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Semana Sartorius 2017 República Dominicana
Microbiología
Enrique Alvarez
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Clasificación de los Microorganismos
3 Membrana, beneficios.
Identificación de los Microorganismos
Legislaciones Regulatorias
1
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Preguntas
5 Referentes del Competidor
Contenido
1
4
4
Microorganisms
Viruses
Fungi
Bacteria
Molds Yeasts
Microorganismos
Organismos microscópicos unicelulares
Algas más de 100 micras
Protozoarios de 50 a 100 micras
Hongos de 1 a 40 micras
Actinomycetos de 0.8 a 10 micras
Bacterias de 0.45 a 1.0 micras
Rickettsias de 0.45 a 0.8 micras
Virus menos de una micra.
una micra = 1/1000 mm
Bacterias Verdaderas
Es el más amplio grupo de microrganismos del tipo vegetal, comprende las bacterias más numerosas y mejor conocidas.
Se clasifican por su forma:
Cocos
Bacilos
Espirilos
Tinción de Gram
Un frotis microbiano se somete a diferentes colorantes:
Cristal violeta
Solución de Yodo
Alcohol-Acido
Safranina
Bacterias Gram (+) Azules
Bacterias Gram (-) Rojas
Tinción de Gram
Soluciones aplicadas Grampositivas Gramnegativas
Cristal violeta Las bacterias se tiñen
en violeta
Las bacterias se tiñen
en violeta
Solución yodo
yodurada (lugol)
Complejo CV-I dentro
de la bacteria
Complejo CV-I dentro
de la bacteria
Alcohol Deshidratación de la
pared celular de la
bacteria
Extracción de lípidos,
aumenta la porosidad
Safranina Las bacterias
permanecen violetas
Las bacterias se tiñen
de rojo
Gérmenes tipo Pleuroneumonía
Mycoplasma, parásito filtrable, multiforme, sin paredes rígidas.
Ligeramente mayor en tamaño que los virus.
Son las más pequeñas células conocidas con metabolismo.
Autónomas.
Virus
Único parásito intracelular.
Ultramicroscópicos.
Constan de un centro de ácido nucleico DNA ó RNA dentro de una cubierta proteica.
Parásitos estrictos.
Microorganisms Size Reproduction
VIRUSES Ø 0.01 - 0.5 µm in host cellsFUNGI
• Molds Ø 3.0 - 5.0 µm Spore formation• Yeasts Ø 3.0 - 12.0 µm Budding
BACTERIA Ø 0.1 - 1.0 µm Fissionlength 0.4 - 5.0 µm
YeastVirus
1 µm
Bacteria
Células de MicroorganismosPROCARIOTICOS
Núcleo que no tiene membrana nuclear
Células primitivas.
Bacterias
Algas Azul Verde.
EUCARIOTICOS
Núcleo definido con membrana nuclear
Células verdaderas
Protozoarios
Hongos
Grupos de Micoorganismos
Saprófitos: Vida libre, se alimentan de materia no viva, el resultado de su crecimiento es la putrefacción o descomposición de la materia orgánica.
Parásitos: Viven dentro de otros organismos (plantas o animales) su alimentación se deriva más o menos directamente de la materia viva.
Patógenos
No Patógenos
Desarrollo de los Microorganismos.
En función de :
Parámetros fisicoquímicos del medio.
pH
Actividad de agua
Potencial de oxido-reducción
Concentración de sales ( presión osmótica)
Propio potencial genético.
Oxígeno del aire
Temperatura
Humedad relativa.
Moisture
Aeration
Nutrients
Temperature
Inhibitors
pH
Condiciones de Crecimiento
pH Bacterias: Pueden desarrollarse entre pH4.5 y 9.0
óptimo entre 6.5 y 7.5
Bacterias lácticas pH inferior a 3.5
Levaduras:Pueden desarrollarse entre pH 2.0 y 9.0 óptimo entre 4 y 6
Mohos:Pueden desarrollase entre pH 2.0 y 11.0
Actividad de agua
El agua es utilizada para el crecimiento de los microorganismos de dos formas:
Como solvente de nutrientes, lo que permite su transporte y disponibilidad en el citoplasma.
