Webinar UHPLC Agilent 1290 InfinityEl sistema UHPLC con mayor rango de potencia para reducir sus tiempos de análisis sin sacrificar resolución, o aumentar resolución manteniendo tiempos.
Isidre MasanaAgilent TechnologiesEspecialista de Producto
7 Abril del 2010 11:00 a.m.
1290 Infinity UHPLCpág.: 2
Agenda1. ¿Porqué es Importante la Velocidad en UHPLC?.2. Posibilidades del 1290 Infinity UHPLC
• Ejemplos de rendimiento del nuevo sistema3. Algunas Innovaciones
Tecnológicas del 1290 Infinity UHPLC
4. Agilent 1290 InfinityUHPLC/MS
- En unos días recibirán un e-mail para poder descargarse la presentación.
The Today‘s Most PowerfulUHPLC:
Agilent 1290 Infinity
to get the best chromatography.
1290 Infinity UHPLCpág.: 3
¿Porqué es Importante la Velocidad en UHPLC?El poder de separación de elevadas velocidades lineales
Cromatogramas con escala de tiempo alineada a primer y último picoI.D. & I.M - Waldbronn 5/2009
Columna: ZORBAX RRHD SB-C18 2.1 x 100mm 1.8 µmGradiente: ACN/H2O 30/70 a 100/0 a 40ºC Cromatogr. A: 0.5mL/min en 3.0min // B: 0.833mL/min en 1.8minInyección: 1µL (Uracilo, Fenol, Metil/Etil/Propil/Butil/Heptil-parabens).
P máx. grad. A= 590bars. B= 905 bars
A 0.5mL/m gr.. 3.0min
K‘ = (87 x F x Tg) / ( % x V0 x S)
FxTg = 0.5x3 = 0.833x1.8 = 1.5
B 0.833mL/m gr. 1.8min
3minSi el producto de Flujo x Tgrad se mantiene
constante el poder de separación no variará(utlizando la misma columna y sin variar los %
solvente orgánico)
1.8min
↑Flujo: Reduce tiempo análisis y mejora capacidad de separación en gradientes
A 0.5mL/m gr.. 3.0min
B 0.833mL/m gr. 1.8min
Columnas RRHD permiten subir el flujo para:
- Reducir tiempos (manteniendo Rs)
- Aumentar resolución (sin sacrificar tiempo)
1290 Infinity UHPLCpág.: 4
• No perder eficacia al aumentar el flujo.
¿Qué se Requiere para Trabajar a Velocidades Lineales Elevadas?
+ EF
ICAC
IA
-
S.T.M.: Sub Two MicronsUHPLC
HEPT = A+ B/u + C u
4.6mm d.i.
UHPLC permite velocidades elevadas sin pérdida de información
• Poder trabajar a flujos y presiones elevadas.
∆P = f (η .u .L / dp2)
pág.: 51290 Infinity UHPLC
1290 Infinity
1290 Infinity UPHLC: Compatible con cualquier HPLC y UHPLC del mercado
bar
ml/min
Standard LC
Vendor A1.7µm columns
Agilent RRLC1.8µm columns
Vendor B1.9µm columns
Vendor C
Vendor D
1290 Infinity le permitirá la máxima reducción de sus tiemposde análisis y/o aumento de la resolución de sus aplicaciones
52
1200
pág.: 61290 Infinity UHPLC
1290 Infinity – ¿Qué aporta al mundo del UHPLC?
Page 6
1290 Infinity NO solo es un equipo capaz de proporcionar unos rangos mayores de Flujo y de Presión…
1290 Infinity es un equipo INNOVADOR
1290 Infinity incorpora grandes avances en todos sus módulos, que una vez más, marca la diferencia tecnológica.
pág.: 71290 Infinity UHPLC
Precision Peak 1 Peak 2 Peak 3 Peak 3 Peak 5 Peak 6 Peak 7 Peak 8 Peak 9
% RSD RT 0.016 0.0077 0.0052 0.0058 0.0058 0.0054 0.0059 0.0057 0.0080
% RSD Area0.5 µl 0.40 0.39 0.43 0.47 0.40 0.46 0.44 0.52 0.56
Page 7
RT RSD = 0.005% !!!
