Guía para la presentación de proyectos de menor cuantía por fuera de convocatoria
Proyectos de Investigación, Innovación y Creación de la Universidad de Caldas”
Vicerrectoría de Investigaciones y Postgrados
Título del proyecto1
Efecto de la cetosis subclínica sobre la respuesta inmune de la glándula mamaria desafiada con
Streptococus agalactiae en bovinos.
Proyecto de investigación presentado por fuera de convocatoria invocando la Resolución 07 de 2011
emanada de la Vicerrectoría de Investigaciones y Posgrados
Nombre de los grupos de investigación
(registre la información de los grupos que participan)
Nombre del grupo Facultad/Instituto/Departamento Clasificación
Grupo de Investigación Biología de
la Producción Pecuaria
Ciencias Agropecuarias / Instituto de
Biotecnología Agropecuaria / Producción
Agropecuaria
A1
Tipo de proyecto de I&D
Investigación
Básica2
XX Investigación
Aplicada3
Innovación
Tecnológica4
Creación:
Tipo de innovación
Innovación tecnológica de
producto
Innovación tecnológica de
proceso
Innovación
organizacional
Área Estratégica del Plan de Desarrollo
Biotecnología Arte Cultura y Humanidades Problemática social
Salud XX Ambiental Ninguna de las
áreas
1 Se recomienda que no exceda 15 palabras
2 Son estudios que tienen como propósito el trabajo experimental o teórico realizado principalmente con el
objeto de generar nuevos conocimientos sobre los fundamentos de fenómenos y hechos observables, sin prever
ninguna aplicación específica inmediata 3 Son proyectos de investigación original realizada para la adquisición de nuevos conocimientos, dirigida
principalmente hacia un fin u objetivo práctico, determinado y específico 4 Se refiere a aquellos proyectos que tienen como objetivo el desarrollo de nuevos productos o procesos, así
como las modificaciones tecnológicas importantes en productos o procesos
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INTEGRANTES DEL EQUIPO DE INVESTIGACIÓN
(indicar cuál es el investigador responsable con un asterisco)
Nombre/tipo de vinculación en la
Universidad de caldas Departamento o Programa
Área de conocimiento (según
anexo 1)
NESTOR ALONSO VILLA ARCILA* Producción Agropecuaria Agronomía, veterinaria y afines
ALEJANDRO CEBALLOS MARQUEZ Producción Agropecuaria Agronomía, veterinaria y afines
JUAN CARLOS RODRIGUEZ L. Prince Edward University -
Canada
Agronomía, veterinaria y afines
JUAN CARLOS SEPULVEDA Fac. de Medicina - UTP Ciencias médicas
Lugar de ejecución del proyecto Ciudad Departamento
Manizales Caldas
Presupuesto (Ingresar al siguiente enlace)
Valor total del proyecto: $ 32.392.552 Valor solicitado en metálico a
la VIP para este proyecto
(entre 0 y 15 smmlv):
$ 9.150.000 Fuentes de financiación:
Duración total (meses): 6 meses
b. Resumen ejecutivo (máximo 500 palabras)
Durante el inicio de la lactancia las vacas de leche experimentan una serie de cambios metabólicos
debidos, generalmente, a un balance energético negativo, caracterizados principalmente por un
aumento en los cuerpos cetónicos, ácidos grasos libres y una disminución de la glucosa sérica (Zarrin
et al., 2014). El aumento de los β-hidroxibutiratos, principal cuerpo cetónico, se denomina cetosis y es
una enfermedad que tiene una prevalencia alta y genera un impacto económico a nivel de hato por la
disminución en la producción de leche y un aumento en la incidencia de enfermedades asociadas al
periparto como mastitis, metritis, desplazamiento del abomaso y un aumentando así, del riesgo de
sacrificio (Berge and Vertenten, 2014; Chapinal et al., 2012; Ospina et al., 2010).
La mastitis bovina es una enfermedad de una alta prevalencia y genera a nivel mundial los costos más
altos en producción de ganado de leche. La respuesta inmune de la vaca después de que los patógenos
mamarios ingresan a la glándula mamaria es convocada y rápidamente la magnitud de la respuesta a la
injuria no se hace esperar (Sordillo, 2005b).
Experimentos con infecciones experimentales con Streptococcus agalactiae, donde el recuento de
células somáticas (RCS) aumentó de 45.000 a 849.000 células/mL, han indicado que esta elevación
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como consecuencia de la infección causó un aumento de la lipolisis y proteólisis de la leche cruda
comparado con la leche con un RCS más bajo (Ma et al., 2000). Después de pasteurizar, homogenizar
y almacenar la leche a 5°C, las propiedades organolépticas de la leche que tenía un RCS más bajo
fueron de más calidad que leches con un alto RCS (Ma et al., 2000). La investigación realizada por
estos autores concluyó que las infección intramamaria (IMI) tenían un alto impacto sobre la calidad
organoléptica y sensorial de la leche durante un período de 21 días en la góndola del supermercado,
sugiriendo que los procesadores deberían implementar un sistema de pago por calidad para leches con
un RCS bajo.
Cuando las bacterias superan las barreras anatómicas de la glándula mamaria puede establecerse la
IIM y es allí donde los leucocitos juegan un papel determinante en la severidad y duración de la IIM.
Durante la IIM los PMN, en particular los neutrófilos, migran desde el torrente sanguíneo a la glándula
mamaria constituyéndose en la primera línea de defensa; son llevados al sitio de infección por agentes
quimio tácticos como son las interleukinas (IL) como la IL1, IL6, IL-8, TNF-α (Paape et al., 2003;
Sohn et al., 2007).
Por lo anterior, el objetivo de este proyecto es evaluar el efecto de los β-hidroxibutiratos en la
respuesta inmune a nivel de glándula mamaria en vacas con infección intramamaria inducida con
Strep. agalactiae, mediante la determinación en leche de Haptoglobina (Hp), Amiloide A Sérico
(AAS), la interleuquinas IL-8 y el factor de necrosis tumoral (TNF), y por citometría las integrinas
CD14 y 11B.
Los resultados favorecerán los programas de prevención, control y erradicación de este patógeno en
las lecherías del Triángulo del Café.
c. Conformación y trayectoria del equipo de investigadores (máximo 500 palabras)
El grupo de investigación en Biotecnología Agraria se conformó en el año 2004 en la Universidad de
Caldas y hoy está escalafonado como grupo A1 ante Colciencias. Tres de los autores del proyecto
pertenecen a este grupo. El autor responsable de este proyecto ha adelantado investigaciones en
diversos campos como la Salud Productiva en Bovinos con el apoyo de entidades reconocidas en el
sector pecuario como la Asociación Colombiana de Criadores de Ganado Cebú – Asocebú y
Asonormando. Estas investigaciones se han enfocado en incrementar el rendimiento productivo de los
hatos y fruto de estos trabajos existen varias publicaciones en revistas nacionales e internacionales.
