Departament de Biologia Cel·lular, Fisiologia i Immunologia
Elaboració del Cariotip Humà
Professorat:
Dras. Carme Fuster i Cristina Templado
Tècnics de laboratori:
Àngels Niubó
Javier del Rey
Alumnes:
Cynthia Merino León
Erika van Veen Romero
Silvia Quintana Sánchez
Índex
1. Treball de laboratori
• Preparació de medis
• Cultiu de limfòcits i extracció del cultiu
• Obtenció d’extensions cromosòmiques i de bandes G
• Observació i captura de metafases al microscopi
2. Utilització del programa Karyolab per l’elaboració de cariotips
Preparació de medis
Medi base
Glutamina
Sèrum fetal
Antibiòtics
Heparina
Fitohemaglutinina
(estimula la divisió dels
limfòcits T)
Cultiu de limfòcits i extracció del cultiu
Extracció de sang
Cultiu a 37ºC durant 72h
Aturada de la divisió cel·lular en
metafase amb l’antimitòtic
Colcemid
Trencament de membranes
cel·lulars amb hipotònic
Fixació material cromosòmic amb
Carnoy (metanol i acètic, 3:1)
Obtenció d’extensions cromosòmiques
Centrifugació a 800 rpm
Dilució amb Carnoy
Obtenció preparacions, deixant
caure gotes sobre portaobjectes
Bandes G
Tractament amb 2xSSC a 65º C
durant 1-3 minuts
Rentar amb aigua i assecar a
temperatura ambient
Tinció amb solució de Wright
durant 1- 3 minuts
Esbandir i assecar
En cas de no observar-se bandes
cal tenyir 1 o 2 minuts més amb
solució de Wright
Utilització del programa Karyolab
Elaboració de cariotips
Diagnòstic de les trisomies més
freqüents en la població:
sindromes de Down, Patau,
Edward