I Conferencia
Nociones Bsicas en Biologa Molecular,
Gentica y Genmica
A. Brayan Campos S. 6to Ao FFBB
Asistente de Investigacin
Clonamiento y expresin de genes por tecnologa del ADN recombinante
CONTENIDO
Tcnicas bsicas empleadas en Biologa Molecular: PCR - Electroforesis
Knockout de protenas transportadoras de membrana del cido pirazinoico en M. smegmatis
EXTRACCIN DE ADN
REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA
ELEMENTOS
Solucin tampn o Buffer de PCR dNTPs Cloruro de Magnesio Cebadores (Primers) ADN polimerasa ADN molde
5 - 10 mM Tris (pH 7 - 8).
La electroforesis es una tcnica bsica en biologa molecular y biotecnologa que consiste en la separacin de macromolculas bajo un campo elctrico, de acuerdo a su tamao, carga y forma.
Nos permite la separacin de molculas cargadas como ADN, ARN y/o protenas.
La matriz ms empleada es la Agarosa.
ELECTROFORESIS
Y para qu amplificar el DNA?
Aplicaciones Biomdicas
Ciencias Forenses
Investigacin
Ciencias de los Alimentos
Oncogenes Enfermedades genticas Paternidad Terapia gnica Genetic
Fingerprinting
Mutagensis dirigda
Clonamiento
Filogenia
Expresin gnica Determinacin de especies animales
Dr. Lawrences talk was spellbinding, and her idea to silence the third chromosome 21 of Down syndrome is perhaps the most brilliant idea Ive heard in my many years of writing about genetics.
Clonamiento y expresin de genes por tecnologa del ADN recombinante
CONTENIDO
Tcnicas bsicas empleadas en Biologa Molecular: PCR - Electroforesis
Knockout de protenas transportadoras de membrana del cido pirazinoico en M. smegmatis
CONOCIMIENTOS EN BIOINFORMTICA
BSQUEDA DE SECUENCIAS Y DISEO
DE PRIMERS
gen pncA
Enzima Pirazinamidasa (PZAsa)
Mecanismo de resistencia a Pirazinamida en Mycobacterium
tuberculosis
Qu clonamos?
*PURIFICACIN DEL AMPLICN
*PURIFICACIN DEL AMPLICN
VECTORIZACIN
DIGESTIN ENZIMTICA Y
LIGACIN
REACCIN DE LIGACIN
TRANSFORMACIN EN CLULAS DE CLONACIN
Verificacin de presencia de inserto (gen pncA) en el vector
TRANSFORMACIN EN CLULAS DE EXPRESIN
INDUCCIN Y EXPRESIN
Clonamiento y expresin de genes por tecnologa del ADN recombinante
CONTENIDO
Tcnicas bsicas empleadas en Biologa Molecular: PCR - Electroforesis
Knockout de protenas transportadoras de membrana del cido pirazinoico en M. smegmatis
El bloqueo de genes (en ingls, gene knockout) es una tcnica gentica que consiste en suprimir la expresin de un gen especfico en un organismo, sustituyendo el gen original en su locus (Posicin en el cromosoma) por una versin modificada del mismo, Esta versin modificada puede ser el mismo gen pero al cual se le han extrado exones, secuencias codificantes, etc. Y por ende la protena que codificaba originalmente ya no sera funcional.
Knockout de protenas transportadoras de membrana del cido pirazinoico en M. smegmatis
Vectores de clonaje
Vectores de expresin
Vectores Integrativos
Shuttle vectors
Vector Suicida
Vector Suicida
Cassetes de Contraseleccin
GRACIAS POR SU GENTIL ATENCIN!!
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