Universidad de La Salle Universidad de La Salle
Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle
Medicina Veterinaria Facultad de Ciencias Agropecuarias
2013
Determinación de anticuerpos anti-diarrea viral bovina DVB Determinación de anticuerpos anti-diarrea viral bovina DVB
mediante Elisa competitivo en una población cautiva de venados mediante Elisa competitivo en una población cautiva de venados
cola blanca Odocoileus virginianus en Cundinamarca, Colombia cola blanca Odocoileus virginianus en Cundinamarca, Colombia
Pedro Enrique Navas Suárez Universidad de La Salle, Bogotá
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Citación recomendada Citación recomendada Navas Suárez, P. E. (2013). Determinación de anticuerpos anti-diarrea viral bovina DVB mediante Elisa competitivo en una población cautiva de venados cola blanca Odocoileus virginianus en Cundinamarca, Colombia. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/medicina_veterinaria/18
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UNIVERSIDAD DE LA SALLE
Facultad de Ciencias Agropecuarias
Programa de Medicina Veterinaria
DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS ANTI-DIARREA VIRAL BOVINA (DVB)
MEDIANTE ELISA COMPETITIVO EN UNA POBLACIÓN CAUTIVA DE
VENADOS COLA BLANCA (Odocoileus virginianus) EN CUNDINAMARCA,
COLOMBIA
Trabajo de Grado
Pedro Enrique Navas Suárez
Bogotá, Colombia
2013
UNIVERSIDAD DE LA SALLE
Facultad de Ciencias Agropecuarias
Programa de Medicina Veterinaria
DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS ANTI-DIARREA VIRAL BOVINA VDVB
MEDIANTE ELISA COMPETITIVO EN UNA POBLACIÓN CAUTIVA DE
VENADOS COLA BLANCA (Odocoileus virginianus) EN CUNDINAMARCA,
COLOMBIA
Trabajo de Grado
Pedro Enrique Navas Suárez
Código: 14071103
Director
Diego Soler-Tovar
Co-director
Leonardo Arias Bernal
Bogotá, Colombia
2013
APROBACIÓN
DIRECTOR
_____________________________
Diego Soler-Tovar
CODIRECTOR
_____________________________
Leonardo Arias Bernal
JURADO
_____________________________
Victoria Pereira Bengoa
JURADO
_____________________________
Javier Andrés Jaimes Olaya
DIRECTIVOS
RECTOR Hno. Carlos Gabriel Gómez Restrepo
VICERRECTOR ACADÉMICO Hno. Carlos Carvajal
VICERRECTOR DE PROMOCIÓN Hno. Frank Leonardo Ramos Baquero
Y DESARROLLO HUMANO
VICERRECTOR ADMINISTRATIVO Dr. Eduardo Ángel Reyes
VICERRECTOR DE INVESTIGACIÓN Dr. Luis Fernando Ramírez Hernández
Y TRANSFERENCIA
DECANO DE LA FACULTAD DE Dra. Claudia Aixa Mutis
CIENCIAS AGROPECUARIAS
DIRECTOR PROGRAMA Dr. Juan Fernando Vela
MEDICINA VETERINARIA
COMPROMISO
Los trabajos de grado no deben contener ideas que sean contrarias a la doctrina
católica en asuntos de dogma y moral.
Ni la Universidad, ni el director y codirector, ni los jurados calificadores son
responsables de las ideas expuestas por los graduandos.
AGRADECIMIENTOS
De antemano quiero agradecer a mi padre porque sé que desde el lugar donde se
encuentra me da su apoyo y es una fuente interminable de fortaleza, a mi mamá
Alicia Suárez Contreras por cumplir el sueño que tuve de niño de ser médico
veterinario y trabajar con animales silvestres, a mi hermano por acompañarme y ser
un apoyo incondicional en mi vida. Le agradezco a Catalina Ospina por tantas cosas
buenas que ha traído a mi vida este tiempo que llevamos juntos.
Expreso mi gratificación a la Fundación Nuevos Horizontes por proporcionar las
instalaciones y medios económicos para la realización de este trabajo.
A los doctores Diego Soler-Tovar y Leonardo Arias-Bernal por ser dar su apoyo
profesional y estar disponibles en cada momento de esta investigación, así como
por la paciencia que tuvieron.
A los cuidadores, estudiantes y demás personas que hicieron posible esta
investigación y me ayudaron todo este tiempo.
Al personal del Laboratorio Zoolab Ltda., por apoyar este estudio desde el área de
diagnóstico.
Finalmente, a todos mis amigos y amigas durante estos 6 años de formación, ya
que sin el apoyo de cada uno de ello no sería el profesional que soy.
TABLA DE CONTENIDO
Pág.
RESUMEN 1
ABSTRACT 2
INTRODUCCIÓN 3
1. OBJETIVOS 6
Objetivo general 6
Objetivos específicos 6
2. MARCO TEÓRICO 7
3. MATERIALES Y MÉTODOS 21
3.1 LOCALIZACIÓN 21
3.2 POBLACIÓN Y MUESTRA 22
3.3 VARIABLES 22
3.4 ANÁLISIS ESTADÍSTICO 22
3.5 MÉTODOS Y PROCEDIMIENTOS 23
4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 34
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 67
6. BIBLIOGRAFÍA 69
ANEXOS 83
LISTA DE TABLAS
Pág.
Tabla 1. Variables del estudio 22
Tabla 2. Media de signos de inmovilización y recuperación de la población 35
Tabla 3. Anticuerpos anti-DVB en O. virginianus, Cundinamarca, Colombia 38
Tabla 4. Hallazgos reportados en sistema respiratorio 47
Tabla 5. Hallazgos reportados a la inspección externa 48
Tabla 6. Hallazgos en el sistema digestivo 49
Tabla 7. Hallazgos en el sistema cardiovascular 50
Tabla 8. Hallazgos del sistema endocrino 51
Tabla 9. Hallazgos de sistema urogenital 52
Tabla 10. Hallazgos a nivel músculo esquelético 53
Tabla 11. Hallazgos reportados en el sistema linfático 54
Tabla 12. Relación dosificación de ketamina y xilacina para la inmovilización de
cérvidos 56
LISTA DE FIGURAS
Pág.
Figura 1. Genoma de los pestivirus 8
Figura 2. Transmisión de DVB 10
Figura 3. Inmunidad innata vs adaptativa 14
Figura 4. ELISA directo vs indirecto 17
Figura 5. Localización Zoológico Jaime Duque, acercamiento de encierro de
venados 21
Figura 6. Acercamientos iniciales 24
Figura 7. Acercamientos con contacto directo del entrenador 25
Figura 8. Métodos de aplicación farmacológica a distancia 27
Figura 9. Venopunción mediante jeringa vs Venoject ® 29
Figura 10. Kit SERELISA® 30
Figura 11. Muestras en pocillos y posterior incubación 30
Figura 12. Lavado de pocillos 31
Figura 13. Segundo lavado y conjugado 31
Figura 14. Último lavado y lectura del ensayo 32
Figura 15. Protocolo de manejo clínico de venado coliblanco en cautiverio 34
Figura 16. Promedio del monitoreo de frecuencia cardiaca 36
Figura 17. Promedio del monitoreo de frecuencia respiratoria 36
Figura 18. Promedio del monitoreo de temperatura 36
LISTA DE FIGURAS (Cont.)
Pág.
Figura 19. Mortalidad anual de O. virginianus entre 1991-2013 40
Figura 20. Mortalidad por mes de O. virginianus entre 1991-2013 40
Figura 21. Descripción de los diagnósticos clínicos 41
Figura 22. Representación de los diagnósticos de necropsia 42
Figura 23. Caracterización de los diagnósticos de histopatología 43
Figura 24. Correlación entre los tres diagnósticos 45
Figura 25. Evaluación por sistemas a la necropsia 46
Figura 26. Alteraciones más importantes del sistema respiratorio 47
Figura 27. Dilatación abdominal severa en un macho infante 50
Figura 28. Hepatomegalia, O. virginianus, macho, infante 51
Figura 29. Edema cerebral discreto 53
Figura 30. Identificación de las causas de muerte para la población 55
Figura 31. Posicionamientos post-aplicación IM de XK 58
Figura 32. Principales causas de mortalidad en neonato 64
LISTA DE ANEXOS
Pág.
Anexo 1. Protocolo de manejo de venado coliblanco (O. virginianus) en colecciones
zoológicas 83
Anexo 2. Descripción de los animales capturados 93
Anexo 3. Formato examen clínico 94
Anexo 4. Casos indeterminados al diagnóstico clínico y de necropsia 95
Anexo 5. Casos con muerte súbita a la clínica, diagnosticados con la necropsia
96
Anexo 6. Valores hematológicos para O. virginianus en cautiverio en la sabana
bogotana 97
Anexo 7. Valores de química sanguínea para O. virginianus en cautiverio en la
sabana bogotana 98
Anexo 8. Resultados análisis hematológico para O. virginianus en cautiverio en la
sabana bogotana 99
Anexo 9. Relación parámetros hematológicos hemograma 100
Anexo 10. Relación parámetros hematológicos química sanguínea 101
Anexo 11. Examen clínico individuos 102
1
RESUMEN
Colombia posee tres géneros de cérvidos: Mazama sp., Odocoileus sp. y Pudu sp.;
el venado coliblanco (Odocoileus virginianus) se encuentra distribuido en las
regiones Andina y Orinoquia; la lista roja de la Unión Internacional para la
Conservación Natural (UICN) lo categoriza como una especie de preocupación
menor (LC); dentro de su área de distribución, se encuentran regiones de
explotaciones bovinas extensivas, las cuales pueden favorecer el contacto directo
entre venados y bovinos, generando un riesgo para la interfaz animal doméstico-
animal silvestre, y de esta manera iniciar ciclos de transmisión de patógenos,
dentro de los cuales el virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB) puede encontrarse.
Este estudio determinó niveles de anticuerpos para VDVB en una población cautiva
de Odocoileus virginianus en Cundinamarca, Colombia. Para ello, se caracterizaron
los niveles de anticuerpos anti-VDVB de 20 individuos entre enero y octubre de
2013 mediante el ensayo inmunoenzimático competitivo (ELISA). Fue diseñado un
protocolo de manejo clínico para facilitar la captura de los individuos; la
inmovilización química se realizó mediante Ketamina (7.2 ± 3.4 mg/kg) + Xilacina
(0.81 ± 0.2 mg/kg) usando Yohimbina (0.3 mg/kg) como antagonista. Se empleó un
programa de condicionamiento operante buscando disminuir el estrés de la
población. Durante el periodo se capturaron 17 animales (7♀/10♂), los restantes 3
individuos correspondieron a neonatos muertos encontrados en el encierro (con un
discreto estado de autolisis). Se determinó una seroprevalencia de 5% (1/20).
Posteriormente se capturó por segunda vez el individuo positivo dando resultado
negativo. Para determinar la mortalidad histórica relacionada se tomó la casuística
entre 1991 y 2013 (136 casos), donde el sistema respiratorio (27.21%) ocupó el
primer lugar, seguido de alteraciones músculo esqueléticas (16.91%) y digestivas
(11.76%) principalmente. Los hallazgos encontrados en estos sistemas fueron
similares a los reportados por este agente en la literatura.
Palabras clave: interfaz domésticos-silvestres, Odocoileus virginianus, VDVB,
ELISA, anticuerpos.
2
ABSTRACT
Colombia has three genera of cervids: Mazama sp., Odocoileus sp. and Pudu sp.;
the white-tailed deer (Odocoileus virginianus) is distributed in the Andean and
Orinoco regions; the red list of the International Union for Conservation of Nature
(IUCN) categorizes it as a specie of Least Concern (LC); inside its range are regions
of extensive cattle farms in which direct contact is promoted between these
populations, therefore, the interface domestic-wild animals is possible and generate
the development of transmission cycles for several infectious agents, among which
the Bovine Viral Diarrhea Virus can be found. This study determined antibody levels
to BVD in a captive population of O. virginianus in Cundinamarca, Colombia. For this
purpose, the BVD-antibody levels were characterized of 20 animals from January to
October 2013 using competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA).
Was designed a clinical management protocol to facilitate the capture of the animals,
regarding chemical immobilization was performed by Ketamine (7.2 ± 3.4 mg/kg) +
Xylazine (0.81 ± 0.2 mg/kg) using Yohimbine (0.3 mg / kg) as antagonist. Operant
conditioning program was used to reduce the population stress. During the period 17
animals were captured, the remaining 3 animals corresponded to dead fawns found
in the exhibition (with a discrete state of autolysis). Seroprevalence of 5% (1/20) was
determined, and subsequently it was captured for second time the positive deer
giving a negative result. To determine the historical mortality related, were taken
cases since 1991 to 2013 (136 cases), where the respiratory system (27.21%)
ranked first, followed by musculoskeletal abnormalities (16.91%) and digestive
disorders (11.76%). The findings in these systems (respiratory and digestive) were
similar to those reported by this agent in the literature.
Key words: Interface livestock-wild animals, Odocoileus virginianus, BVDV, ELISA,
antibodies.
3
INTRODUCCIÓN
Los incrementos de la demanda de alimento han generado un crecimiento
sustancial en las producciones agropecuarias, las cuales se ven reflejadas con
efectos como el incremento de la frontera agrícola predisponiendo interacciones
entre poblaciones de animales de domésticos con poblaciones silvestres; estos
sucesos han incrementado los desarrollos tecnológicos, con respecto a las ciencias
veterinarias las áreas de mayor desarrollo son: diagnóstico, clínica, patología,
farmacología, terapéutica y biología molecular entre otras. El enfoque patógeno
específico brinda herramientas para su manejo en poblaciones, es así como,
estudios que involucren la interfaz humano-animal y animales silvestres-domésticos
son de importancia para descifrar el impacto del patógeno en los seres vivos
independiente de su categoría; factores como: prácticas de manejo, eventos
fisiológicos, características propias del agente y sucesos ambientales predisponen
eventos de morbilidad y mortalidad en poblaciones animales, enfocando estas
problemáticas a una visión metapoblacional se pueden establecer los roles que
cumplen las especies silvestres en los ciclos de transmisión de patógenos, área que
actualmente no se encuentra desarrollada en su totalidad.
Una de las enfermedades más conocidas por la ciencia es la brucelosis, en la cual,
el rol cumplido por el ciervo común (Cervus elaphus nelsoni) en la transmisión está
reconocido; estudios similares se han realizado con tuberculosis y la importancia del
venado coliblanco (Odocoileus virginianus) como portador y diseminador del agente
(Van Campen y Ryan, 2010). Dentro de los agentes infecciosos de importancia en
las ciencias veterinarias, se encuentran los Pestivirus, un género viral que abarca
agentes de gran impacto para poblaciones productivas, como: Virus de Peste
Porcina Clásica (PPC) y el virus de la diarrea viral bovina (VDVB) afectado porcinos
y bovinos a nivel mundial (Nettleton y Entrican, 1995). El VDVB por sus
características genéticas puede encontrarse en diferentes especies de rumiantes
silvestres; Van Campen y Ryan (2010) determinaron anticuerpos específicos en
poblaciones salvajes de bisontes (Bison bison), venados coliblancos (Odocoileus
virginianus), ciervos mulo (Odocoileus hemionus) y cabras salvajes mediante
Inmunohistoquimica (IHQ) y aislamiento viral (AV). En venado coliblanco hay
información adecuada al respecto: en 1995, Aguirre y colaboradores mediante un
4
estudio serológico determinaron un grupo de posibles agentes infecciosos de
importancia para la especie, para ello, tomaron 133 muestras en 8 parques
nacionales de Estados Unidos, determinando seroprevalencia de Parainfluenza 3
(PI-3) 58%, Virus Respiratorio Sincitial Bovino (RSV) 55%, Herpesvirus Bovino tipo 1
(BHV-1) 32%, Enfermedad Hemorrágica Epizoótica (EHD) 14% y Diarrea Viral
Bovina 59%, siendo este el agente de mayor seroprevalencia; posteriormente,
Passler y su grupo de estudio (2007, 2008) realizaron infecciones experimentales
para conocer el comportamiento del agente en la especie, con el fin de reconocer
animales persistentemente infectados (PI); un año después Duncan y su grupo
(2008) reportaron un individuo persistentemente infectado en Colorado, EEUU. En
Latinoamérica, se han realizado estudios serológicos en México donde se reporta
una prevalencia de 63.5% en 521 animales muestreados (Cantú et al. 2008).
En Colombia, la diarrea viral bovina (VDVB) es una enfermedad no sujeta a control
oficial, los estudios publicados han sido en bovinos por medio de la Federación
Colombiana de Ganaderos - FEDEGAN (2010), la información disponible presenta
la importancia de este agente en ganaderías de leche y carne, obteniéndose una
prevalencia de 41% entre 2005 y 2009, para un total de 5219 muestras analizadas,
también se presenta que DVB ocupa el cuarto puesto en solicitud diagnostica
después de leptospirosis, rinotraqueitis infecciosa bovina y leucosis. Antioquia,
Caquetá y Cundinamarca son los departamentos que lideran la lista de remisión de
muestras para diagnóstico. Teniendo en cuenta que las explotaciones extensivas
son empleadas en gran parte del territorio nacional, la importancia estudiar el
interfaz silvestre-doméstico de los patógenos de mayor diagnóstico en el país
incrementa. La importancia de VDVB radica en su 4 posición en solicitud diagnóstica
y sus grandes impactos productivos, dentro de los cuales el principal es
reconocimiento mundial como el principal patógeno reproductivo para poblaciones
bovinas (Fray, et al., 2000). Los géneros Pudu sp., Mazama sp., y Odocoileus sp.,
se encuentran distribuidos en Colombia, siendo este último el género de mayor
distribución, incluyendo Cundinamarca, departamento con prevalencia de 31% y
prevalencia histórica de 47% para VDVB (FEDEGAN 2010).