Ahora, mediante este proyecto se abordará el problema de la cetosis y su efecto en la sanidad
mamaria, evaluada mediante la respuesta inmune a un patógeno que tiene una alta prevalencia en
nuestro medio como es el Strep. agalactiae. Prevalencia que de acuerdo a estudios realizados entre
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investigadores de la Universidad de Caldas y Prince Edwards supera el 40% en tanques de
enfriamiento. Lo anterior es continuación de la filosofía del grupo que es trabajar bajo una óptica de
salud de hato o poblacional y que los resultados redunden en beneficio de la producción bovina
nacional.
Para la ejecución del proyecto se ha conformado un equipo de profesionales con una trayectoria muy
amplia en el área de los bovinos y con especial énfasis en el metabolismo, la mastitis, la inmunología y
salud de hato, donde cada uno de los co-investigadores son de renombre en las diferentes áreas, es así
como el Dr. Alejandro Ceballos M., es reconocido a nivel nacional e internacional en el diagnóstico,
manejo, tratamiento, prevención y control de mastitis bovina; a publicado numerosos trabajos sobre
mastitis en revistas de circulación internacional, además, durante un período de tiempo tuvo la
oportunidad de implementar planes de prevención de infecciones intramamarias (IIM) y reducción del
recuento de células somáticas en rebaños lecheros en el occidente del estado de Nueva York. Planes
que sin duda alguna podrán ser adaptados a los sistemas de producción de leche en el Eje Cafetero.
Igualmente, se han vinculado con el proyecto los Dres. Juan Carlos Rodríguez L. de la Universidad de
Prince Edward en Canadá y el Dr. Juan Carlos Sepúlveda de la Universidad Tecnológica de Pereira,
ambos son reconocidos Inmunólogos, ellos ha hecho numerosos aportes en el área de la inmunología
Veterinaria y humana y como co-investigadores de este estudio tiene a su cargo apoyar la parte
molecular del proyecto; lo que asegura la calidad de los resultados finales del estudio.
d. Descripción del proyecto (máximo 15 páginas Letra Arial 12, espacio doble)
Con el mejoramiento genético alcanzado a través de los años en ganado de leche se han multiplicado
los desórdenes nutricionales que generan enfermedades metabólicas e infecciosas (Dillon et al., 2006).
Las enfermedades metabólicas o enfermedades de la producción son provocadas por un desequilibrio
entre los nutrientes que ingresan al organismo del animal (hidratos de carbono, proteínas, minerales,
agua), su metabolismo y los egresos a través de la leche, feto, materia fecal, orina etc. (Wittwer and
Contreras, 1980). Los desequilibrios nutricionales que afectan a las vacas de alta producción se
producen porque el aporte o la utilización de los alimentos no satisfacen los requerimientos de
mantenimiento o producción (Roche et al., 2009). Cuando estos desequilibrios son de corta duración y
no muy severos, el animal los puede compensar utilizando sus reservas corporales; sin embargo, si el
desequilibrio es severo o moderado pero persistente, el animal agota sus reservas corporales y se
presenta una enfermedad producto de la movilización grasa que se llama cetosis.
Existe una asociación directa entre condición corporal y cetosis, una condición corporal de 3.5 o más,
en una escala de 1 a 5 al momento del parto está asociada a la presentación de cetosis (Gillund et al.,
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2001). Durante el periparto las vacas de leche experimentan una serie de adaptaciones metabólicas
principalmente relacionadas con la movilización de sus reservas corporales, producto de un balance
energético negativo; particularmente son cambios significativos en ácidos grasos libres y el contenido
de fosfolípidos a nivel de membrana celular en el tejido adiposo e hígado (Drackley, 1999). A nivel
hepático y específicamente del hepatocito, estos cambios pueden causar daños por la excesiva lipolisis
y acumulación de triacilgliceroles (Jorritsma et al., 2001).
El hígado graso o lipidosis hepática es una enfermedad metabólica que afecta más del 50% de las
vacas durante la lactación temprana (Jorritsma et al., 2001), está asociada a un incremento en la
incidencia de enfermedades metabólicas e infecciosas, como cetosis (Smith et al., 1997), mastitis
(Suriyasathaporn et al., 2000), metritis y disminución de la fertilidad (Bobe et al., 2007). La
acumulación de lípidos a nivel hepático puede alterar la función del hígado como son la síntesis y
biotransformación de metabolitos y proteínas, la detoxificación y excreción de productos de desecho
que comprometen el sistema inmune (Jorritsma et al., 2003). La acetonemia es una alteración
metabólica producida por un balance energético negativo que se presenta en la vaca en períodos de
alta demanda con disminución de la glicemia, incremento de los ácidos grasos libres y acumulación de
cuerpos cetónicos en la sangre y fluidos (Drackley, 1999). Además, se produce un depósito de grasa
en el hígado que derivan en una serie de trastornos bioquímicos que en la mayoría de los casos
produce una enfermedad que no es posible detectar clínicamente (subclínica) (Miettinen and Setälä,
1993).
Los cuerpos cetónicos, los betahidroxibutiratos (ßHB) y el acetoacetato, son productos fisiológicos en
el metabolismo de carbohidratos y lípidos de rumiantes, sus precursores son las grasas y ácidos grasos
de la dieta, así como los depósitos de grasa del animal (Duffield et al., 2009). El ácido butírico de la
dieta es transformado en el epitelio de los preestómagos, vía acetoacetato, a ßHB por lo que este
constituye el principal cuerpo cetónico de la sangre del rumiante. Por otra parte, los ácidos grasos de
cadena larga producto de la movilización de reservas de grasa son convertidos en el hígado a
acetoacetato y luego a ßHB, el cual puede ser empleado como fuente de energía y en la síntesis de
grasa en la ubre. De esta forma, la cetosis se produce cuando la producción de cuerpos cetónicos es
superior a los que se utilizan, lo cual se presenta cuando hay un déficit de energía (oxalacetato),
producto de alta demanda de glucosa para producir lactosa (Drackley, 1999; Drackley et al., 2005).
La cetosis subclínica corresponde a los casos en que hay un incremento anormal de los cuerpos
cetónicos, si bien el animal no presenta ningún signo clínico, como anorexia, alteraciones digestivas o
nerviosas de la cetosis (Anderson, 1988). Su importancia radica en que está asociada a una reducción
en la producción de leche y a un deterioro en la fertilidad del grupo de animales afectados (Leblanc,
2010). No es claro si estos problemas son causados primariamente por el aumento de los cuerpos
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cetónicos o bien, son producidos por el BEN. Se ha descrito que la prevalencia de la cetosis subclínica
en los dos primeros meses de lactancia varía entre un 8 y un 34% (Dohoo and Martin, 1984; Duffield
et al., 1997). Por lo anterior, la cetosis subclínica es más prevalente que la cetosis clínica.
La cetosis subclínica y clínica tienen una asociación temporal y negativa sobre la producción de leche,
por ejemplo, se ha observado una disminución en la producción de leche entre la segunda y cuarta
semana de lactancia (Rajala-Schultz et al., 1999). La relación grasa – proteína en leche también se ve
afectada, el porcentaje de grasa en leche aumenta en la cetosis subclínica producto del incremento de
ßHB y ácidos grasos que participan normalmente en la síntesis de la grasa de la leche (Heuer et al.,
1999). La proteína en leche de vacas con cetosis disminuye y está asociada a un deficiente aporte de
energía, ya que la proteína en leche también depende del balance de energía (Miettinen and Setälä,
1993).
