Objetivo de este seminario
• Repasar las generalidades del sistema inmune
• Conocer las formas de evaluar la respuesta celular in vivo e in vitro.
¿Qué vamos a ver hoy?
In vivo: • Pruebas funcionales
Pruebas para evaluar
la inmunidad celular:
In vitro: • Pruebas funcionales• Pruebas no funcionales
Pruebas in vitro
No Funcionales
Funcionales
Proliferación celular
-por mitógenos
-por antígenos
Citotoxicidad
-ADCC
-CDC
Detección de sustancias liberadas
-Bioensayos
Citometría de Flujo
Inmunofluorescencia
Pruebas in vitro
No Funcionales
Citometría de Flujo
Inmunofluorescencia
UTILIDADES: Caracterizar poblaciones celulares
* Detección de tipos celulares Diagnóstico y clasificación de leucemias y linfomas
* Caracterización fenotípicaEvaluación del pronóstico en cáncer
* Evaluación número total de linfocitos Pronóstico de pacientes con HIV
* Relaciones LT/LB, LT CD4+/ CD8+ Estado inmunitario en pacientes transplantados
Pruebas in vitro
Funcionales
No Funcionales
Citometría de Flujo
Inmunofluorescencia
Funcionalidad de LT: Bioensayos,ELISA,ELISPOT
Detección de sustancias liberadas (Respuesta efectora)
-ADCC (Citotoxicidad mediada por Ac)
Citotoxicidad (Respuesta efectora)
-por antígenosProliferación celular (linfocitaria) (Activación)
¿Cómo se cultiva una célula?
Condiciones esterilidad para evitar contaminaciones con bacterias y hongos fundamentalmente
Proliferación por antígenos
Co-cultivo de Células presentadoras de antígenos (CPA) con LT
Evalúa: Funcionalidad de LT específicos de memoria
contra una antígeno determinado
LINFOCITO T o B
CPA
ANTIGENO
5-7 días
Proliferación de Linfocitos
BIOENSAYO
Evalúa la funcionalidad biológica de una molécula determinadaEjemplos:
• Proliferación inducida por citoquinas (proliferación de LT por IL-2)
• Citotoxicidad de una molécula (TNF-α produce citotoxicidad de células fibroblasticas, L929)
• Funcionalidad de anticuerpos (anti TNF-α inhibe la funcionalidad del TNF- α)
Pruebas para evaluar la inmunidad celular
Pruebas in vivo
Funcionales Intradermo-reacción
Hipersensibilidad Retardada
Intradermo-reacción
Prueba de Mantoux, tuberculina o PPD
Inoculación del Ag
Intradérmico
LT reconoce el Ag y libera
citoquinas que actúan sobre el endotelio
Reclutamiento de macrófagos y
leucocitos INFLAMACION
Evalúa la respuesta celular (activacion de CPS y linfocitos de memoria)
ante el Mycobacterium tuberculosis
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