Si se considera la importancia de las alteraciones reproductivas en las ganaderías
colombianas, donde se afectan sensiblemente indicadores reproductivos como: el
5
porcentaje de preñez, incremento de abortos y momias y disminución tasa de
natalidad, es necesaria la implementación de programas para el control de estas
enfermedades (FEDEGAN, 2010). Los postulados anteriores deben motivar la
investigación de este agente grupo de agentes infecciosos y la importancia de las
poblaciones silvestres. Debido a las dificultades diagnósticas y logísticas para
investigar poblaciones silvestres en vida libre (in situ), las poblaciones cautivas (Ex
situ) toman importancia con el fin de estandarizar procedimientos metodológicos y
pruebas diagnósticas.
Dentro de la colección del Parque Zoológico Jaime Duque (ZDJ) se encuentran 3
especies de cérvidos colombianos venado soche (Mazama gouazoubira), venado
conejo (Mazama bricenii) y venado coliblanco (Odocoileus virginianus), este último
posee una población promedio de 30 animales con eventos reproductivos y de
mortalidad anuales, considerando la información epidemiológica para VDVB en
Cundinamarca y las características propias del agente, la población de la institución
puede estar en contacto con el agente; mediante fómites (ingreso de un animal
seropositivo para alimentación de carnívoros o contacto de personal con animales
domésticos fuera de la institución) o incluso aerosoles (ver pág. 10); por lo cual,
toma importancia la determinación del estatus epidemiológico; para ello, se decide
efectuar un ensayo inmunoenzimático ELISA para determinar los niveles de
anticuerpos específicos anti-VDVB, dando así un aporte para futuros estudios en
poblaciones de vida libre.
6
1. OBJETIVOS
General
Determinar los niveles de anticuerpos para el virus de diarrea viral bovina VDVB
mediante ELISA competitivo y la mortalidad histórica acumulada en una población
cautiva de venados cola blanca (Odocoileus virginianus) en Cundinamarca,
Colombia.
Específicos
• Desarrollar un protocolo de manejo clínico, conformado por
inmovilización química, examen clínico y muestreo.
• Caracterizar los niveles de anticuerpos específicos para DVB en la
población.
• Determinar el estatus epidemiológico de la población hacia DVB.
• Establecer las causas de mortalidad con cuadro reproductivo en la
población de venados cola blanca en el Zoológico Jaime Duque
compatibles con DVB.
7
2. MARCO TEÓRICO
Pestivirus
Pertenecen a la familia Flaviviridae, de los cuales se encuentran 3 virus de
importancia veterinaria: peste porcina clásica (VPPC), enfermedad de la frontera
(VEF) y diarrea viral bovina (VDVB), los cuales afectan ungulados en general
(domésticos y silvestres), su distribución es mundial. Debido a sus características
epidemiológicas generan grandes pérdidas económicas importancia en animales
domésticos, las pérdidas en animales silvestres no son conocidas (Maclachlan y
Dubovi, 2011). Vilcek y Nettleton (2006) resaltan la importancia de los Pestivirus por
no ser hospedero-especifico estrictos; los estudios existentes identifican infección en
estas especies: jabalí (Sus scrofa), búfalo cafre (Syncerus caffer), bisonte
americano (Bison bison), alpaca (Lama pacos), pudú (Pudu puda), venados de los
géneros Odocoileus y Cervus, jirafa (Girafa camelopardalis), reno (Rangifer
tarandus), sarrio (Rupicapra pyrenaica pirenaica), bisonte europeo (Bison bonasus)
y antílope americano (Antilocapra americana) entre otros, estas especies se
encuentran en el súperorden Ungulata. Paton et al., (1995), reporta que se pueden
presentar falsos positivos a nivel de serología por las semejanzas de los tres virus y
la posibilidad de infecciones cruzadas (PPC, EF y DVB).
Los viriones constan de una envoltura y una nucleocápside, su cápside se
encuentra envuelta; son de morfología esférica con un tamaño de 40-50 nm de
diámetro, en la superficie posee proyecciones de 6-8 nm de longitud, el núcleo es
isométrico con un diámetro de 27-29 nm. El genoma no está segmentado y contiene
una sola molécula en sentido positivo lineal, es decir son ARN de cadena simple y
polaridad positiva; el genoma completo consta entre 12.000 a 12.500 nucleótidos
(ICTVdB Management, 2006). el genoma del virion contiene un marco de lectura
abierto que codifica más de 10 proteínas, las cuales son creadas por procesamiento
co y post-traduccional; en total se componen de 4 proteínas estructurales que son
codificadas en el extremo 5´ del genoma, dichas proteínas son: C: proteína de
nucleocápside y Erns, E1, E2: glicoproteínas de envoltura; en cuanto a las proteínas
no estructurales estas se codifican en el extremo 3’, la familia Flaviviridae contiene
8
entre 7 y 8 proteínas no estructurales: NS5: ARN-polimerasa ARN-dependiente;
NS3: actúa como helicasa y proteasa, contribuye en el complejo ARN-polimerasa;
NS2B, NS3: ayudan a la escisión de la poliproteína y las proteasas de la célula
hospedera las cuales son responsables para su subsiguiente procesamiento; en los
Pestivirus solo es codificada una proteína Npro la cual mediante autocatálisis se
libera de la poliproteína, se conoce que esta proteína no es esencial para la
replicación viral en cultivos celulares, pero tiene una actividad moduladora de
interferón (INF) en células infectadas (Maclachlan y Dubovi, 2011) (Figura 1).
Figura 1. Genoma de los pestivirus
Npro, proteasa; C, la proteína de la cápside; Ernas
, proteína de la envoltura menor con la actividad
ARNsa; E, proteína de la envoltura; p7, proteína no estructural; NS, proteínas no estructurales; P, NS2-
3 (NS3) proteasa; H, helicasa; R, ARN-polimerasa.
Adaptado de. Maclachlan y Dubovi (2011)
Virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB)
Generalidades
Posee dos genotipos VDVB tipo 1 y VDVB tipo 2, el primero consta de 12
subgenotipos y el segundo de 2, los cuales se han determinado mediante análisis
filogenético, su diversidad se atribuye a las altas modificaciones genómicas que
pueden presentar los virus ARN (Bolin y Grooms, 2004), esta diversidad aumenta
las diferencias antigénicas las cuales son limitantes diagnósticas, también se
considera que pueden tener importancia clínica. Este virus fue caracterizado
9
inicialmente en Estados Unidos en 1946 (Arauco, 2012), según Ridpath (2010a)
posee entre 9 y 12.3 kilobases.
Es un virus que a pH bajos tiene menos riesgo de ser inactivado, pero a
temperaturas superiores a 40°C es sensible; como se mencionó anteriormente
posee una alta diversidad genética la cual es atribuida a la ausencia de una
exonucleasa que corrige bases mal incorporadas, característica que genera una alta
plasticidad traducida en una mayor capacidad de generar cepas mutantes; la cual es
considerada como estrategia de defensa ya que puede ocultarse de la respuesta
inmunológica del hospedero (Arauco, 2012). La plasticidad es mayor cuando el virus
infecta especies no comunes o animales persistentemente infectados (PI), ya que al
sintetizarse posee una tasa de 1 error por cada 10.000 nucleótidos polimerizados
(Lértora, 2003; Brock, 2003).
Puede clasificarse según el efecto del virion dentro de la célula en: biotipos
citopáticos (CP) y nos citopáticos (NCP). Según Ridpath (2010b) el biotipo NCP es
conocido se localiza principalmente en el ambiente, mientras que los biotipos CP se
encuentran únicamente en animales sintomáticos y es originado por mutación de
una cepa NCP; se caracteriza por ocasionar vacuolización y muerte celular, este
biótico es el encargado de las diversas presentaciones patológicas del agente; por
otro lado los NCP poseen propiedades que facilitan la infección transparentaría,
razón por la cual se asocian a animales PI (Nettleton y Entrican, 1995). Otra
estrategia para proliferar en poblaciones es su capacidad de generar infecciones
persistentes junto a la transmisión horizontal y vertical (Ridpath, 2010a). El genotipo
DVB-1 ha sido ampliamente identificado en Estados Unidos de América (Santos et
al., 2011); en 2000 fue identificado DVB-2 en Brasil por Flores y colaboradores
(2000b) para ello emplearon aislamiento e identificación viral, mediante cultivo.
Transmisión e infección
Su éxito en la transmisión a una población está asociado a la inmunotolerancia que
poseen algunos individuos “PI”, los cuales tienen la capacidad de eliminar viriones
durante toda su vida en secreciones nasal, salivar, orina, heces, semen y leche;
10
aunque los animales con infección aguda también pueden transmitirla en menor
escala (Vera et al. 2006). Para Brock (2003) la presencia de hospederos
secundarios como rumiantes silvestres; las infecciones con biológicos y la
variabilidad antigénica, son factores que facilitan su transmisión y persistencia.
Las vías de infección pueden ser: transmisión horizontal, por contacto directo
nariz-nariz o semen de animales PI, o indirecta por guantes, agujas e incluso
insectos; transmisión vertical, donde la infección trans-placentaria en hembras
susceptibles durante la gestación o en transferencia de embriones es la principal
fuente, y transmisión entre rebaños, como es de esperarse es dada por la
presencia de animales PI en la población, en animales en vida libre se cree que la
transmisión se da por el contacto con especies con potencial infeccioso (Smith y
Grotelueschen, 2004) (Figura 2).
Figura 2. Transmisión de DVB
Adaptado de: Vera et al. 2006.
Un estudio realizado por el grupo de Arenhart (2009) determinó el potencial de
seroconversión y desarrollo de animales bovinos PI, para ello, realizaron infección a
una población y monitorearon por 150 días, teniendo en cuenta que el día 0 fue la
fecha de destete de los animales, el monitoreo fue realizado mediante sangre,
secreción nasal, ocular, oral y genital tomadas con un intervalo semanal, donde se
observó la eliminación del virus en todas las secreciones y los altos niveles de
anticuerpos en sangre durante el periodo evaluado, finalmente se introdujeron estos
11
individuos PI a dos poblaciones una con características de manejo semi-intensivo y
extensivo, el primer grupo presentó seroconversión total en 30 días, el segundo un
77% al día 100; este estudio presenta de forma detallada y clara la ecología del
agente en una población expuesta a él.
Las infecciones en estadios reproductivos se pueden clasificar según Grooms
(2004) en: Infecciones tempranas, justo después de la concepción, entre los días
0 y 45 de gestación, en este periodo la principal consecuencia es la disminución de
la tasa de concepción, por absorción embrionaria o por mala fijación; Infecciones
en tercio medio, entre los días 45 y 175, donde pueden presentarse abortos,
animales inmunotolerantes PI y defectos congénitos principalmente en sistema
nervioso (hipoplasia cerebelar, microencefalopatía, hidrocéfalo, hidranencefalia e
hipomielinización) seguido de ocular (cataratas, microftalmia, degeneración retiniana
y neuritis óptica), en menor frecuencia pueden evidenciarse individuos con
hipoplasia de timo, hipotricosis, braquignatismo y retardos en crecimiento; las
infecciones en tercio final, se presentan entre 125 y 285 días, como en esta fase
la organogénesis esta completada y el sistema inmune ya es competente el
individuo nace siendo seropositivo. En bovinos se cree que entre los días 125 y 150
el individuo será PI siempre y cuando la infección sea dada por un biotipo NCP
(Brock, 2004).
Presentación Clínica
A nivel mundial la prevalencia es entre 60 y 80%; factores del agente como el
genotipo o el biotipo y de hospedero como el estado inmune, especie y estado
reproductivo pueden variar la presentación clínica; en infecciones en bovinos con
DVB-1 se inicia con un cuadro febril, acompañado de leucopenia entre los 3 y 7 días
post-infección, esta es dada por el carácter inmunosupresor que posee el virus al
inducir muerte linfocitaria consecuente con una leucopenia inducida (Patel et al.,
2012). Estudios realizados en bovinos indican que la presentación aguda cursa con
un cuadro febril elevado, signos respiratorios, diarrea, problemas reproductivos
como aborto, hipó o agalactia y muerte súbita; las cepas de alta virulencia,
desarrollan el cuadro clínico conocido como enfermedad de las mucosas.
12
Por otro lado la infección subclínica en bovinos se caracteriza por descargas óculo-
nasales y leucopenia transitoria, en esta infección la morbilidad es elevada pero la
mortalidad baja, la producción de anticuerpos es dada entre 14 y 28 días post-
infección. Según Ridpath (2010a) estas infecciones contribuyen con el desarrollo de
neumopatías. Spilki et al. (2006) describieron el cuadro clínico respiratorio
expresado, en el cual se evidencia secreción nasal mucohemorrágica, disnea,
asociadas a un cuadro sistémico donde se puede presentar pirexia y anorexia. Las
infecciones cruzadas se pueden presentar junto a parainfluenza tipo 3 (PI3), virus
respiratorio sincitial bovino (VRSB) y herpesvirus tipo 1 (HV-1), debido al mismo
efecto inmunosupresor mencionado anteriormente, pero esta vez involucrando
macrófagos alveolares (Welsh et al., 1995).
A nivel reproductivo, los principales problemas son los abortos y problemas de
concepción, en menor frecuencia malformaciones congénitas (Ridpath, 2010a),
dichas problemáticas van a depender de la fase de infección, como se mencionó
anteriormente. Según Rondón (2006) VDVB se encuentra involucrado en el
complejo de diarrea neonatal bovino, presentando signos cuando la transferencia
pasiva de anticuerpo no fue exitosa, predisponiendo la colonización de diversos
agentes infecciosos a nivel de TGI, por su efecto inmunosupresor. El genotipo DVB-
2, se asocia a un síndrome hemorrágico, en bovinos es caracterizado por la
presencia de mucosas anémicas con hemorragias petequiales y equimóticas,
pirexia, cuadro hemorrágico sistémico, diarrea sanguinolenta, epistaxis, sangrado en
locales de inyección, al hemograma se pueden evidenciar leucopenia y
trombocitopenia, usualmente el individuo termina muriendo (Lértora, 2003). El
efecto inmunosupresor del virus puede ser visualizado al hemograma como una
leucopenia y alteraciones de las funciones leucocitarias, esto puede ser provocado
por su gran afinidad con el tejido linforeticular en el cual produce atrofia y necrosis
(Rondón, 2006).
Impacto económico
Es ampliamente asociado a pérdidas económicas en la industria ganadera; Valle y
colaboradores (2005) evaluaron la relación costo-beneficio de la erradicación de
13
este agente en granjas bovinas, demostrando que en 10 años de seguimiento las
granjas que decidieron erradicar tuvieron ganancias de un 60% con relación a
aquellas que no implementaron herramientas de control. En Nueva Zelanda se
determinó que las pérdida anuales por este agente están en 44.5 millones de
dólares neozelandeses, basados en un porcentaje de afectación de 14.6% rebaños
afectados (Heuer, et al. 2007).
Inmunología de las enfermedades virales
Los agentes virales son microorganismos intracelulares obligados, es decir, se
replican dentro de la célula, para ello usan ácidos nucleicos y mecanismos de
síntesis proteica del huésped. Tienen la capacidad de infectar un gran número de
poblaciones celulares ya que pueden emplear moléculas de superficie de la célula
como receptores. Cuando el agente ingresa provoca lesión o enfermedad mediante
un gran número de mecanismos. Como medida de protección el organismo tiene
dos respuestas inmunitarias innata o adaptativa, con el fin de bloquear la infección y
eliminar células infectadas (Abbas et al., 2008).
Inmunidad innata
Los principales mecanismos son: inhibición de la infección por IFN I, ya en
muchas infecciones de este tipo se asocia la producción de este por parte de células
infectadas, principalmente células dendríticas de tipo plasmocitoide, su síntesis se
da cuando hay reconocimiento de DNA o RNA vírico por parte de receptores de tipo
toll (RTT) endosómicos por un lado y la activación de cinasas citoplásmicas por el
RNA vírico, una vez sintetizado el IFN I este contribuye con la inhibición de la
replicación viral en células infectadas y no infectadas, induciendo un estatus
antivírico; junto a la eliminación de células infectadas por linfocitos NK, este es
un mecanismo que actúa en la primeras etapas de la infección, es decir, actúa antes
que se desencadenen repuestas inmunes adaptativas (Figura 3) (Abbas et al.,
2008).
14
Inmunidad adaptativa
En este tipo de inmunidad actúan los anticuerpos que bloqueen la unión del virus a
la célula diana y su posterior entrada, estos son eficaces durante la fase extracelular
del ciclo biológico del virus y actúan como neutralizantes, debido a que evitan la
fijación y penetración a la célula huésped, uniéndose a los antígenos de envoltura
de la cápside del virus. Los linfocitos T citotóxicos - LCT ayudan al organismo
destruyendo células infectadas, los linfocitos CD8+ son específicos para virus, estos
pueden reconocer antígenos virales citosólicos o de síntesis endógena, asociadas a
molecular CPH de fase I de células nucleadas (Figura 3) (Abbas et al., 2008).
Según Chase (2013) el virus de diarrea viral bovina genera supresión de esta
inmunidad, dicha supresión es dependiente de la cepa.
Figura 3. Inmunidad innata vs adaptativa
Fuente: Abbas et al., 2008.
Diagnóstico
Detección antigénica
Se basa en el aislamiento viral, para ello, se pueden tomar muestras como: suero,
sangre completa, tejidos fetales, secreción nasal, vaginal y semen, la técnica a
15
emplear es la inmunohistoquímica (IHQ) en la cual se emplean anticuerpos
monoclonales o policlonales marcados, con el fin de que sean visualizados
mediante fluorescencia o peroxidasa, esta es una técnica histopatológica; el ensayo
inmunoenzimático (ELISA) también puede ser empleado, en él se usan anticuerpos
monoclonales para inmovilizar el antígeno en particular y posteriormente visualizarlo
mediante espectrofotometría (Vargas et al., 2009).