MASTITIS
La mastitis bovina, es una reacción inflamatoria de la glándula mamaria y produce alteraciones físicas
y químicas en la leche, aumento del recuento de células somáticas (RCS) por la presencia de
microorganismos patógenos y finalmente cambios en la pérdida de la funcionalidad (Calderón and
Rodríguez, 2008).
Las bacterias de los géneros Staphylococcus, Streptococcus, Corynebacterium y algunos gérmenes
Gram negativos, son responsables de más del 90 % de los casos clínicos y subclínicos (Barker et al.,
1998; Wilson et al., 1997). La enfermedad puede cursar como subclínica (la de mayor prevalencia en
el hato) o como clínica, con alteraciones macroscópicas de la leche y síntomas palpables de la ubre y,
a veces, de tipo sistémico en todo el animal. Clásicamente se ha definido como una “enfermedad
multifactorial” porque el riesgo de infección depende de la habilidad de la vaca para rechazarla, del
tipo, número y de la patogenicidad de las bacterias presentes en el hato, y fundamentalmente, de las
condiciones del ambiente, del manejo en general y de la rutina de ordeño en particular que se estén
desarrollando en el establecimiento (Ramírez et al., 2001; Sordillo, 2005b; Wilson et al., 1997).
La protección contra los patógenos comprende una compleja interacción entre órganos, tejidos, células
y moléculas que conforman el sistema inmune del cuerpo (Moser and Leo, 2010). La glándula
mamaria (GM) es protegida por estos mecanismos de defensa. La inmunidad innata, también conocida
como inmunidad no específica es la predominante en los estados iniciales de infección, está presente y
es activada rápidamente por numerosos estímulos, pero no aumenta por la repetida exposición al
agente infeccioso; además, la defensa innata está mediada por barreras físicas del pezón (Sordillo,
2005a). Si los mecanismos de defensa no específica funcionan adecuadamente muchos patógenos son
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eliminados en corto tiempo y antes de que los mecanismos de defensa específicos sean activados
(Sordillo and Streicher, 2002).
El canal del pezón es la principal puerta de entrada a la glándula mamaria de numerosos patógenos
causantes de mastitis y es la primera línea de defensa contra la mastitis cuando los patógenos entran a
través de éste a la glándula mamaria; este canal es sellado entre ordeños y en el período seco por una
queratina derivada del epitelio estratificado de revestimiento (Rainard and Riollet, 2006). Los ácidos
grasos esterificados y no esterificados y proteínas asociadas a la queratina actúan como
bacteriostáticos y bactericidas (Hogan et al., 1988). La piel es también considerada como parte de esta
primera barrera de defensa contra los patógenos, una piel sana reduce la contaminación de bacterias
como el Staphylococcus aureus que predisponen a nuevas infecciones de la GM (Rainard and Riollet,
2006).
El contenido acuoso del estrato cornificado debe mantenerse en un rango entre 10 – 20 % para que la
piel mantenga sus características de flexibilidad y suavidad, si el contenido de humedad disminuye por
debajo del 10 %, la piel se torna rugosa y resquebrajada. Bajo estas condiciones, el contenido ácido de
la piel, formado principalmente por ácido láctico, ácidos grasos libres y aminoácidos, cambiará. Como
consecuencia la piel será más propensa a la colonización de patógenos, predisponiendo a los animal a
infecciones (Zecconi et al., 2000).
El músculo liso y la elasticidad de los tejidos alrededor del conducto del pezón, hacen que este se
mantenga cerrado y limite así el ingreso bacteriano (Sordillo et al., 1997). El diámetro del pezón y en
menor medida la longitud del mismo, tienen una relación directa con la incidencia de enfermedades
intramamarias. A mayor diámetro, mayor tasa de nuevas infecciones. Estudios morfométricos indican
que el diámetro del canal del pezón cambia considerablemente durante el periodo seco y la lactancia
del animal. Este diámetro fue mucho mayor a los 7 días del secado comparado con los días 1, 16 y 30,
hallándose una relación positiva entre diámetro e incidencia de enfermedades intramamarias
(Nickerson, 1989). Asimismo, a medida que el proceso involutivo progresa, la glándula se torna más
resistente. Dicha resistencia, entre otras causas, es atribuida a la formación del tapón de queratina en el
conducto del pezón, la cual tiene componentes con un efecto microbicida que previenen el ascenso y
multiplicación bacteriana en la glándula (Craven and Williams, 1985)
Entre los componentes solubles de la glándula mamaria y que hacen parte del sistema inmune están la
lactoferrina, xantina oxidasa y lactoperosidasas entre otras. La lactoferrina (Lf) es una proteína
perteneciente a la familia de las trasnferrinas y cuyo papel biológico más importante es colaborar en
los mecanismos innatos de protección de la glándula mamaria. El efecto bacteriostático de la Lf en su
forma de apo Lf se ha atribuido a su habilidad de captar el ion Fe3+ y limitar así su utilización por
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bacterias patógenas, es así como después de la infección la Lf es liberada por los neutrófilos y células
epiteliales a la circulación sanguínea (Legrand and Mazurier, 2010). En rumiantes la Lf actúa
sinérgicamente con las IgG1 inhibiendo bacterias causantes de mastitis que tienen un alto
requerimiento de hierro y que son susceptibles a la actividad bacteriostática de Lf como son la E. coli
seguida por el S. aureus, sin embargo, otras bacterias como el Streptococcus son resistentes (Rainard,
1986; Sordillo and Streicher, 2002).
La leche bovina contiene muy poca cantidad de Lf (20 – 200 µg/mL) comparada con la leche humana
(1 – 2 mg/mL). Mientras que el calostro bovino contiene altas cantidades de Lf (2 – 5 mg/mL)
(Rainard and Riollet, 2006). Los factores solubles de defensa hacen parte tanto del sistema inmune
innato como del específico y representan una importante línea de defensa dentro de la glándula
mamaria. Estos factores son principalmente las inmunoglobulinas, células de defensa y las citoquinas.
Las inmunoglobulinas (Ig) son producidas por activación antigénica de los linfocitos B. El suero
bovino y la secreción láctea contiene principalmente tres clases de Igs: IgG, que tiene dos subclases
las IgG1 y IgG2, IgM y IgA; la estructura básica de todas es similar y están compuestas por dos
cadenas aminoacidicas largas e idénticas (Korhonen et al., 2000). Una función importante de las Ig es
su habilidad para aumentar la capacidad de fagocitosis y reconocimiento de las bacterias por parte de
los leucocitos (opsonización). Las Igs también previenen la adhesión de microbios a superficies
mucosas, inhibiendo el metabolismo bacteriano, aglutinando bacterias y neutralizando toxinas y virus.
