
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Determina la presencia o ausencia de la enfermedad en el tiempo (momento en el ciclo) y en espacio (lugar de la planta).
Fuente: Riveros, 2010
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Patógeno: Complejo Fusarium graminearumFase sexual: Gibberella zeae
Fuente: Leslie et al., 2006
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Hospedero
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“La base genética en el estudio de la Interacción Hospedero-Patógeno, es la relación del
huesped en carácter de resistencia o susceptibilidad y en patógenos la capacidad de
virulencia o avirulencia”.
Fuente: Riveros, 2010
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El ciclo de vida de F. graminearum (fase sexual, G. zeae), agente causal de la Fusariosis de la espiga en trigo.
Fuente: Frances Trail, 2009
Peritecium
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Patógenos
Tejido vegetal
Fuente: Agrios, 2005
Modelo Biológico en la Interacción
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Modelo Biológico en la Interacción temprana Trigo-Fusarium
Fuente: Walter et al., 2009
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Fuente: Walter et al., 2009
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Fuente: Walter et al., 2009
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Fuente: Walter et al., 2009
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Fuente: Jia et al., 2009
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Fuente: Chetouhi et al., 2015
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Fuente: Chetouhi et al., 2015
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Avance preliminar del Proyecto
Apoyo y Colaboración de
Modelo
Interacción
Genes
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Objetivo
Identificar y caracterizar los genes
asociados a la resistencia de la fusariosis de
la espiga en materiales de trigo.
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Materiales genéticos de trigo
Línea de prueba Referencial Resistencia
Referencial Resistencia
Susceptible
E V A L U A C I O N E S A L A S 0 H D I, 2 H D I, 6 H D I, 1 2 H D IH D I (Horas después de Inoculación)
• Inoculación forzada de F.graminearum posterior a los 16 días de emergencia, en el tallo las plántulas.
• Condiciones controladas, 26°C , 85-95% HR , oscuridad.
Fusarium graminearum
Patógeno
Metodología y Resultados
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A B C D E
Aspectos morfológicos en la interacción hospedero-patógeno.
(A) Fusarium graminearum en medio de cultivo PDA. (B) Conidias de
Fusarium graminearum. (C) 48HDI con F.graminearum en el material Cmpy.
(D) 114 HDI con F.graminearum en el material Cmpy. (E) Testigo Cmpy sin
inoculación.
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Colecta de Muestras 0 hdi, 2 hdi, 6 hdi, 12 hdi
N2 liq.
-196°CTrizol®Total 64
muestras -80°C
Extracción de ARN, método convencional
Plántula
Tejido
Célula
ARN Pureza: 1,9 -2,03Concentración:
~ 2 ug/ul
Electroforesis Agarosa 1%
28S
18S
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Análisis Bioinformático
• El primer gen en estudio, es el NBS-LRR (tipo de gen de resistencia), expresado
diferencialmente en el interactoma Trigo- F.graminearum .
• Se han diseñado cebadores directos, mediante la base de datos de secuencias
expresadas provenientes de la interacción en estudio.
Cebador
Fw 5’- TTGCTTGTGCCAGGTTGTTA -3’
Rv 5’- CCCAAAATTCGCATCTCAAT-3’Tm°: 60°C in silico
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Amplificación por ReverseTranscriptase - Polymerase ChainReaction (RT-PCR)
1kb 55,9°C 57°C 58,6°C 60,3°C
~319 pb300 pb
• Gradiente de Tm° del cebador con RNA pool
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Amplificación por RT-PCR del gen tipo NBS-LRR de Triticum aestivum sub. aestivum.
(A) Muestras a las 0HDI. (B) Muestras a las 2HDI. (C) Muestras a las 6HDI. (D) Muestras a las
12HDI. 1, 2 y 3: réplicas biológicas; T: Plantas sin inocular; 1kb: Marcador de peso molecular de
1 kb.
~319 pb
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Intensidad relativa de los productos de amplificación de RT-PCR. En los
materiales de trigo Cmpy y testigo, Sumai3 y testigo, Frontana y testigo, Caninde11 y
testigo. A las diferentes horas de evaluación OHDI, 2HDI, 6HDI y 12HDI.
L e y e n d a
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Discusión y Conclusiones
• En el modelo experimental de interacción Trigo-Fusarium graminearum,la infección es dada, pero no se observan diferencias entre los materiales,se justifica que es debido de la infección forzada.
• El gen de tipo NBS-LRR se encuentra transcripcionalmente activo, sinembargo existen diferencias de intensidad en la expresión en losdiferentes momentos de evaluación.
• Para validad el nivel de expresión entre los materiales y las diferenteshoras de evaluación es necesario la cuantificación de la expresiónrelativa y el gen referencial o constitutivo que determine el nivelcorrespondientemente.
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