Inmunohistoquimica IHQ
La detección de antígenos en tejidos fijados en formol al 10% durante 24 horas, es
una herramienta diagnostica para animales muertos, principalmente abortos o
mortinatos; aunque, actualmente se desarrolló en biopsias auriculares, y es una
prueba tamiz para determinar animales PI. Los tejidos de elección son fragmentos
de oreja, piel, cerebro, cerebelo, medula espinal, ganglio trigémino, hipófisis,
linfonodo sub-mandibular, linfonodo mesentérico, tonsila, linfonodo hepático,
linfonodo mediastínico, bazo, timo, pulmón, tráquea, esófago, rumen, omaso,
retículo, abomaso, intestino delgado (duodeno, yeyuno e íleon), intestino grueso
(ciego, colon, recto), tiroides, riñón, medula ósea, adrenal, corazón e hígado (Santos
et al., 2011). Los tejidos de mayor cuantificación de marcaje son: piel de oreja,
corteza frontal cerebral, tálamo, hipocampo, tiroides, linfonodos mesentéricos; en
menor escala: bazo, yeyuno e íleon.
Para la colecta de biopsia auricular, se realiza limpieza y desinfección con solución
a base de yodo; los fragmentos colectados deben medir 1cm de profundidad por 0,5
cm de longitud, el lugar de elección es la punta del pabellón auricular. Una vez se
obtiene la biopsia, debe colocarse en tubos de ensayo con solución de formol al
10% durante 24 horas, posteriormente es deshidratado con soluciones crecientes de
alcohol etílico, diafinizado en xilol e incluido en parafina. Para así realizar cortes de
5 micrómetros, colocados en láminas de poli-l-lisina para desarrollar el IHQ (Santos
et al., 2011).
16
Detección de anticuerpos
Para la detección de anticuerpos específicos, se emplean pruebas serológicas como
la seroneutralización y ELISA indirecto o competitivo, los cuales cuantifican la
titulación de anticuerpos (Vargas et al., 2009). Días y colaboradores (2010)
mencionan la seroneutralización como técnica a escoger, mientras que Tobias y su
grupo de estudio (2000) reportan mayor reactividad de anticuerpos monoclonales
para P125-P80, con relación a E2/gp53 y EO/gp48, proteínas a evaluar en ensayos
inmunoenzimáticos.
Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas – ELISA
El uso de técnicas inmunoenzimáticas en las ciencias veterinarias se ha
incrementado notablemente, siendo entre 1980-1984 los años en los que inicio esta
técnica con un total de 71 artículos publicados, mientras que en 2004 se han
publicado 853 estudios, las principales aplicaciones de esta técnica son:
confirmación de enfermedad con cuadro clínico, análisis de la respuesta inmune de
un individuo a un agente infeccioso determinado, comparación antigénica (Crowther,
2009). El ensayo inmunoenzimático es una técnica que involucra pruebas donde se
usan anticuerpos como reactivos, así como enzimas las cuales están ligadas a uno
de los reactivos en un inmunoensayo para permitir la cuantificación mediante el
desarrollo de color después de la adición de un sustrato cromógeno (Crowther,
2009).
Es una técnica inmunológica para diagnóstico tanto de antígenos como de
anticuerpos, se basa en la reacción antígeno-anticuerpo. Su fundamento se basa en
la cuantificación de un antígeno inmovilizado sobre una superficie sólida mediante el
empleo de un anticuerpo específico ligado a una enzima de forma covalente, con el
fin de detectar la respuesta inmunológica de la muestra a evaluar. La cuantificación
del anticuerpo unido al antígeno es proporcional a la cantidad de antígeno presente,
su determinación se realiza por espectrofotometría al medir la transformación de un
sustrato transparente en un producto de color a través de la enzima enlazada
(Abbas et al., 2008; Crowther 2009). Los test de ELISA pueden ser competitivos o
17
no competitivos; en el ELISA competitivo el anticuerpo de la muestra compite con
el conjugado por los sitios de unión al antígeno, una muestra es positiva cuando no
hay color, ya que el sustrato no encontrará la enzima porque el conjugado ha sido
desplazado por el anticuerpo presente en la muestra, es decir, cuantifica el antígeno
presente en la muestra; mientras tanto, en el ELISA no competitivo se enfrenta la
muestra con el antígeno o anticuerpo que está en la fase sólida, la positividad de
este test es dado cuando al formarse el complejo antígeno-anticuerpo y al agregar el
conjugado estos reaccionan con el sustrato y generan color, dentro de estos se
encuentran dos tipos: los directos detectan antígeno y los indirectos detectan
anticuerpos (Figura 4) (Abbas et al., 2008).
Figura 4. ELISA directo vs indirecto
Adaptado de: Murphy et al., 1999.
Reinhardt y Col. (2003) mencionan la importancia del ELISA para detección de
antígeno viral, debido a que, combina la acción de un anticuerpo de captura unido a
una fase solida con un anticuerpo detector el cual es marcado con un sistema
señalizador (peroxidasa) para su cuantificación, la sensibilidad de esta prueba es
equivalente a el aislamiento viral. Se usa tanto para detección de anticuerpos como
18
de antígenos. Sandvik y Krogsrud (1995) recomiendan colectar la muestra
sanguínea en tubo heparinizado para la realización de ELISA de captura, con el fin
de determinar antígenos contra proteínas p125/p80.
Al momento de analizar los resultados por espectrofotometría Felmer y Col. (2009)
recomiendan realizarlo a 450 nm, empleando el kit comercial (Svanovir®,
SVANOVA, Suecia), ELISA indirecto. Se han realizado pruebas de diagnóstico por
ELISA y neutralización viral en leche presentando resultados similares a los dados
en muestras sanguíneas (Sturza et al., 2011).
Detección de genoma viral
Para ello se emplea el RT-PCR, técnica de biología molecular, se puede aislar en
sangre con EDTA de animales positivos a IHQ, o pulmón, bazo y timo de animales
muertos son las adecuadas para esta técnica (Vargas et al., 2009; Santos et al.,
2011). Esta técnica fue usada por Pilz et al., (2007) para detección de la región
terminal no traducida (UTR) 5’UTR en suero, el autor recomienda que posterior a la
retracción del coagulo, el suero debe ser colectado y conservado a -20°C, para
evitar su degradación. Carvalho Días y colaboradores (2010) emplearon
neutralización viral para determinación mediante biología molecular de genotipos
DVB-1 y DVB-2.
Otras herramientas diagnósticas
La necropsia no es una herramienta diagnostica sensible y especifica aunque un
estudio realizado por Santos y colaboradores (2011), presenta algunas alteraciones
frecuentes a la necropsia como: linfomegalia moderada de linfonodos mesentéricos,
moderada observación de placas de Peyer y discreta linfagiectasia mesentérica; a
nivel microscópico se evidenció: infiltrado inflamatorio mononuclear leve o moderado
en intestino delgado, dilatación de vasos sanguíneos mamarios, depleción linfoide
con infiltrado histiocitario leve a moderado en linfonodos, tonsilas y placas de Peyer.
19
Reportes en Latinoamérica
En América Latina, Brasil es el país que más ha estudiado este agente, siendo en
1970 su primer reporte (Flores et al. 2005); un estudio realizado en Minas Gerais y
Sao Paulo, Brasil donde se muestrearon 376 bovinos evidenció una prevalencia de
57.56 y 56.46% respectivamente, mediante ELISA indirecta (Samara et al., 2004).
En Colombia la enfermedad data de 1975, mediante la entrada al país de bovinos
con signología clínica compatible, dando como resultado final enfermedad de las
mucosas (Vargas et al., 2009), en 2011 en Pasto se tomaron 238 muestras de
bovinos para realizar serología mediante ELISA presentando una prevalencia de
32.7% (Cadeño Quevedo et al., 2011). Estudios también en bovinos en Perú revelan
titulación de anticuerpos mediante ELISA de captura y neutralización viral (Zúñiga et
al. 2006), en México se realizaron titulaciones de anticuerpos para Neospora
caninum (54.2%), Brucella abortus (21.2%), Rinotraqueitis infecciosa bovina (30.6%)
y DVB (33.6%) en una población de 500 bovinos, denotando así, la existencia y
coexistencia de dichos agentes en la población, para ello se utilizó serología
mediante ELISA (Sánchez-Castilleja et al., 2012). Estudios de filogenética de cepas
aisladas denotan 23 estirpes aisladas en Perú y Chile, dando como resultado su
categorización dentro del genotipo 1, subtipo 1b (Ståhl et al. 2009); en 2007
Betancur y colaboradores realizan un estudio para determinar la prevalencia en
bovinos de diversas fincas ganaderas en Montería, dándose una prevalencia de
29.4%; 5 años más tarde se realizó un estudio donde se determinó la prevalencia de
este agente en los bovinos de Caquetá, Colombia, observando una prevalencia de
35.5% entre 1999 y 2009 (Motta Giraldo et al., 2012); El biotipo 2 se desconoce en
Colombia, siendo reportado en Brasil y Argentina (Vargas et al., 2009).
Estudios en especies silvestres
En 2008, Craig y colaboradores demostraron la infección en búfalos de agua
(Bubalus bubalis), en el mismo año se demostró la posibilidad de infección
persistente en ciervo ratón de java (Tragulus javanicus) mediante infección
experimental (Semrau et al., 2008). Marcoppido et al. (2010) establecieron
prevalencia de 0.8% para una población de 17 vicuñas (Vicugna vicugna) en vida
20
libre. Las infecciones experimentales en venados coliblancos han demostrado su
susceptibilidad y desarrollo de signos clínicos post-inoculación; estas mismas han
sido replicadas en Taurotragus oryx observando animales PI con replicación y
eliminación viral; entre 2005 y 2006 se tomaron biopsias de pabellón auricular de
5597 animales producto de la temporada de caza, de los cuales 141 pertenecen a
venado cola blanca, donde fue positivo un O. hemionus mediante IHQ (Duncan et
al., 2008); Nettelton (1990) identificó la presencia del agente en poblaciones de
rumiantes silvestres mediante estudios serológicos y aislamiento viral en Cervus
elaphus scoticus, Capreolus capreolus y Bison bonasus especies también
estudiadas por Romvary, (1965); McMartin et al., (1977); Doyle y Heuschele, (1983);
Frolich (1995) y Nielsen et al., (2000).
21
3. MATERIALES Y METODOS
3.1 LOCALIZACIÓN
Este estudio se realizó en el Zoológico Jaime Duque (ZJD), en el municipio de
Tocancipá, Cundinamarca. Localizado en el kilómetro 34 vía Tocancipá (Figura 5).
Tocancipá se ubica geográficamente sobre los 4° 58´ latitud norte y los 73° 55´
longitud oeste, se encuentra a 2.606 metros sobre el nivel del mar; su temperatura
promedio es 13° C. Según su sitio web “El Municipio posee y conserva áreas
ambientalmente estratégicas llamadas "Predios de interés hídrico", que influyen
sobre nacederos de agua, donde se realizan actividades ecológicas como
caminatas y reforestaciones. También se debe resaltar que la Administración
Municipal creó la Secretaría del Medio Ambiente, para que desde lo local, se
propenda por el desarrollo sustentable basado en la protección de los componentes
agua, suelo y aire. (Municipio Tocancipá, 2013).
Figura 5. Localización Zoológico Jaime Duque, acercamiento de encierro de
venados
Tomado de. Google Maps, 2013.
22
3.2 POBLACIÓN Y MUESTRA
Población: grupo de venados coliblancos de la colección del ZJD, para la
investigación se tomaron 20 animales de los 32 ubicados en el encierro. La
descripción de los animales capturados se presenta en el Anexo 1.
Muestra: se realizó venopunción para toma de muestra sanguínea, para la prueba
de ELISA se tomó en tubo sin anticoagulante, para hemograma en tubo con EDTA
(como posible correlación paraclínica de DVB), con la sangre restante se realizó
frotis sanguíneo para evaluar morfología de línea roja.
3.3 VARIABLES (Tabla 1)
Tabla 1. Variables del estudio.
Nombre Variable Tipo Variable Unidad de Medida o
Categorías
Títulos de anticuerpos
anti-DVB en sangre Cuantitativa continua Densidad óptica
Sexo Cualitativa dicotómica Macho / Hembra
Edad Cualitativa policotomica
ordinal
Neonato / Infante / Juvenil
/ Adulto / Geriatra
3.4 ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Muestreo: Probabilístico, aleatorio simple (Samuels et al., 2012)
Estadística descriptiva: Frecuencias, proporción y/o porcentaje (Samuels et al.,
2012).
23
3.5 METODOS Y PROCEDIMIENTOS
Diseño metodológico:
Tipo de estudio:
- Descriptivo: ya que se buscó describir el estatus epidemiológico de la
población hacia el virus de la diarrea viral bovina y su posible impacto
poblacional.
Método de estudio:
- Cuantitativo: ya que se evaluaron datos numéricos.
- Analítico: debido al carácter analítico y de correlación tanto clínica
como paraclínica de la población.
Procedimientos metodológicos:
Condicionamiento del grupo
Para ello se empleó el condicionamiento operante, definido como “…un proceso de
ejercer control sobre la conducta de un organismo en un cierto ambiente, por medio
de la aplicación del refuerzo. Incluye máxima flexibilidad y adaptabilidad…”
concepto postulado por Skinner (Ardila, 1981) un psicólogo estadounidense que
estudió a fondo el comportamiento humano, sus postulados han sido empleados en
animales principalmente en adiestramiento canino. Para efectos de este estudio se
empleó como control de la conducta la adaptación de los animales a personas
dentro del encierro, como refuerzo fue empleado el alimento. El condicionamiento
tuvo un tiempo inicial de 2 meses en los cuales se logró el objetivo planteado, para
ello, se ingresaba al hábitat de los animales en compañía del alimentador y se
procedía a dispersar el alimento en un círculo de aproximadamente 4 metros de
diámetro, al interior del círculo se posiciona una persona y queda a espera que los
animales se acerquen a comer (Figura 6), durante las primeras dos semanas no se
obtuvieron resultados significativos, pero posterior a ellas los animales respondieron
de forma adecuada.
24
Figura 6. Acercamientos iniciales, a) acercamientos iniciales a la población; b)
acercamientos mediante alimentación
a)
b)
Fuente. Autor.
El siguiente paso del condicionamiento se basó en el acercamiento de los animales
hacia las personas, para ello, se empleó como recompensa el alimento que más
consumen los animales, para este caso zanahorias, la metodología fue la siguiente:
como primer paso se buscó disminuir la distancia entre los animales y el entrenador,
para ello la distancia se fue disminuyendo gradualmente 0,5 m cada 4 días hasta
llegar a una distancia de 1 m, en este momento se buscó ofrecer al animal el
alimento de la mano sin tener contacto visual, hasta llegar al punto de tener contacto
visual y poder palpar rostro, región cervical y miembros anteriores (Figura 7). Los
resultados de este paso fueron positivos después de 2 meses, cabe resaltar que las
conductas jerárquicas de la especie limitaron este paso, ya que los individuos de
menor jerarquía no se acercaron debido a que los individuos de mayor jerarquía no
lo permitían.
25
Figura 7. Acercamientos con contacto directo del entrenador, a) contacto directo
con una hembra; b) contacto directo con un macho.
a) b)
Fuente. Correa, 2013.
Una vez el condicionamiento en su primera fase tuvo éxito se procedió a inicial la
captura de individuos mediante una técnica de distancia como lo es el dardeo de
anestésicos mediante cerbatana y pistola de aire comprimido.
Antecedentes de manejo anestésico
Los fármacos se seleccionaron con base en la experiencia del ZJD, la disponibilidad
de los principios comerciales en el país y una revisión de literatura, en cérvidos los
fármacos empleados incluyen xilacina, medetomidina, zolazepam, azaperona,
ketamina y tiletamina, entre otros (Caulkett y Haigh, 2007). Para el presente estudio
se empleó xilacina y ketamina para formular el protocolo, esta asociación ha sido
descrita por un gran número de investigadores tanto para animales en cautiverio
como en vida libre (Al-Sobayil et al., 2010; Muller et al., 2007; Wallingford et al.,
1996; Kreeger et al., 1986). La seguridad del protocolo se incrementará al emplear
yohimbina un fármaco antagonista de la xilacina (Wallingford et al. 1996).
26
Fármacos empleados
Xilacina
Pertenece al grupo de los α2-agonistas, fármacos con capacidad de estimular
receptores α2 adrenérgicos; su mecanismo de acción está directamente relacionado
a estos receptores, específicamente a los de membrana asociados a la proteína G,
los cuales, al ser estimulados inhiben la adenilil ciclasa y generan cambio en las
conductancias de calcio y potasio, lo cual se traduce en cambios en el voltaje de la
membrana y excitabilidad neuronal. La xilacina posee un efecto analgésico el cual
puede ser comparable con algunos compuestos opioides (Botana López et al.,
2002).
Ketamina
Es un principio activo que genera anestesia disociativa, en la cual el individuo se
encuentra cataléptico, es decir, el paciente presenta disociación de la actividad del
SNC, razón por la cual, no hay respuesta a estímulos físicos como dolor, presión y
calor, entre otros. La ketamina actúa como antagonista del glutamato,
neurotransmisor excitador, en los receptores NMDA (M-metil-D-aspartato) del
glutamato que regula el calcio en el SNC, se cree que junto a los efectos en
receptores opiáceos son las dos vías de analgesia que proporciona este principio.
También tiene acción en receptores GABA (ácido gaba-amino-butírico) y en el
bloqueo del transporte neuronal de dopamina, serotonina y noradrenalina (Botana
López et al., 2002).
Yohimbina
Es un antagonista de receptores α2 adrenérgicos, tiene mayor afinidad por estos
receptores que por los α1, sus efectos farmacológicos ayudan a disminuir los efectos
de los agonistas y de esta manera disminuir el tiempo de recuperación anestésica
por disminuir el efecto del agonista (Botana López et al., 2002).
