7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas
1/13
Introduccin: el polimetilmetacrilato (PMMA) es el nico sistema de entrega local de antibiticos aprobado por laMateriales y mtodos: se dise& un estudio in %itro, estandariado, controlado, con el mtodo de difusin agar,Resultados: los antibiticos e%aluados fueron transportados ' liberados por el gel rico en pla$uetas. #e produjo inDiscusin: se demostr in %itro la capacidad $ue tiene el P1P como transportador ' liberador de antibitico. DadoPalabras clave: plasma rico en pla$uetas, agentes antibacterianos, in %itro.71e% +ol 8r 9ra /:5 ;(:)< 2=!>=?
Plasma rico en pla$uetas (P1P) como sistema de entrega
@olumen ; ! Ao. :, Mar)o 2
Plasma rico en plaquetas (PRP) como sistemade entrega local de antibiticos en infeccionesseas:
estudio in vitro
Dr. Julin Camargo! Dra. "atas#a $anegas! Dr. Juan David $%le&! Dr. Juan Carlos 'pe&! Dr. Juan anuelerrera
* Posgrado de Ortopedia y Traumatologa, Universidad El Bosque, Bogot, Colombia.
** nstituto de !en"ti#a $ole#ular Ba#teriana, Universidad El Bosque, Bogot, Colombia.
Corresponden#ia%&r. 'uan $anuel
(errera
Calle )+ o. -B/ O0. )1)+, Edi0i#io El Bosque, Bogot, Colombia.
Tel. 23-)4 35111/6
7uanm8errera9#able.net.#o
:e#8a de re#ep#i;n% < de 7ulio de 511it8out asso#iated systemi# to?i#ity.evert8eless, it is also a #on#ern t8at sometimes P$$= may a#t as a 0oreign body >it8in our body, on#e it8as #ompleted its antibioti# release,
and spe#ially, on#e t8e antibioti# release rate 8as dropped belo> t8erapeuti# levels. Per8aps, sometimes P$$= #ould even a#t as a 0riendly
sur0a#e 0or ba#terial bio0ilm.
et#ods: = standardi@ed #ontrolled invitro study >as designed 0ollo>ing t8e agar di00usion met8od, a##ording to parameters set byClini#al
and Aaboratory tandards nstitute 2CA4 in 511-, in order to determine i0 t8e platelet ri#8 plasma 2PP4 loaded >it8 antibioti# #ould >orD as a
#arrier and as an antibioti# lo#al delivery system, by in8ibiting a Dno>n S. aureus subtype gro>t8.
Results: =ll antibioti#s tested >ere transported and released by t8e PP. e 0ind out a dire#t relations8ip bet>een ba#terial in8ibition 8alos and
antibioti# #on#entration dilutions. =s 8ig8er t8e #on#entration as bigger t8e 8alo. O?a#ilin at )%5 dilution 8ad a ba#terial in8ibition 8alo even
greater t8an t8e sensidis#. T8e ba#terial in8ibition 8alos produ#ed by t8e Fan#omy#in >ere t8e smaller ones. Cipro0lo?a#in s8o>n t8e lo>est
ba#terial in8ibition #apa#ity #ompared to #ontrol.
Discussion: PP 8as t8e ability to per0orm as an antibioti# #arrier as >ell as a lo#al antibioti# delivery system invitro. &ue to t8e 8ete
rogeneous be8avior s8o>n in t8ese di00erent antibioti# trials, it is assumed t8at ea#8 antibioti# 8as its o>n di00usion #apa#ity >8i#8 must be
taDen in #onsideration any time t8e PP >ants to be used as a lo#al antibioti# delivery system.
,e- .ords: plateletri#8 plasma, antiba#terial agents, in vitro.