Phenone Standard, 10 Consecutive Runs2.1 x 50mm RRHD SB C18, 1.8µm
1.2ml/min, 0.5ul, 40C80Hz, 245/10nm, REF 360/80nm
5 - 95% ACN in 0.5min
1290 Infinity UHPLC: Precisión del Tiempode Retención en modalidad UFLC
pág.: 81290 Infinity UHPLC
Agilent 1290 InfinityEl más Versátil UHPLC:• Cualquier tipo de columnas:
UHPLC, LC, Solid Core, Monolitics,…• Columnas de 1 a 8 mm d.i..• Longitudes hasta 25cm x1.8µm.• UHPLC & UFLC con CH3OH.• ….• ..•.
Infinitas Posibilidades !!
pág.: 91290 Infinity UHPLC
Agilent 1290 Infinity UHPLCPoder de separación por unidad de tiempo.Ejemplo Repetibilidad en condiciones extremas
Columna: ZORBAX RRHD SB-C18 2.1 x 50mm 1.8 µmGradiente: ACN/H2O 30/70 a 100/0 en 30 segundos
2.4mL/min a 80ºC P.máx. Grad.= 1060 barsInyección: 1µL (Uracilo, Fenol, Metil/Etil/Propil/Butil/Heptil-parabens)
min0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4
mAU
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Tiempos RSD% : 0.01 – 0.03%
Áreas RSD% : 0.03 - 0.4%(6 inyecciones de 1µL)
I.D. & I.M - Waldbronn 5/2009
DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (1290 INFINITY\DAY3_B___ 2009-05-28 16-23-46\002-0901.D)DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (1290 INFINITY\DAY3_B___ 2009-05-28 16-23-46\002-0902.D)DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (1290 INFINITY\DAY3_B___ 2009-05-28 16-23-46\002-0903.D)DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (1290 INFINITY\DAY3_B___ 2009-05-28 16-23-46\002-0904.D)DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (1290 INFINITY\DAY3_B___ 2009-05-28 16-23-46\002-0905.D)DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (1290 INFINITY\DAY3_B___ 2009-05-28 16-23-46\002-0906.D)
Pk Wd = 0.004-0.005min
1.5 seg.
0.4min
Condiciones Extremas:• Muy elevada velocidad
(eq. 12mL/min en col. 4.6mm d.i.)
• Elevada presión: 1060bars
• Elevada temperatura: 80ºC
• Pequeño vol. inyec.: 1µL
• Gradiente muy rápido: 30s.
• Picos solapados
• ….
*RSD en tiempos para picos K’>0
pág.: 101290 Infinity UHPLC
Muestra de tranquilizantesColumna: Porosa superficial
Poroshell-120 50 x 2.1mm, 2.7umFlujo 3.5ml/min, ~ 700 bar
Gradiente 2-92% ACN en 0.4minT= 80 °C
0.095sec PW
0.140secPW
Agilent 1290 Infinity UHPLC: Poder de separación con todo tipo y marcas de columnas
Columnas Superficialmente Porosas:permiten muy elevadas velocidades lineales
con elevada resolución y menor presión
0.5 s
NúcleoSólido1.7um
} 0.5µm
2.7µm
pág.: 111290 Infinity UHPLC
Agilent 1290 Infinity UHPLCPoder de separación con todo tipo de diámetros y flujos.Ejemplo Gradiente Agua/Metanol
Columna: ZORBAX RRHH (600bars) SB-C18 4.6 x 50mm 1.8 µmGradiente: MeOH/H2O 30/70 a 100/0 en 1.71min
3.5mL/min a 80ºC Presión. máx grad.: 590barsInyección: 5µL (Uracilo, Fenol, Metil/Etil/Propil/Butil/Heptil-parabens)
I.D. & I.M - Waldbronn 5/2009
min0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4
mAU
0
20
40
60
80
100
120
140
T0
1
2
3
4
5
6DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (002-0501.D)DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (002-0502.D)DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (002-0503.D)DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (002-0601.D)DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (002-0602.D)DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (002-0603.D)
min0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4
mAU
0
100
200
300
400
500
DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (002-0501.D)
T0