27
Protocolo anestésico
La dosificación empleada fue establecida con base a la revisión de literatura y la
experiencia de la institución: Xilacina 0.5-1 mg/kg; Ketamina 5-8 mg/kg y Yohimbina
0.3 mg/kg.
Captura
Para la captura se emplearon dardos de 3 mL marca Telinject ®, así como dardos
fabricados por la institución, se emplearon dos técnicas de disparo: Cerbatana y
pistola de aire comprimido marca Telinject ®. Con la primera técnica se pudo
realizar con una distancia máxima de 10 metros, con la segunda técnica se pudo
ampliar la distancia a 30 metros máxima (Figura 8).
Figura 8. Métodos de aplicación farmacológica a distancia, a) aplicación con
cerbatana, b) aplicación con pistola de aire comprimido
a) b)
Fuente. Autor.
28
Examen clínico
El examen clínico de los animales se realizó bajo anestesia, empleando el formato
establecido por la institución (Anexo 2), donde se examina: Inspección externa:
Tegumentario, mucosas, órganos de los sentidos (ojo, oído); digestivo: cavidad oral
(lengua (saliva), rumen, intestino, recto, materia fecal); respiratorio: mucosa nasal
(moco), tráquea, pulmones; cardiaco: pulso, corazón (válvulas); urinario: orina;
Locomotor: ligamentos, articulaciones, huesos.
Toma de muestra sanguínea
Para la obtención de la muestra en animal se debe encontrar en un plano
anestésico entre 0-1 de la escala clínica para evaluar la profundidad de sedación
(OAAS) (Chernik et al., 1990). Una vez en animal se encuentra en el plano
anestésico adecuado es posicionado en decúbito lateral derecho, para la toma de
sangre se empleó la vena yugular izquierda, para ello, los miembros anteriores se
dejan pegados al cuerpo pero estirados y la mandíbula se deja en ventro-extensión
con el fin de dejar expuesto el cuello, justo antes de la entrada al tórax se realiza
una ligera presión en el canal yugular para visualizarla a lo largo del cuello,
posteriormente se aplica alcohol como método de desinfección y al mismo tiempo
para visualizar mejor el vaso, para la venopunción se empleó aguja hipodérmica de
calibres 21½ o 16G y jeringa de 10 mL o venoject® con camisa, para ingresar al
vaso se posiciona la jeringa a 45° aproximadamente y se ingresa aproximadamente
1,5 cm de la aguja de forma paralela al surco yugular. Al obtener la muestra
sanguínea se coloca en tubos de 4 mL sin anticoagulante y con EDTA (Figura 9).
29
Figura 9. Venopunción mediante jeringa vs Venoject®, a) posicionamiento del
cuello; b) desinfección de la zona de venopunción; c-d) punción con jeringa de vena
yugular; e-f) punción con venoject® de vena yugular;
a) b)
c) d)
e) f)
Fuente. Autor y Correa Blain, 2013
Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas – ELISA
Se empleó el kit SERELISA® del laboratorio Synbiotics (Figura 10), el cual es un
ELISA indirecto para la detección de un antígeno en este caso una proteína no
estructural llamada p80/125, la cual posee un epitope común para las cepas CP y
NCP del virus de la diarrea viral bovina, esta técnica fue realizada por el personal
del laboratorio Zoolab Ltda.
30
Figura 10. Kit SERELISA®, a) kit Serelisa, b) caja del kit con especificaciones
técnicas
a) b)
Fuente. Autor
Para esta prueba la muestra a usar es suero, plasma o sangre entera, su
importancia radica en la identificación de animales infectados permanentemente
inmunotolerantes, es decir PI. También puede usarse para el análisis de muestras
de leucocitos, muesca de oreja y extracto de tejido. La consiste en 4 pasos:
1. Los controles y muestras son colocados directamente en los pocillos
sensibilizados con anticuerpos monoclonales anti-BVD/MD/BD [p80/125]. La
proteína viral presente se fijará a los sitios específicos (Figura 11).
Figura 11. Muestras en pocillos y posterior incubación, a) preparación de
conjugado, b) depósito en los pocillos de las muestras
a) b)
Fuente. Autor.
31
2. Se realiza lavado para eliminar las fracciones no ligadas, se agrega un
antisuero de conejo anti-BVD/MD/BD [p80/125]. Este se fija al antígeno
previamente adherido a la fase sólida (Figura 12).
Figura 12. Lavado de pocillos, a) pocillos post-incubación, b) lavado de
pocillos
a) b)
Fuente. Autor
3. Se realiza un segundo lavado y posteriormente se agrega un conjugado de
peroxidasa anti-Ig de conejo el cual se obtiene en cabra, con ello se permite
la revelación del antisuero de conejo anti-BVD/MD/BD [p80/125], formando el
complejo: (Mac) - (Ag BVD/MD/BD [p80/125]) - (anti-BVD/MD/BD [p80/125]
Ig de Conejo) - (Ac cabra anti-conejo Ig / peroxidasa) (Figura 13).
Figura 13. Segundo lavado y conjugado, a) incubación en cámara oscura;
b) muestras pre-incubación
a) b)
Fuente. Autor.
4. Se realiza un tercer lavado y posteriormente la enzima unida al complejo es
revelada tras la adición de un substrato el cual se transforma en un producto
coloreado. Las densidades ópticas se leen e interpretan para determinar la
32
presencia o ausencia del antígeno en función a los valores del umbral
obtenidos del control positivo (Figura 14).
Figura 14. Último lavado y lectura del ensayo a) muestras post-incubación, b)
aplicación de reactivo (coloración), c) muestras post-lavado; d) espectrofotómetro, e)
muestras en espectrofotómetro, f) visualización de resultados.
a) b) c)
d) e) f)
Fuente. Autor.
Estudio retrospectivo de mortalidad para la población
Inicialmente se tomó la información encontrada en los registros de necropsia del
ZJD entre el periodo 1991-2013, como primer paso se toman los siguientes datos
de cada caso: N° de RN, año, fecha de muerte, fecha de necropsia, origen, sexo,
edad, diagnóstico clínico, diagnostico de necropsia y diagnóstico de histopatología.
El segundo paso es tomar el informe de necropsia y registrar en una tabla de
acumulación la información existente clasificada por sistema: Inspección externa,
33
respiratorio, cardiovascular, digestivo, endocrino, urogenital, linfático, musculo
esquelético y nervioso, de esta forma de va a obtener de forma sistematizada la
información de las lesiones presentadas en casa caso. Con la información existente
se realizan tablas de frecuencia para determinar los grupos demográficos de
importancia y los sistemas y hallazgos de mayor presentación, como paso final se
realizará un análisis de los casos para verificar el diagnostico necroscópico y en el
caso pertinente postular un diagnóstico.
34
4. RESULTADOS
Protocolo de manejo clínico, el protocolo de manejo clínico se presenta en la Figura 15, y se describe en el Anexo 1.
Figura 15. Protocolo de manejo clínico de venado coliblanco en cautiverio
Fuente. Autor
35
Captura de individuos
Se capturaron 17(7♀/10♂) animales entre enero y octubre de 2013, las dosis del
protocolo fueron para xilacina (X) 0.81± 0.2 mg/kg, ketamina (K) 7.2± 3.4 mg/kg y
yohimbina 0.3± 0.0 mg/kg. Muller y colaboradores (2007) emplearon X 1.6± 0.2
mg/kg + K 7.8± 0.3 mg/kg, en cuanto a la ketamina la dosis promedio no varían pero
al detallar la SD están varían en 3 mg/kg, lo cual presenta significa un rango mayor
en nuestra dosis, la dosis de xilacina fue 2 veces mayor que la empleada en este
estudio. Para el protocolo empleado el tiempo transcurrido entre la aplicación del
anestésico y el primer efecto observado fue 5.64± 3.9 minutos, el tiempo
transcurrido en presentar recumbencia esternal fue 9.9± 8.8 min y el tiempo en
reincorporarse 76.1± 42.4 min (Tabla 2).
A nivel cardiovascular la frecuencia cardiaca en promedio se mantuvo en 56± 1.8
latidos por minuto (Figura 16), la frecuencia respiratoria en promedio fue 54± 2
respiraciones por minuto (Figura 17); la temperatura promedio al inicio fue 38.46°C,
20 minutos después 37.86°C y al finalizar el procedimiento 37.63°C (Figura 18),
durante el estudio se recapturo un individuo.
Tabla 2. Media de signos de inmovilización y recuperación de la población
Dosis ketamina
mg/kg ±
SD
Dosis xilacina
mg/kg ±
SD
Dosis yohimbina
mg/kg ± SD
Efecto inicial (n)
min ± SD
Tiempo a recumbencia esternal (n)
min ± SD
Tiempo de reincorporación
(n) min ± SD
7.2± 3.4 0.81± 0.2 0.3± 0.0 5.6± 3.8 (18)
9.9± 8.8 (18) 61,8± 12.7 (16)
36
Figura 16. Promedio del monitoreo de frecuencia cardiaca
Fuente. Autor
Figura 17. Promedio del monitoreo de frecuencia respiratoria
Fuente. Autor
Figura 18. Promedio del monitoreo de temperatura
Fuente. Autor
0
20
40
60
80
100
120
5 10 15 20 25 30 35 40
Lati
ds/
Min
Min
Promedio SD (Mín) SD (Máx)
0
20
40
60
80
100
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Re
sp/m
in
Min
Promedio SD (Mín) SD (Máx)
35,5
36
36,5
37
37,5
38
38,5
39
39,5
Ini Med Fin
°C
Prom SD (Mín) SD (Máx)
37
Examen clínico
Se examinaron 20 individuos, 17 (capturados con restricción química) y 3 neonatos,
A la evaluación no fueron observadas alteraciones de importancia (Anexo 11):
El estado general fue bueno en el 70% de los individuos mientras en el 30%
restante fue regular. El estado de hidratación se evaluó según Radostits (2002)
tomando como parámetros: el tiempo de llenado capilar de más de 2 segundos
como anormal, la persistencia del pliegue cutáneo más de 4 segundos anormal y el
grado de depresión ocular, siendo esta una prueba relativa por no tener una
clasificación determinada; ningún animal presentó trastornos de hidratación al
examen; en cuanto a la piel y el pelaje el 40% de los animales presentó pelaje
hirsuto, mientras que el restante 60% no presentaron alteraciones. Inspección de
cavidad oral, el rasamiento dentario de los individuos fue óptimo, teniendo en
cuenta su fórmula dentaria I 0/3, C 0/1, P 3/3, M 3/3 = 32 (Knight, 2001), en este
estudio solo fueron observados los incisivos, 15% presentaron dientes de leche tres
de tres, 5% presentaron pinzas mudadas y los demás de leche, 30% presentaron
rasamiento total de dientes definitivos con observación de raíz, mientras que 25%
también se encontraban con rasamiento total pero sin observación de raíz, 15%
presentaron un rasamiento total solo en pinzas, 5% rasamiento parcial de pinzas y
medios, y un 5% presentaron ausencia del medio izquierdo. El examen de sistema
digestivo solo evidenció un individuo (5%) con dilatación sugestiva de timpanismo.
A nivel de sistema musculo esquelético un individuo presentó fractura de tarso de
MPI y un individuo recapturado (10%) presentó una masa a nivel de rama horizontal
de mandibular izquierda. A nivel genitourinario dos hembras presentaron hallazgos
clínicos, una presentó congestión en mucosa vulvar y la otra una secreción
blanquecina también a nivel vulvar, dicha secreción se cree que pudo ser semen
pero no se confirmó; los sistemas respiratorio, circulatorio y linfático no presentaron
hallazgos al examen clínico.
38
Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas – ELISA
Una de las 20 muestras fue positiva, mientras que otra fue sospechosa, las
restantes 18 muestras fueron negativas, dando así una prevalencia del 5% para
DVB. La muestra positiva perteneció a una hembra adulta en puerperio, la muestra
sospechosa fue de un neonato de dos crías que nacieron en fechas similares, la
hembra positiva es una de las dos hembras que dieron a luz, por lo cual es posible
que fuera la madre de la cría sospechosa, en la Tabla 3 se describen los resultados
de cada una de las muestras, denotando el sexo, la edad, el resultado por
colorimetría y la interpretación de dicho resultado. Posteriormente el individuo que
dio positivo se recaptura y el resultado es negativo.
Tabla 3. Anticuerpos anti-DVB en O. virginianus, Cundinamarca, Colombia
Caso Sexo Edad Resultado Interpretación
V01 M G -75,65 Negativo
V02 H G -4,52 Negativo
V03 H A 5,45 Negativo
V04 H A 3,66 Negativo
V05 M J -12,48 Negativo
V06 M A -24,73 Negativo
V07 H A -2,68 Negativo
V08 M A -23,99 Negativo
V09 H J -21,68 Negativo
V10 M A 15,604 Negativo
V11 M A -79,65 Negativo
V12 M A -4,47 Negativo
V13 M A -14,51 Negativo
V14 H N -69,31 Negativo
V15 H N 30,14 Sospechoso
V16 M N -54,56 Negativo
V17 H A 75,855 Positivo
V18 M A -16,1 Negativo
V19 M A 8,078 Negativo
V20 H J 6,487 Negativo
V17 H A 4,526 Negativo
39
Hematología
Mediante el protocolo empleado se tomaron muestras de 20 individuos a los cuales
se les realizó hemograma y bioquímica sanguínea, para analizar los parámetros
fueron considerados los rangos obtenidos en este estudio (Anexos 6-7).
Hemograma
Los glóbulos rojos se encontraron dentro de los intervalos en 13 individuos, 3
estuvieron por encima, al igual que por debajo de los rangos. La hemoglobina
estuvo disminuida en 4 individuos, 4 individuos presentaron valores de leucocitos
elevados, 3 individuos valores de neutrófilos, 1 de linfocitos, 2 tanto de monocitos
como de eosinófilos; mientras que solo 3 animales presentaron neutrófilos
disminuidos, los demás analitos del hemograma no presentaron hallazgos de
importancia clínica (Anexo 8).
Química sanguínea
La glucosa se observó en 4 individuos elevada y en igual número disminuida, 7
animales presentaron este parámetro dentro del intervalo, el nitrógeno ureico en
sangre se encontró elevado en 3 casos y disminuido en 1, la CK se encontró
elevada en un caso, la creatinina elevada en 3 casos y disminuida en 1 (Anexo 8).
Mortalidad entre 1991-2013
Casuística y mensual
Durante el periodo evaluado se presentaron 136 casos, donde el año 2006 presentó
la mayor mortalidad 10.29% (16), el 2013 ocupo el segundo lugar con 8.82% (14),
seguido de 2003 con 7.35%, los demás años presentaron mortalidades entre 0.82 y
6.61%, siendo el 0.82% la mortalidad para el año 1991 (Figura 19). Al evaluar dicho
fenómeno por mes se observó un ligero aumento de la mortalidad en agosto
40
presentándose 22 casos (16.17%), seguido de junio con 16 casos (11,76%),
septiembre y octubre (10.29%), diciembre fue el mes que menos casos presentó
con 3 (2,2%), en 4 casos no se reporta este dato (Figura 20).
Figura 19. Mortalidad anual de O. virginianus entre 1991-2013
Figura 20. Mortalidad por mes de O. virginianus entre 1991-2013
Descripción demográfica
En cuanto al sexo el 49.26% fueron hembras, mientras que el 45.59% machos, un
5.15% fue indeterminado; el estado de desarrollo biológico evidenció que los
estadios iniciales fueron los más destacados siendo juveniles (25.74%), infantes
(22.79%) y neonatos (35%) con un 73.53%, el restante 22.96% fueron adultos,
0,74% geriatras y el 3.68% indeterminado. El origen de los animales fue en un
0
2
4
6
8
10
12
14
16
N°
Cas
os
0
5
10
15
20
25
Ene Feb Mar Abr May Jun Jul Ago Sep Oct Nov Dic NR
N°
caso
s
41
89.71% exhibición, mientras que, hospitalización 3.68%, cuarentena 1.46% y un
5.15% no reportado.
Diagnóstico clínico
La muerte súbita fue el diagnóstico más frecuente (23.53%), aunque en un 20.59%
de los casos no se reportó este diagnóstico, los traumatismos (12.5%) ocupan el
tercer lugar, seguido de los problemas respiratorios, de regulación de temperatura y
casos sin información con 6.62%, el quinto lugar lo comparten las enfermedades
digestivas y problemas pediátricos en un 5.15%, los choques y problemas
nutricionales 3.68%, un 2.94% de los animales fueron eutanasiados, 2.21% fueron
casos a esclarecer y finalmente un caso (0.71%) fue toxicológico (Figura 21).
Figura 21. Descripción de los diagnósticos clínicos
1
3
4
5
5
7
7
9
9
9
17
28
32
0 5 10 15 20 25 30 35
Tóxicológico
A esclarecer
Sacrificio In extremis
Choque
Nutricional
Digestivo
Pedriatria
Respiratorio
Sin información
Temperatura
Traumatismos
No presenta
Muerte súbita
N° Casos
42
Diagnóstico de necropsia
Los hallazgos a nivel de sistema respiratorio ocuparon el primer lugar con un
27.21%, dentro de los cuales la neumonía fue el diagnóstico de mayor importancia
con 17 casos (48.65%), la segunda alteración en este sistema fue el edema
pulmonar (37.84%) y finalmente la congestión (13.51%); los trastornos musculo-
esqueléticos ocuparon el segundo lugar con un 16.91% dentro de los cuales se
destacan lesiones traumáticas e infecciosas a nivel óseo; las alteraciones
nutricionales como las infestaciones ectoparasitarias y la caquexia se observaron en
el 13.24%, así como en un 11.76% fueron caracterizadas alteraciones digestivas,
dentro de las cuales las inflamatorias fueron importantes, en 12 casos (8.82%) no se
consiguió información al respecto, los trastornos urinarios, endocrinos, linfáticos y
nerviosos así como los cadáveres con autolisis no fueron de importancia en la
población (Figura 22).
