Aislam,Iento y Recuento de Anaerobios (1)
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aislamiento y recuento de bacterias Anaerobias
Anaerobios Características generales
Son incapaces de desarrollar en contacto con el oxígeno
Son exigentes para crecer, necesitan vitaminas y cofactores.
Forman parte de la flora normal del hombre y de los animales.
Producen infecciones.
Incluyen a varios géneros de cocos y bacilos, grampositivos y
gramnegativos.
Anaerobios estrictos: requieren un 0% de oxígeno para crecer
Anaerobios aerotolerantes: sobreviven hasta con 0,5% de oxígeno
• Efecto tóxico directo
• Formación de anión peróxido y superóxido
• Oxidación de enzimas esenciales que contengan grupos SH-
• Inhibición del metabolismo de flavoproteínas y NADH oxidasa
• Imposibilidad para alcanzar potenciales redox bajos
• Déficit o ausencia de catalasa y/o superóxido dismutasa (presente en
aerotolerantes)
Bacterias Anaerobias Efecto tóxico del oxígeno
Género Veillonella
V. parvula
Cocos Gramnegativos Anaerobios
Género Peptostreptococcus
P. anaerobiusP. magnusP. micros
P. asaccharolyticus
Cocos Grampositivos Anaerobios
Género ActinomycesA. israeliiA. odontolyticusA. viscosus
Género EubacteriumE. lentumE. aerofaciens
Género LactobacillusL. casseiL. bulgaricusL. yoghurtii
Bacilos Grampositivos Anaerobios
Género BacteroidesB. fragilisB. thetaiotaomicron
Género PorphyromonasP. gingivalisP. endodontalis
Género PrevotellaP. melaninogenicaP. bivia
Género FusobacteriumF. nucleatumF. necrophorum
Bacilos Gramnegativos Anaerobios
Obtención de atmósfera anaerobiaObtención de atmósfera anaerobia
2H2 + O2 2H2O
CO2
H2
1.- Técnica en jarra anaerobiaCon catalizador: a-Evacuación-reemplazo
b-Método del sobre generador de gas descartable Sin catalizador: Fijación del O2 por limaduras de Fe 2.- Técnica de la cámara anaerobia de guante 3.- Tubos con película de agar con siembra por estrías en medios PRAS.
Sistemas anaerobios para el cultivo de bacterias anaerobias
Técnica en jarra anaerobia
La jarra GasPak usa un catalizador en frío compuesto de bolitas de alúmina cubiertas de paladio, que no requieren calentamiento.
•El catalizador en frío es más conveniente para usar y no tiene riesgo de explosión.•El catalizador en frío de paladio puede ser inactivado en la jarra por la producción de SH2 u otros productos volátiles de las bacterias.•Se recomienda reemplazarlo por uno nuevo o uno reactivado cada vez que se utiliza la jarra.
1.- En la técnica de anaerobiosis por evacuación-reemplazo se extrae el aire de la jarra hasta 51-61 mm Hg, luego se lava con corriente de N2. Este procedimiento se repite dos veces. Por último se llena la jarra con una mezcla anaeróbica de N2:85%, CO2:5% e H2:10%.
2.- En la técnica del sobre generador de gases se emplean sobres conteniendo, por ejemplo, ácido cítrico o tartárico, bicarbonato de sodio y borohidruro de sodio.En el momento de utilizarse se corta el extremo del sobre y se hidrata con un volumen de agua, luego se cierra inmediatamente la jarra.
Cámara anaerobia de guante
Una cámara anaerobia de guante es un sistema anaerobio autoabastecido que permite procesar muestras y realizar la mayor parte de las técnicas bacteriológicas para aislamiento e identificación de bacterias anaerobias sin exposición al aire.
Pueden construirse de diferentes materiales, incluyendo acero, acrílico o fibra de vidrio.
Medios PRAS en tubos arrollados
Esta técnica utiliza medios PRAS: medios previamente reducidos y anaeróbicamente esterilizados.
-El medio se envasa en tubos con tapón de caucho butílico bajo gas libre de O2 y se esterilizan y mantienen en ambiente anaeróbico
-Se enfrían en una máquina giratoria lo que resulta en una capa fina de agar en la superficie interna de los tubos
-El sistema requiere el agregado de un agente reductor, como L-cisteína en la fórmula del medio de cultivo.
- Permiten la inspección de las colonias en cualquier momento sin la exposición al O2.
Identificación
Anaerobios Esporulados
Características generales
Son incapaces de desarrollar en contacto con el oxígeno
Resisten hasta 120ºC, la desecación y cambios de pH
Forman parte de la flora normal del hombre y de los animales.
Se los encuentra ampliamente distribuidos en el agua, el suelo
y las plantas
Producen infecciones oportunistas.
Su acción se manifiesta por la producción de potentes
exotoxinas.
Incluyen al género Clostridium con varias especies.
Anaerobios Esporulados
Clasificación
Neurotóxicos
Clostridium tetani
Clostridium botulinum
Histotóxicos
Clostridium perfringens
Clostridium septicum
Enterotóxicos
Clostridium difficile
Clostridium perfringens
Clostridium tetani
Clostridium tetani
Se encuentran en el suelo e intestino del hombre y animales.
Las esporas ingresan a través de heridas.
Al alcanzarse el potencial redox adecuado la espora germina.
La forma vegetativa produce una exotoxina (tetanoespasmina).
La toxina difunde por vía neural hasta las neuronas motoras.
En SNC bloquea la liberación de glicina y GABA. A nivel periférico
inhibe la liberación de acetilcolinesterasa dando como resultado la
estimulación incontrolada de los músculos esqueléticos.
El paciente muere por parálisis de los músculos respiratorios.
Clostridium tetani
RESULTADO
S
Características Colonia 1
Colonia 2 Clostridium Sp.
Medio de cultivo
TSN TSN Gelosa sangre
Forma Amiboide
Circular Irregular
Tamaño 5 mm 2 mm 4 mm Color Beige Amarillo BeigeBorde lobulado Entera Filsamentosa
Superficie Lisa Lisa Rugosa Elevación Convexa Convexa Plana
Luz trasmitida Opaca Opaca OpacaLuz reflejada Mate Mate Mate Aspecto Húmeda Húmeda SecoConsistencia Butirosa Butirosa DuraAcción sobre el medio
ninguna Ninguna Ninguna
Característica Colonia 1 Colonia 2 Clostridium Sp.
Forma Ovoide Coco BacilosAgrupación Aislado Racimo AisladosTinción de Gram
Negativo Positiva Positivo
Presencia de endoesporas
No
No
Si
Dilución Número de tubos positivos
NMP/ml o g
10^-1 1 3.6
10^-2 0
10^-3 0