[Rev Col Or Tra 2012; 26(1): 39-49]
+ntroduccin
$Gltiples ba#terias son #ausantes de in0e##iones mus
#uloesquel"ti#as. El agente pat;geno depende de la
edaddel pa#iente, la va de ino#ula#i;n, las #ir#unstan#ias
en las #uales se produ7o la in0e##i;n y la respuesta
inmune indivi duali@ada de #ada pa#iente. Aosmi#roorganismos que predominan en las in0e##iones de
pr;tesis e implantes, adems de osteomielitis y artritis
s"pti#a, son el Stap!lo"o""us aureusy el Stap!lo"o""us
#oagulasa negativo 2), 54. $u#8as de las ba#terias
impli#adas en la osteomielitis #r;ni#a, parti#ularmente el S.ep#$er%#$#s y algunas #epas de S. aureus& produ#en
un
glu#o#li? que limita la a#tividad de los antibi;ti#osH este
glu#o#li? 8a#e que la ba#teria se ad8iera a #uerpos e?traIos
#omo el polimetilmeta#rilato 2P$$=4 y los implantes metli#os
generando una de las prin#ipales #ausas de resisten#ia
antibi;ti#a y re#urren#ia de la in0e##i;n en un pro#eso que8a
sido denominado J#ompeten#ia por la super0i#ieK.Aa re#omenda#i;n terap"uti#a a#tual para la mayora de las
in0e##iones osteoarti#ulares #onsiste en un desbridamien to
quirGrgi#o de todo el te7ido ne#r;ti#o, aso#iado a una terapia
agresiva #on antibi;ti#os intravenosos por un mnimo de +6
semanas. El obtener una ade#uada respuesta de la in 0e##i;n es
un gran desa0o debido a que las #on#entra#iones altas de
antibi;ti#os en suero llevan a un riesgo de to?i#idad sist"mi#a
generada por dosis altas y mGltiples, adems de la
7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas
3/13
pobre ad8eren#ia al tratamiento por parte de los pa#ientesa
#ausa de los e0e#tos se#undarios del antibi;ti#o.
Para evitar los problemas rela#ionados #on
a##esibilidad, ad8eren#ia al tratamiento y to?i#idad
que produ#en los antibi;ti#os sist"mi#os, se 8a
planteado el uso de sistemas de entrega lo#al deantibi;ti#o. En el tpi#o mi#roambientede una in0e##i;n
osteoarti#ular, que se #ara#teri@a por una @ona de
te7ido avas#ular rodeada por un ambiente #on p(
#ido
e 8ipo?"mi#o, el sitio de la in0e##i;n se #onstituye en
un rea ina##esible, tanto para la respuesta inmune del
8uesped a la in0e##i;n, #omo para el mismo antibi;ti#o.
Aos sistemas de entrega lo#al de antibi;ti#os tienen la#apa#idad yLo 8abilidad para al#an@ar #on#entra#iones
e?tremadamente altas de antibi;ti#os a nivel tisular lo#ali@ado,
sobre todo#uando se #omparan #on el m"todo tradi#ional de
terapia#on antibi;ti#o sist"mi#o, sin presentar el riesgo in8erente
deto?i#idad sist"mi#a aso#iada. Aa seguridad de los sistemas deentrega lo#al de antibi;ti#os se 8a #omprobado en algunos
estudios, in#luso reali@ados en pa#ientes #on altera#i;n de la
0un#i;n renal 24.
Aos di0erentes sistemas de entrega lo#al de antibi;ti#otienen
#omo prin#ipio bsi#o la entrega lo#al del antibi;ti#o
7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas
4/13
> 1e% +ol 8r
en #on#entra#iones altas y la minimi@a#i;n de sus e0e#tos
se#undarios y to?i#idad sist"mi#a. Aa idea de utili@ar #ementode
P$$= #omo una 0orma de antibioti#oterapia lo#al 0ueintrodu#ida
en la literatura por Bu#88ol@ y #ols. en )
7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas
5/13
@olumen ; ! Ao. :, Mar)o >
0ibrina libera las plaquetas #ontenidas en ella, perdi"ndoseas la
#apa#idad osteoindu#tora deseada #on la geli0i#a#i;n del PP.
in embargo, di#8a lisis de 0ibrina podra produ#ir una libera#i;n
antibi;ti#a a demanda por parte del germende a#uerdo #on su
tasa de repli#a#i;n.
