Caracterización y valor pronóstico de la expresión de c-Myb y B-Myb en Leucemia Mieloblástica...
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Caracterización y valor pronóstico de la expresión de c-Myb y B-Myb en
Leucemia Mieloblástica Aguda
Laboratorio de Biología Molecular
Hospital La Fe
Pertenecen a una familia de factores de trascripción
A-Myb Gónadas
B-Myb Ubicuo
c-Myb C.Hematoyéticas
B-Myb y c-Myb
B-Myb Progenitor Ancestral
RegulaciónTrans-activaciónUnión-DNA
B-Myb progenitor ancestral
c-Myb y A-Myb se originaron por duplicación durante la evolución
B-Myb y c-Myb
Cromosoma 6
c-Myb 6q23B-Myb 20q13
Cromosoma 20
Ratones homocigotos
A-Myb inactivado
ViablesViables
C-Myb inactivado
Muerte etapa tardía in uteroFallo hematopoyesis
(anemia severa)
Muerte etapa tardía in uteroFallo hematopoyesis
(anemia severa)
B-Myb inactivado
Muerte etapa temprana in
utero
Muerte etapa temprana in
utero
Myb en Ratones
B-Myb y c-Myb
“Correcta expresión”
Necesaria para función celular
Gen SupresorOncogen
B-Myb
Diferenciaciónterminal
Proliferación
c-Myb
Desregulación¿Desarrollo tumoral?
Objetivos
1.-Cuantificación expresión de B-Myb y c-Myb
2.-Asociación expresión de B-Myb y c-Myb -
factores clínico-biológicos
3.- Valor pronóstico de B-Myb y c-Myb
En Pacientes con LMA:
197 Leucemias Mieloblásticas Agudas
Pacientes I
Sexo (n,%)Hombre 114 (58%)Mujer 83 (42%)
Edad (mediana, rango) 57(17-91)
Leucocitos(mediana, rango) 8*103/L (1-342)
Blastos(mediana, rango) 40% (1-100)
197 Leucemias Mieloblásticas Agudas
Pacientes II
Citogenética Favorable 30Intermedio 92Desfavorable 27No disponible 48
FAB (n)M0 15M1 32M2 37M3 24M4 32M5 17M6 8M7 3Sin clasificar 29
Cuantificación Relativa de la expresión de B-Myb y c- Myb
Calibrador: Niveles CD34+
Muestras: Pacientes LMA
Cuantificación Relativa (δδCt= δCtmuestra- δCtcalibrador )
Métodos
B-Myb
Gus
TaqMan Expression Assay para B-Myb y c-Myb
mRNA obtenido de MO cDNA
Resultados
Expresión respecto CD34+
c-Myb 0,26 (0,01-4,27)
B-Myb 2,46 (0,08-39,79)
P=0,001
LMA DXCD34
c-M
yb (
2e
xp d
elta
Ct)
10
5
0
B-Mybc- Myb
LMA DXCD34
B-M
yb
(2
exp
de
lta
Ct)
2
1
1
0
FAB
m7m6m5m4m3m2m1m0
c-M
yb (
2 e
xp d
elta
de
lta C
t)
2
1
1
0
Resultados
c-Myb -Factores clinico-biológicosp
edad (años) >60<60
Sexo ns
Leucocitos>50000/uL<50000/uL
FAB <0,001
Riesgo Citogenético
FavorableIntermedioDesfavorable
Expresión c-Myb
ns
ns
nsNiveles de c-Myb reducidos :
mieloproliferación con aumento de trombopoyesis
The Embo journal 2009
pedad (años)
>60<60
Sexo ns
Leucocitos>50000/uL<50000/uL
FAB 0,05
Riesgo Citogenético
FavorableIntermedioDesfavorable 0,048
Expresión B-Myb
ns
ns
desfavorableintermediofavorable
B-M
yb
(2
exp
de
lta
de
lta
Ct)
12
8
4
0
FAB
m7m6m5m4m3m2m1m0
B-M
yb
(2
exp
de
lta
de
lta
Ct)
20
15
10
5
0
Resultados
B-Myb- Factores clinico-biológicos
Niveles de B-Myb elevados:
•Asociación de con otros tumores: Neuroblastoma, mama, próstata•Malignidad
Cancer Research 1999, Eur J cancer 2005
Resultados
Valor Pronóstico de las LMA no M3
MuerteResistenciaRC
%
100
80
60
40
20
0
2117
58
Expresión de c-Myb p=0,855
Expresión de B-Myb p=0,109
Resultados
Valor Pronóstico de las LMA no M3
DÍAS
2000150010005000
SL
E
1,0
,9
,8
,7
,6
,5
,4
,3
,2
,1
> Mediana (n=36)
≤ Mediana (n=44)
B-Myb
DÍAS
2000150010005000
SL
E
1,0
,9
,8
,7
,6
,5
,4
,3
> Mediana (n=41)
≤ Mediana (n=39)
c-Myb
Resultados
Valor Pronóstico de las LMA no M3
ANÁLISIS MULTIVARIANTE p HR IC 95%
Expresión B-Myb 0,039 2,33 (1,04-5,22)
Edad (≤ 60 años) 0,02 3,47 (1,57-7,77)
ANÁLISIS MULTIVARIANTE p HR IC 95%
Expresión B-Myb 0,043 3,24 (1,04-10,13)
MECANISMOS MODIFICADORES DE LA ACTIVIDAD DE B-Myb
1. miRNA
miRNA
miRNA
miRNA
n=80Expresión
Western
16 15b
miRNAs-cMYB
0,76
1,08
0,40
0,60
0,80
1,00
1,20
1,40
0 1 2 3
30a 30b 30c 30d 30e 29a 29b 29c
miRNAs-bMYB
0,11
0,280,14
0,65
0,04
0,34
1,32
0,37
-0,200,000,200,400,600,801,001,201,401,60
0 2 4 6 8 10
MIMICS & INHIBITORS
2. POLIMORFISMO S427G
• PCR Tiempo Real con sondas hibridación
POLIMORFISMO S427G
•Puesta a punto con sondas hibridación
•Grupo control n=46 analizados
Wild type
n=35
Homocigotosn=2
Heterocigotosn=2
HRM región codificante
3. VARIACIONES GENÉTICAS
•14 exones
•Puesta a punto exones: 2, 3, 4, 5, 6, 9,12,14
Mutado
n=35
4. ALTERACIONES GENÓMICAS
•2 pacientes con trisomia en el cromosoma 6 (+6)
EXP: 0.04 y 0.24
c-Myb:
FISH
B-Myb:
n=7 •1 paciente con trisomia en el cromosoma 20 (+20) •3 pacientes con monosomía en el 20 (-20)
EXP: 6.45 EXP: 0.96, 8.31 y 2.03
ALTERACIONES GENÓMICAS
b-MYB
RP11-69I10RP11-354E16
RP11-464F7RP11-822E15*
FISHDeleciones
Traslocaciones