MÉTODO DE ENSAYO PARA LA DETERMINACIÓNCUANTITATIVA DEL FÓSFORO
Método espectrofotométrico del fósfomolibdovanadato
1. ALCANCE: Este método es aplicable a suelos (opcional), roca fosfórica,
fertilizantes o abonos orgánicos e inorgánicos en todas sus presentaciones.
1.1. Principio del método: Determina la cantidad de fósforo proveniente de
todos los compuestos fosfatados, tanto orgánicos como inorgánicos
presentes, reaccionando con el molibdovanadato y formando complejos
coloreados que absorben a una longitud de onda de 400 nm. La
absorbancia de esta solución es proporcional a la concentración de
fósforo presente en la muestra.
2. REACTIVOS NECESARIOS
Ácido clorhídrico (HCl) concentrado 35 % - 37 %
Ácido nítrico (HNO3) concentrado 65 %
Reactivo de Molibdovanadato.
Solución estándar de 2 mg de fósforo/cm3
Solución estándar de trabajo de 0,1 mg de fósforo/cm3.
3. MATERIALES Y EQUIPOS
Matraces aforados 250 y 100 ml
Pipetas aforadas
Papel filtro
Embudos
Equipos de digestión
Espectrofotómetro equipado con celda de 10 nm (1 cm)
Equipo de filtración
Material usual de laboratorio
4. PROCEDIMIENTO
4.1. Preparación de la curva estándar:
Se transfieren alícuotas de la solución estándar de trabajo que contenga 0,5 mg P,
0,8 mg P, 1 mg P y 1,5 mg P en un matraz aforado de 100 cm 3. Se adicionan 20
cm3 de reactivo molibdovanadato a cada uno y se diluye hasta volumen con agua
mezclando bien. Se deja en reposo por 10 minutos para que desarrolle el color,
luego se lee % A a 400 nm contra 100 % T o le que es correspondiente a 0 % de
Absorbancia, tomando como cero el valor de 0,5 mg de estándar. Se prepara la
curva estándar graficando miligramos de P contra absorbancia (%A) en papel
semilogarítmico.
4.2. Determinación:
Se pesa cerca de 1 gramo de muestra y se somete a digestión adicionando 40 cm3
de HCl 1:3 y varias gotas de ácido nítrico HNO3; se lleva hasta ebullición. Se
enfría, se transfiere a un matraz aforado de 250 cm3 y se diluye hasta volumen con
agua. Se filtra y se coloca una alícuota que contenga entre 0,5 mg a 1,5 mg de
fósforo en un matraz aforado de 100 cm3. Se adicionan 20 cm3 de reactivo
molibdovanadato, se diluye hasta volumen con agua y se mezcla bien. Se deja en
reposo por 10 minutos para que desarrolle color y luego se lee % T a 400 nm
contra 100 % T fijada en 0,5 mg de estándar; o se lee la absorbancia, tomando
como cero el valor de 0,5 mg de estándar de la misma forma que en los
estándares de fosfato, ajustando el cero (0) con el estándar de 5 mg. Se lee la
concentración de P en la curva. Cuando se tengan varias series, se cuadra el cero
(0) con el estándar de 5 mg antes de cada lectura.
5. DATOS
Tipo de Muestra: Roca Fosfórica
Número de muestra: 257
M = Peso de muestra = 1,0121 gramos
Fd = Factor de dilución = 250 ml.
Va = Volumen de alícuota = 2,0 ml
Concentración de fosforo (ppm)
Absorbancias (AU)Muestra 257
0,5 0,0000,8 0,2211,0 0,3601,5 0,696
6. CALCULOS
Cálculo de los miligramos de fósforo en la alícuota
Dónde:
m = pendiente
Abs = Absorbancia leída de la muestra.
b = Intercepto
El factor de correlación R debe ser cercano a 1.
m = pendiente = 1,3821
b = Intercepto = 0,4953
R = factor de correlación = 0,9998
Abs = Absorbancia leída de la muestra = 0,198
Reemplazando los datos de la muestra 257 en la formula anterior:
mg de FOSFORO (P) = (m * Abs) + b
mg de FOSFORO (P) = (1,4408 * 0,198) + 0,4900
mg de FOSFORO (P) = 0,6846 = Y
Fórmula para calcular Fósforo Total:
Y = mg de FOSFORO (P) en la Alícuota obtenidos del gráfico.
Fd = Factor de dilución.
M = Peso de muestra
Va = Volumen de alícuota
Luego aplique la formula y reemplace en:
%P= (Y*Fd*100) / (M*Va*1000)
Gráfica: curva de calibración Absorbancia vs. mg de P2O5
IMÁGENES DE LA DETERMINACIÓN DE FOSFORO Deben hacerla según los
calculos.
Podemos observar que entre mayor sea su tramitansia (color mas debil) menor sera su
adsorvancia (color mas intenso) y visceversa permitiendonos inferir que si los contenidos de
fosforo son muy elevados en una muestra cualquiera su adsorvancia sera alta y ligado a esto se
presentara una acumulacion de energia. Es dicer, Cuando una molecula absorve un foton
aumenta su energia interna provocando que sea inestable, ocasionandole que tenga que liberar su
energia sobrante, permitiendole asi regresar a su estado inicial que es mucho mas estable. Se
denomina estado inicial o estado fundamental y su estado mas energetico se conoce como estado
excitado. La absorcion de radiacion conduce a un paso del estado fundamental a excitado
(excitación) y en el contrario llamado (relajacion) presenta una liberacion de energia ya sea en
forma de calor o en forma de radiacion electromagnetica que es la que se le fue aplicada al inicio
del proceso.
http://www.bioquimica.ucv.cl/paginas/central/bioquimica%20clinica/apuntes%20de
%20espectrofotometria.pdf