DIVERSIDAD MICROBIANA EN UN MICROAMBIENTECOLUMNA DE WINOGRADSKY

INTEGRANTES

Escobedo Carmona Oscar Espino Baca Jessica Flores Corona Luis Ernesto Geyer de la Merced Sara

Ytalivy Olivares Espinosa Liliana Ruíz Rosario Mónica Silvestre Varela Diego Torres González Laura

Se obeservó: clorofíceas y

algunos paramecium

PRIMERA SEMANA

(14/09/10)

SEGUNDA SEMANA

(30/09/10)Mayor

desarrollo de protozoarios y

algas. Aparecen las

primeras bacterias.

Inicia decaimiento de protozoarios y

aumenta número de bacterias

TERCERA SEMANA

(14/10/10)

CUARTA SEMANA

(18/11/10)Bacterias

predominan en número, escasa

cantidad de protozoarios.

Presencia constante de

algas

LÍNEA DEL TIEMPO

NUTRICIÓN

CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA

PRIMERA SEMANACARACTERÍSTICAS

MACROSCÓPICAS

Se observó sedimentación uniforme sin bandas de color café

oscuro. Además de la presencia de una

pequeña banda verde en la superficie. La fase líquida se observó de color verde claro, con

olor característico y sin presencia de burbujas.

CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICASZONA MICROORGANISMOS OBSERVADOS

Superficie Algas clorofíceas.Media superior

Algas clorofíceas y microalga.

Media Inferior

Diatomeas y poca cantidad de algas clorofíceas y protozoarios paramecium.

Fondo Abundante cantidad de algas cloroficeas y poca cantidad de protozoarios paramecium.

En la columna de Winogradsky las algas y cianobacterias aparecen rapidamente en las capas superiores de la columna (Mádigan, 2008)

Fecha: 14/09/2010Muestra: Zona superficial de la columna de Winogradsky.Preparación: En frescoTinción: Sin tinciónDescripción: En la imagen se observan algas clorofíceas

Fecha: 14/09/2010Muestra: Zona media superficial de la columna de Winogradsky.Preparación: En frescoTinción: Sin tinciónDescripción: En la imagen se observa un protozoario paramecium.

INICIO

CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS

Se observó sedimentación de color

negro. Una banda superficial de color

café. Y la fase líquida de color verde claro

con presencia de burbujas, materia

orgánica flotando y aroma característico

muy fuerte.

SEGUNDA SEMANA

CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICASZONA MICROORGANISMOS OBSERVADOS

Superficie Diatomeas, clorofíceas, microalgas y un protozoario flagelado.

Media superior

Diatomeas y clorofíceas en poca cantidad.

Media Inferior

Diatomeas y protozoarios paramecium en mayor cantidad que en la primera semana.

Fondo Se observaron algas clorofíceas y protozoarios ciliados en gran cantidad, además de cocos y espirilos gram negativos sin agrupación.

Fecha: 30/09/2010Muestra: Zona media inferior de la columna de Winogradsky.Preparación: En frescoTinción: Sin tinciónDescripción: En la imagen se un alga diatomea en un círculo verde.

Fecha: 30/09/2010Muestra: Fondo de la columna de Winogradsky.Preparación: En frescoTinción: Sin tinciónDescripción: En la imagen se observan protozoarios ciliados.

Fecha: 30/09/2010Muestra: Fondo de la columna de WinogradskyPreparación: FijaTinción: De GramDescripción: En la imagen se observan Espirilos Gram negativos sin agrupación en círculos azules y cocos gram negativos sin agrupación en círculos verdes.

INICIO

TERCERA SEMANA

CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS

Se observó sedimentación de color

negro con surcos grandes. Una banda

gruesa de color café en la superficie. Y la fase líquida de color verde

oscuro con presencia de burbujas y aroma

característico no tan fuerte.

CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS

ZONA MICROORGANISMOS OBSERVADOSSuperficie Algas, microalgas y diatomeas. Media superior

Protozoarios ciliados y flagelados en poca cantidad. Algas clorofíceas en mayor cantidad. Bacilos cortos y largos Gram negativos

Media Inferior

Diatomeas y microalgas. Se observaron bacilos y cocos Gram negativos.

Fondo Se observaron algas clorofíceas, además de cocos Gram positivos y cocos y diplococos Gram negativos.

Fecha: 14/11/2010Muestra: Zona media superficial de la columna de Winogradsky.Preparación: En frescoTinción: Sin tinciónDescripción: En la imagen se observa un protozoario flagelado

Fecha: 14/10/2010Muestra: Zona media superficial de la columna de Winogradsky.Preparación: En frescoTinción: Sin tinciónDescripción: En la imagen se observa un protozoario ciliado.

Fecha: 14/10/2010Muestra: Fondo de la columna de Winogradsky.Preparación: FijaTinción: De GramDescripción: En la imagen se observan cocos Gram positivos, cocos Gram negativos y diplococos Gram negativos. INICIO

CUARTA SEMANACARACTERÍSTICAS

MACROSCÓPICAS

Se observó sedimentación de color negro (zona

anaerobia). Una banda de color café violáceo con una zona líquida de color café rojizo (zona microaerófila).