Las IgM se producen en menos proporción que las IgG, pero son consideradas más eficientes que las
IgG, con respecto a las IgA no ayudan a la opsonización de bacterias, pero aglutinan antígenos y
neutralizan virus y toxinas bacterianas disminuyendo la propagación de infecciones bacterianas en la
GM (Korhonen et al., 2000).
La concentración de Igs en la glándula varía de acuerdo al momento de la lactancia y al grado de salud
de la misma. En leche normal su concentración es relativamente baja en comparación con el calostro
(50 – 150 mg/ml), o con la glándula inflamada, incrementándose en este último caso entre 2 y 3 veces
sobre el valor normal (Sordillo et al., 1997).
Cuando las bacterias superan las barreras anatómicas de la glándula mamaria puede establecerse la
IIM y es allí donde los leucocitos juegan un papel determinante en la severidad y duración de la IIM.
Los leucocitos están divididos en polimorfonucleares (PMN) que incluyen (neutrófilos, eosinófilos y
basófilos), los macrófagos y linfocitos, estos últimos participan en la respuesta inmune innata y
adquirida. Durante la IIM los PMN, en particular los neutrófilos, migran desde el torrente sanguíneo a
la glándula mamaria constituyéndose en la primera línea de defensa; son llevados al sitio de infección
por agentes quimio tácticos como son las interleukinas (IL) como la IL1, IL6, IL-8, IL-12, IL-1β,
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factor de necrosis tumoral (TNF)-α y leucotrinos B4 liberados por el endotelio y los macrófagos
(Paape et al., 2003; Sohn et al., 2007). Una vez los PMN se unen a las bacterias éstos producen
sustancias oxidantes como el peróxido de hidrogeno, superóxido de hidrogeno y el radical hidroxilo
que matan la bacteria (Paape et al., 2002).
Los animales que tienen una mejor respuesta a nuevas infecciones IIM no solo reclutan rápidamente y
masivamente un número alto de PMN sino que además, tienen altos niveles sanguíneos de IgG2,
además de una efectiva respuesta inflamatoria temprana (Burton and Erskine, 2003). El número de
neutrófilos es relativamente bajo en la glándula mamaria sana (<105 células/mL), mientras, en caso de
mastitis puede constituirse en el 90% del total de leucocitos (>106 células/mL) (Sordillo, 2005a).
Los PMN tienen cinco funciones claves de vigilancia y defensa en la IIM, estas son: marginación,
migración, fagocitosis, estallido respiratorio y degranulación. La marginación y la migración son
críticos en la respuesta inmune innata y sucede como respuesta inflamatoria en el sitio de la infección.
La fagocitosis, estallido respiratorio y degranulación culminan con la muerte del patógeno
intracelularmente por parte de los PMN que han emigrado desde el torrente circulatorio a sitio de la
infección.(Burton and Erskine, 2003).
Durante el periparto la función y el número de neutrófilos está alterada o afectada por los
glucocorticoides, estos tienen un efecto inhibidor en la migración de los PMN por una disminución en
la expresión del receptor de adhesión de los neutrofilos llamado CD62L (selectina L) que es necesaria
para la penetración dentro del endotelio en los sitios de infección (Weber et al., 2004). Así mismo,
(Lamote et al., 2004), han demostrado que el 17β estradiol también tiene efecto sobre los PMN
durante el periparto, inhibiendo la diapédesis de estas células al sitio de infección, lo que explicaría
porque la mayoría de infecciones se establecen al inicio de la lactancia, por el efecto inmunosupresor
de esta hormona y que se encuentra en altas concentraciones alrededor del parto. Con respecto a la
progesterona, altos niveles de ésta tienen un efecto negativo sobre los PMN generando una desviación
a la izquierda y favoreciendo la aparición de PMN inmaduros (Moreira da Silva et al., 1998).
Las vacas con alteraciones metabólicas al inicio de la lactancia como cetosis, hígado graso y NEFA
altos, tienen un sistema inmune deprimido (Suriyasathaporn et al., 1999). Los cuerpos cetónicos
disminuyen la función de los neutrófilos, junto con los β-hidroxibutiratos y el acetoacetato inhiben la
proliferación de las células hematopoyéticas después del parto (Hoeben et al., 1999). La severidad de
la mastitis por E. coli y su relación con la quimiotáxis de los neutrófilos in vitro fue estudiada en vacas
con balance energético negativo. Las vacas fueron inoculadas con la bacteria y clasificadas en
cetósicas y no cetósicas basados en la concentración de β-hidroxibutiratos; en las vacas no cetósicas la
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mastitis inducida experimentalmente fue de moderada a severa, mientras que en todas las vacas
cetóticas la mastitis fue severa (Kremer et al., 1993).
Los macrófagos en la GM sana y en la leche representan las células predominantes, sin embargo
durante la inflamación de la glándula mamaria, estas células disminuyen (Sordillo, 2005a). Los
macrófagos actúan como centinelas contra bacterias invasoras y en caso de infección liberan
quimioatrayentes que causan una rápida migración de los PMN al sitio de infección; los macrófagos
también pueden matar muchos patógenos intracelulares y pueden activar factores como el TNF y el
interferon Gamma (Burvenich et al., 2007).
Después de la apoptosis de los PMN, los macrófagos se encargan de la rápida eliminación de éstos con
el fin de minimizar las lesiones derivadas de efectos inflamatorios en el epitelio secretor de la GM
(Paape et al., 2003).
Los linfocitos son los encargados de construir y regular la respuesta inmunitaria. Existen dos tipos de
linfocitos, los cuales difieren en funciones y en componentes proteicos producidos, llamados linfocitos
B y T (Tizard, 1996). Los linfocitos T se dividen en dos grandes poblaciones, llamadas αβ y γδ. Los
αβ, a su vez, son subdivididos nuevamente en CD4+ (T colaboradores / memoria) y CD8+ (T
citotóxicos / supresores) (Burton and Erskine, 2003). Las funciones biológicas de los linfocitos T
CD4+ son la producción de citoquinas y la activación de la respuesta inmunitaria celular y humoral
(Sordillo et al., 1997; Kimura et al., 1999a). Los linfocitos T CD8+ tienen la capacidad de destruir
blancos específicos, como células infectadas con virus o cancerígenas, o de producir ciertas citoquinas
con efecto supresor de la respuesta inmune (Sordillo et al., 1997; Mallard et al., 1998; Kimura et al.,
1999a).
Las citoquinas son proteínas solubles que participan en una gran variedad de procesos biológicos,
incluyendo inflamación e inmunidad; el término citoquina fue originalmente para describir un grupo
de factores solubles libres que actúan como moléculas comunicadoras entre leucocitos y, aunque
juegan un papel esencial en la respuesta inmune, ellas también tienen efectos deletéreos en el
individuo (Borghetti et al., 2009; Sordillo and Streicher, 2002). Por lo anterior, debe existir un
equilibrio entre los efectos positivos y negativos de las citoquinas en el huésped que es regulado por
la duración, la cantidad y localización donde se expresan (Bannerman, 2009b). Las principales
citoquinas que se expresan en la GM cuando existen infecciones son IL-1, IL-2, IL-6, IL-8, IL-12,
TNF-α, factor de necrosis tumoral (TNF-α), interferón (IFN-γ) y factor estimulante de colonia (CSF)
(Lee et al., 2006; Oviedo-Boyso et al., 2007).
