Post on 02-Apr-2015
Clivaje del CD44 y promoción de la migración en células tumorales inducido
por Acido Hialurónico
Objetivos
Estudiar el clivaje del CD44 inducido por el ácido hialurónico y su incidencia en la migración de células tumorales.
Estudiar la relación de este clivaje y migración con el peso molecular de ácido hialurónico.
Acido hialurónico (HA):
Es un glicosaminoglicano formado por dímeros de ácido glucurónico y N-acetilglucosamina. No se encuentra sulfatado ni unido a proteínas. Es un constituyente de la matriz extracelular.
Interacciona con el CD44. Favorece la migración y adhesión celular y esto está mas favorecido por los fragmentos de HA
La fragmentación de HA puede darse in vivo por:
medios enzimáticos degradación de HA por radicales libres síntesis de novo de HA de bajo peso molecular
La fragmentación de HA in vitro se hace por:
HAasa de testículo fragmentos de HA HAasa de Streptococcus Disgalactiae monómeros de HA
CD44:
Es una molécula de adhesión que actúa como receptor de membrana y se encuentra muy distribuida en el organismo. Presenta :
un dominio extracelular: unión a HA un dominio intracelular: unión a citoesqueleto
Está implicada en muchos procesos biológicos, como: interacción célula-célula interacción célula-matriz extracelular trasporte y endocitosis de HA
El clivaje de CD44 da in vivo por: metaloproteasas serinproteasas
El clivaje de CD44 da in vitro por: ésteres de forbol (PMA)
Interacción entre CD44 y HA relacionada con cáncer:
Se conocen casos de cáncer con:
alta producción de HA presencia de HA de bajo peso molecular alta actividad de HAasa
Resultados
• Fragmentos de HA inducen el clivado de CD44 en líneas celulares MIA PaCa-2 de carcinoma pancreático humano.
La línea celular MIA PaCa-2 expresa CD44.
. Con Anti CD44-FL
Sin Anti CD44-FL
Análisis por Citometría de Flujo
Intensidad de Fluorescencia
Núm
ero
de c
élul
as
Las células se unen a las moléculas de HA
MIA PaCa-2 + FL-HA
MIA PaCa-2
Las células requieren CD44 para interaccionar con las moléculas de HA
MIA PaCa-2+ Anti-CD44 + FL-HA
MIA PaCa-2+ Ig G Ratón + FL-HA
Intensidad de Fluorescencia
Núm
ero
de c
élul
as
Intensidad de Fluorescencia
Núm
ero
de c
élul
as
Análisis por inmunoblotting
Células MG 132 +/- PMA SDS
Anti CD44
Anti--tubulina
En el crecimiento tumoral, las células presentan una alta actividad de clivaje del CD44.
Análisis por ELISA
Se tomaron los sobrenadantes de los tratamientos con o sin PMA.
Las células tratadas con fragmentos de HA (6-14 mers) inducen el clivaje del CD44 de una manera dependiente de la concentración de HA.
HA (200 kDa) frHA (6-14 mers)
HAasa de testículo de oveja
HPLC
frHA inducen el clivaje del CD44.
El mismo es dependiente de la concentración de frHA.
El clivaje es dependiente del PM del HA.