07 de octubre de 2015
HERRAMIENTAS PARA LA CORRECTA IDENTIFICACIÓN DEL GUSANO DE LA MAZORCA
Helicoverpa armigera (HÜBNER)
Reconocimiento morfológico de larvas y adultos de Helicoverpa
armígera (Hübner) comparando con especies parecidas
Morfología externa
Técnica de extracción y montaje de genital
Identificación mediante técnicas moleculares
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
Francisco Urra L. SAG
MORFOLOGÍA DE LARVA DE LEPIDOPTERA
MORFOLOGÍA DE LARVA DE LEPIDOPTERA
Cuerpo dividido en tres regiones : Cabeza, Tórax y Abdomen
- Abdomen: propatas, espiráculos,
setas primarias y secundarias,
quetotaxia.
- Tórax: escudo protorácico, patas,
espiráculo, setas primarias y
secundarias, quetotaxia.
Cabeza: stemmata, palpos labiales,
mandíbulas, antena, quetotaxia.
T1 T2 T3A1 A2 A3 A4 A5
A6 A7A8
A9
A10
T1 T2 A3 o 4A9
A10
cabeza
CABEZA
• sutura epicraneal
• stemmata (no ocelos)
• antena
• mandíbulas
• espinerete
• quetotaxia
CABEZA
• sutura epicraneal
• stemmata (no ocelos)
• antena
• mandíbulas
• espinerete
• quetotaxia
CABEZA
• sutura epicraneal
• stemmata (no ocelos)
• antena
• mandíbulas
• espinerete
• quetotaxia
CABEZA
• sutura epicraneal
• stemmata (no ocelos)
• antena
• mandíbulas
• espinerete
• quetotaxia
CABEZA
• sutura epicraneal
• stemmata (no ocelos)
• antena
• mandíbulas
• espinerete
• quetotaxia
CABEZA
• sutura epicraneal
• stemmata (no ocelos)
• antena
• mandíbulas
• espinerete
• quetotaxia
CABEZA
• sutura epicraneal
• stemmata (no ocelos)
• antena
• mandíbulas
• espinerete
• quetotaxia
CABEZA
• sutura epicraneal
• stemmata (no ocelos)
• antena
• mandíbulas
• espinerete
• quetotaxia
CABEZA
T1 T2 T3A1 A2 A3 A4 A5
A6 A7A8
A9
A10cabeza
TÓRAX
Francisco Urra L. SAG
• escudo protorácico
• patas
• espiráculo
• setas primarias y secundarias
• quetotaxia
T1 T2-3
TÓRAX
T1 T2-3
• escudo protorácico
• patas
• espiráculo
• setas primarias y secundarias
• quetotaxia
TÓRAX
• escudo protorácico
• patas (3 pares)
• espiráculo
• setas primarias y secundarias
• quetotaxia
T1 T2-3
TÓRAX
• escudo protorácico
• patas
• espiráculo (T1)
• setas primarias y secundarias
• quetotaxia
T1 T2-3
TÓRAX
• escudo protorácico
• patas
• espiráculo
• setas primarias y secundarias
• quetotaxia
T1 T2-3
TÓRAX
• escudo protorácico
• patas
• espiráculo
• setas primarias y secundarias
• quetotaxia (mapa setal)
D = dorsal
SD = subdorsal
L = lateral
SV = subventral
V = ventral
TÓRAX
ABDOMEN
T1 T2 T3A1 A2 A3 A4 A5
A6 A7A8
A9
A10
T1 T2 A3 or4A9
A10
head
• espiráculos (segmentos A1-8)
• propatas
• setas primarias y secundarias
• quetotaxia
• escudo anal
ABDOMEN
• espiráculos
• propatas (segmentos A3-6, A10)
• setas primarias y secundarias
• quetotaxia
• escudo anal
Crochets
Planta
ABDOMEN
Crochets – círculos, bandas, fila
ABDOMEN
Propatas en segmentos A3-6, A10.
ABDOMEN
Propatas en menos segmentos
Propatas en A5, A6, A10Noctuidae: Plusiinae Propatas en A6, A10
Geometridae
ABDOMEN
• espiráculos
• propatas
• setas primarias y secundarias
• quetotaxia
• escudo anal
ABDOMEN
Setas primarias
Noctuidae Geometridae Tortricidae
ABDOMEN
Setas secundarias
Erebidae (Arctiinae) Erebidae (Lymantriinae) Lasiocampidae
ABDOMEN
Francisco Urra L. SAG
• espiráculos
• propatas
• setas primarias y secundarias
• quetotaxia (mapa setal)
• escudo anal
ABDOMEN
• espiráculos
• propatas
• setas primarias y secundarias
• quetotaxia (mapa setal)
• escudo anal
D = dorsal
SD = subdorsal
L = lateral
SV = subventral
V = ventral
ABDOMEN
• espiráculos
• propatas
• setas primarias y secundarias
• quetotaxia
• escudo anal
ABDOMEN
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)Reconocimiento morfológico de larvas
La cabeza y el escudo protorácico café, llega amedir hasta 35-40 mm en el último instarlarval
Gusano bellotero Heliothis virescens (Fabricius)
Largo retináculo en lamandíbula.
Pinácula dorsal en A1,A2, y A8 cubierta conmicroespinas.
