LIC.T.M EFRAIN MONTES HIJAR
BACTERIOLOGIA MEDICAUNIVERSIDAD PERUANA LOS
ANDESCARRERA PROFESIONAL DE
TECNOLOGIA MEDICA
Géneros Streptococcus y Enterococcus
Flora normal del tracto respiratorio y digestivo Cocos gram positivos agrupados en cadenas de longitud
variable. Catalasa negativa Crecen bien en medios de cultivo habituales Aerobios / Anaerobios facultativos
Agrupación Staphylococcus Agrupación Streptococcus
Clasificación
Propiedades serológicas Grupos de Lancefield A-V
Patrones de hemólisis Incompleta (α) Completa (β) Nula (γ)
Propiedades bioquímicas
Género Streptococcus
Clasificación1.- Hemólisis en medios con sangre β-hemolíticos: hemólisis total (S.pyogenes, S. agalactiae) α-hemoliticos: hemólisis parcial (S.pneumoniae, S. viridans) No hemolíticos
Género Streptococcus
2.- Clasificación serológica
Antígeno polisacarido de la pared celular o
antígeno de grupo
Grupos serológicos de Lancefield Grupo A, B, C, D, F,……..V. Grupo A = S. pyogenes Grupo B = S. agalactiae
Género Streptococcus
3.- Diferenciación bioquímicaEstreptococos β - hemolíticos Sensibilidad a bacitracina
S. pyogenes = Sensible Otros estreptococos β-hemolíticos = Resistente
Estreptococos α - hemolíticos Sensibilidad a optoquina
S. pneumoniae = Sensible S. grupo viridans = Resistente
S. Pyogenes (Grupo A) Estructura antigénica
. Antígeno C Grupo específico. Antígeno M Tipo específico. Antigenos proteicos T, R.
S. Pyogenes (Grupo A) determinantes de patogenicidad
.Determinantes de patogenicidad: 1.- Estructurales 2.- Extracelulares
Clasificación de patógenosClasificación serológica
Microorganismo Patrones de hemólisis
A S. pyogenes β
B S. agalactiae β
C S. anginosus, S. equisimilis
β o no hemólisis
D S. bovis, Enterococcus spp.
α,γ, β
F, G S. anginosus β
-- S. pneumoniae α
Streptococcus
Cocos Gram positivos
Aerobios facultativos, algunos capnofílicos
Catalasa negativos
No móviles
No tienen esporas
Streptococcus
Agrupamiento en cadena en medios líquidos
Crecimiento y la hemólisis se favorecen con 10% de CO2 a 35ºC
Los cultivos “viejos” pueden ser Gram (-)
Manifestaciones Clínicas Streptococcus pyogenes: faringitis, amigdalitis,
escarlatina, impétigo, secuelas no supurativas: fiebre reumática y glomerulonefritis
Streptococcus agalactiae: meningitis en neonatos
Streptococcus pneumoniae: principal causa de neumonía, sinusitis, meningitis y otitis media.
EnterococcusCocos Gram positivos
Catalasa negativos
Aerobios facultativos
Crecen en CTS NaCl 6,5%
Algunos móviles
Enterococcus
Agrupamiento en pares o cadenas
Hidrolizan esculina en presencia de sales biliares
Capaces de crecer a pH 9,6
Temperatura oscila 10°C - 45ºC
Enterococcus
Enterococcus faecalis: 80 a 90% de aislamientos
Enterococccus faecium: mayor incidencia como agente nosocomial y se han detectado cepas multirresistentes a antimicrobianos de uso común contra G+
Manifestaciones clínicas Endocarditis
Infección de tracto urinario
Mediastinitis: infección de herida postoperatoria a nivel del mediastino
Escarlatina
Impétigo
Muestras clínicas
Hisopados faríngeos Aspirado pleural Sangre LCR Exudado bronquial Muestra de oído medio Lesiones de piel
S. pyogenes Diagnóstico
Obtención de muestras Tinción de Gram Cultivo
Tinción de Gram P.bioquímicas
Catalasa Hemólisis Sensibilidad a bacitracina
Identificación serológica Detección Ag de grupo
Pruebas de identificación Muestra Aislamiento y tinción de Gram Catalasa Hemólisis Resistencia a bacitracina Resistencia al optoquín Resistencia a SXT Factor CAMP Bilis esculina Crecimiento en CTS 6.5% NaCl
Tinción de Gram
Streptococcus
Enterococcus
Hemólisis En medios nutritivos
enriquecidos con sangre o suero.
Patrón de hemólisis
Alfa hemólisis (parcial) H2O2
Beta hemólisis (completa) Estreptolisinas O y S
Gamma hemólisis
Catalasa
Para diferenciar Streptococcus y Enterococcus de Staphylococcus y Micrococcus
Resistencia a antibióticos Se realiza en agar sangre
Bacitracina: cualquier halo permite considerar a la bacteria como Streptococcus pyogenes
Optoquín: halo de inhibición de 14mm o más es presuntivo de Streptococcus pneumoniae.