1
2 3 4 5
6
PMP1, PMP1B, Pressure DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (002-0502.D) PMP1, PMP1B, Pressure DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (002-0503.D) PMP1, PMP1B, Pressure DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (002-0601.D) PMP1, PMP1B, Pressure DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (002-0602.D) PMP1, PMP1B, Pressure DAD1 A, Sig=254,10 Ref=360,40 (002-0603.D) PMP1, PMP1B, PressureTiempos RSD% : 0.01 – 0.05%
Áreas RSD% : 0.10 - 0.34%(6 inyecciones de 5µL)
6 perfiles presión
1ª iny. serie
1.4min
U.F.L.C. con columnas de
d.i. 4.6mm
pág.: 121290 Infinity UHPLC
Agilent 1290 Infinity UHPLC: RangoPotencia con Columnas TP 2.1mm d.i.x 1.8um
50 x 2.1 mm100 x 2.1 mm150 x 2.1 mm250 x 2.1 mm
STM = Sub-2um SP = Superficially Porous
TP = Totally Porous
H2O/ACN, 40 °C
bar
ml/min
0.45 mL/min 40ºC
50 x2.1mm x 1.8µm 40ºC
ZORBAX RRHT SB-C182.1 x 50mm x 1.8µmH2O/ACN2.4ml/minT=95 °C560bar RRLC
50 x2.1mm x 1.8µm 95ºC
1290 infinity permite usar columnas 250mm x 1.8µm
250mm40ºC
10 -50
100x2.1mm 40ºC
pág.: 131290 Infinity UHPLC
Algunas InnovacionesTecnológicas delAgilent 1290 InfinityUHPLC
1290 Infinityincorpora
importantes innovaciones que marcan la
diferencia tecnológica
pág.: 141290 Infinity UHPLC
1290 Infinity Bomba Binaria: nuevo diseño La siguiente generación en Tecnología de Bombas UHPLC
Mezclador“Jet Weaver“
µ-Desgasificador
Válvula dePurga
automática
CanalBCanal
A
Válvula de selección de 4 disolventes
Gradientes binarios
Pistones de Carburo de
Silicio
Bombas de alta resolución
Alta velocidad y resolución1200 bar @ 2.0 mL/min1000bar @ 3.5ml/min800 bar @ 5.0 mL/minVolumen muerto: 10 µl / 45 µl
Amortiguador electrónico de pulsosProcesador de doble núcleo dedicado al control de pulsosMotores de 300 picolitrospor paso (0.0003µL)
Largos intervalos de mantenimientoCorrección Automática Fugas > 150 Litros de disolvente
AutomatismoPurga automática
4 Motores de altaprecisión: independientespara cada pistón
Intercambiadorde calor
multicapa
pág.: 151290 Infinity UHPLC
1290 Infinity: Atenuación Activa¿Porqué 4 motores independientes? ¿Como funciona?
Atenuación activa• El menor “ripple” de
bomba con 10 µl de volumen de retardo(45 µl w. Jet Weaver)para alta sensibilidad en detección (UV/IR/…).
• La mejor precisión y reproducibilidad de tiempos de retención.
• Compensación de pequeñas fugas para optima repetibilidad y mínimos tiempos de parada.
FirmwareBombas
Inteligentes
µ-Procesador dedicado para el control del movimiento de los pistones en tiempo real.Motores independientes de alta resolución para cada pistón(300 picoL/paso, mejora x50)
Caracterización total de las propiedades del disolvente
Sintonizado (optimización en tiempo real basado en parámetros estáticos y dinámicos)
HardwareControl muy preciso de sus movimientos
+
pág.: 161290 Infinity UHPLC
1200 “versus” 1290 Infinity Binary Pumps- Los más bajos volumen muerto y ruido de mezcla
1200 SeriesChannel A
Passive Damper0 - 300 µl
Passive Mixer400 µl
1200 SeriesChannel B
1290 InifinityChanel A
1290 InifinityChanel B
Very Low Noise~ 800 µl
+ =Active Damping
10µlJet Weaver Mixer
35µl
Lowest Noise• min. 50% lowerDelay Volume• 10µl / 45µl• 80x / 20x lower
1290 Infinity
pág.: 171290 Infinity UHPLC
1290 Infinity UHPLC Binary PumpRobustez y alta capacidad de disipación de calor
Nuevo material del pistón: SSiC* (Carburo de silicio sintético). Proporciona Mejor Conductividad térmica y menor fricción para menor desgaste.