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En infecciones naturales de la GM con coliformes se ha observado que la concentración de IL-1, IL-6
y TNF-α son significativamente altas en vacas que tiene signos severos y respuesta inflamatoria
sistémica (Wenz et al., 2010). No obstante, en infecciones con S. aureus es característico una baja
relativa y un incremento de corta duración de las citoquinas proinflamatorias donde cumple un papel
fundamental la IL-6 (Bannerman, 2009a). Existen citoquinas antiinflamatorias, como la IL-4, IL-10,
IL-13 y el TGF-β, a nivel de la ubre la IL-10 ha sido bien estudiada y se le atribuyen varias funciones
como es inhibir la síntesis de interleuquinas y disminuir factores del MCH-II y regular antígenos y la
diferenciación y función de los linfocitos T (Schukken et al., 2011). Se ha observado un incremento a
nivel de la leche de IL-10 en infecciones por E. coli y otros Gram negativos y S uberis. Sin embargo
en infecciones por S. aureus, éste no induce una significativa respuesta de IL-10 a nivel de la ubre por
la falta de TNFα que estimularía la producción de IL-10 (Bannerman et al., 2004)
Durante la inflamación de la GM es común observar un incremento en el número de células somáticas
(neutrófilos) en leche; los neutrófilos migran del torrente sanguíneo a la GM como respuesta a
citoquinas proinflamatorias como el TNF-α y la IL-1β, sin embargo existen bacterias que son capaz de
modular la producción de citoquinas en la GM y modificar la respuesta inmune innata de la vaca
(Oviedo-Boyso et al., 2007).
Como resultado de la acción sistémica de las citoquinas, las células hepáticas incrementan la síntesis
proteica, en forma de proteínas de fase aguda (PFA), las que ejercen funciones inmunomoduladoras,
previenen el daño tisular, la propagación de la infección y mejoran el proceso de recuperación de la
homeostasis en el organismo (Eckersall et al., 2001). En bovinos, las proteínas de fase aguda más
sensibles son la haptoglobina (Hp) y el amiloide A sérico (AAS), las que muestran un sustancial
aumento en respuesta a la inflamación (Eckersall et al., 2006).
La Hp se clasifica como una alfa-globulina, con dos subunidades alfa y dos subunidades beta. Su
propiedad de combinarse de forma estable con la hemoglobina (Hb) libre permite retirarla de la
circulación y llevarla al hígado para ser catalizada a fin de prevenir lesiones renales y evitar la pérdida
de Hb por la orina cuando ocurre hemólisis (Fagoonee et al., 2005). Además de reciclar el hierro de la
Hb, la formación del complejo Hp-Hb tiene dos efectos beneficiosos: uno bacteriostático al impedir
que el Fe quede disponible para el crecimiento bacteriano (Eaton et al. 1982) y además una función
antioxidante al inhibir la diseminación de radicales libres generados por la Hb (Miller et al. 1997).
A pesar de que la Hp es una proteína clínicamente útil para medir el estado inflamatorio en los
bovinos, es una proteína inespecífica, ya que se aumenta en muchos estados inflamatorios como lo
indican varios autores en el trabajo de (Murata et al., 2004). En rumiantes clínicamente sanos, esta
proteína tiene concentraciones mínimas, sin embargo en procesos inflamatorios puede aumentarse
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hasta 1000 veces en comparación con otras especies como los omnívoros donde se aumenta entre 5 y
10 veces (Eckersall et al., 2006). De otra parte, la Hp no solo se aumenta en procesos inflamatorios o
infecciosos, es así como (Nakagawa et al., 1997) observaron un aumento sustancial de Hp en vacas
con hígado graso.
Con respecto a la dinámica de la Hp en la GM, muchos estudios indican el aumento dramático de esta
proteína en suero y leche en vacas con mastitis (Eckersall et al., 2001; Eckersall et al., 2006; Hiss et
al., 2004). También se ha indicado que en vacas con mastitis, los neutrófilos y las células epiteliales de
la GM tienen la capacidad de sintetizar Hp, en un estudio realizado por (Lai et al., 2009) hallaron una
correlación positiva entre el RCS y los niveles de Hp, ya que observaron que todos los neutrófilos
aislados de células somáticas expresaron Hp. Lo anterior demostraría que los neutrófilos y las células
epiteliales de la GM son también una fuente extra-hepática de proteínas de fase aguda.
Las concentración de esta proteína fue mayor significativamente en vacas con infecciones por gram
negativos, 1126 µg/mL, mientras que en vacas con infecciones por gram positivos fue de 575 µg/mL,
también se observan concentraciones más altas de Hp a medida que la infección fue más severa.
(Wenz et al., 2010). Relaciones entre la presencia de PFA en leche y la calidad de la misma ha sido
evaluada, observándose que los niveles de proteínas totales y caseína fueron afectados cuando se
encontraron niveles de Hp altos; en este mismo estudio se encontró que el AAS en leche afecto la
caseína y la lactosa (Åkerstedt et al., 2008).
CETOSIS Y SANIDAD MAMARIA
La cetosis tiene un efecto negativo en los mecanismos de defensa de la ubre, es así como
(Suriyasathaporn et al., 2000) encontraron que los leucocitos de vacas cetóticas tienen una menor
capacidad de fagocitosis a nivel de la ubre. Así mismo, estos autores indican que la capacidad de los
neutrófilos es reducida cuando estas células actúan en presencia de altas concentraciones de cuerpos
cetónicos. De otra parte, (Hoeben et al., 1997), hallaron en un estudio in vitro que la cetosis induce
una supresión de la actividad de los PMN por una inhibición del anión superóxido, fundamental para
la fagocitosis. Las interleuquinas o quimoquinas (IL) son proteínas que favorecen la migración de los
neutrófilos a los sitios de inflamación, en especial la IL8 parece ser uno de los principales mediadores
de la inflamación y migración de leucocitos a la glándula mamaria en los procesos de mastitis
(McClenahan et al., 2006).
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d.1 Planteamiento de la pregunta o problema de investigación y su justificación (máximo
1000 palabras).
La producción de leche en Colombia ha aumentado significativamente en las últimas dos décadas,
alcanzando una producción de 5550 millones de litros en el 2010, la que se incrementó 0,2% en el
2011 (Suárez et al., 2012), lo que representa el 25% del PIB pecuario, y el 10,2% del PIB
agropecuario.
El documento Conpes 3576 de 2010 indica que el consumo de leche per cápita en Colombia está por
debajo de la recomendación de la Organización Mundial de la Salud, 30 litros por habitante por año,
pese a estar por encima del consumo en otros países en desarrollo. Sin embargo, el consumo en los
estratos socio-económicos 1, 2 y 3 no supera los 35 litros per cápita, el que está asociado en muchos
casos a la adquisición de leche cruda con una baja calidad nutricional y de alto riesgo sanitario.