Figura 22. Representación de los diagnósticos de necropsia
1
2
2
3
5
6
11
12
16
18
23
37
0 5 10 15 20 25 30 35 40
Nervioso
Autolisis
Linfatico
Endocrino
Urinario
No se observan Hallazgos
Cardiovascular
Sin información
Digestivo
Nutricional
Músculo esquelético
Respiratorio
N° Casos
43
Diagnostico histopatología
Los casos donde no se ha concluido un diagnóstico ocupan un 57.36% dentro de los
cuales en el 19.12% esta técnica no fue realizada, el 9.56% no presentó
alteraciones histológicas en los tejidos evaluados, un caso (0.74%) presentó
autolisis, así como otro caso (0.74%) presentó errores en la muestra, el 22.79% de
los casos no poseen información al respecto y finalmente un 4.41% de los casos
pertenecientes al año 2013 no poseen resultado histológico en este momento. Del
restante 42.64%, así como a la necropsia las patologías respiratorias ocupan el
primer lugar con un 13.97%, en segundo lugar las alteraciones digestivas con
10.29%, los problemas endocrinos y los choques comparten el tercer lugar (5.15%),
los cardiovasculares (3.68), las demás categorías no son de importancia por el
número de casos entre 1 y 2 (Figura 23).
Figura 23. Caracterización de los diagnósticos de histopatología
0 5 10 15 20 25 30 35
Dht., severa
Error en la muestra
Indt., autolisis
Infeccioso, micótico
Linfatico
Nutricional
Renal
Cardiovascular
Sin resultado
Choque
Endocrina
Sin alteraciones
Digestivo
Respiratorio
No realizado
Sin información
N° Casos
44
Correlación clínica – necropsia – histopatología (Figura 24).
A nivel respiratorio los casos con sospecha clínica fueron 9, a la necropsia se
diagnosticaron 37 y finalmente a la histopatología fueron 19, este valor debe
analizarse teniendo en cuenta el porcentaje de ausencia diagnóstica observado; 28
casos no presentaron diagnóstico clínico (Anexo 4), de ellos 12 resultaron con
alteraciones respiratorias, 9 cardiovasculares, digestivas y musculo esqueléticas con
3 cada uno, 4 casos fueron renales y nutricionales dos cada uno, y un caso fue de
sistema endocrino, finalmente 2 casos continuaron indeterminados, pero por
ausencia de información.
De los 32 casos con diagnóstico clínico de muerte súbita, 27 casos pudieron
esclarecerse a la necropsia ya que uno presentó un grado de autolisis severo y los 4
restantes no presentaron alteraciones patológicas a la necropsia, de estos a la
histopatología solo uno presentó lesiones (respiratorias), en los demás casos los
trastornos respiratorios fueron los de mayor presentación (8 casos), esta vez
seguidos de los nutricionales (6), los digestivos (4), cardiacos (3), músculo
esquelético y renal (2 c/u) y finalmente linfático al igual que nervioso un caso (Anexo
5). Los casos diagnosticados como traumatismos (17) a la clínica en la gráfica se
observan con nulidad a la necropsia e histopatología, se debe considerar que estos
diagnósticos a la necropsia exhiben lesiones a nivel músculo esquelético, de las
cuales hay 23 casos a la necropsia, 8 de los cuales corresponden a los 17
reportados en clínica, 3 no poseen información, 2 involucran lesiones respiratorias y
cardiovasculares, y los dos restantes uno es linfático y el otro digestivo.
Los casos categorizados dentro de pediatría a la necropsia describieron alteraciones
respiratorias, renales, cardiovasculares, endocrinas y un caso presento autolisis. La
eutanasia se presentó en 4 diagnósticos de clínica los cuales a la necropsia
evidenciaron problemas a nivel músculo esquelético. A la clínica no se observaron
casos que involucrarán al sistema cardiovascular, pero a la necropsia fueron
diagnosticados 11 y confirmados 5 a la histopatología, esto mismo fue observado en
el sistema linfático donde no hubo casos a la clínica pero si a la necropsia e
histopatología; al igual que con el sistema urinario con 5 casos reportados a la
necropsia y 2 a la histopatología. La categoría de trastornos en el balance de la
45
temperatura presentó 9 casos a la clínica, los cuales a la necropsia se distribuyeron
así, alteraciones nutricionales, digestivas y cardiovasculares presentaron 2 casos
cada uno, al igual que necropsias sin lesiones evidentes y caso restante involucró
sistema respiratorio.
Figura 24. Correlación entre los tres diagnósticos
Clasificación por sistemas de los hallazgos a la necropsia
Del total observado 14 casos no presentaron información de necropsia por lo cual se
muestran en la Figura 25 como casos sin información y poseen la línea de color
negro. El sistema respiratorio se encuentra en primer lugar de mayor presentación
de casuística con 90 de 136, el segundo lugar lo posee la inspección externa con 85
0 5 10 15 20 25 30 35 40
A esclarecer
Autolisis
Cardiovascular
Choque
Deshidratación
Digestivo
Endocrino
Error en la muestra
Infeccioso, micótico
Linfatico
Muerte súbita
Músculo esquelético
Nervioso
No presenta
No realizado
Nutricional
Pedriatria
Respiratorio
Sacrificio In extremis
Sin alteraciones
Sin información
Sin resultado
Temperatura
Tóxicológico
Traumatismos
Urinario
N° Casos Histopatología Necropsia Clínica
46
casos, los sistemas digestivo, cardiovascular, endocrino y urogenital ocupan los
lugares 3, 4 y 5 respectivamente, y al final se encuentran músculo esquelético,
nervioso y linfático este último con 21 casos.
Figura 25. Evaluación por sistemas a la necropsia.
Respiratorio
En este sistema la alteración más reportada fue la congestión tanto en pulmón como
en tráquea (40%), los trastornos infecciosos a nivel pulmonar también presentaron
gran frecuencia (21%) donde la neumonía es la principal. El edema pulmonar se
presentó en 14%, 2% de los casos presentaron autolisis (Tabla 4), en la Figura 26
se detallan las principales alteraciones observadas.
0 20 40 60 80 100 120
Urogenital
Respiratorio
Nervioso
Músculo-esquelético
Linfático
Inspección externa
Endocrino
Digestivo
Cardiovascular
N° Casos Sin información Con hallazgos Sin hallazgos
47
Tabla 4. Hallazgos reportados en sistema respiratorio
Figura 26. Alteraciones más importantes del sistema respiratorio, a) Superior
izquierda, neumonía necrótica moderada; b) Superior derecha, edema pulmonar
moderado; c) Inferior, vasos sanguíneos inter-anelares con moderada ingurgitación.
a) b)
c)
Fuente: Autor.
Hallazgo N° Casos
Autolisis 2 Múltiples órganos, congestión 63 Múltiples órganos, hemorragia 9
Pulmón, adherencia 15 Pulmón, antracosis 2
Pulmón, colapso 1 Pulmón, edema 22
Pulmón, enfisema 6 Pulmón, infarto 2
Pulmón, inflamatorio 34 Tráquea, contenido extraño 3
48
Inspección externa
La principal lesión fue la presencia de ectoparásitos (18%), donde el principal
reportado fueron las pulgas, la palidez de las mucosas (mucosas anémicas) obtuvo
un 15%, seguida de, efusión torácico-peritoneal y laceraciones con un 10% cada
una, el 2% dilatación abdominal, lesiones oculares, estado nutricional regular y
autolisis cada uno, 5% deshidratación y pelo hirsuto, 6% caquexia en diferentes
estadios, siendo moderada en 2 casos, 1% presentó prolapso de recto y pérdida de
un tercio de la mucosa anal por posible predación, la congestión de mucosas se
observó en el 4% de la población (Tabla 5).
Tabla 5. Hallazgos reportados a la inspección externa
Hallazgo N° Casos
Cadáver, abdomen, dilatado 3
Cadáver, alopecia 5
Cadáver, autolisis 3
Cadáver, caquexia 11
Cadáver, deshidratación 4
Cadáver, ectoparásitos 32
Cadáver, edema 2
Cadáver, efusión 17
Cadáver, estado nutricional, regular 3
Cadáver, hematoma 8
Cadáver, hemorragia 5
Cadáver, inflamatorio 4
Cadáver, laceración 17
Cadáver, lesión, ocular 3
Cadáver, pelo, hirsuto 4
Cadáver, traumatismo, herida, perforante 12
Cadáver. mucosa, anal, pérdida de 1/3 1
Mucosa, anal, prolapso 1
Mucosa, cianosis 3
Mucosa, congestión 7
Mucosa, hemorragia 3
Mucosa, pálida 26
49
Digestivo
En la Tabla 6 se detallan los hallazgos reportados, en primer lugar se encuentran
trastornos de origen inflamatorio, donde fueron observados glositis necrótica,
enteritis y necrosis lingual, dentro de las enteritis las acuosas, parasitarias y
hemorrágicas fueron las más comunes; en segundo lugar están los trastornos
vasculares congestión vascular y hemorragias; seguidos de las pérdidas de epitelio
(úlceras), donde los órganos de mayor frecuencia fueron lengua y abomaso; la
presencia de cuerpos extraños se reportó en 8 casos. En 6 oportunidades se
evidenció dilatación (Figura 27), la cual se asocia a timpanismo. Los demás
hallazgos presentaron menos de 4 reportes.
Tabla 6. Hallazgos en el sistema digestivo
Hallazgo N° Casos
Autolisis 2
Órganos TGI, congestión 32
Órganos TGI, dilatación 6
Órganos TGI, impactación 4
Órganos TGI, cuerpo extraño 8
Órganos TGI, hemorragia 9
Órganos TGI, úlcera 15
Órganos TGI, inflamatorio 39
Cavidad oral, 1 molar, ausencia 1
Órganos TGI, poco contenido alimenticio 2
Estómago, serosa, ventral, forma linear 1
Omento, nefroesplénico, tensionado 1
Generalizado, puntos negros 1
Intestino delgado, duodeno, pared, edema 1
Órganos TGI, adherencia 2
Rumen, traumatismo 4
50
Figura 27. Dilatación abdominal severa en un macho infante
Fuente. Autor
Cardiovascular
La cardiomegalia fue el hallazgo de mayor importancia en este sistema, observado
en 15 casos; los procesos inflamatorios ocuparon el segundo lugar solo 4 casos por
debajo del primero, donde el hallazgo principal fueron los nódulos miocárdicos con
compromiso pericardial; 9 casos presentaron efusión pericárdica, 8 infartos de
miocardio, 7 trombos, ese mismo número de casos presentó adherencias de
pericardio y miocardio (Tabla 7).
Tabla 7. Hallazgos en el sistema cardiovascular
Hallazgo N° Casos
Autolisis 2
Corazón, aumentado de volumen 15
Corazón, aurícula derecha, punción, iatrogénica 1
Corazón, congestión 2
Corazón, degeneración 1
Corazón, hemorragia 2
Corazón, infarto 8
Corazón, trombo 7
Múltiples órganos, inflamatorio 11
Múltiples órganos, adherencia 7
Pericardio, efusión 9
51
Endocrino
La autolisis se presentó en dos casos; el órgano de mayor importancia fue hígado,
en el cual la congestión junto a la megalia reportaron el mayor número de casos
(Figura 28), estos hallazgos también se reportaron en páncreas y glándulas
adrenales en un grado menor, los trastornos inflamatorios fueron evidentes en 9
casos, donde la nuevamente el hígado cumplió un papel importante con la presencia
de nódulos y granulomas a nivel de parénquima, en un caso se reportó la vesícula
biliar pletórica (Tabla 8).
Tabla 8. Hallazgos del sistema endocrino
Hallazgo N° Casos
Autolisis 2
Hígado, adherencia, diafragmática 2
Hígado, degeneración 4
Hígado, fibrosis 3
Hígado, friable 2
Hígado, ictericia 1
Hígado, inflamatorio 9
Múltiples órganos, congestión 21
Múltiples órganos, hemorragia 4
Múltiples órganos, megalia 17
Múltiples órganos, palidez 2
Vesícula biliar, pletórica 1
Figura 28. Hepatomegalia, O. virginianus, macho, infante
Fuente. Autor
52
Urogenital
En este sistema los hallazgos renales fueron los de mayor frecuencia; siendo la
congestión renal el más frecuente, la nefritis ocupó el segundo lugar, en 5
oportunidades se reportó vejiga pletórica; los órganos de reproductivo presentaron 3
reportes de hallazgos uterinos (Tabla 9).
Tabla 9. Hallazgos de sistema urogenital
Hallazgo N° Casos
Autolisis 2
Reproductivo, útero, cuello, engrosado 1
Reproductivo, útero, grávido 1
Reproductivo, útero, restos de placenta 1
Riñón, asimetría 1
Riñón, megalia 2
Riñón, estriaciones 4
Riñón, indiferenciación, cortico-medular 3
Riñón, adherencia 4
Riñón, nefritis 8
Riñón, congestión 15
Múltiples órganos, hemorragia 4
Riñón, pálido 3
Riñón, derecho, hematoma, múltiple 1
Riñón, friable 2
Riñón, grasa peri-renal, severa 1
Vejiga, pared, engrosamiento 1
Vejiga, pletórica 5
Músculo esquelético
Las fracturas se reportaron en 12 casos, en las cuales los huesos largos son los
más frecuentes a presentar fractura, en especial de miembros anteriores y
posteriores, aunque los huesos costales también son reportados con frecuencia, en
dos casos se presentó fractura de mandíbula; los hematomas son el segundo
hallazgo (10 reportes); a nivel inflamatorio se presentaron 7 casos de abscesos
53
mandibulares, los hallazgos denotan que en este sistema los trastornos
degenerativos no se han presentado (Tabla 10).
Tabla 10. Hallazgos a nivel músculo esquelético
Hallazgo N° Casos
Autolisis 2
Articulación, dislocada 2
Óseo, fractura 12
Múltiples tejidos, hematoma 10
Traumatismo 4
Múltiples tejidos, inflamatorio 7
Nervioso
A nivel nervioso solo se reportó la congestión como principal hallazgo (6 reportes), 2
casos presentaron autolisis y uno edema cerebral (Figura 29); en 16 reportes este
sistema no fue evaluado.
Figura 29. Edema cerebral discreto
Fuente. Autor
54
Linfático
Los linfonodos muestran un similar de reportes a los observados en bazo; el
principal hallazgo es linfomegalia a nivel de mesentéricos, reportado en 10 casos.
La palidez esplénica ocupa el primer lugar de los hallazgos en este órgano con 4
reportes, los demás hallazgos tanto esplénicos como linfáticos presentaron entre 1 y
2 reportes (Tabla 11).
Tabla 11. Hallazgos reportados en el sistema linfático
Hallazgo N° casos
Autolisis 2
Bazo, caudal, ruptura 1
Bazo, congestión 1
Bazo, friable 1
Bazo, hiperplasia de pulpa blanca 2
Bazo, pálido 4
Bazo, parénquima, nódulo, múltiple 1
Bazo, parénquima, puntos rojos 1
Ganglio, congestión 1
Ganglio, hemorragia 2
Ganglio, megalia 10
Causas de muerte
La categorización de los diversos procesos que desencadenan la muerte de un ser
vivo es de importancia para el desarrollo de estrategias de manejo poblacional, para
este caso, se usó la clasificación empleada por Matushima (2007): colapso
respiratorio, colapso cardiorrespiratorio, choque neurogénico, choque séptico,
choque endotóxico, choque hipovolémico, inanición, sacrificio In extremis e
indeterminado. La Figura 30 presenta los resultados de la clasificación donde la
categoría indeterminado posee el primer puesto debido al análisis de los hallazgos
reportados en las necropsias, muchas veces, estos no explican la muerte del
paciente, por ende es válido clasificar en indeterminado, ya que de esta manera se
pueden realizar otras técnicas o pruebas para determinar la causa de muerte del
55
animal, en segundo lugar se encuentra el colapso respiratorio, esto asociado a la
numerosa presentación de alteraciones que afectan la fisiología de este sistema
tanto directas como indirectas, los choques séptico y neurogénico se encuentran en
3 y 4 lugar ya que en algunos casos de observaron hallazgos compatibles con
sepsis y con alteraciones nerviosas directas pero principalmente indirectas, el
colapso cardiorrespiratorio se observó en menor cantidad a igual que el choque
hipovolémico, el sacrifico In extremis fue dado en 7 casos debido al criterio del
profesional a cargo, finalmente el choque endotóxico y la inanición fueron las
categorías de menor frecuencia. La mortalidad presentada en 2006 no posee
patrones similares para determinar un evento de importancia en la población.
Figura 30. Identificación de las causas de muerte para la población
0 10 20 30 40 50 60
Inanición
Choque endotóxico
Choque hipovolémico
Sacrificio In extremis
Colapso cardiorespiratorio
Choque neurogénico
Choque séptico
Colapso respiratorio
Indeterminado
N° casos Sin información
56
DISCUSIÓN
El protocolo aquí propuesto es novedoso, debido a que presenta de manera
detallada el paso a paso para el abordaje clínico de la especie (incluyendo el
condicionamiento previo), con respecto a los documentos de la revisión de literatura,
donde se encontraron protocolos de manejo para cérvidos en los cuales el
componente clínico no es abordado en detalle, mientras que los datos de manejo
nutricional e infraestructura son más profundizados, a nivel médico-veterinario la
información encontrada se remite a las principales enfermedades infecciosas y no
infecciosas que posee la especie (The Wildlife Society, sf; Michigan Department of
Natural Resources and Environment, sf.), el protocolo con mayor temática
encontrado es el manual de cuidado para tapíridos de la AZA (2013).
Protocolo anestésico
La tabla 12 presenta una comparación las dosis reportadas para inmovilización de
cérvidos, en cuanto a la ketamina la dosis de 7,14± 3,39 mg/kg fue relativamente
mayor a las dosis reportadas en la literatura, ya que Muller et al., (2007) empleó una
dosis de 7.8 mg/kg pero nuestra SD es de 3.39 mg/kg, la dosis más baja fue de 2
mg/kg reportada por García et al. (1998) en ciervo ibérico. En cuanto a la xilacina la
dosis empleada se encuentra en los rangos que reporta la literatura 0.48-2.2 mg/kg.