Como agente químico que forma parte de las reacciones hidrolíticas necesarias para la síntesis microbiana y para las reacciones energéticas.
Potencial redox y Oxígeno
Los microorganismos se clasifican en función de sus exigencias de oxígeno y/o en la toxicidad del mismo.
Aerobios estrictos.
Aerobios facultativos.
Anaerobios estrictos.
Microaerófilos.
Temperatura
La mayor parte de los microorganismos proliferan a temperaturas medias superiores o iguales a 20 ° C, pero existen algunos que son capaces de crecer mientras las temperaturas estén comprendidas entre –18 y 90 ° C
Psicrótrofos y psicrófilos: desarrollan a 0 ° C
Mesófilos: entre 20 y 45 ° C y óptimo 37 ° C
Termófilos: entre 45 y 65 ° C y óptimo 55° C
100
80
60
40
20
0
thermophilic
mesophilic
psychrophilic
Vegetativeform
Bacterialspore
Temperature
Presión Osmótica
Osmosis es la difusión de productos a través de una membrana semipermeable que separa dos soluciones de diferente concentración.
Plasmólisis: Deshidratación de las células
Plasmóptisis ó turgescencia: La célula revienta por gran cantidad de agua dentro.
Extracts
Minerals
Nutrient medium
Peptones
Casein
Soy
MeatYeast
Malt
Water
Sugar
Selectivity of nutrient media
Endo Wort
pH 7,4 4,8
Peptones Meat peptone Casein peptone
Meat peptone
Soymeal peptone
Sugars Lactose Maltose
Dextrin
Extracts - Malt extract
Inhibitors Sulfite -
Fuchsin
Incubation 36°C, 24 h 25°C, 2-3 days
fineurg !
E.coli +
coliforms
Yeasts +
Molds
Microorganismos Indicadores
Reflejan la calidad microbiológica:
Deben estar presentes y deben ser detectables fácilmente.
Su multiplicación y número tienen relación directa negativa con la calidad de fármacos, Alimentos y bebidas.
Deben poderse diferenciar claramente de otros microorganismos.
Se deben poder contar en corto tiempo.
Su crecimiento debe ser independiente de otros componentes de la flora del alimento.
ColiformesEnterobacterias
Escherichia
Salmonella
Shigella
Proteus
Enterococos Streptococcus
OtrasPseudomonas
Lactobacillus
Clostridium
LevadurasCandida
Fuentes de Contaminación
Microbiana
AGUA
AIRE
PRODUCTOEQUIPO
MATERIAS PRIMAS
Trabajadores
y Empleados
Edificios e Instalaciones
Plagas
La Directiva Europea sobre Agua Potable 98/83 / EC
Parámetros microbiológicos para el agua embotellada
Escherichia coli 0 / 250 ml
Enterococci 0 / 250 ml
Pseudomonas aeruginosa 0 / 250 ml
Coliform bacteria 0 / 250 ml
Colony count at 22 °C 100 / ml
Colony count at 36 °C 20 / ml
30 September 2010 Page 2
Todas las pruebas microbiológicas deben realizarse según las normas ISO
Escherichia coli/ coliforms ISO 9308-1 (2014)Enterococci ISO 7899-2 (2000)Pseudomonas aeruginosa DIN EN ISO 16266 (2008)Clostridium perfringens TrinkwV 2001 and ISO 6461-2.2Total Count DIN EN ISO 6222 (1999)Membrane filters ISO 7704 (1985)General methods ISO 8199 (2008)
ISO = The International Organization for Standardization.DIN = Draft International Standards.