El prop;sito del presente estudio es determinar si el gelde
plasma ri#o en plaquetas 2PP4 #argado #on antibi;ti#os
sirve
#omo sistema de transporte y libera#i;n lo#al de losantibi;ti#os
in8ibiendo el #re#imiento in vitro de una #epa #ono#ida de
Stap!lo"o""us aureus.
ateriales - m%todosPara determinar si el gel de PP suplementado #on un
antibi;ti#o 2o?a#ilina, #ipro0lo?a#ina, gentami#ina o van#o
mi#ina4 sirve #omo sistema de transporte y libera#i;n lo#al de
antibi;ti#os, in8ibiendo el #re#imiento in vitro de una #epa
#ono#ida de Stap!lo"o""us aureus, se diseI; un estudio in vitro,
estandari@ado, #ontrolado, #on el m"todo de di0usi;n en agar,
siguiendo los parmetros estable#idos por el Clini#al and
Aaboratory tandards nstitute 2CA4 511- 2-4.
/standari&acin del m%todo de obtencin del plasmarico
en plaquetas
e tomaron 1 ml de sangre total de un donante voluntario
para #ada una de las pruebas, los #uales se re#ole#taron en
tubos de ensayo #on #itrato para prevenir su #oagula#i;nH
inmediatamente despu"s, la sangre total se #entri0ug; a dis
tintas revolu#iones y tiempos y a #ada una de las muestrasse le
8i@o re#uento de plaquetas por m"todo automati@ado =&F=61
2BayerQ4.
/standari&acin del volumen de PRP - de la activacin del
plasma rico en plaquetas
Para lograr obtener un gel de PP que se pudiera manipu
lar y sembrar en los medios de #ultivo se reali@; una prueba#on
6 muestras de 311 Rl de PPH a #ada una se le agreg; un
volumen distinto de CaCl5 al )1 M 2) Rl, 5 Rl, Rl, 3 Rl, - Rl, )3
Rl4 y se estable#i; el tiempo y las #ara#tersti#as del#ogulo que
se 0ormaba.
Diluciones de los antibiticosPara determinar el volumen de antibi;ti#o ne#esario para
lograr las di0erentes #on#entra#iones se tuvo en #uenta el vo
lumen de #ada muestra de PP ms el volumen del a#tivador
2351 Rl4 y )1 dilu#iones seriadas en base dos 2de la dilu#i;n de
5 RgLml 8asta la dilu#i;n de 1,16 RgLml4 preparadas apartir de
una solu#i;n sto"' de )1 111 RgLml.
(e&cla del PRP con el activador - el antibitico para la
obtencin del gel
En una pla#a de 5+ po@os se me@#laron +
7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas
6/13
@olumen ; ! Ao. :, Mar)o >2
9abla . 1esultados obtenidos con %ancomicina.
a :. +oncentraciones de pla$uetas obtenidas con diferentes tiempos ' %elocidades de centrifugacin.
#idos. e molde; el #ogulo para darle una 0orma es0"ri#aque
generara 8alos de in8ibi#i;n de 0orma #ir#ular que se pudieran
medir, puesto que en algunas pruebas preliminares al sembrar
#ogulos de 0orma irregular los 8alos de in8ibi #i;n no eran
#ir#ulares y no se podan medir. En #ada #a7a se sembr; un
sensidis#o del antibi;ti#o estudiado #omo #ontrolpositivo y una
muestra de PP #on a#tivador sin antibi;ti#o
#omo #ontrolnegativo 20igura 54. Aos #ultivos se in#ubarona - SC durante 5+
8oras para reali@ar la medi#i;n de los8alos de in8ibi#i;n.
Resultados
/standari&acin de la obtencin de PRP
Aa mayor #on#entra#i;n de plaquetas se logr; #on una
#entri0uga#i;n a 111 rpm por 3 minutos obteniendo un
re#uento de plaquetas de -11 111 por mm
2tabla )4.
/standari&acin del volumen - de la activacin del PRP El
volumen de PP #on el que se pudo obtener un #ogulo de
tamaIo ade#uado 0ue de 311 Rl. Con )3 Rl dea#tivador se logr;
una #onsisten#ia ade#uada del #ogulo.
El tiempo para obtener el #ogulo 0ue de 531 minutos.
+n#ibicin del crecimiento bacteriano obtenido con PRP -
vancomicina
e obtuvo in8ibi#i;n del #re#imiento ba#teriano utili@an do
#on#entra#iones de van#omi#ina de / RgLml, )6 RgLml y 5
RgLml. El promedio de los 8alos de #ada #on#entra#i;n 0ue de/,) mm,
7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas
7/13
:B:;:>::/B;>/
+91 ! /,/; /,:C /,C /,C : >B:;2 +91
+oncentracin de %ancomicina ( g4ml)
9abla 2. 1esultados obtenidos con o"acilina.