Tabla 12. Relación dosificación de ketamina y xilacina para la inmovilización de
cérvidos
Autor ±-
SD
Kreeger et al. (1986)
Wallingford et al. (1996)
García et al. (1998) +
Monteith et al. (2012) *
Muller et al. (2007)
Ketamina (mg/kg)
7.2± 3.4 4,75 1,8 - 4,4 2 1,92 7,8
Xilacina (mg/kg)
0.81±
0.2
1,58 1,1 - 2,2 0,8 0,48 1,6
* Empleando T/Z
+ Protocolo empleado en Cervus elaphus hispanicus
57
García y colaboradores (1998) usaron X 0.8 mg/kg y K 2 mg/kg, en 10 hembras de
la especie Cervus elaphus hispanicus, el tiempo de inducción fue de 2.1 min con un
rango entre 1 y 5 minutos, 3.5 min por debajo del tiempo de inducción presentado
en este estudio. Monteith y colaboradores emplearon Tiletamina-Zolazepam (T-Z) a
2.41 mg/kg junto a K y X, disminuyendo las dosis de K y X así: K 1.92 mg/kg y X
0.48 mg/kg, lo cual es significativo por disminución de los volúmenes, protocolo
empleado para la captura de O. virginianus en vida libre. Con T-Z/K/X el periodo de
recumbencia esternal fue de 8.65 min, el de recumbencia lateral de 12.11 min
(Monteith et al., 2012), este primero un minuto por debajo del observado en esta
investigación 9.9+/- 8.8 min, empleando solo K/X.
Después de la aplicación de xilacina disminuye el interés por los estímulos externos
posteriormente se presenta bradicardia, bradipnea y depresión pulmonar (García et
al., 1998) en esta investigación se pudo presenciar la disminución a los estímulos
externos, pero al haber aplicado la xilacina junto a la ketamina no podemos afirmar
que dicho efecto sea causado por esta o por su sinergismo con la ketamina.
A dosis elevadas de xilacina se puede observar parálisis lingual, la cual se observa
por visualización de la lengua fuera de la boca, también se puede generar un
aumento en la producción de saliva, la cual sale al exterior de la cavidad oral
(García et al., 1998); En dos individuos donde se emplearon dosis de 1 y 1.1 mg/kg
se observó la parálisis lingual, pero sin presentación de sialorrea, aunque en un
individuo la dosis empleada fue de 1.8 mg/kg y no observado ninguno de estos
efectos. Así como sugiere García et al. (1998), durante el periodo de inducción los
animales inclinaron la cabeza, perdieron estación y se posicionaron primero en
decúbito esternal y finalmente en decúbito lateral (Figura 31).
58
Figura 31. Posicionamientos post-aplicación IM de XK. a) Imagen izquierda,
posicionamiento en decúbito esternal, b) Imagen derecha, posicionamiento en
decúbito lateral izquierdo.
a)
b)
Fuente: Correa, 2013.
La yohimbina se ha empleado a 0.25mg/kg, con reincorporación en 2 minutos post-
aplicación, un estudio donde fue exitoso en 8 de 10 individuos (García et al.,1998),
en este caso se empleó a 0.3mg/kg, presentando un tiempo total de anestesia de
61,8+/- 12.7 min, la yohimbina se suministró al minuto 60 post-aplicación de xilacina,
59
es decir se presentó un tiempo de 1.8 minutos en promedio, en el protocolo
realizado se mantuvo al animal tranquilo durante 5 minutos post-aplicado, y después
se estimulaba para inducir su reincorporación, esta fue exitosa en 17 de los 18
animales. Monteith y colaboradores (2012) emplearon el antagonista 47.3 post-X, a
dosis de 0.11 mg/kg, teniendo un tiempo de recuperación de 74.5 ± 13.1 min,
aunque en dicho estudio se evaluó el efecto de la Tolazolina como antagonista
observando un tiempo de recuperación de 12.5 ± 12.3 min a dosis de 4 mg/kg, por
lo cual reportan mejores efectos con este principio activo, teniendo en cuenta el
periodo de recuperación presentado en este estudio, en condiciones de cautiverio y
procedimientos cortos el protocolo empleado por nosotros es recomendado.
Hemograma
El promedio de glóbulos rojos presentado (9.96 x 106 µL) difiere con los reportados
en la literatura para O. virginianus, ISIS (2002) 12.01 x 106 µL, Lovera (2011) en un
estudio realizado Perú con animales en cautiverio determinó este parámetro en
10.12 x 106 µL, mientras que Powell y DelGuicide (2005) en 7.8 x 106 µL para
neonatos; teniendo en cuenta las condiciones ambientales y de distribución el
estudio de Lovera se asemeja más a este, por los cual la comparación se realizó
con el mismo; el hematocrito, hemoglobina, volumen corpuscular medio,
hemoglobina corpuscular media y concentración de hemoglobina corpuscular media
observados en este trabajo fueron mayor con relación a los valores presentados por
Lovera (2011), esto puede deberse a las diferencias reportadas en altitudes
mayores (Claxton y Ortíz, 1996), teniendo en cuenta que Lima, Perú se encuentra al
nivel del mar y Tocancipá a 2650 smnm; Estudios en otras especies como ciervo
común (Marco y Lavin, 1999; Topal et al., 2010) y en ciervo del pantanal (Szabó et
al., 2005) presentan diferencias de hasta dos unidades en la mayoría de analitos, el
trabajo realizado por Topa y colaboradores (2010) es el que presenta mayor
similitud en los valores, pero se debe tener en cuenta que son dos especies
diferentes y las condiciones ambientales también difieren.
60
Diarrea viral bovina
Técnicas diagnósticas - ELISA
En este estudio se tomaron muestras del 62.5% de la población, de los cuales el
90% fueron individuos negativos, 5% sospechosos y 5% positivos, el individuo
sospechoso corresponde a un neonato (hembra) el cual se encontró muerto en el
encierro, al realizar la evaluación clínica se decidió realizar venopunción tanto
femoral como intracardiaca; una vez identificada la madre de este cervatillo se
capturó al examen serológico este individuo corresponde al positivo, por lo cual se
deja abierta la posibilidad de trasmisión en periodo pre natal o perinatal de este
agente, aunque también se pueden atribuir estos niveles de anticuerpos con la
inmunidad materna (Smith y Grotelueschen, 2004).
Teniendo en cuenta el fundamento de la técnica (cuantificación de anticuerpos
específicos a una proteína no estructural “p80/125”), y que esta población no ha
expuesta a vacunación, la evidencia de reacción inmune en este individuo se
atribuye a multiplicación post-infección. Un estudio similar fue realizado por
Kirchgessner et al. (2012) empleando un kit comercial diferente, donde tomaron
muestras de O. virginianus en Nueva York y Pennsylvania con prevalencia de 6.01%
y 0.34% respectivamente, las muestras sospechosas y positivas se confirmaron
mediante seroneutralización.
En California se realizó un estudio para monitorear el estado sanitario del venado
bura (Odocoileus hemionus), donde VDVB presentó prevalencia de 17.1%, para
2619 muestras tomadas entre 1990-2007 (Roug et al., 2012). En bovinos se han
comparado las técnicas de neutralización viral (NV) y ELISA, esta última presentó
una sensibilidad menor, es decir de 64 muestras positivas logró identificar 60, es
decir, una sensibilidad de 93.75% (Zarkov y Jarullah, 2012), aunque Beaudeau et al.
(2001) y Solis-Calderon et al. (2005) postulan sensibilidad de 96.9 - 97.9% y
especificidad entre 97.3-97.9% para ELISA indirectos y de bloqueo, en sueros de
bovino. Los antígenos E2, E0 y NS3 revelan especificidad entre 98.6-100% aunque
su sensibilidad es menor 76.9-93.8%, siendo NS3 el mejor (Chimeno Zoth y Taboga,
2006).
61
Los estudios que involucran VDVB en O. virginianus describen prevalencias entre
0.34 y 63%, realizados en poblaciones In situ de Estados Unidos y México (Aguirre
et al., 1995; Cantú et al. 2008; Kirchgessner et al., 2012), cabe resaltar que en la
mayoría de las investigaciones VDVB se encuentra dentro del panel de agentes
infecciosos. En infecciones experimentales se ha demostrado que los individuos
pueden estar seronegativos pero mediante técnicas biológica como RT-PCR
demostrar la presencia del virus, e incluso mediante hisopados nasal y rectal tener
resultados positivos en aislamiento viral (AV) e hibridación In situ (HIS) (Raizman et
al., 2009). En 2007 Passler y su grupo de estudio demostraron la presencia de un
venado coliblanco persistentemente infectado, con el genotipo DVB-2, diagnosticado
mediante aislamiento viral, IHQ y RT-PCR.
Desarrollo clínico
El examen clínico del cervatillo sospechoso evidenció: a) condición nutricional
regular determinada por el grado de desarrollo de musculatura esquelética y su
relación con la palpación y visualización de accidentes óseos y b) pelaje hirsuto, los
demás órganos y sistemas no presentaban anormalidades; el estado nutricional
regular se encuentra relacionado con estados caquécticos y pelaje hirsuto, signos
evidenciados en infección con VDVB-1 (Tessaro et al. 1999, Flores et al., 2000); por
otro lado, la infección con VDVB-2 es caracterizada por: anorexia progresiva, atonía
ruminal, diarrea parda oscura sanguinolenta, tenesmo, deshidratación, congestión
conjuntival, disnea, secreción nasal muco-purulenta e incluso muerte, este cuadro
puede desarrollarse entre 7 y 10 días post-infección (Flores et al., 2000). Según los
estadios de infección fetal propuestos por Grooms (2004), este individuo pudo
contraer la infección en los 2 últimos tercios, ya que en estos el individuo puede
desarrollar inmunotolerancia (2/3) o simplemente ser seropositivo (3/3), en los dos
casos el individuo no exhibe signos clínicos de enfermedad, cabe aclarar que las
infecciones en tercio medio pueden ocasionar abortos y alteraciones congénitas, las
cuales favorecen la muerte peri-natal. Ridpath y su grupo de estudio en 2012
determinaron que los efectos del virus en O. virginianus infectados en segundo y
62
tercer tercio de gestación son similares a los observados en bovinos (abortos o
animales con serología negativa pero niveles de anticuerpos maternos).
En el estudio retrospectivo el 47.79% de la mortalidad observada involucró neonatos
e infantes, con un promedio de 3 individuos por año, teniendo en cuenta el hallazgo
del individuo sospechoso, es necesario analizar si la mortalidad de este grupo etario
está relacionada con VDVB directa o indirectamente.
La hembra positiva no presentó alteraciones al examen clínico, esto puede deberse
al carácter asintomático del VDVB en cérvidos (Chase et al., 2008): en 1999
Tessaro y colaboradores evaluaron el desarrollo de infección experimental en
Cervus elaphus, siendo de curso asintomático, por otro lado se evidenció la
seroconversión de un individuo del grupo control que estuvo en contacto con
animales infectados, demostrando que la especie es susceptible a la infección y
puede transmitirla a otros individuos. En 2007 Ridpath y colaboradores observaron
evolución clínica de cervatillos infectados, donde la fiebre y la linfopenia fueron los
hallazgos de mayor importancia. De esta manera se puede probar que la infección
es similar en venados y en bovinos.
Exámenes paraclínicos
El hemograma y química sanguínea del cervatillo sospechoso reveló: a)
hematocrito, hemoglobina y VCM elevados, b) leucocitosis con neutrofília, monofilia,
c) trombocitopenia, las enzimas AST y ALT se encontraron por debajo del rango
mientras que el BUN elevado; la leucocitosis puede asociarse a los hallazgos a la
necropsia (ver siguiente párrafo), por otro lado, la trombocitopenia es un hallazgo
común en infecciones con VDVB según Lértora (2003) y Rondón (2006). Se ha
reportado que en terneros con alteraciones inmunológicas, estas se pueden
relacionar a infección con VDVB, la cual se puede cuantificar mediante IHQ por
marcación de antígeno a nivel de megacariocitos y células mieloides (Spagnuolo et
al., 1997). Mientras que los exámenes paraclínicos de la hembra positiva no
evidenciaron alteraciones compatibles con infección por VDVB, el hemograma se
encontró dentro de los rangos, mientras que la enzima GGTP estuvo elevada y
63
albumina, bilirrubinas (indirecta, directa y total), AST y colesterol total se
encontraron discretamente por debajo del rango.
Necropsia
Al examen necroscópico se observó: enteritis acuosa discreta y congestión
pulmonar discreta; En el estudio retrospectivo el 22.79% presentaron colapso
respiratorio como causa de muerte, mientras que el 66.17% de la población
presentó alteraciones respiratorias a la necropsia, los principales hallazgos fueron:
congestión pulmonar moderada a severa, pleurobronconeumonia exudativa
moderada a severa y edema pulmonar severo; la congestión pulmonar
principalmente se presenta como medida de protección (migración de leucocitos)
ante un proceso infeccioso en estadio inicial (Ridpath, 2010b).
Los individuos 1, 3, 11(19), 14, 15, 16 y 20 fallecieron durante el estudio, a la
necropsia se pudo evidenciar que los 6 individuos presentaron un estado nutricional
regular, también se observó neumonía exudativa severa en 3 animales (1, 3, 11(19))
los cuales eran 2 machos y una hembra adultos, los casos 14, 15 y 16 corresponden
a 3 neonatos uno de ellos sospechoso, ninguno de estos animales presentó signos
en común, el individuo 20 tuvo una fractura completa de tarso, se realizó
intervención quirúrgica pero al poco tiempo reincidió en la fractura después del
examen médico-veterinario se optó por la eutanasia
Diéguez et al. (2009) postula una posible relación entre poblaciones positivas a
VDVB y la presentación de neumopatías; así mismo, se reporta que los trastornos
respiratorios y entéricos son observados en infecciones por VDVB, ya que el efecto
inmunosupresor hace que otros agentes infecciosos como: Rinotraqueitis Infecciosa
Bovina (IBR), Parainfluenza-3 (PI-3), Mycoplasma bovis y Mannheimia haemolytica
se replique en el individuo generando los cuadros infecciosos y patológicos
conocidos en cérvidos (Orr, 1991; Aguirre et al., 1995; Dyer et al., 2004; Ridpath,
2010a; Maggi et al., 2013). Ridpath (2010a) postula que el desarrollo del cuadro
clínico es favorecido por factores como: la virulencia de la cepa, el tiempo de
exposición, el tipo de infección y la presencia de patógenos secundarios, aunque los
64
animales PI tienen mayor riesgo de mortalidad respiratoria, debido a infecciones
secundarias. Los trastornos dermatológicos también pueden estar asociados a este
agente (Odeón et al., 2003).
En cuanto a la mortalidad perinatal, el 45% de los casos posee información de
histopatología donde se observa que el 30% presentaron trastornos a nivel de
sistema respiratorio y el 13% trastornos digestivos (Figura 32). A nivel respiratorio
las neumonías intersticiales y las bronconeumonías purulentas fueron las de mayor
importancia, y las cuales pueden estar relacionadas con Mycoplasma bovis o
Mannheimia haemolytica, dos agentes que se favorecen de los efectos
inmunosupresores de VDVB (Dyer et al., 2004; Maggi et al., 2013). Se ha
determinado que en infecciones asociadas entre VDVB y Neospora caninum se
favorece la presentación de abortos (Stahl et al., 2006 y de Melo et al., 2004).
Figura 32. Principales causas de mortalidad en neonatos
Colombia y VDVB
La literatura menciona que en Colombia se desconoce la presencia de los genotipos
y subgenotipos de VDVB, la investigación ha revelado su importancia dentro del
complejo reproductivo, al generar pérdidas por abortos, aumento de días abiertos,
Respiratorio 30%
Digestivo 13%
Endocrino 20%
Cardiovascular 7%
Séptico 7%
Deshidratación severa
3%
Urinario 3%
Sin lesiones 17%
65
baja calidad de semen de los reproductores, disminución en la reproducción y
costos en el tratamiento así como su asociación al complejo respiratorio bovino, las
pérdidas estimadas por el complejo reproductivo ascienden a 44.000.000 millones
de pesos anuales, donde se cree que gran parte de estas involucran VDVB (Vargas
et al., 2012);
Mortalidad
Para el estudio retrospectivo la principal causa de muerte fue el choque respiratorio
(22.79%), seguido de choque séptico (11.76%), choque neurogénico (11.03%),
colapso cardiorrespiratorio (8.09%), choque hipovolémico y sacrificio In extremis
(5.15%) cada uno, choque endotóxico (1.47%) y finalmente inanición (0.74%).
Estudios en poblaciones In situ denotan que los eventos traumáticos
(intraespecificos, autoinducidos e interespecificos) o inducida por actividades
antrópicas como los atropellamientos son la principal causa (Dinkines et al., 1992;
Nettles et al. 2002; Vreeland et al., 2004). Un estudio descriptivo determinando la
mortalidad de poblaciones In situ de Capreolus capreolus en Suecia, determinó: que
los traumatismos (19%) son la principal causa de muerte, seguido de inanición
(18%), Enteritis y gastritis (15%), infecciones bacterianas (11%), infecciones
parasitarias (11%), enfermedades sistémicas (11%), neoplasias (2%) y finalmente
desordenes congénitos (1%) (Aguirre et al., 1999).
Mientras que en poblaciones ex situ las causas varían; según Hattel et al. (2004),
procesos infecciosos como bronconeumonías, enterocolitis son las principales
causas de mortalidad, aunque la desnutrición y los traumatismo también son
frecuentes.
Se conoce el riesgo de la especie a desarrollar abscesos intracraneales
desencadenados principalmente por Arcanobacterium pyogenes, ingresando por vía
dérmica, este proceso ocasiona eventos de mortalidad en Estados Unidos (Karns et
al., 2009).