Permite una optima disipación de calor• Mayor presión x flujo (1200bar at 2 ml/min)• Alarga el tiempo de vida de los sellos/ intervalos de
mantenimiento (>150L)• Un solo sello para fase normal y reversa
Capilares Multi-Capa para unóptimo intercambio de calor entre los cabezales de las bombas.
SSiC*: Material cerámico de alta dureza formado por Carburo de Silicio sintético.
1290 Infinity UHPLCpág.: 18
Agilent “Jet Weaver”- Una Nueva Tecnología en mezcladores
“Jet Weaver”
35 µl
Sin “Jet Weaver”
Competidor A50 µl mixer
1 ml/min2-35 % ACN/H2O (0.1 % TFA)
Prestaciones con TFA
Tecnología:-Tecnología multicapa – Placas de difusión de acero inoxidable con estructuras grabadas (Microfluidica)
La mejor eficiencia de mezcla, incluso a flujos muy bajos, con el menor
volumen de retardo (35 µl) para muy bajo ruido UV
1290 Infinity UHPLCpág.: 19
1290 Infinity UHPLC Diode Array Detector- La necesidad de una nueva tecnología
10 mm camino óptico13 µL volumen
4.6 mm id column
+ =
Columna corta d.i. 2.1 mm
?Dispersión pico• Pérdida de resolución• Menor señal (S/N)
¿Cómo lograr celdas de menor volumen? Corto camino óptico (3 mm, 2 µL)
Alta transmisión de luz => bajo ruido Baja S/N Baja transm. de luz => elevado ruido Low S/N
Largo camino óptico (10 mm, 0.5 µL)
Guía de ondas Optofluídica• Largo camino óptico• Pequeño d.i./ volumen de celda• Alta transmisión de luz La mayor S/N
Solución:
pág.: 201290 Infinity UHPLC
Celda Diode Array “Max-Light Cartridge“- Guía de ondas Optofluídica
Beneficios:La más alta sensibilidad (S/N) con pequeños volúmenes de celda (mínima dispersión). Fácil selección de celdas: una para todas las aplicaciones principales.
Más fiable y robusta integración automática de picos, debido a la “quasi”NO influencia de cambios de IR y de temperatura del disolvente. Diseño en cartucho para un muy fácil intercambio y manejo de la celda.Sílice fundida libre de recubrimiento (sin efectos sobre línea de base) y sin mantenimiento.
La Solución: Fibra no recubierta (sílice fundida)
V
VmDLFr
⋅⋅⋅⋅
=24
42 πσ
~100% eficiencia transmisión de luz debido a principio de reflexión interna total (TIR).2 Versiones: 60 mm x Vol. σ : 4 µL 10 mm x σ Vol. σ : 1 µL
1290 Infinity UHPLCpág.: 21
1290 Infinity Diode-Array Detector Mejora Sensibilidad “versus” Detectores 1200-VWD/DAD- Comparación celdas “Max-Light High Sensitivity vs 1200-VWD“
1200-VWD (10 mm x σ Vol.: 14 µL)S/N: 253
Muestra: Antraceno, 835 pg/µLCol.:: 4.6x150mm ZORBAX SB C18, 5 µm
Fase móvil: Agua/Acetonitrilo = 20/80Flujo: 1.5ml/min
Detección 251nm, PW >0.1min,Volumen inyección : 5µl
Temp. columna: 40°C
Celda “Max-Light High Sensitivity“ (60 mm x σ Vol.: 4 µL) S/N: 2944
Mayor Sensibilidad: hasta x10 vecesSin aumento de la dispersión del pico
Technical Note: 5990-5326EN
mDLFr
⋅⋅⋅⋅
=24
42 πσ V2
V
1290 Infinity UHPLCpág.: 22
Descanso – Sesión de Preguntas Número 1
• Para preguntar en directo,Marque *1 en su teléfonoo use la “Chat Box”
1
Cierra el panel del chat
Reduce Tamaño Pantalla Presentación y Muestra
Paneles para Preguntas vía “Chat”
Muestra Panel para Preguntas
vía “Chat”
pág.: 231290 Infinity UHPLC
1290 Infinity AutosamplerDiseño ”Flow-Through” con Loop Variable
Este diseño proporciona una excelente repetibilidad con todo tipo de volúmenes (incluso <1µL), y sin necesidad de cambiar el “loop”.
