PRÀCTICA 04 MICROBIOLOGIA
TÉCNICAS DE COLORACIÓN DIFERENCIAL
OBJETIVOS:
Aplicar y distinguir técnicas de coloración diferencial en bacterias.
Clasificar algunas especies bacterianas en gran positivas y en gran negativas de
acuerdo a la tinción de gram.
PROCEDIMIENTO
MATERIALES
EQUIPOS: MATERIALES: REACTIVOS:Microscopio compuesto con objetivo 100X
Asa de Siembra Aceite de inmersión
Papel lente Acetona-alcoholIodo
láminas portaobjetos Cristal violeta láminas cubreobjeto (laminillas), Agua destilada Mechero con alcohol SafraninaEncendedorHisopos
Coloración al gram
A. Muestra de Frotis
1. Colocar con el asa de siembra ya
esterilizada (para evitar cualquier
contagio), una muestra del Frotis en
una láminas portaobjetos
Después colocar en la muestra una gota de H2O + Mta (culivo), y
empezar a
homogeneizar.
2. Fijar el frotis al calor,
pasándolo
hasta secar sin que se
carbonice por completo
3. Después de haberlo eliminado las bacterias de la muestra
Con mucho cuidado tratar de cubrir la muestra con el Cristal Violeta
durante un minuto, después lavarlo con H2O y dejar secarlo bien.
4. Cubrirlo con Iodo y cubrir toda la muestra durante un minuto, luego
lavarlo bien con H2O y dejar secarlo.
5. Decolorar por 20 segundos con alcohol acetona agitándolo suavemente,
lavarlo bien con H2O y dejar secarlo.
Observar por el microscopio objetivo
RESULTADO
Primero se pudo observar la muestra en 10x se observo solamente
pequeños puntos azules, en 40x, se observo manchas o trazos rojizos
extendidas en la superficie del portaobjeto. A este nivel de observación
no se pudo distinguir la estructura de la bacteria inoculada.
Luego observamos la
muestra con una
potencia de 100x. Esta
observación se
Fig. 1. Muestra del Frotis en microscopio 40x
realizo empleando el aceite de inmersión para mejorar la capacidad del
objeto.
En esta observación la imagen obtenida nos permitió ver miles de
diminutas estructuras circulares agrupadas en forma de racimos de uva
identificada como una colonia de bacterias Estafilococos caracterizadas
por su forma circular.
Fig.2. muestra del Frotis en microscópico 100x
En la tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción
diferencial empleado en que utiliza tanto para poder referirse a la morfología
celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la
diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias
que se visualizan de color azules y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan
de color rosa o rojo o grosella como en el caso de la Fig. 2.
CONCLUSIONES:
Gran cantidad de los estreptococos, enterococos y el resto de grupos o
géneros microbianos algunos son patógenos y no patógenos de los
cuales se pueden preparar fermentaciones, que por medio de un largo
proceso, llegan a ser elaboradas en productos para consumo humano.
El procedimiento seguido nos dio en cada muestra elaborada por
nosotros resultados en el cual las bacterias eran gram positivo y gram
negativo diferenciadas principalmente por su color de cada una.
Para concluir, se pudo observar por medio del microscopio las
diferencias que hay entre las bacterias de tipo gram positivo y gram
negativo, las cuales son notables por el color de cada una.