66
Mediante este trabajo se realizó un abordaje integral a una población de O.
virginianus con el fin de determinar el estatus epidemiológicos hacia VDVB, para ello
se postuló un protocolo de manejo clínico el cual fue basado en el acercamiento
metodológico desarrollado; este acercamiento demostró la efectividad del
condicionamiento operante al capturar individuos mediante técnicas de aplicación
farmacológica a distancia, ya que durante los abordajes anestesiológicos no hubo
complicaciones cardiorrespiratorias y sistémicas (P.e. parada cardiorrespiratoria,
miopatía de captura) presentadas en individuos sometidos a procesos agudos de
estrés (Koncan et al., 1980; Beringer et al., 1996).
Con los resultados serológicos se evidenció el desarrollo de actividad inmunológica
en la población, la cual se vio reflejada en el individuo positivo, con lo cual se deja
abierta la posible presencia del VDVB en la población, debido a la baja expresión
inmunológica de los individuos se postula la posible presencia de una cepa no
citopática, debido a que la reacción inmune en estas cepas es menor a comparación
de cepas CP.
El individuo positivo se capturo por segunda vez 57 días después dando resultado
negativo, lo cual se puede asociar al periodo de viremia de este agente por lo cual
57 días después los niveles de anticuerpos pueden encontrarse disminuidos; por
otro lado, como la técnica es diseñada para identificar animales PI (bovinos) no es
conocido como es el PI a nivel inmunológico en cérvidos, por lo cual se deja abierta
la posibilidad de que este individuo sea inmunotolerante (Passler, 2007; Passler,
2008; Roug et al., 2012).
67
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Conclusiones
Mediante el protocolo de manejo clínico diseñado e implementado se proporciona
un protocolo anestésico práctico, eficiente y eficaz, así como la facilidad de emplear
los formatos utilizados por la institución. También se logra obtener un rango de
parámetros hematológicos y de química sanguínea para la especie en condiciones
de cautiverio, y en altitud mayor a 2500 msnm.
La utilización del condicionamiento operante en poblaciones de cérvidos es
adecuada para disminuir los niveles de estrés al momento de la captura, así como
favorece la aplicación de fármacos anestésicos a distancia ya que reduce la
distancia del operario y el individuo a capturar. Así mismo el condicionamiento
puede llegar a brindar la posibilidad de tomar muestras (p.e. hisopados, saliva,
secreción nasal y pelo) sin tener que realizar inmovilización química. Por otro lado,
el condicionamiento se dificulta debido al carácter social de la especie, ya que los
individuos de mayor jerarquía limitan el acercamiento al operario de individuos de
menor jerarquía.
El protocolo anestésico brindó resultados adecuados tanto en el funcionamiento
cardiorrespiratorio de los individuos intra y post-anestesia, así como en los tiempos
de inducción y recuperación, los volúmenes utilizados no sobrepasaron los 3 mL lo
cual facilita el ingreso de la mezcla anestésica al momento del impacto del dardo, el
volumen también facilita el uso de dardos tamaño pequeño, lo cual favorece al
operario ya que al utilizar cerbatana se puede obtener mayor distancia de disparo.
Se demostró la presencia de anticuerpos específicos para VDVB en la población
cautiva de venados coliblancos; con lo cual se brinda información de importancia
para el monitoreo de VDVB en poblaciones de venados cola blanca, teniendo en
cuenta su importancia en la interfaz con animales de producción como bovinos.
También se demuestra que debido a las características inmunológicas del virus, la
transmisión, la replicación y el cuadro clínico desarrollado en venados se hace
68
necesaria a aplicación de dos técnicas diagnósticas para confirmar la presencia del
agente en un individuo o una población
Mediante el desarrollo del estudio retrospectivo de observó la importancia de un
buen diagnóstico clínico, la realización de una técnica necroscópica adecuada, la
descripción adecuada de alteraciones, el análisis de los hallazgos y la importancia
del diagnóstico histopatológico para la determinación de mortalidad en una
población con el fin de desarrollar estrategias de control.
Recomendaciones
La determinación de anticuerpos relacionada con los efectos secundarios y sus
consecuencias hacen de vital importancia la aplicación de otra técnica diagnóstica
para confirmar la sospecha de VDVB, el autor recomienda una técnica de
aislamiento viral o antigénica. Por lo cual, para obtener resultados de mayor
impacto, se recomienda para futuros estudios emplear dos técnicas diagnósticas
una que evalúe anticuerpos y otra que determine antígenos o el agente como tal.
También se recomienda la captura de la totalidad de la población estudiada,
principalmente de los machos para determinar la presencia de animales PI.
Se recomienda evaluar otros protocolos anestésicos, para aumentar el espectro
farmacológico, teniendo en cuenta que los resultados con este protocolo fueron
óptimos, se podrían evaluar otros fármacos como Tiletamina-Zolazepam,
Dexmedetomidina, Azaperona y Butorfanol, entre otros, ya que estos fármacos
actualmente son usados para la inmovilización de cérvidos en el mundo.
Se recomienda crear un banco de sueros para que de tal forma se puedan
conservar muestras que en estudios futuros ayuden a incrementar la muestra (n) del
investigador y de esta forma realizar una evaluación sanitaria de poblaciones a largo
plazo.
Valdría la pena evaluar el estatus epidemiológico de las demás especies de
cérvidos colombianos hacia este agente con miras a futuros planes de monitoreo de
fauna silvestres, en este caso de importancia por su interfaz doméstico-silvestre.
69
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anticuerpos contra el virus de la diarrea viral bovina de un hato en proceso de
82
erradicación de la enfermedad. Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú.
Vol. 17(1): 44-50.
83
Anexo 1. Protocolo de manejo de venado coliblanco (O. virginianus) en colecciones
zoológicas.
Objetivo
Proporcionar a instituciones zoológicas una guía de manejo clínico para venado
coliblanco, con énfasis en manejo químico, examen clínico y toma de muestras
Introducción
El manejo médico de animales en cautiverio es una herramienta indispensable en
colecciones zoológicas, teniendo en cuenta herramientas como el entrenamiento
este manejo puede ser cada vez menos traumático y estresante para los animales;
los venados son animales que por sus condiciones en vida libre suelen ser muy
nerviosos, en cautiverio se han adaptado con buenos resultados, en general el
manejo médico suele ser traumático y de dificultad, por lo cual el condicionamiento
operante es una herramienta con grandes ventajas al ser usada en la especie, con
ella se pueden estimular conductas como la adaptación y el acercamiento a
personal dentro del encierro, con lo cual la administración de medicamentos (orales)
puede ser satisfactoria, así como el manejo químico de los animales. Este protocolo
brinda a las instituciones una guía básica de manejo clínico de venado coliblanco.
Pasos
1. Observación preliminar del estatus sanitario:
Esta observación se realiza previa a la captura, su objetivo es seleccionar el o los
individuos a capturar, para ello, se debe conocer el objetivo del procedimiento (p.ej.
evento medico de importancia (absceso, fractura, neumopatía, enteropatía, etc.),
marcaje, toma de muestras para chequeos sanitarios (sanguíneas, hisopados,
biopsias, etc.); una vez tenga identificado el individuo, debe realizar una evaluación
médica con la cual determine el estado general del animal, en el examen debe tener
en cuenta: el comportamiento del animal solo e interactuando con otros individuos,
la conducta del animal con el personal de la institución (condicionamiento, ver más
84
adelante), si presenta signos de enfermedad (consistencia heces, secreciones en
mucosas, tos, signos neurológicos, etc.), si se decide realizar la captura del animal
esta información deberá quedar registrada en el formato de evolución del individuo.
2. Contención química:
Evaluación estado sanitario del animal: esta evaluación es similar a la presentada
en el paso 1, solo que esta se realizada justo antes de la captura del animal, de ella
depende la captura, ya que animales con signos de estrés no van a presentar una
respuesta anestésica adecuada, así como el riesgo a presentar de miopatía de
captura, esta evaluación se registra en el formato de anestesia , en la casilla de
observaciones (el formato de anestesia puede ser el empleado por su institución, en
este protocolo se presenta el formato empleado en la institución donde se realizaron
las capturas).
Evaluación de condiciones ambientales: es de suma importancia antes de
planear la captura evaluar las condiciones ambientales (precipitación y temperatura
principalmente), ya que si su institución no posee infraestructura para evitar las
condiciones ambientales, el manejo químico puede ser riesgoso para la salud del
animal (hipotermia o hipertermia), aunque este factor no es indispensable para la
realización de la captura (puede trasladar el animal a la clínica y mantener control
de temperatura en ella).
Evaluación logística: esta evaluación se realiza previa a la captura, en ella se
deben preparar todos los instrumentos y materiales que vaya a emplear, se
recomienda llenar una hoja de chequeo (protocolo recomendado Ketamina 7.2+/- 3.4,
Xilacina 0.81+/- 0.2, usando Yohimbina 0.3 mg/kg como antagonista.
Preparación de material: en este paso se deben armar y probar los equipos que va
a emplear para la contención: dardos y equipo de aplicación del dardo (cerbatana,
pistola de aire comprimido, o la que posea su institución), posteriormente con las
dosificaciones previamente realizadas se arma el dardo y deja cargado (bajo
supervisión de una persona).
Captura: para la captura usted debe cumplir las cuatro actividades anteriores, debe
tener en cuenta que con la cerbatana usted alcanza máximo 15 metros de distancia
(con viento a favor), con la pistola se pueden alcanzar distancias de 30 metros; sin
tener en cuenta la técnica a emplear, usted deber realizar un acercamiento
despacioso y con cuidado de no alterar la población, en este paso el
condicionamiento de los animales juega un papel importante, ya que con este las
distancias entre el veterinario y el animal se pueden disminuir considerablemente
85
(Tenga en cuenta que durante el procedimiento se debe llenar el registro de
anestesia).
Nota: una vez el animal este bajo los efectos anestésicos y se realice la contención
física debe iniciarse el monitoreo cardiaco, el monitoreo respiratorio debe realizarse
durante todo el procedimiento; este debe realizarse minuto a minuto registrando en
el formato cada 5 minutos, la temperatura debe tomarse mínimo tres veces (inicio,
intermedio y final).
3. Contención física
Tenga en cuenta que la contención física se debe realizar con el animal bajo
anestesia para seguridad tanto del personal como del animal. El manejo debe incluir
mínimo tres personas distribuidas así: miembros anteriores, miembros posteriores y
cabeza, los miembros se deben sujetar por encima de tarsos y carpos haciendo
énfasis a la inmovilización de estos, la cabeza se sujeta desde los occipitales (si es
macho de la base de las astas).
Nota: durante la contención física se deben cubrir los ojos con un textil negro, para
limitar la visión del individuo y de esta manera brindar mayor calma al animal.
Posicionamiento: el animal se debe posicionar en decúbito lateral izquierdo para
favorecer la salida de gases y evitar el timpanismo, continuando con la sujeción de
miembros y cuello.
Manejo intra y post-operatorio: debe tener en cuenta que el animal todo el tiempo
debe mantenerse con sujeción física.
4. Examen clínico
Para la realización del examen clínico se debe llenar el formato empleado en su
institución.
Anamnésicos: en este se llenan los datos de identificación del animal así como una
breve reseña del paciente.
Inspección general y signos vitales: se evalúan el estado de condición corporal,
el estado general, el estado de hidratación y las constantes fisiológicas.
Evaluación sistemática: evaluación de cada uno de los sistemas para determinar
signos de enfermedad (piel y pelaje, cavidad oral, sistema digestivo, respiratorio,
circulatorio, reproductivo, músculo esquelético, linfático, urinario y nervioso).
86
Lista de problemas y diagnósticos diferenciales: una vez tenga sus resultados
clínicos debe realizar la lista de problemas para determinar los diagnósticos
diferenciales
Nota: deben registrarse los medicamentos aplicados con dosis del fármaco, dosis
aplicada y concentración del producto.
5. Toma de muestras
Sanguínea: se emplea la vena yugular izquierda, para ello el animal debe
encontrarse bajo anestesia, se posiciona en decúbito lateral derecho, los miembros
anteriores se dejan pegados al cuerpo pero estirados y la mandíbula se deja en
ventro-extensión con el fin de dejar expuesto el cuello, justo antes de la entrada al
tórax se realiza una ligera presión en el canal yugular para visualizarla a lo largo del
cuello, posteriormente se aplica alcohol como método de desinfección y al mismo
tiempo para visualizar el vaso, para la venopunción se emplea aguja hipodérmica de
calibres 21½ o 16G y jeringa de 10 mL o venoject® con camisa, para ingresar al
vaso se posiciona la jeringa a 45° aproximadamente y se ingresa aproximadamente
1,5 cm de la aguja de forma paralela al surco yugular. Al obtener la muestra
sanguínea se coloca en tubos sin anticoagulante par suero y con EDTA para sangre
completa.
Órganos:
Técnica de necropsia por abordaje lateral
Este abordaje se realiza cuando el tamaño del animal imposibilita el abordaje por
línea media, o en sospechas de problemas respiratorios para realizar una extracción
de un gradíl costal, esta técnica de describe debido a episodios de mortalidad que
se pueden presentar post-captura, los cuales deben esclarecerse con necropsia u
otras herramientas diagnósticas.
a. Posicionamiento
En esta técnica el cadáver se posiciona en decúbito lateral derecho, en los
rumiantes es de importancia ya que de este modo el rumen queda expuesto y se
disminuye la probabilidad de perforación de órganos.
87
Figura 1. Posicionamiento en decúbito lateral.
b. Extracción de miembros contralaterales
Ya posicionado el cadáver se procede a retirar los miembros anterior y posterior
izquierdos, El miembro anterior izquierdo se retira realizando un corte a nivel axilar y
se separa la fascia subescapular hasta retirar el miembro; para el pelviano se realiza
un corte de musculatura glútea y femoral hasta llegar a la articulación coxofemoral,
en la articulación se inciden todos los ligamentos y se desarticula cabeza de fémur
de fosa acetabular (Figura 2 y 3).
Figura 2. Extracción de miembros anterior
}
88
Figura 3. Extracción de miembros posterior
c. Primera abertura
Se realiza el mismo corte que en la técnica anterior, pero en esta, se separa la piel
desde el corte hasta la línea dorsal desde la región cervical alta hasta el sacro
(Figura 4).
Figura 4.Primera incisión
d. Visualización de cavidades
Mediante esta técnica se obtiene una visualización lateral de ambas cavidades, para
el examen de cavidad se realiza un corte de peritoneo que bordeé la cavidad; para
89
despejar la cavidad torácica se cortan las costillas a nivel de unión costo-esternal en
un extremo y vertebral en el otro (es necesario antes realizar la prueba de presión
negativa) (Figura 5).
Figura 5. Cavidades torácica y abdominal
e. Extracción de lengua
Se realiza un corte a nivel de la sínfisis mandibular por la cara medial abarcando
toda la superficie de la rama mandibular, dicho corte se realiza en las dos ramas,
posteriormente, se exterioriza la lengua a nivel de los cortes por el plano ventral, al
exteriorizar lengua se corta paladar blando hasta llegar a epiglotis y separar lengua,
tráquea y esófago de columna vertebral (es recomendado que dichas estructuras se
aíslen con la menor cantidad de tejido subcutáneo y muscular), este corte se realiza
hasta la entrada a cavidad torácica.
f. Extracción de primer conjunto
Una vez se tenga visualizada la cavidad se cortan nervios y paquetes vasculares
encontrados a la entrada de cavidad, se visualiza el esófago, se coloca una pinza
hemostática antes de cruzar el diafragma y se corta de tal manera que la pinza
quede en el cadáver, posteriormente se continua aislando de craneal a caudal sobre
la columna vertebral tomando como soporte la lengua, para que dicho paquete
quede solo siendo unido por la vena cava posterior, la cual se corta igual que el
esófago (antes de sobrepasar el diafragma). En resumen el primer conjunto consta
de: lengua, faringe, amígdalas, tráquea, esófago, glándulas tiroides y para-tiroides,
pulmón, corazón, timo y linfonodos mediastínicos.
90
g. Segundo conjunto
Este consta de omento y bazo, para ello, se realiza un corte bordeando la curvatura
mayor del estómago para así extraer el omento junto al bazo, finalmente se procede
a separar bazo de omentos.
h. Tercer conjunto
Se colocan dos pinzas hemostáticas caudal al páncreas dejando un espacio
considerable (dependiendo de la especie) para realizar un corte entre ambas pinzas,
posteriormente, se ubica el recto se traccionan hacia craneal las heces, se coloca
una pinza lo más caudal posible y se corta, para aislar las asas intestinales se corta
el mesenterio siguiendo el recorrido de las asas.
i. Cuarto conjunto
Este conjunto consta de diafragma, hígado, vesícula biliar, rumen, retículo, omaso,
abomaso, duodeno, páncreas y ganglios mesentéricos; para su extracción se corta
diafragma contorneándolo, y así se separa del cadáver (cabe resaltar que se debe
tener cuidado al extraerlo porque se pueden cortar las glándulas adrenales).
j. Quinto conjunto
Sistema genitourinario, adrenales y ano; para ello, se remueve masa muscular de
región púbica hasta visualizar los forámenes obturadores; se cortan con ayuda de
un costótomo las ramas craneal y caudal del pubis, luego se aíslan los riñones del
cadáver teniendo cuidado de no cortar adrenales ni uréteres, aislar hasta llegar a
ano y realizar un corte contorneándolo.
k. Sistema nervioso
En posición decúbito ventral se realiza una incisión cráneo-caudal longitudinal por
línea media, para así, exponer bóveda craneana, remover masa muscular, para
dejar expuesto el hueso, posteriormente con una sierra se realizan tres cortes uno
lateral el otro contralateral y el otro craneal, dichos cortes se realizan con dirección
al foramen magno, finalmente con la remoción de la bóveda craneal se procede a
aislar encéfalo cortando pares craneales en dirección cráneo-caudal.