Posición durante Análisis
Presión típica• <1.5% desde 0.5-1µL• <0.7% @ 1-2µL• <0.25% @ 2-20 µl (40 ul)
Excelente repetibilidad con muy pequeños volúmenes
Bomba
Columna
pág.: 241290 Infinity UHPLC
1290 Infinity Autosampler”Bypass” para toma de muestra
Este diseño* permite derivatización pre-columna, adición ISTD’s,….
Posición durante toma de Muestra
*Diseño equivalente disponible en modelos: 1090, 1050, 1100 y 1200
Dispositivo Medida
Bomba
Columna
pág.: 251290 Infinity UHPLC
Posición durante el lavado exterior de la aguja
1290 Infinity AutosamplerLimpieza del exterior de la aguja en el portal de lavado
Bomba Peristáltica para
lavado aguja
pág.: 261290 Infinity UHPLC
1290 Infinity AutosamplerMovimiento al asiento de la aguja
Posición justo antes de inyectar
Sin pérdida de muestra (se inyecta toda)
Asiento aguja
pág.: 271290 Infinity UHPLC
1290 Infinity AutosamplerInyección
Inyección
Mínima dispersión de la muestra; ésta no tiene que recorrer todo el sistema hidráulico (vol. 70µL).
Se puede reducir el volumen de retardo del gradientedevolviendo la válvula a posición “by pass” (cuando la
muestra ya ha salido del inyector).
Bomba
Columna
pág.: 281290 Infinity UHPLC
Derivatización precolumna: ejemplo 20 Aminoácidos con OPA y FMOC (18 min Agilent Series 1100)
Dosificador de MuestraUnidad
de Muestreo
deshecho
Bomba
a columna
Muestra Reactivo
VWD1 A, Wavelength=338 nm, TT (AASM0531\095-0101.D)VWD1 A, Wavelength=338 nm, TT (AASM0531\003-0201.D)VWD1 A, Wavelength=338 nm, TT (AASM0531\007-0401.D)
min0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
mAU
0
50
100
150
200
250
300
350
ASP
GLU
SER
THR
TYRCYS-CYS
VAL
METPHE
ILEASN
TRP
ORN
ROJO: muestra AAS libres
GLY
HIS
ARG
ALA
LEULYS
PRO
DERIVATIZACION AMINOACIDOS1.-Toma 5 µl tampón Borato (vial 2)2.-Toma 1 µl reactivo OPA (vial 3)3.-Toma O µl agua (vial 1) - lavado exterior aguja4.-Toma 1 µl muestra AAS (vial X)5.-Toma O µl agua (vial 1) – lavado aguja6.-Mezclar 7 µl 6 veces – Derivatiza AAS PRIMARIOS7.-Toma O µl agua (vial 1) - lavado exterior aguja8.-Toma 1 µl reactivo FMOC (vial 3)9.-Mezclar 8 µl 3 veces – Derivatiza AAS SECUNDARIOS10.-INYECTAR
También es útil para mezclar patrones durante la puesta a punto de métodos o p.e. para automatizar la derivatización con FMOC en el análisis de Glifosato y AMPA por LC/MS
MODIFICACIONES: ELUYENTE B SIN TAMPÓN / ELUYENTE A 75 mM AcNa
Mejora separación HYS/GLYcambia orden: ARG/ALA
pág.: 291290 Infinity UHPLC
1290 Infinity Gama de Inyectores Automáticos a 1200bars
G4226A1290 Infinity Autosampler
G4278A1290 Infinity LC Injector HTC
G4277A1290 Infinity LC Injector HTS
• Hasta 2 well plates ó 108viales de 2ml refrigerados*.
• ~ 40 ppm tipico “carryover”• Vol. Iny.: hasta 20, 40 ó 100** μL
• Hasta 12 well plates ó 324 viales de 2ml refrigerados.