Muestreo Bolsa Whirl-Pak®
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—Pre-esterilizada
—Deshechable
—Reduce el tiempo de preparación y la esterilización de recipientes de vidrio
—Disponible con un comprimido de tiosulfato de sodio para neutralizar el cloro
Calidad de la Membrana
Cumple los requerimientos de los Métodos Estándar para la Prueba de Agua y Aguas residuales
Recuperación de bacterias existentes en el agua Coliformes (totales y fecales)
Bacterias totales
Reproducibilidad de lote a lote
Debe retener las bacterias típicas 100% de retencíon de 104 Serratia marcesens
No debe liberar extraíbles bactericidas o bacteriostáticos Inorgánicos -- Na, Ca, Zn, Ag, Pb, Hg, Cu, Cr, P, NH3
Orgánicos -- carbono orgánico total
No debe alterar el medio utilizado para ayudar al crecimiento pH del extracto del filtro
acidez total
Debe estar certificada por el proveedor
MEMBRANA
Membrana de Filtración
Filtre la muestra a través de una membrana de 0.45 o 0.8um
Transfiera la membrana a una caja Petri (con caldo o agar)
Enjuague con 20-25ml de solución amortiguadora estéril
Equipo y consumibles de Microbiología
Dispensador de Membrana Nuevo modelo
Pall
Sartorius 2003 Sartorius 2017
Manifold vs Combisart
“Estándar”
Único embudo acero inoxidable
Electropulido “impide biofilm”
Resisiste esterilización calor seco y
húmedo
• “Convertible”Versatilidad de embudos: Polipropileno Acero inoxidable electropulido Biosart 100 Vidrio 30 ml Vidrio 250 ml
Uso de Microsart en Convisart
Sartorius
Nutrient Pad Sets
Optimiza el flujo de trabajo en el laboratorio
Provee resultados confiables
Esencial para el aseguramiento de calidad
Nutrient Pad Sets
Contenido • Nutrient Pad Sets (NPS) • Aplicaciones en Control Microbiológico de Bebidas: Suaves, Carbonatadas, Agua • Ventajas del producto • NPS vs Competidor
Nutrient Pad Sets
Descripción del producto • Placas de agar deshidratado para Cuenta Límite de Microorganismos detallada en USP Capítulo 61 y EP capítulo 2.6.12 • Empaque aluminizado con ambiente controlado evita deterioro de producto por luz y/ oxígeno Ventajas: Evita la refrigeración previa al uso del medio Fecha de caducidad de hasta 24 meses en condiciones de temperatura ambiente Vigencia superior a placas de agar cuyo tiempo está en el rango de 3 y hasta 9 meses como máximo Abate pérdidas de medios por estar próximos a caducar
Nutrient Pad Sets
Aplicaciones en la Industria de las bebidas
Filtración y Microbiología
Membranas Nitrocelulosa Cuadrícula para análisis
Nutrient Pad Sets
Filtración de:
• Materias primas
• Muestras en interfases de proceso
• Producto terminado
• Muestras de retención
Microsart e Motion Membrane Filters
Manifold
Jeringa Dosificadora
Microsart e Motion Membrane Dispenser
Microsart funnel 100
Presentaciones disponibles• Embudos y base de polipropileno estériles en 5 bolsas selladas• Esterilización mediante óxido de etileno• Complementario con diferentes tipos de membranas tamano de poro y colores• Contiene 60 piezas
Embudo de 100 ml estéril
Ajuste embudo en base
Ranura para muesca 16 A07– 10 --N
Microsart @ filter 100
Presentaciones disponiblesEmbudos y base de polipropileno estériles mediante óxido de etileno en bolsas selladas Integradas distintos tipos de membranas tamano de poro y colores Contiene 60 piezas
Embudo de 100 ml estéril
Membrana
Ajuste embudo en base
Base desechable
Ranura para muesca 16 D01 10—06--BL
Microsart @ filter y Microsart funnel
Ventajas
Ahorra espacio en campana de flujo
Compatible con dispensador 16A08
Menor costo
16 A08
16 A07 10 N
16 A07 10 N
16 D01 10—06--BL
Microsart @ filter 100
Caracteristicas Microsart @ filter
Geometría innovadora ↓ Retencion de líquidos Ajuste perfecto y de fácil remoción
Junta asegura adecuada posición
Fácil remoción y transferencia de membrana soporte adecuado
fácil retiro del embudofácil transferencia al NPS
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¿Qué se prueba?• Agua utilizada en la producción• (Agua purificada, agua para inyección)• Desinfectantes• Bioburden• Materias primas
A qué microorganismos se dirigen?