La mastitis bovina es la enfermedad más costosa en producción bovina y representa grandes pérdidas a
la industria a nivel mundial , como también considerables alteraciones en el bienestar de las vacas
afectadas (Cha et al., 2011). Cuando se habla de mastitis, concentramos la atención en un individuo
que padece la enfermedad y los costos de tratamiento y las pérdidas directas e indirectas que la
enfermedad genera. No obstante, el riesgo que la enfermedad tiene en el resto del rebaño a partir de un
individuo infectado tiene un impacto potencialmente alto por la posible transmisión de la enfermedad
a otros individuos. El costo de la mastitis en otros países se ha calculado que fluctúa entre los 95 y los
211 dólares (Bar et al., 2008; Cha et al., 2011), estos costos están representados en pérdidas de leche,
medicamentos, asistencia médica y por un aumento en las pérdidas futuras en la producción de leche,
el porcentaje de sacrificio y un mayor número de hembras de reemplazo.
La respuesta inflamatoria de la glándula mamaria depende del tipo de bacteria involucrada y así
mismo el efecto, donde hay agentes patógenos que tienen un mayor impacto en la salud de la vaca, en
la producción y en la rentabilidad del hato (Bannerman, 2009). El S. agalactiae es un agente que
comúnmente da cuadros de mastitis subclínica, o también clínica de leve a moderada. La infección
subclínica va acompañada de un recuento de células somáticas elevado pero sin anormalidades en la
leche. En general, las vacas infectadas con S. agalactiae presentan más de un cuarto infectado y es
generalmente descrita como contagiosa. La infección se disemina desde las vacas infectadas a las
sanas durante el ordeño a través de la máquina de ordeño, las manos del ordeñador y los materiales
que se utilizan para limpiar los pezones, como las toallas, si se utiliza la misma en más de una vaca.
Recientemente, en un estudio en Colombia involucrando una selección aleatoria de tanques de
enfriamiento de leche, se encontró que un 42% de los tanques eran positivos a la presencia de Strep.
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agalactiae, siendo variable la prevalencia según la zona geográfica del país (Keefe et al., 2010).
Situación que no ha variado según lo reportado en otros estudios (Calderón et al., 2011; Calderón and
Rodríguez, 2008).
Con la implementación de este proyecto se generara una mayor conocimiento de la enfermedad con el
fin de establecer los programas de control, prevención y erradicación de este patógeno para garantiza
un producto de mejor calidad, lo que se traduce finalmente en un mayor desarrollo económico para la
región y un mejoramiento de la calidad de vida de los consumidores.
d.2 Marco Teórico (máximo 2000 palabras)
De acuerdo a antecedentes de literatura, la cetosis subclínica en bovinos tiene una prevalencia
que fluctúa entre el 8 y 34% en vacas de leche% (Dohoo and Martin, 1984; Duffield et al., 1997),
y en nuestro medio se ha observado una prevalencia del 12% (Datos sin publicar), sin
embargo, no se han cuantificado las pérdidas económicas que genera esta enfermedad y los
efectos que tiene en la predisposición para la presentación de otras enfermedades como la
mastitis y alteraciones reproductivas.
Como se describió anteriormente, la mastitis es la principal causa de pérdidas económicas en
ganado de leche y conociendo que es una enfermedad multicausal y que son muchos los
factores que predisponen a ella, así como, el efecto que tiene en la salud pública, donde
alrededor del 50% de leche que se comercializa en nuestro país es a través del comercio
informal; se hace necesario conocer la dinámica de las infecciones y cuáles son los patógenos
más prevalentes y que generan mayores riesgos en la salud pública. De acuerdo a estudios
previos en nuestro medio existe una alta prevalencia de Streptococcus agalactiae y éste no
solo constituye un problema para la industria lechera del país, causando pérdidas por baja
producción de leche, bajo rendimiento en los subproductos lácteos y baja calidad de los
derivados de la leche, sino que también afecta la salud pública al ser principal agente causal
de muertes neonatales en humanos (Ismail et al., 2011).
En algunos países, como Dinamarca, la prevalencia de infecciones intramamarias en bovinos
causadas por este patógeno se logró disminuir hasta un 2% gracias a esfuerzos de control
establecidos por el gobierno (Andersen et al., 2003). Sin embargo, desde el año 2000 la
prevalencia ha venido incrementándose progresivamente, hasta el punto que en el 2009 se
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reportó un 28% de hatos lecheros positivos para esta bacteria, incluyendo también su
positividad para cepas de origen humano (Katholm and Rattenborg, 2009). Se desconoce el
cómo y el por qué reemergió este patógeno con una alta prevalencia, lo que puede
relacionarse con cambios en la virulencia o adaptabilidad (Zadoks et al., 2011)
Por todo lo anterior, esta propuesta de investigación pretende conocer la dinámica de algunas
citoquinas inflamatorias y proteínas de fase aguda en vacas bajo condiciones de cetosis
subclínica y con mastitis inducida con Streptococcus agalactiae. Para implementar programas
de control y erradicación de esta bacteria en nuestro medio.
d.3 Objetivos (máximo 500 palabras)
Objetivo general
Evaluar la respuesta inflamatoria de la glándula mamaria mediante el análisis de citoquinas
inflamatorias específicas y proteínas de fase aguda en vacas infectadas con Strep. agalactiae bajo
condiciones de cetosis subclínica.
Objetivos específicos
Estimar la concentración de albúmina, globulinas, fibrinógeno y proteínas totales en vacas infectadas
con Strep. agalactiae; como también determinar la relación neutrófilos – linfocitos en sangre.
Cuantificar la actividad de la IL8, TNFα en leche de cuartos infectados y no infectados con Strep.
agalactiae.
Analizar los cambios de las proteínas de fase aguda (AAS y Haptoglobina) y la proteína lactoferrina
en leche de cuartos sanos e infectados con Strep. agalactiae.
Determinar la actividad de las integrinas CD 14 y 11B mediante citometría en las células somáticas de
la leche de cuartos sanos e infectados con Strep. agalactiae.
d.4 Metodología propuesta (máximo 1000 palabras)
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Con el fin de evaluar la respuesta inflamatoria a nivel de glándula mamaria, a 5 vacas al inicio de la
lactancia se les evaluará la presencia de la cetosis entre la segunda y tercera semana, la cetosis será
medida a través del método cuantitativo Keto-Stix®. Al momento de encontrar a cada una de las vacas
con la cetosis se les hará una determinación de RCS y cultivo de cada uno de los cuartos para conocer
el estado de la sanidad mamaria. Además, a cada vaca se le realizará un hemoleucograma para
determinar el recuento leucocitario. Inmediatamente la glándula mamaria de cada vaca se declare
clínicamente sana se procederá a infectar dos cuartos de cada vaca con Strep. agalactiae. Así mismo,
se realizaran cultivos bacteriológicos durante los cinco días del experimento para establecer la
presencia de la bacteria posterior a la inoculación experimental. A partir del sexto día las vacas serán
tratadas en cada uno de los cuartos mediante terapia extendida con un producto comercial cuyo
proveedor será MSD®.