C
/
:C
:/
C
/+91 ! /,/; /,:C /,C /,C : >B:;2 +91
+oncentracin de o"acilina ( g4ml)
#ura 3. #ota: CTR-: "o,trol ,eat#vo (R s#, a,t##t#"o); CTR?: "o,trol pos#t#vo(se,s#$#s"o)
1 ! 2 so, se,s#$#s"os $e 1 5 $e oa"#l#,a (OO78); se "o,s#$era se,s#le u,
alo %a!or $e 13 %%.
R1 ! R2 so, $#s"os $e plas%a r#"o e, plauetas s#, a,t##t#"o ("o,trol
,eat#vo).
#ura 4. @alos $e #,##"#, pro$u"#$os por va,"o%#"#,a. Se oserva else,s#$#s"o
$e va,"o%#"#,a ("o,trol pos#t#vo) (/)& el R s#, a,t##t#"o("o,trol ,eat#vo) () ! el
R "o, $#=ere,tes "o,"e,tra"#o,es $e a,t##t#"o (C1& C2& C3& C4 ! C9& para las
$#lu"#o,es 32& 16& A& 4 ! 2& respe"t#va%e,te).
+n#ibicin del crecimiento bacteriano obtenido con PRP -o7acilina
Con o?a#ilina se obtuvo in8ibi#i;n del #re#imiento ba#
teriano a partir de la dilu#i;n de 5 RgLml. El promedio del
dimetro del 8alo de in8ibi#i;n obtenido #on la dilu#i;n ms alta
25 RgLml4 0ue superior al 8alo de in8ibi#i;n del sensidis#o 251,
mm #ontra 51 mm4 2)15 M4. Aos 6 #ontroles de PP no
produ7eron in8ibi#i;n del #re#imiento ba#teriano 2tabla 4 20igura34.
#ura 9. #
7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas
8/13
9abla >. 1esultados obtenidos con gentamicina.9abla C. 1esultados obtenidos con cipro6o"acina.
+n#ibicin del crecimiento bacteriano obtenido con PRP -
gentamicina
=l evaluar el PP #on gentami#ina se obtuvo in8ibi#i;n del
#re#imiento ba#teriano desde la dilu#i;n de 5 RgLmlHdilu#iones
menores no produ7eron in8ibi#i;n. Aa in8ibi#i;n produ#ida por la
#on#entra#i;n ms alta 0ue de )6,6 mmH seal#an@; el / M del
dimetro de in8ibi#i;n del sensidis#o
empleado 251 mm4. Aos#ontroles de PP no generaron in8ibi#i;n del #re#imiento
ba#teriano 2tabla +4 20igura 64.
+n#ibicin del crecimiento bacteriano obtenido con PRP -
ciproflo7acina
Con #ipro0lo?a#ina se produ7o in8ibi#i;n #on las #on
#entra#iones de + RgLml, / RgLml, )6 RgLml y 5 RgLmlH el
promedio de la medida del 8alo 0ormado por la dilu#i;n de 5
RgLml 0ue de )/,6 mm, #orrespondiente al 6< M del 8alo
generado por el sensidis#o, el #ual 0ue de 5- mm. inguno delos#ontroles negativos produ7o in8ibi#i;n 2tabla 34 20igura -4.
Dilucin Prueba
Inhibicin (mm)
Prueba 2 Prueba Promedi
32 19 15 16 16,6
16 18 14 12 14,68 16 10 9 11,6
4 15 9 9 11
2 11 7 7 8,3
1 0 0 0 0
0,5 0 0 0 0
0,25 0 0 0 0
0,12 0 0 0 0
0,06 0 0 0 0
D1 20 20 20 20
D2 20 20 20 20
P!P1 0 0 0 0
P!P2 0 0 0 0
Diluci n g/
Prue
b
Inhibicin (mm)
Prueba Promedio
32 14 20 22 18,6
*1 ! 2 so, se,s#$#s"os $e 10 5 $e e,ta%#"#,a (OO78); se "o,s#$era se,s#le u,
alo %a!or $e 12 %%.