• ~40 ppm tipico “carryover”• Vol. Iny.: hasta 100 μL con DLW, hasta
5 mL*** con “Active or Fast wash”
• Hasta 24 well plates ó 648viales de 2ml refrigerados.
*Opcional ** Limite de presión 600 bar *** Requiere HW adicional
pág.: 301290 Infinity UHPLC
1290 Infinity Compartimento Columnas Termost.- Mejora en Facilidad de uso y Versatilidad:
New prolonged HX-carrierwith 3rd hand (not shown)
New valve drive and valve head
Nueva guía Capilares
New leak funnel
modified lowdisp HX
New door-open sensor
RFID-tag, storestype, pressure
range, valveswitches
Nuevo AislamientoTérmico:
fácil cierre del compartimento
Nuevas válvulas ALta Presión: 2PS/6PT, 2PT/10PT and 9PT/8PS. Rápido intercambiode distintas válvulas
pág.: 311290 Infinity UHPLC
1290 Infinity UHPLC: Infinitas Soluciones !!!- Automatización Flexible
31
Desarrollo de métodos y Multi-Métodos• Hasta 3 compartimentos de Columna
para un máximo de 8 Columnas, 26 Solventes y 6 zonas de temperatura.
• MD: ChromSword and AutoChrom• Multi-Métodos: ChemStation, EZAccess
Regeneración Automática de Columna• 2000 muestras/día con inyecciones
superpuestas y offline data analysis
Preparación de muestra “Online“• Enriquecimiento• …….
pág.: 321290 Infinity UHPLC
Agilent 1290 Infinity UHPLC: Infinitamente Mejor para HPLC y UHPLC (RRLC,UFLC,HRLC,…)
MásFlexible
Más Sensible
MásPotente
El mejor en su claseSensibilidad UV : 2 – 20x con celda 1 cm
8 – 80x con celda UHS de 6 cm Independiente de las condiciones.
Sensibilidad MS/MS: < 1 fg con “Jet Stream”.Contaminación cruzada: < 0.002% Clorhexidina.
Admite todo tipo de columnas analíticas SIN limitación.Permite transferir métodos DE / A cualquier (U)HPLC.Inyección flexible: “flow-through” y con “loop” fijo.La mayor capacidad de muestreo: > 2000 muestras/día.Soluciones Multi-columna y de Desarrollo Automatizado de Métodos: hasta 8 columnas, 26 disolventes y 6 zonas de temperatura.
El mejor en su clase Resolución y Velocidad: 1200 bar (2 ml/min)
800 bar (5 ml/min)20ul volumen retardo
Columnas RRHD (1.8µm / 1200bar): N=50.000 en 3min
1290 Infinity UHPLCpág.: 33
1290 Infinity Posicionamiento del portfoliode HPLC de Agilent El máximo rendimiento y flexibilidad preservando y mejorando las características del Sistema Agilent 1200
1290 Infinity = 1200 RRLC + X1200 RRLC = 1200 HPLC + Y
1200 HPLC = 1120 HPLC + Z
1290 Infinity = 1200 RRLC + X1200 RRLC = 1200 HPLC + Y
1200 HPLC = 1120 HPLC + Z
Una solución óptima para todo tipo de necesidades y presupuestos en
HPLC y UHPLC
pág.: 341290 Infinity UHPLC
Agilent 1290 InfinityUHPLC/MS
La mejor capacidad de separación para mejorar sus resultados en LC/MS
Una buena separación
ayuda a minimizar la “supresión”
de Ionización en LC/MS
pág.: 351290 Infinity UHPLC
30:70 agua/metanol, 0.2 % ácido acético
Intensity, cps
Difenhidraminam/z 256.17
Ketoprofenom/z 255.10
Time, min
0.0
6.0e4
1.2e5
1.8e5
2.4e5
3.0e5
3.6e5
4.2e5
4.8e5
0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40
Difenhidraminam/z 256.17
0.0
6.0e4
1.2e5
1.8e5
2.4e5
3.0e5
3.6e5
4.2e5
4.8e5
Intensity, cps
0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00Time, min
Ketoprofenom/z 255.10
5:95 agua/metanol, 0.2 % ácido acético
1/7 respuesta (-85%)
Una buena cromatografía puede mejorar
considerablemente la sensibilidad y robustez de los resultados por LC/MS
La Importancia de una Buena Separación incluso con LC/MS Altamente Selectivos
pág.: 361290 Infinity UHPLC
1290 Infinity UHPLC + 6460 QQQ Jet StreamProductividad: Análisis 250 Pesticidas en 8 min - Dynamic MRM.Columna 100x2,1mm x 1.8µm Zorbax Eclipse Plus C18
500ppt, dynamic MRMRetention Time Window = 12 secPeak widths ~ 1 second
Zorbax Eclipse Plus C182.1 x 100mm (1.8μm)
pág.: 371290 Infinity UHPLC
x3 x4 x4 x3 x4 x2 x1
Cycle time
ΔRt
QqQ-DRM: “Dynamic Reaction Monitoring”