Durante los cinco días siguientes a la inoculación, se procederá a tomar temperatura dos veces al día y
se tomará una muestra de sangre diariamente para evaluar los posibles cambios hematológicos como
son: albúmina, globulinas, fibrinógeno y proteínas totales. También se hará un hemoleucograma
completo incluyendo un recuento diferencial de los leucocitos. A nivel de cada cuarto se tomará una
muestra de leche de los cuartos infectados y sanos y se procederá a determinar el RCS y se hará una
caracterización y diferenciación de estas células mediante el conteo de 100 células en tres campos.
Posteriormente, estas células se fijaran y se congelaran a <80°C para mediante citometría de flujo
determinar la CD14 y la integrina 11B.
Para la determinación de las citoquinas en leche, inmediatamente obtenida la muestra se procederá a
centrifugarla a 1500 g por 30 minutos a 4°C. La grasa será removida y el supernadante se almacenará
a < 20° C. La concentración de las IL8 y TNFα y las proteínas de fase aguda AAS y Haptoglobina se
cuantificarán usando un kit de ELISA (R&D Systems®) para bovinos de acuerdo a las instrucciones
del fabricante.
Para el análisis de citometría las células somáticas se resuspenderán en una solución balanceada de sal
y suplementada con 10mM de azida de sodio y 1% (w/v) BSA. Los anticuerpos monoclonales que se
usaran son CD14 y 11B integrina anti bovino, utilizando los anticuerpos fluorescentes (Serotec®,
Oxford, UK).
Para el análisis de los resultados se hará estadística descriptiva, para garantizar la distribución normal
del RCS se transformaran al logaritmo natural. Las asociaciones entre las diferentes variables y los
resultados de interés serán evaluados mediante regresión lineal mixta en el programa Stata 13.1 (Stata
Corp. College Station, Texas, USA).
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d.5 Resultados esperados5
Mediante este estudio se describirá desde el punto de vista biológico la respuesta inmune de la
glándula mamaria a una bacteria que tiene una alta prevalencia en nuestro medio y bajo condiciones de
cetosis que es una enfermedad metabólica que afecta a muchas vacas al inicio de la lactancia y que se
describe como una patología que induce inmunosupresión. Además, este trabajo sería un soporte
importante para buscar la prevención y erradicación en nuestro medio ya que se conocerá como es la
dinámica de la infección bajo nuestras condiciones, lo que permitirá a los profesionales de campo e
investigadores enfrentar este problema y generar nuevos estudios en el área de la salud pública y
epidemiología veterinaria.
Los resultados de este estudio se divulgados mediante una publicación de carácter internacional y
además serán enviados a un evento internacional como el National Mastitis Council que se celebra
cada año. De otra parte, estos resultados serán un insumo importante para entregarlos a los estudiantes
de pre y postgrados que estén en el área.
d.6 Impactos esperados a partir del uso de los resultados (máximo 1 página)
Conocedores de la alta prevalencia que tiene el Strep. agalactiae como una causa de mastitis a
nivel nacional y el efecto que tienen las enfermedades metabólicas, como la cetosis, al inicio de la
lactancia en vacas de leche; con la ejecución de este proyecto se busca caracterizar el patrón de
inflamación que genera esta bacteria en vacas sometidas a cetosis subclínica. Así mismo, se
implementaran técnicas asociadas a la biología molecular que permitan continuar con otros trabajos
en el campo de la sanidad mamaria y las enfermedades metabólicas.
Con este estudio se promueve nuevo conocimiento de alto impacto a nivel regional, nacional e
internacional, además, se generarán nuevas hipótesis que permitirán continuar en esta misma línea
de investigación y fortalecernos en este campo de la Medicina Veterinaria y adoptar metodologías
diagnósticas de alto impacto científico en nuestra Universidad. En este mismo sentido, es
importante indicar el fortalecimiento de las relaciones de nuestra Universidad con otras
instituciones de alto nivel académico como son la Universidad Tecnológica de Pereira y la
Universidad de Prince Edwards de Canadá, donde con la calidad académica de los coautores de
este estudio se garantiza la ejecución del proyecto. De otra parte, con este estudio se favorecerá la
formación de un estudiante de pregrado.
5 Serán reportados en los informes técnicos de avance (anual) o final, de acuerdo al formato para tal fin,
disponible en la página web de la Universidad en el link de investigaciones
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También es de resaltar que la apertura, globalización e internacionalización de la economía
implican cambiar las estrategias competitivas de las empresas. Los productos lácteos colombianos
deben compararse en cuanto a su calidad con los producidos en otros países donde se ha legislado
para maximizar la calidad de la leche cruda; no obstante, para hacer esta comparación se requiere
fortalecer la competitividad de los productos nacionales mediante planes de prevención y
aseguramiento de la calidad en sanidad mamaria.
d.7 Cronograma de actividades: Relación de actividades a realizar en función del tiempo
(meses), en el periodo de ejecución del proyecto.
Año - bimestre 2014 2015
3 4 5 6 1 2 3
Presentación del proyecto X
Selección de los animales y el predios
objeto del trabajo X
Recolección de muestras X
Análisis de muestras X X X
Tabulación de datos X X
Análisis estadístico X
Informe de avance X
Informe final del proyecto X
Presentación a congresos X
Publicaciones X
d.8. Compromisos
Relacione los compromisos que van a adquirir con el desarrollo del proyecto en términos de
informes y productos.
Los autores de este proyecto nos comprometemos a entregar un informe parcial de acuerdo con el
cronograma de actividades y un informe final donde estará consolidando todo el trabajo ejecutado en
el proyecto. De otra parte, nos comprometemos a realizar una publicación en una revista clasificada
como A1 de acuerdo a Colciencias.
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Así mismo, hacemos el compromiso de entregar al final del proceso de investigación un documento,
en el formato establecido por la Vicerrectoría de investigaciones donde se indicará el impacto que
tendrá esta investigación desde el punto de vista aplicado. Así mismo, se conocerán aspectos
moleculares implicados en la inmunología de la glándula mamaria que aportaran antecedentes que
permitirán en un futuro disminuir la prevalencia de mastitis por el patógeno objeto de estudio y así
entregar un producto de mejor calidad al consumidor final y disminuir los costos de producción en los
hatos dedicados a la producción de leche en nuestra región.
Desde el punto de vista académico, los conocimientos generados se divulgaran en diferentes espacios
académicos con estudiantes de pre y posgrado, como también a productores de la región.
d.9. Bibliografía
Relacione únicamente la bibliografía referida en el texto, ya sea en forma de pie de página o como
ítem independiente.
d.10 Presupuesto
Completar el anexo 1, sólo en los recuadros claros, los sombreados representan que los rubros no
son permitidos.