R1 ! R2 so, $#s"os $e plas%a r#"o e, plauetas s#, a,t##t#"o ("o,trol
,eat#vo).
* 1 ! 2 so, se,s#$#s"os $e 9 5 $e "#pro=loa"#,a (OO78); se "o,s#$erase,s#le u,
alo %a!or $e 21 %%.
R1 ! R2 so, $#s"os $e plas%a r#"o e, plauetas s#, a,t##t#"o ("o,trol
,eat#vo).
Dimetr
odelhalo(mm)
Dimetrodelhalo(mm)
7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas
9/13
C
/
:C
:/
C
/
+91 ! /,/; /,:C /,C /,C : >B:;2 +91
+oncentracin de gentamicina ( g4ml)
2/
C
/
:C
:/
C
/
+91 ! /,/; /,:C /,C /,C : >B:;2 +91
+oncentracin de cipro6o"acina ( g4ml)
#ura 6. #
7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas
10/13
esterili@a#i;n del tend;n se reali@a #on ;?ido de etileno o#on
radia#i;n gammaH las esterili@adas #on ;?ido de etileno
al#an@an mayor #on#entra#i;n lo#al de antibi;ti#o que las
esterili@adas #on radia#i;n gamma, pero en estas Gltimas, la
degrada#i;n de la espon7a es mayor. Aa gentami#ina es
liberada a mayores #on#entra#iones que las al#an@adas #on el
P$$=. El antibi;ti#o se di0unde desde la espon7a a partirde su
implanta#i;n pero prin#ipalmente desde la degrada#i;n
del#olgeno #ausada por las #olagenasas produ#idas por los
ma#r;0agos. Aa degrada#i;n se #ompleta en / semanas, pero
estudios in vitro demuestran que la libera#i;n del antibi;ti#o
puede #ompletarse en solo +/ 8oras 2))4, motivo por el #ual
todava no se puede re#omendar #omo un sistema de en
trega lo#al de antibi;ti#o para el tratamiento de in0e##iones
ortop"di#as.
El grupo de los polmeros sint"ti#os es un promisorio
sistema de transporte de antibi;ti#os en la pr#ti#a #lni#a. us
prin#ipales venta7as son que es biodegradable y que los
antibi;ti#os que libera tienen una 0arma#o#in"ti#a ade#uada.Tiene dos 0ormas de presenta#i;n% perlas #ompuestas de#ido
polil#ti#oLpoligli#;li#o y dil#ti#o polimeri@ado devarios pesos
mole#ulares. Aos #opolmeros de polil#ti#oy poligli#;li#o se
produ#en #on rela#iones entre los dos#ompuestos que van
de
7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas
11/13
a )111 ve#es la #on#entra#i;n in8ibitoria mnima para los
prin#ipales agentes pat;genos impli#ados en la osteomielitis
#r;ni#aH el pi#o de libera#i;n se presenta en el primer daen
los polmeros de ba7o y mediano peso mole#ular 251 D&y 31 D&,
respe#tivamente4. En los polmeros de )11 D& se observa
libera#i;n sostenida de #ipro0lo?a#ina que al#an@a los 31 das
2+, 3, 6, -, /,
7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas
12/13
#iones se 8an 8e#8o en el #ampo de los implantes dentales y
#iruga ma?ilo0a#ial, #uya primera re0eren#ia data de )alter '=, imon , Ein8orn T=, editores. Ort8opaedi# basi#
s#ien#e. Biology and biome#8ani#s o0 t8e mus#ulosDeletal system. 5. ed.
=meri#an =#ademy o0 Ort8opaedi# urgeonsH 5111. p. 5)-61.5. E8alen 'A, :it@gerald C(, $orrissy CT. = 8istologi#al study o0 a#ute
8ematogenous osteomyelitis 0ollo>ing p8yseal in7uries in rabbits. 'Bone
'oint urg )
7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas
13/13
3. Bu#88ol@ (, Elson =, Engelbre#8t E,
AodenDVmper (, Wttger', iegel =. $anagement o0
deep in0e#tion o0 total 8ip repla#ement.' Bone 'oint
urg )
Top Related