91
Nota: cabe resaltar que al momento de realizar una necropsia el profesional encargado
debe tener criterio para separar o no los conjuntos, en algunos casos el animal puede
ser tan pequeño que se dificulta la separación por conjuntos y se pueden llegar a
lesionar los tejidos. Así como en cada paso tomarse las muestras de los órganos a
evaluar (microbiología), la muestras de histopatología se pueden tomar al final después
de la evaluación macroscópica.
a. Condicionamiento operante
El condicionamiento operante, es una herramienta de suma importancia para
diseñar un protocolo de esta especie ya que la interacción entre el entrenador y los
animales favorecen la realización de diversos procesos (p.ej., suministro de
medicamentos vía oral, examen general, toma de muestras como hisopados de
nariz y cavidad oral, toma de saliva).
Acercamiento inicial y determinación de refuerzos positivos: durante el
condicionamiento se recomienda que las personas que lo realicen sean constantes,
es decir, realizarlo todos los días con una duración mínima de 30 minutos, estos
acercamientos tienen como objetivo familiarizar la población con el entrenador, para
ello se recomienda emplear la comida; para la determinación de los refuerzos
positivos, se recomienda, suministrar a los animales el alimento de la ración y
observar cual es el que ellos prefieren, para así trabajar con ese alimento, la
selección de conductas a reforzar requiere de un análisis previo del
condicionamiento, es decir, determinar para que va a ser usada esta herramienta,
en este caso la conducta a reforzar es la adaptación a personas en un primer paso y
el acercamiento a estas como segunda conducta.
Desarrollo de conducta a reforzar: el desarrollo de dichas conductas
generalmente es lento, una vez ganada la confianza de los animales se puede
iniciar con realizar puntos de alimentación con la presencia del entrenador, si esto
es exitoso la distancia entre los animales y el entrenador se pueden hacerse
menores.
Monitoreo de la conducta: este monitoreo es básicamente realizar la rutina en el
día a día para no perder el entrenamiento, tenga en cuenta que una vez se pierda el
entrenamiento debe iniciar de cero.
92
Documentos de interés
Barbanti Duarte, J.M. y Gonzáles, S. 2010. Neotropical cervidology: biology and
medicine of Latin American deer. FAPESP.
West, G., Heard, D. y Caulkett, N. 2007. Zoo and wildlife immobilization and
anesthesia. Blackwell pub professional. Pp 718. Capitulo cérvidos.
93
Anexo 2. Descripción de los animales capturados
Caso
Identificación
Sexo
EDB
Procedencia
V01 Manolo M G Nacimiento
V02 Orejera 05 H G Nacimiento
V03 Orejera 07 H A Nacimiento
V04 Orejera 24 H A CAV
V05 Orejera 26 M j Nacimiento
V06 Orejera 29 M A Nacimiento
V07 Orejera 31 H A Indeterminado
V08 Orejera 33 M A Nacimiento
V09 Orejera 34 H j Nacimiento
V10 Orejera 35 M A Nacimiento
V11 Orejera 36 M A Nacimiento
V12 Orejera 42 M A Nacimiento
V13 N2 H N Nacimiento
V14 N3 H N Nacimiento
V15 N1 M N Nacimiento
V16 Orejera 43 H A Nacimiento
V17 Orejera 50 M A Nacimiento
V18 Orejera 36 M A Nacimiento
V19 Chip 58 H J Nacimiento
V20 Orejera 41 M A Nacimiento
94
Anexo 3. Formato examen clínico
EXAMEN CLÍNICO
Fecha: ________ Identificación: _________________________ Peso: _______
Sexo: M H Condición corporal: ____________
Temperatura: _____ F. respiratoria: _____ F. cardiaca: ______ TLLC: _____
Examen N AN NE Observaciones
Estado general
Hidratación
Piel y pelaje
Cavidad oral (piezas dentarias)
Sistema digestivo
Sistema respiratorio
Sistema circulatorio
Sistema genitourinario
Sistema musculo esquelético
Sistema linfático
Otros
Observaciones:
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
Medicamentos usados:
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
* Adaptado del formato usado en la unidad de rescate y rehabilitación de animales silvestres URRAS - UNAL
95
Anexo 4. Casos indeterminados al diagnóstico clínico y de necropsia
Caso Hallazgo
26 Edema pulmonar severo
28 Neumonía necrótica exudativa
41 Pulicosis
42 Infarto cardiaco
44 Edema pulmonar severo
45 Edema pulmonar severo
49 Politraumatismo
50 Pulicosis severa
53 Enteritis acuosa
54 Politraumatismo
55 Edema pulmonar severo
56 Edema pulmonar
57 Congestión pulmonar
60 Edema pulmonar severo
64 Congestión pulmonar
77 Timpanismo ruminal
78 Isquemia cardiaca
82 Edema pulmonar severo
83 Politraumatismo
94 Nefritis intersticial
95 Congestión pulmonar
99 Enteritis acuosa
101 Mucosas anémicas generalizadas
106 Nefritis intersticial
110 Neumonía abscedativa multifocal
112 Hepatosis
135 Sin información
136 Sin información
96
Anexo 5. Casos con muerte súbita a la clínica, diagnosticados con la necropsia.
Caso Hallazgo
1 Neumonía multifocal
2 Neumonía multifocal
6 Omasitis y tiflitis parasitaria
7 Neumonía abscedativa multifocal severa
9 No se observan Hallazgos
20 No se observan Hallazgos
30 Peritonitis traumática
38 Bronconeumonía
59 Pulicosis
61 Neumonía aspirativa
63 Pulicosis severa
67 Pulicosis severa
69 Enteritis acuosa generalizada
71 Infarto cardiaco
72 Infarto cardiaco
74 Pulicosis
75 No se observan Hallazgos
79 Linfomegalia de mesentéricos
80 Autolisis severa
81 Edema pulmonar severo
85 Politraumatismo
86 Nefritis multifocal
89 Neumonía
93 Caquexia moderada
97 Timpanismo ruminal
98 Infarto cardiaco
108 Politraumatismo
109 Nefritis intersticial
111 Neumonía abscedativa discreta
118 Hematoma cerebral
121 Caquexia moderada
124 No se observan Hallazgos
97
Anexo 6. Valores hematológicos para O. virginianus en cautiverio en la sabana
bogotana.
Analitos Promedio SD Rango
Número
animales
Valor
mínimo
Valor
máximo
Hematíes (106 µL) 9,96 1,73 8,23 11,69 20 6,94 12,08
HT (%) 35,45 4,16 31,29 39,61 20 26 46
Hb (g/dl) 12,48 1,31 11,17 13,79 20 10,1 14,8
VCM (fL) 36,59 7,70 28,89 44,29 20 29,93 54,76
HCM (pg) 12,90 2,70 10,20 15,60 20 9,77 18,16
CCMH (g/dl) 35,49 4,50 30,99 39,99 20 28,83 50,77
Plaquetas (105 µL) 6,44 3,09 3,35 9,53 20 1,05 13,75
Leucocitos (103 µL) 5,48 3,17 2,31 8,65 20 2,4 13,3
Neutrófilos (103 µL) 3,52 2,16 1,37 5,68 20 1,18 7,92
Linfocitos (103 µL) 1,70 1,46 0,25 3,16 20 0,26 5,93
Monocitos (103 µL) 0,04 0,09 -0,05 0,13 20 0 0,36
Eosinófilos (103 µL) 0,22 0,25 -0,03 0,47 20 0 0,85
Basófilos (103 µL) 0,00 0,00 0,00 0,00 20 0 0
Bandas (103 µL) 0,00 0,00 0,00 0,00 20 0 0
98
Anexo 7. Valores de química sanguínea para O. virginianus en cautiverio en la
sabana bogotana.
Analitos Promedio SD Rango
Número
animales
Valor
mínimo
Valor
máximo
Glucosa (mg/l) 195,02 85,89 109,13 280,91 15 84,31 345
BUN (mg/dl) 27,04 16,72 10,32 43,77 18 0,4 76
Creatinina (mg/dl) 1,51 0,57 0,94 2,08 19 0,6 2,94
Colesterol ttal (mg/dl) 95,75 27,34 68,40 123,09 15 34,7 128
AST (UI) 108,75 67,65 41,10 176,41 15 25 270
Bilirrubina ttal (mg/dl) 0,93 0,53 0,40 1,45 18 0,15 1,8
Bilirrubina ind (mg/dl) 0,44 0,32 0,12 0,75 18 0,01 1
Bilirrubina dir (mg/dl) 0,46 0,29 0,16 0,75 18 0,08 1,13
FALK (UI) 92,64 105,90 -13,25 198,54 18 5,7 386,3
GGPT (UI) 64,86 35,17 29,68 100,03 14 2,1 116,8
CPK ttal (UI) 293,20 337,44 -44,24 630,64 8 6,2 1048
ALT (UI) 44,79 19,47 25,32 64,26 9 20,2 71,9
PT (g/dl) 6,43 0,73 5,71 7,16 18 5,2 8,2
Albumina (g/dl) 1,96 0,56 1,40 2,52 18 1,18 3,16
Globulinas (g/dl) 4,50 0,88 3,62 5,38 18 3,2 6,83
99
Anexo 8. Resultados análisis hematológico para O. virginianus en cautiverio en la
sabana bogotana.
Analitos N° venado 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 17 18 19 20
Hematíes (106 µL) - N N - N + N N N + + - N N N N N N N
HT (%) N N N N N + N N - N N N N N + N N N N
Hb (g/dl) N - N - N N - N N + N N N - + N N N N
VCM (fL) N N N + N N N N N N N + N N + N N + N
HCM (pg) + N N N N N N N N N N + N - N N N + N
CCMH (g/dl) N N N N N N N N + + N N N - N N N N N
Plaquetas (105 µL) N N - N N - N N N N N - N N - N N N N
Leucocitos (103 µL) + N N + N N N N N N N N N N + N N + N
Neutrófilos (103 µL) + N N N N - N - N N N N N - + N N + N
Linfocitos (103 µL) N N N + N N N N N N N N N N N N N + N
Monocitos (103 µL) N N N N N N N N + N N N N N + N N N N
Eosinófilos (103 µL) N N N + N N N N N N N N N N N N N + N
Basófilos (103 µL) N N N N N N N N N N N N N N N N N N N
Bandas (103 µL) N N N N N N N N N N N N N N N N N N N
Química sanguínea
Glucosa (mg/l) - - + N + + - N N N
- N N N +
BUN (mg/dl) + N N N N N N N N N - N + N N + N
Creatinina (mg/dl) N + N N N + N N N N N - + N N N N N
Colesterol ttal (mg/dl) + N N + N - N + N N - N - N N
AST (UI) N + N N N N N N N N N - - - +
Bilirrubina ttal (mg/dl) N + N + N N N - + N - N N - - N +
Bilirrubina ind (mg/dl) N N N + N N N - + N - N N - N N +
Bilirrubina dir (mg/dl) N + - N N N - N N N N N + - - N N
FALK (UI) N N N N N N N N N N N N N N + + N
GGPT (UI) - N N N - - + N N N N + N +
CPK ttal (UI) + N N N N N N N
ALT (UI) N N N + N - + N
PT (g/dl) + N + - N N - N N N N - N N N N
Albumina (g/dl) N N N - N + N N + N N N N - N - N
Globulinas (g/dl) + N N N N - - N N N N N N N N N N
Convenciones Elevado Normal Disminuido Sin información
100
Anexo 9. Relación parámetros hematológicos hemograma
Analitos
Navas et al, 2013 ISIS, 2002 Lovera et al.,
2011
DelGuidice et al., 1992
*hembras
Powell y DelGuicide,
2005 * Neonatos
Marco y Lavin, 1999 * Cervus
elaphus
Topal et al., 2010 * Cervus
elaphus
Szabó et al., 2005 * Hembras
Blastocerus dichotomus
Szabó et al., 2005 * Machos
Blastocerus dichotomus
Prom SD N Prom
SD N Prom
SD N Prom
SD N Prom
SD N Prom
SD N Prom
SD N Prom
SD N Prom SD N
Hematíes (106
µL) 9,96 1,73 20 12,01 3,81 76 10,12 1,64 25 7,8 0,3 22 10,9 2 20 9,04 1,69 10 11,5 4,1 25 11,3 3,5 17
HT (%) 35,45 4,16 20 40,3 0,09 166 28,9 3,8 25 29,8 1,2 22 44 7,7 20 35,2 4,6 10 45 5 25 46 4 17
Hb (g/dl) 12,48 1,31 20 14,1 2,6 69 9,5 1,1 25 8,5 0,3 22 15,9 2,4 20 12,4 2 10 9,2 1,82 29 8,3 1,6 15
VCM (fL) 36,59 7,7 20 35,7 11,6 70 28,8 3,2 25 29,9 0,4 59 38,2 0,5 22 40,5 4,1 20 39,9 3,4 10 45 23,1 25 46,7 22,1 17
HCM (pg) 12,9 2,7 20 12,3 4 67 9,6 1,3 25 35,8 0,2 59 10,9 0,2 22 15,8 5 20
CCMH (g/dl) 35,49 4,5 20 35,3 2,5 65 33,2 1,8 25 28,5 0,4 22 35,1 5,3 20
Plaquetas (10
5 µL)
6,44 3,09 20 4,35 1,4 10 - - - 3,11 1,17 20 7,49 1,8 10
Leucocitos (10
3 µL)
5,48 3,17 20 3,53 1,72 151 3,71 1,03 25 3,1 0,2 59 3,1 0,3 22 2,97 1,05 20 4,3 0,72 10 15,3 4,2 25 17 5,9 17
Neutrófilos (10
3 µL)
3,52 2,16 20 2,04 1,54 146 55.5 11,2 25 1,59 0,97 20 4,5 2,3 25 4,7 1,8 17
Linfocitos (10
3 µL)
1,7 1,46 20 1,22 0,68 146 39,8 11,3 25 1,04 0,41 20 8,4 3 25 9,6 3,8 17
Monocitos (10
3 µL)
0,04 0,09 20 0,12 0,12 110 0,1 0,3 25 0,11 0,08 20 0,4 0,3 25 0,5 0,7 17
Eosinófilos (10
3 µL)
0,22 0,25 20 0,26 0,26 115 4,6 2,6 25 0,18 0,11 20 1,9 1 25 1,9 1,3 17
Basófilos (10
3 µL)
0 0 20 0,047 0,038 25 0 0 25 0,01 0,03 20 0,1 0,2 25 0,2 0,2 17
Bandas (103
µL) 0 0 20 0,16 0,22 15 20
101
Anexo 10. Relación parámetros hematológicos química sanguínea
Analitos Navas ISIS
Lovera et al., 2011
Powell y DelGuicide, 2005
* Neonatos
Topal et al., 2010 * Cervus elaphus
Prom SD N Prom SD N Prom SD N Prom SD N Prom SD N
Glucosa (mg/dl) 195,02 85,89 15 141,98 59 84 117,2 28,35 10
BUN (mg/dl) 27,04 16,72 18 27,07 10,02 86 21,4 1,4 22 7,07 2,14 10
Creatinina (mg/dl) 1,51 0,57 19 1,59 0,5 70 2,1 0,4 25 1,1 0,1 22 1,58 0,27 10
Colesterol ttal (mg/dl) 95,75 27,34 15 74,27 30,9 84
AST (UI) 108,75 67,65 15 174 163 83 59,6 0,12 10
Bilirrubina ttal (mg/dl) 0,93 0,53 18 0,99 0,7 66
Bilirrubina ind (mg/dl) 0,44 0,32 18 0,4 0,29 15
Bilirrubina dir (mg/dl) 0,46 0,29 18 0,11 0,11 15
FALK (UI) 92,64 105,9 18 173 270 62 104,33 20,24 10
GGPT (UI) 64,86 35,17 14 77 45 35
102
Anexo 11. Examen clínico individuos
N° Caso
Estado general
Hidratación Piel y pelaje
Cavidad oral (piezas dentarias)
Sistema digestivo
Sistema respiratorio
Sistema circulatorio
Sistema genitourinario
Sistema musculo esquelético
Sistema linfático
Otros
V01 Regular N Hirsuto Total I 3/3 N N N N N N N
V02 Regular N Hirsuto Total I 3/3 N N N Mucosa vulvar congestionada N N N
V03 Regular N N Total I 3/3 N N N
Secreción blanquecina en vulva N N N
V04 Bueno N N Parcial I 3/3 N N N N N N N
V05 Bueno N N Parcial I 1/3 N N N N N N N
V06 Bueno N N Parcial I 3/3 N N N N N N N
V07 Bueno N N
Ausencia medio izquierdo N N N N N N N
V08 Bueno N N Rasamiento I 1/3 N N N N N N N
V09 Bueno N N Parcial I 1/3 N N N N N N N
103
Anexo 11. Examen clínico individuos (cont.).
N° Caso Estado general
Hidratación Piel y pelaje
Cavidad oral (piezas dentarias)
Sistema digestivo
Sistema respiratorio
Sistema circulatorio
Sistema genitourinario
Sistema musculo esquelético
Sistema linfático
Otros
V10 Bueno N N Parcial I 3/3 N N N N N N N
V11 Bueno N Hirsuto Parcial I 3/3 N N N N Masa rama mandibular izquierda
N N
V12 Bueno N Hirsuto Parcial I 1/3 N N N N N N N
V13 Bueno N N Total I 3/3 N N N N N N N
V14 Regular N Hirsuto Leche 3/3 N N N N N N N
V15 Regular N Hirsuto Leche 3/3 Dilatación N N N N N N
V16 Regular N Hirsuto Leche 3/3 N N N N N N N
V17 Bueno N N Total I 3/3 N N N N N N N
V18 Bueno N N Total I 3/3 N N N N N N N
V19 Bueno N Hirsuto Parcial I 3/3 N N N N Masa rama mandibular izquierda
N N
V20 Bueno N N Definitivos 2/3
N N N N Fractura tarso MPI
N N
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