• Cuenta Viable Total (TVC)• Levaduras y Hongo (TYMC)• Microorganismos especificados• Organismos de potabilidad del agua
Aplicaciones en Farma
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Filter Material Comparison
Membrane Material
Suitablefor
Aqueoussolutions
Suitable foralcoholicsolutions(Disinfectants)
Adsorption Chemical Resistance
(pH)
BacterialGrowth
Cellulose Mixed Ester
XXX - XXX X XXX
Cellulose Acetate XXX XXX X XXX X
PESU XXX X XX XXX XXX
PVDF XXX XXX X XXX X
Nylon XXX XXX XXX ---
1.Soluciones acuosas ~ 95% de las aplicacionesEl éster mixto de celulosa (CN) es más adecuado para la enumeración microbiana y estándar en la industriaSoluciones no acuosas, soluciones alcohólicas como desinfectantes ~ 5% del mercadoCA y PVDF son opciones para Cellulose Mixed Esters
Nutrient Pad Sets
Acorde a legislaciones vigentes Control Microbiológico de productos No estériles
Clave Producto Nombre Propósito
14053 –47----N Endo E.Coli y coliformes
14080 –47----N Schaufus Pottinger Hongos y levaduras
14084–47----N R2A Cuenta total en agua
14062–47----N Suero naranja Bacterias acidófilas
EP USP
2.6.12 Cuenta microbiana 61 Cuenta microbiana
2.6.13 Prueba específica paramicroorganismos
62 Prueba específica paramicroorganismos
Microsart @filter 100
Microsart@ filter OTROS
Mayor área de filtración ↓ 30% área de filtración
Embudos en empaque de 100 piezas Microfil S Embudos en empaque individual
Membrana fácil de remover /remplazar Membrana difícil de remover /remplazar
Microsart @filter fácil visión y manipulación de membranas = Solución fácil y rápida Asegura resultados confiables Seguridad en manejo de muestras
Alternativas de monitoreo
Efectividad de las soluciones Escenario I (continuación)
1. Cliente emplea embudos, membrana de filtración y pinzas
2ª Opción
Beneficios:Ahorra tiempo, horas hombre, provee resultados confiables, ergonomía
Alternativas de monitoreo
Efectividad de las soluciones Escenario I (continuación)
1. Cliente emplea embudos, membrana de filtración y pinzas
3ª Opción
Beneficios:Ahorra tiempo, horas hombre, provee resultados confiables, ergonomía
16414Biosart 100 Adapter (silicone)onto - Sartorius stainless steel base e.g. 16840 or 16841
16424Biosart 100 Adapter (PP, with silicone o-ring)onto- Sartorius stainless steel base1ZU---0002 Microsart
16415Biosart 100 Adapter (PP, with 50 mm Ø)onto - Millipore Microfil
16416Biosart 100 Adapter (PP, with 59 mm Ø )onto - Millipore Milliflex - Whatman AS230 (MBSII)
Biosart 100 Adapter
02. Juli 2014 Seite 1
3 different packaging types are available:
ACK: 48 pzas, estéril empacado individualmente en 1 caja
K : Cada 12 monitores se empacan estéril en una bandeja, 1 caja tiene 4 de estas bandejas.4 bandejas (= 48 monitores)
V--K: 48 Monitores se empacan en 1 caja de cartón, la caja de cartón es sellada con una lámina delgada
Biosart 100 Monitors:
INCUBACIONExaminación inmediata
después del período de
incubación.
Cuenteo de colonias y tomar
nota de los resultados
ExaminarSe denomina unidad formadora de colonia
(UFC) a una célula viva y aislada que se
encuentra en un substrato sólido y en
condiciones ambientales adecuadas y produce
una colonia en un breve lapso de tiempo.
Una UFC también puede corresponder a más de
una célula cuando éstas forman parte de
grupos unidos fuertemente ya que cada grupo
formaría una colonia.
No Se Observa Crecimiento
Muestra con pH extremo
Almacenamiento inadecuado del medio
Manejo inadecuado de la muestra
Medio caducado
Volumen insuficiente del medio
Evaporación del medio durante la incubación
Tiempo insuficiente de incubación
Enjuagar
Refrigerar
Proteger del exceso de calor
Verificar fecha de caducidad
Verificar volúmen = 2 ml
Usar caja petri cerrada herméticamente
Verificar que el tiempo y la temperatura sean los requeridos para el organismo analizado
Razón Solución
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Thank you very much for your
attention!
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