Gusano bellotero Heliothis virescens (Fabricius)
Helicoverpa armigera (Hübner)
H. armigera. Pinácula dorsal en A1,A2, y A8 cubierta sin microespinas.Y mandíbula sin retináculo.
Gusano bellotero Heliothis virescens (Fabricius)
Mandíbula
Heliothis virescens
Helicoverpa armigera
Helicoverpa armigera Heliothis virescens
Gusano cogollero Spodoptera frugiperda (J. E. Smith)
Sutura epicraneal. “Y” invertida
Octavosegmentoabdominal
Gusano cogollero Spodoptera frugiperda (J. E. Smith)
Helicoverpa armigera (Hübner)
Helicoverpa armigera
Gusano cogollero Spodoptera frugiperda (J. E. Smith)
Spodoptera frugiperda
Gusano elotero Helicoverpa zea (Boddie)
Helicoverpa armigera
Gusano elotero Helicoverpa zea (Boddie)
Setas D de A1-8 inserta en gran chalazas cónica, los de A1, A2 o A8 menudo más grande que el restoColor del cuerpo muy variable, pero por lo general con líneas.La mandíbula presenta unos diente diminutos en el nervio interior y no hay retináculo.
No hay caracteres morfológicos consistentes que pueden ser utilizados para separar las larvas de H. armigera y H. zea.
Gusano elotero Helicoverpa zea (Boddie)
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)Pupa
Spodoptera frugiperda (J. E. Smith)
Mide de 14 a 22 mm de largo y 4.5 a 6.5 mm de ancho. Además presenta dos espinas paralelas en el extremo posterior.
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)Adulto
(A) Helicoverpa armigera (B) Heliothis virescens
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)Adulto
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
Spodoptera frugiperda (J. E. Smith)
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)Adulto
Gusano cogollero Spodoptera frugiperda (J. E. Smith)Adulto
Gusano cogollero Spodoptera frugiperda (J. E. Smith)Adulto
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)Adulto
Gusano elotero Helicoverpa zea (Boddie)
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)Gusano elotero Helicoverpa zea (Boddie)
Genital
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
Gusano elotero Helicoverpa zea (Boddie)
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
Abdomen
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
Helicoverpa armigera (Hübner)
Helicoverpa armigera (Hübner)
Helicoverpa armigera (Hübner)
Edeago
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
Helicoverpa zea (Boddie)
Helicoverpa zea (Boddie) Helicoverpa zea (Boddie)
TÉCNICA DE EXTRACCIÓNY MONTAJE DE GENITAL
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
TÉCNICA DE EXTRACCIÓNY MONTAJE DE GENITAL
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
La técnica extracción de genitalia de palomillas empleada es con base en el Manual deProcedimientos del laboratorio de Entomología y Acarología del CNRF, misma que se ajustaa la utilizada por Gilligan y Epstein, 2012.
Consiste en observar bajo microscopio estereoscópico la muestra (placa con palomillas)seleccionar las palomillas a procesar y con la ayuda de pinzas entomológicas retirarúnicamente el abdomen de los especímenes. En caso de que el abdomen presente residuosde pegamento, colocarlo en una caja de porcelana y agregar tres gotas de gasolina blanca,con la ayuda de un pincel se remueve el pegamento.
Colocar el abdomen en un tubo de ensayo, agregar un mililitro de KOH al 40% y mantenerloen baño maría por 15 minutos. Vaciar el contenido en una cápsula de porcelana, observarbajo microscopio estereoscópico y con la ayuda de agujas entomológicas retirar la genitalia.Realizar un lavado con agua destilada y posteriormente con alcohol al 96%.Consecutivamente en un vidrio de reloj colocar dos gotas de aceite de clavo y dejar reposarla genitalia por 10 minutos. Por último, realizar el montaje en bálsamo de Canadá.
TÉCNICA DE EXTRACCIÓNY MONTAJE DE GENITAL
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
• Métodos de extracción de ADN.
CTAB
Williams
• Muestras recibidas.
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
Etapas básicas para Extracción de ADN
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
REACCIÓN EN CADENA DE LAPOLIMERASA.
Conocida como PCR, es una técnicade biología molecular desarrolladaen 1987 por Kary Mullis, cuyoobjetivo es obtener un gran númerode copias de un fragmento de ADNparticular, partiendo de un mínimo.
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
PROCESO DE PCR
DESNATURALIZACIÓNQue las dos cadenas de ADN se separen y para estose eleva la temperatura.
ANILLAMIENTOPermitir que los cebadores se unan porcomplementariedad al DNA molde; mediante undescenso de la temperatura.
EXTENSIÓNLa enzima polimerasa incorpora nucleótidoscomplementarios.
¿Qué se ha obtenido tras un ciclo de PCR?
Únicamente una copia deun fragmento del ADNmolde
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
COMPONENTES DE LA PCR
ADN Taq polimerasa (sintético) Cebadores o primers (sintéticos) Nucleótidos libres
Estos cuatro componentes son los elementos básicos que es necesario incorporar a lareacción para que se complete una PCR.
94 °C
68-72 °C
55-65 °C
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES
Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
Área de extracción Área de PCR
¡¡GRACIAS!!Biól. Nallely Acevedo Reyes
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