PRESUPUESTO (RUBROS Y FUENTES)
AÑO 1 (debe hacerse cada año por separado)
RUBROS*
FUENTES
TOTAL
UNIVERSIDAD FINANCIACIÓN EXTERNA
RECURRENTE6
Recursos
solicitados en
esta
convocatoria
RECURRENTE
RECURSOS
FRESCOS
1. SERVICIOS
PERSONALES
1.1 Investigadores
Néstor Alonso Villa 6.690.360 6.690.360
Alejandro Ceballlos 1.962.192 1.962.192
Juan Carlos Rodríguez 4.890.000 4.890.000
Juan Carlos Sepúlveda 3.600.000 3.600.000
6 Costos recurrentes son los rubros existentes en cada institución o empresa
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RUBROS*
FUENTES
TOTAL
UNIVERSIDAD FINANCIACIÓN EXTERNA
RECURRENTE6
Recursos
solicitados en
esta
convocatoria
RECURRENTE
RECURSOS
FRESCOS
2.1 Servicios técnicos
2.1.1 Exámenes
2.1.2 Pruebas
2.2 Materiales e insumos
2.2.1 De campo
Tratamientos Antimastiticos
1.100.000
2.2.2 De oficina (papel, tinta,
fotocopias)
2.2.3 De laboratorio
Kits de Elisa para
interleuquinas y citometría
9.150.000 9.150.000
2.3 Apoyo económico para
gastos de viaje y
transporte
2.3.1 Pasaje terrestres
2.3.2 Gastos de viaje
(Gasolina y Peaje)
2.3.3 Auxilio para viaje
2.3.4 Apoyo económico para
alojamiento y
alimentación7
2.4 Equipos
Elisa y Equipo de citometría
5.000.000
5.000.000
2.4.1 Alquiler
3. INVERSIÓN
3.1 Equipo requerido
3.1.1 Para comprar
3.1.2 Propio
3.2 Material bibliográfico
3.2.1 Para comprar
3.3 Software
3.3.1 Para comprar
3.3.2 Propio
4. ADMINISTRACIÓN 20%
TOTAL 8.652.552 9.150.000 13.490.000 1.100.000 32.392.552
7 Se recomienda que este valor esté por debajo de la liquidación de viáticos estipulada en el Acuerdo No. 04 del
Consejo Superior del 15 de febrero de 2005
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RUBROS*
FUENTES
TOTAL
UNIVERSIDAD FINANCIACIÓN EXTERNA
RECURRENTE6
Recursos
solicitados en
esta
convocatoria
RECURRENTE
RECURSOS
FRESCOS
PORCENTAJE DE FUENTES 26.7 28.2 41.6 3.4 100
4. Finalización del proyecto
La finalización del proyecto, está determinada por la presentación de (i) un informe final, y (ii)
acreditación de envío de manuscrito para publicación a revista indexada (mínimo en categoría B) y
recibo del mismo por el respectivo editor, o por la prueba de repositorio de artículo científico en
concordancia con la política editorial de la revista. El segundo requisito puede ser suplido por una obra
de creación (para los proyectos en artes) o por un producto de apropiación (sometimiento de registro
de patente, prototipo de un producto tecnológico, propuesta de documento de política pública
sometido a organismos gubernamentales, o propuesta madura de generación de empresa tipo spin-off).
5. Documentación complementaria para inscripción del proyecto
Si el proyecto es aprobado, los proponentes deberán diligenciar la ficha de inscripción del proyecto,
la ficha de inscripción de cada integrante y la carta de compromiso firmada por todos los autores (ver
formatos para inscripción de proyectos, CÓDIGO:
R-1108-P-IN-77, del procedimiento P-IN-77 del SIG).
NOTA IMPORTANTE:
Los investigadores firmarán con la Universidad de Caldas un acta de propiedad intelectual, una vez
analizada la necesidad, en desarrollo de la política aprobada por el Consejo Superior. Igualmente, el
proyecto estará supeditado a la aprobación del Comité de Ética en Investigación o del Comité de Ética
para experimentación con animales. Los proyectos que involucren colecta de especímenes,
manipulación genética, o trabajo con comunidades étnicas requieren permiso especial de las
autoridades ambientales competentes.
6. Anexos
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Anexo 1: Presupuesto
Anexo 2: Ficha del proyecto (diligenciado por directores de departamento o institutos). Se encuentra
en el paso 7 del flujograma del procedimiento P-IN-77 del SIG.
Anexo 1
PRESUPUESTO (RUBROS Y FUENTES)
DISCRIMINADO AÑO POR AÑO
Instrucciones
1. Diligenciar el presupuesto del archivo Excel “presupuesto_estandar_proyectos” (anexo 1).,
empezando por digitar el nombre del proyecto en la primera pestaña. Acceder solamente a las
pestañas “Año_1”, “Año_2”, y “Año_3”.
2. Usar solamente las celdas en blanco que sean requeridas. Las celdas sombreadas están
programadas para llenarse automáticamente
3. Imprimir el cuadro de la pestaña “presupuesto total” e incluirlo en la versión física del proyecto.
4. Grabar el archivo diligenciado en el CD que se entrega con el proyecto, usando un nombre
distintivo del proyecto en cuestión.
Solamente se aprobará compra de material bibliográfico que se demuestre que es imprescindible para
el proyecto específico, y debe constituirse en material de apoyo INSTITUCIONAL de uso público
para la comunidad académica de la Universidad de Caldas. Finalizada la investigación, el material
bibliográfico debe transferirse a la Biblioteca. Además, solamente se aprobará compra de software que
se demuestre que es una herramienta imprescindible para el desarrollo del proyecto.
Los docentes que requieran asesoría para la elaboración del proyecto, pueden solicitarla a la
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DESGLOSE DEL PRESUPUESTO
Descripción de los gastos de personal
Nombre del
Investigador /
Experto/
Auxiliar/estudiante
Formación
Académica
Función
dentro en del
proyecto
Institución o
Empresa
Tipo de
vinculación
DEDICACIÓ
N
Horas/semana
Fuentes
Total Recursos
VIP en
efectivo
Especie8
Néstor Alonso Villa MVZ, MSc Inv. principal U. de Caldas TC 5 6.690.360
Alejandro Ceballos MVZ, MSc. PhD Coinvestigador U. de Caldas TC 2 1.962.192
Juan Carlos
Rodríguez MVZ, MSc. PhD Coinvestigador Prince Edward TC 1
4.890.000
Juan Carlos
Sepúlveda Med. Dr Coinvestigador UTP TC 5
3.600.000
Totales 17.142.552
8 Ya disponibles en la institución
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Descripción de equipos a adquirir
Equipos Justificación Fuentes Otras fuentes
Total Recursos VIP en efectivo
Equipos UTP Lector de Elisa y
Totales
Descripción de software a adquirir
Software Justificación Fuentes Otras fuentes
Total Recursos VIP en efectivo
Descripción y justificación de viajes
Lugar /No. de viajes Justificación Pasajes ($) Estadía ($) Total días Total
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Totales
Valoración de salidas de campo (complete un cuadro por salida o pondere el total de las salidas)
Lugar de la Salida :
Justificación:
Concepto $ / día No. de Días TOTAL
Alimentación
Alojamiento
Transporte
TOTAL
Material Bibliográfico (en miles de $)
Ítem Justificación Valor
TOTAL
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BIBLIOGRAFIA
Åkerstedt, M., Waller, K.P., Larsen, L.B., Forsbäck, L., Sternesjö, Å., 2008. Relationship
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