THE MOST BEAUTIFUL EXPERIMENT IN BIOLOGY

Crecen Escherichia coli durante varias generaciones en un medio que contiene amonio (NH4+) como fuente de nitrgeno para la sntesis de DNA y protenas. 14N es el istopo ms comn del nitrgeno, pero utilizan un primer enriquecimiento en un istopo de nitrgeno de alto peso molecular, 15N.

Despus de crecer E. coli durante varias generaciones en un medio que contiene 15NH4+, encuentran que el DNA de las clulas es ms pesado que el normal por haber incorporado los tomos de 15N. La diferencia se detecta mediante extraccin de DNA de las clulas de E. coli y posterior separacin en el tubo en funcin de su densidad mediante centrifugacin.

Seguidamente transfieren las clulas a un medio que contena amonio normal (14NH4+) y se incuban el tiempo de una nica divisin celular. El DNA en esta nueva generacin de clulas es exactamente intermedio en densidad entre ambas generaciones. Esto significa que la mitad de los tomos de nitrgeno en las nuevas hebras de DNA son 14N y la otra mitad 15N pero no indica nada acerca de la unin y disposicin de las molculas.

Incuban las bacterias permitiendo as que se dividan nuevamente en un medio con (14NH4+) y dos distintas densidades de DNA se forman: la mitad de DNA es de densidad normal y la otra mitad de densidad intermedia.

Replicacin semiconservativa del DNA

2 replicacin

Dispersiva

Bacteria transferida a medio que contiene 14N

Centrifugacin de la muestra de DNA tras 40 min

Centrifugacin de la muestra de DNA tras 20 min

Predicciones

Conservativa

1 replicacin

Semiconservativa

Bacteria crecida en medio que contiene 15N

Referencias: Artculo: Meselson M. y Stahl FW. 1958. The replication of DNA in Escherichia coli. Proceedings of the national academy of sciences of the United States of America. 44: 671-682.

Generaciones 0

0.3

0.7

1.0

1.1

1.5

1.9

2.5

3.0

4.1

0 and 1.0 mixed

0 and 4.1 mixed

HH

HL

LL + HL

HH

H

HL LL LL LH

Deteccin de la replicacin

semiconservativa en E. coli mediante

centrifugacion en gradiente de densidad. La

posicin de una banda de DNA depende de su

contenido en 14N y 15N. Despus de 1.0 generacin,

todas las molculas de DNA son hbridos que contienen igual cantidad de 4N y

15N