Además de una banda gruesa de color verde en la superficie (zona aerobia).

En la fase líquida hubo presencia de burbujas y

débil aroma característico.

ZONA ANAERÓBICA: Está situada en el fondo de la columna. En esta zona se desarrollan dos tipos de microorganismos: fermentadores de materia orgánica y anaerobios. Ambos descomponen la materiaorgánica y dan lugar a la formación de ácidos orgánicos, alcoholes y H2.

ZONA MICROAERÓFILA: Hay cierta cantidad de H2S. En una primera franja se localizan las bacterias verdes del azufre que procesan los sulfatos a azufre y aparecen en una franja verdosa. En zonas cercanas se forma una capa negra de bacterias que procesan el hierro pero esta está por debajo de la anterior. Un poco más arriba se desarrollan las bacterias púrpuras del azufre. Se caracteriza por su color rojo púrpura. Todas las bacterias de la zona microaerófila obtienen energia de reacciones luminosas

CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICASZONA MICROORGANISMOS OBSERVADOS

Superficie Protozoario paramecium y un cúmulo de microalgas.

Media superior

Se observó un cúmulo de algas clorofíceas además de bacilos y espiroquetas Gram negativos.

Media Inferior

Se observaron diatomeas, microalgas, un alga Scenedesmus y un protozoario ciliado. Además de tetradas de cocos Gram negativos, bacilos Gram negativos agrupados en cadena, cocos Gram negativos sin agrupación, bacilos Gram negativos sin agrupación y diplococos Gram negativos sin agrupación.

Fondo Se observaron algas clorofíceas, diatomeas, protozoarios paramecium además de cocos, espiroquetas y espirilos Gram negativos y positivos sin agrupación.

Fecha: 18/11/2010Muestra: Zona media inferior de la columna de Winogradsky.Preparación: En frescoTinción: Sin tinciónDescripción: En la imagen se observa un alga scenedesmus dentro de un círculo verde.

Fecha: 18/10/2010Muestra: Zona media superficial de la columna de Winogradsky.Preparación: En frescoTinción: Sin tinciónDescripción: En la imagen se observa un protozoario ciliado.

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NUTRICIÓNClasificación nutricional.

MEDIO FORMULACIÓN (g/L) ZONA DE LA COLUMNA

Superior Media superior

Media inferior

Fondo

Luz Oscuridad Luz Oscuridad Luz Oscuridad Luz Oscuridad

A 15.0 de agar ++ + ++ + + + ++ +

B 0.5 de MgSO47H 20, 0.5 de K2HPO 4, 15.0 de agar.

+ ++ + ++ + ++ + ++

C 0.5 de MgSO47H 2 0 , 0.5 de K2HPO 4, 1.0 de NH4Cl, 10.0 de glucosa, 15.0 de agar

+ + + + + + + +

D 0.5 de MgSO47H 2 0 , 0.5 de K2HPO 4, 10.0 de glucosa,15.0 de agar

+ + + + + + + +

E 0.5 de MgSO47H 2 0 , 0.5 de K2HPO 4, 10.0 de peptona, 15.0 de agar

+++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++

F 0.5 de MgSO47H 2 0 , 0.5 deK2HPO 4, 10.0 de glucosa, 0.2 extracto de levadura, 15.0 de agar.

+ - ++ - ++ - + -

Cuadro de desarrollo microbiano. (resiembra)

Medio de Cultivo Zona de la columna Morfología y Gram Clasificación Nutricional

ASuperficial Cocos, bacilos largos y cortos gramnegativos.

Sin agrupación.*hubo crecimiento debido a que se arrastraron

nutrientes de la columna, pero no se debió haber observado crecimiento

Media superior Bacilos largos y bacilos cortos, gramnegativos. Sin agrupación.

Media inferior Diplococos, bacilos cortos y espiroquetas gramnegativos.

Fondo Bacilos largos y cortos gramnegativos. Sin agrupación.

BSuperficial Cocos, bacilos largos y cortos gramnegativos.

Sin agrupaciónFotolitoautotrofos

yQuimiolitoautotrofos

Media superior Diplococos, Bacilos largos y cortos gramnegativos sin agrupación.

Media inferior Diplococos, bacilos cortos y espiroquetas gramnegativos.

Fondo Gram negativos y Gram positivos. Cocos, bacilos largos y cortos , sin agrupación

*No hubo crecimiento en los que se incubaron sin luz

CLASIFICACIÓN NUTRICIONAL DE LAS BACTERIAS PRESENTES EN LA COLUMNA DE WINODRADSKY

CSuperficial Bacilos cortos y cocobacilos gramnegativos

sin agrupación. Fotoheterotrofos

yQuimioheterotrofos

Media superior Bacilos cortos, cocobacilos y cocos grampositivos, además de bacilos cortos, cocobacilos y cocos gramnegativos.

Media inferior Cocos y bacilos cortos gramnegativos. Además se observaron algunos bacilos y cocos grampositivos sin agrupación.

