EVALUACIÓN DE POBLACIONES DE Peronospora variabilis EN LOS
VALLES DE BOLIVIA
Giovanna Plata Rosales, Anna Testen, Paul Backman
Ibarra, 2013
Objetivo
v C a r a c t e r i z a r l a s d i f e r e n t e s poblaciones de Peronospora variabilis con el propósito de comparar su s imi l i tud o su d i fe renc ia para seleccionar el sitio ideal para la evaluación de material resistente.
Materiales y Métodos
v Recolección de foliolos e n f e r m o s d e t r e s departamentos.
v E n v i ó d e m u e s t r a s deshidratadas. v 17 muestras (5 replicas codificadas con las letras A-E)
Datos de los 17 aislamientos de Peronospora variabilis
Código de Muestra Lugar 1 BDM2 Cochabamba 2 BDM3 Cochabamba 3 BDM4 Cochabamba 4 BDM5 Cochabamba 5 BDM6 Cochabamba 6 BDM8 Cochabamba 7 BDM9 Cochabamba 8 BDM10 Cochabamba 9 BDM11 Chuquisaca 10 BDM12 Chuquisaca 11 BDM13 Oruro 12 BDM14 Oruro 13 BDM15 Chuquisaca 14 BDM16 Chuquisaca 15 BDM17 Chuquisaca 16 BDM18 Chuquisaca 17 BDM19 Chuquisaca
Materiales y Métodos
v Ext racc ión de ADN (DNeasy Plant Mini Kit )
v PCR semianidada
v Arrancadores ITS4, ITS6 y el DC6
Materiales y Métodos
Condiciones de reacción de la PCR:
Reactivos Volumen Master Mix 12.5 µl Primer DC6/ITS4 (5µM) ITS6/ITS4
1 µl
Agua libre de nucleasas
5.5 µl
ADN 5.0 µl Volumen total 24.0 µl
Materiales y Métodos Condiciones de ciclaje de la PCR:
Pasos Condiciones Denaturación inicial 95° C por 2 minutos 30 ciclos de: Denaturación 95° C por 20 segundos Hibridación 55° C por 20 segundos Extensión 72° C por 50 segundos Extensión final 72° C por 10 minutos
v Las secuencias obtenidas para los análisis filogéneticos fueron procesadas mediante el ChromasLite (Technelsyum Pty Ltda. v Alineadas con el programa MUSCLE en MEGA5 y revisada manualmente
Reconstrucción filogenética de aislamientos bolivianos de Peronospora variabilis utilizando la región intergénica de los genes ribosomales mediante el método de Maximun Likehood utilizando el programa MEGA 5 utilizando el modelo de sustitución Kimura 2 con distribución gama y un bootstrap de 1000 repeticiones.
Reconstrucción filogenética de aislamientos bolivianos de Peronospora variabilis utilizando el gen citocromo c-oxidasa subunidad 2
v Todos los aislamientos bolivianos corresponden a Peronospora variabilis y reflejan una sola población.
v A pesar de que no se ha detectado diferencia alguna a nivel molecular, bajo condiciones de campo se observan diferencias en la sintomatología las cuales podrían atribuirse a las condiciones ambientales.
v Los materiales generados por el programa de Mejoramiento pueden ser evaluados y seleccionados en cualquiera de los sitios de producción donde se presente el problema.
Conclusiones
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