= nº Concurrent dMRM
DRM: MRM Dinámico con ventanas de monitorización
individuales creadas automáticamente a partir del tiempo de
cada compuesto
pág.: 381290 Infinity UHPLC
1290 Infinity/6540-UHD-QTOF: Fast UHPLC“Screening” 250 Pesticidas en 90 segundos.
4x10
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
2
2.2
2.4 145.06481924909
146.06893917868
Counts vs. Mass-to-Charge (m/z)145 145.5 146 146.5 147
4x10
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
4.5
5
5.5422.208059
38636
423.21126333121
424.21395629032
Counts vs. Mass-to-Charge (m/z)421.5 422 422.5 423 423.5 424 424.5 425 425.5
Fenpyroximate EMass [M+H]+ = 422.20806Resolution = 38636‐0.25ppm
1290/6540 90seg análisis250 pesticidas (125pg on-column)
MS con masa exacta
1‐naphtholMass [M+H]+ = 145.06489Resolution = 249090.06 ppm
4x10
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
4.5
5
5.5
6
6.5
7
7.5
8
8.5
9 732.46871447094
733.47226542144
734.47514735133
Counts vs. Mass-to-Charge (m/z)731 731.5 732 732.5 733 733.5 734 734.5 735 735.5 736 736.5 737 737.5 738
Spinosad AMass [M+H]+ = 732.4687 Resolution = 47094‐0.77ppm
90s
LC/MS-TOF(/QTOF):“Screening” de
cualquier compuesto ionizado
6540-QTOF Resolución
espectral: 25-47K
2.1 x 50 mm x 1.8µm Eclipse Plus C181.2 mL/min, 60 ºC
pág.: 391290 Infinity UHPLC
1290 Infinity/6540-UHD-QTOF: 10 ppb Pesticidasen Pimiento Rojo en 90 segundos
6x10
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
1.1
1.2
1.3
1.41 1
Counts vs. Acquisition Time (sec)4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80 82 84 86 88
2.1 x 50 mm x 1.8µm Eclipse Plus C181.2 mL/min, 60 ºC
1
Counts vs. Acquisition Time (sec)4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80 82 84 86 88
1a
5x10
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
Counts vs. Acquisition Time (sec)53.5 54 54.5 55 55.5 56 56.5 57 57.5 58 58.5 59
1b
3a 4a
4b
2a
2b
3b
Name RT Mass Mass (Tgt) Diff (Tgt, ppm) Score (Tgt)
1a tricyclazole 0.652 189.036175 189.036068 0.57 98.10
1b propazine 0.929 229.109356 229.109423 -0.29 97.50
2a diethofencarb 0.953 267.146937 267.147058 -0.45 85.49
2b cyprodinil 0.936 225.126620 225.126598 0.10 98.82
3a cyproconazole 0.925 291.114106 291.113840 0.91 97.92
3b paclobutrazol 0.923 293.129448 293.129490 -0.14 96.74
4a tetraconazole 0.972 371.021290 371.021530 -0.65 99.45
4b azoxystrobin 0.957 403.116637 403.116821 -0.45 99.19
50 pg on-columnExactitud m/z (promed. abs. ) : 0.45ppm
90s
90s
4 seg.
10 ppb’s
10 ppb’s
pág.: 401290 Infinity UHPLC
40
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Published in Spain, March 25, 2010
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