Fondo Cocos agrupados en diplococo gramnegativos, además presencia de bacilos cortos y cocobacilos gramnegativos.

D Superficial Cocos gram negativos y positivos, algunos con agrupación en tétradas.

FotoheterotrofosY

Quimioheterotrofos

Media superior Bacilos cortos gramnegativos, algunos bacilos largos y cocobacilos gramnegativos.

Media inferior Solo se observaron cocos gram positivos.

Fondo Bacilos cortos gram negativos y escasos cocos y cocobacilos gram negativos.

E Superficial Bacilos cortos gram negativos y algunos cocos gram positivos.

QuimioorganoheterotrofosY

Fotoorganoheterotrofos

Media superior Cocos gram negativos

Media inferior Cocos gram positivos algunos como diplococos.

Fondo Bacilos cortos gram negativos.

F Superficial Bacilos cortos gramnegativos, cocos gramnegativos agrupados en diplococo y en menor proporción bacilos largos gramnegativos.

QuimioorganoheterotrofosY

Fotoorganoheterotrofos(auxotrofos)

Media superior Bacilos cortos, cocobacilos y cocos en menor proporción, todas gramnegativas.

Media inferior Bacilos cortos, cocobacilos y cocos, todas estas bacterias eran gramnegativos.

Fondo Bacilos cortos, cocobacilos y espirilos, todos ellos gramnegativos. Se alcanzaron a observar algunos cocos gramnegativos sin agrupación. INICIO

CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICACiclos biogeoquímicosRequerimientos de oxígeno

Tipo de microorganismo Superficie Fondo Observaciones

Bacterias G+ - - No se observó ninguna colonia.

Bacterias G- ++ +++ Se observaron bacterias Lac+ y Lac -.

Anaerobios + +++ Las colonias eran de color blanco y redondas.

Aerobios +++ ++

Proteolíticos - ++ Se observó un halo alrededor de las bacterias proteolíticas.

Amilolíticos ++ - Se observó en la superficie un color amarillo. En el fondo se observó el medio de color azul.

Mineralizadores de P + + Se observó poco crecimiento en ambos tubos

Solubilizadores de P +++ - En la superficie se observaron gran cantidad de colonias blancas pequeñas.

Fijadores de N vida libre +++ - Pequeñas colonias blancas.

Amonificantes ++ +++ Se observó precipitación y un color café al agregar el reactivo Nessler en ambos tubos.

Desnitrificantes ++ ++ Formación de burbuja de N2en ambos tubos.

Oxidantes del S +++ +++ En la superficie y en el fondo se observó un crecimiento en todo el tubo.

Reductores de SO4 +++ +++ En superficie se observó y precipitado color negro y en el fondo se observó un color anaranjado.

DIVERSIDAD METABÓLICA

+++= Desarrollo abundante, ++ = desarrollo medio, + = desarrollo escaso, y - = sin desarrollo

REQUERIMIENTOS DE OXÍGENO Se obtuvo que en el medio de cultivo (Agar

Brewer), incubado en una zona de anaerobiosis hubo mayor crecimiento en la muestra tomada del fondo, debido a que en esta zona hay muy poca cantidad de oxigeno por lo tanto los microorganismos presentes en estas zona usan el metabolismo energético llamado desasimilador que consiste en la reducción de nitrato, sulfato o CO2.

En el medio de cultivo incubado en un zona de aerobiosis se obtuvo mayor crecimiento en la muestra tomada de la superficie, debido a que los microorganismos que crecen en esta zona usan el O2 como aceptor de electrones para su metabolismo energético.

EMB Se observa crecimiento en ambas partes de la columna,

teniendo un mayor desarrollo en la parte del fondo. Se observa tanto en el fondo como en la superficie bacterias Lac + y Lac-. Por lo tanto como hubo crecimiento en este medio de cultivo podemos decir que existe bacterias G-.

Manitol En las dos partes de la columna (fondo y superficie) no

observamos ningún crecimiento, por lo que podemos decir que no existen bacterias G+.

Prueba de antagonismo, En medio BHI Tanto en el fondo como en la superficie de la columna

observamos que en la zona en donde sembramos E.coli existía un crecimiento de la estría recta, en la zona donde sembramos M. luteus y S. aureus no existió ningún crecimiento , en cambio en B. subtilis solo se observo una parte con crecimiento en la estría. Podemos interpretar que en las partes donde no existe ningún crecimiento existe antagonismo.

Medio leche descremada Microorganismos proteolíticos, (presencia de proteasas)

que hidrolizan las proteínas (caseína) en la leche. Se observó presencia de degradadores de caseína en

fondo pero no en superficie. En el medio se observa un halo alrededor de las

colonias que hidrolizan la caseína.

Medio Agar almidón Microorganismos amilolíticos, (presencia de amilasas)

que hidrolizan el almidón. Se observó la presencia de degradadores de almidón

en superficie pero no en fondo. Al agregar yodo-yoduro (lugol) se produce un color azul

a reaccionar con el almidón, por lo tanto si se encontrara microorganismos amilolíticos el medio se observara con zonas blancas alrededor de las colonias.

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