Trimetropín sulfa: Sensibles grupo C, F y G.
Prueba de CAMP
Streptoccocus β-hemolíticos
S. agalactiae (grupo B) Positiva
Prueba de Hidrólisis de Esculina Agar Bilis-Esculina
Identificación presuntiva de grupo D y Enterococcus
Hidrólisis de esculina: libera glucosa y esculetina
Esculetina en presencia de Fe3+
forma complejo coloración negra cuando la prueba es positiva
Crecimiento en 6.5% NaCl
Diferenciación de Streptococcus grupo D con respecto a Enterococcus:
Enterococcus (+) Streptococcus grupo D (-)
Cocos G+
+Staphylococcus
-StreptococcusEnterococcus
Hemólisis
Bacitracina
SGrupo A
(S. pyogenes)
RCAMP
+Grupo B
(S. agalactiae)
-Bilis esculina
+6.5%NaCl
-Streptococcus β
No A, B o D
+Enterococcus spp.
-Grupo D
β α γ
Optoquín
SS.pneumoniae
RBilis esculina
+6.5%NaCl
-Grupo Viridans
+Enterococcus spp.
-Grupo D
Bilis esculina
+6.5%NaCl
-StreptococcusNo hemolíticos
+Enterococcus spp.
-Grupo D
Esquema de clasificación
Catalasa
Paciente femenino 72 años Mieloma múltiple 14 años Varias neumonías 24/04/2011 Bolo de Dexametasona
04/05/2011 Ingresa
Síntomas y signos
Tos Sensación febrilExpectoración Adinamia38°CMurmullo vesicular asimétricoCrepitaciones : mayor en pulmón derechoSibilancias
Infiltrado
Paracardíaco
derecho
NEUMONÍA
Cefotaxima y Levofloxacina
HemogramaParámetro Resultado Valores
normales
Leucocitos 1500 cel/mm3 4.000 / 10.000
Neutrófilos 40% 40 – 70
Linfocitos 20% 20 – 40
Monocitos 4% 2 – 10
Plaquetas 69 000 cel/mm3 150.000 – 400.000
Hemoglobina 8.7 g/dL 14 – 18
Hematocrito 27% 41 – 51
Bandas 24% 5 – 15
QuímicaParámetro Resultado Valores normales
Creatinina 2,4 mg/dL 0,7 – 1,5
Nitrógeno ureico 53 mg/dL 20 – 40
Na 127 mEq/L 135 – 145
K 4.5 mEq/L 3,5 – 5,0
Cl 104 mEq/L 100 – 106
Ca 7.9 mg/dL 8,5 – 10,5
Parámetro Resultado Valores normales
pH 7.43 7.35 - 7.45
PO2 49 mmHg 75 - 100
PCO2 33 mmHg 35 - 45
Saturación O2 79% 94 - 100
Bicarbonato 21 mEq/litro 21 - 26
Gases
ANÁLISIS RESULTADO
Antibioterapia Sí recibe
Muestra clínica Sangre
Tipo examen Hemocultivo
Fecha recepción 04/05/09
Fecha finalización 06/05/09
Identificación
Identificación
Identificación VITEK 2 Y PSA
Antibiótico Resultado
Bencilpenicilina S
Cefotaxima (Meningitis) S
Cefotaxima (No Meningitis) S
Ceftriaxona (Meningitis) S
Ceftriaxona (No Meningitis) S
Cloranfenicol S
Eritromicina R
Levofloxacino S
Linezoid S
Moxifloxacino S
Ofloxacino S
Tetraciclina S
Trimetoprima/Sulfametoxazol R
Vancomicina S
Aislamiento: Streptococcus pneumoniae
Esputo o aspirado bronquial
Al obtener crecimiento colonial realizar pruebas como:
Catalasa
Pruebas especiales como:
Sensibilidad al Optoquín
Sensibilidad a la Bacitracina
Si no hacemos previamente un gram, debemos montar en los siguientes medios:
Agar Sangre
Agar Chocolate
Mac Conkey
Agar Manitol Sal***
***Importante correlacionar con la clínica e historia del paciente. (Staphylococcus aureus y algunos del grupo viridans)
Procedemos a montar la respectiva tarjeta para el VITEK
Descripción de la muestra. Celularidad >10 Leucos Diferencial.
Gram
Cultivo BacT-Alert 3D
Género Enterococcus
Incluye varias especies: E. faecalis y E. faecium Flora normal del tracto digestivo Escaso poder patógeno. Sinergia con otras
bacterias aerobias y anaerobias (E. coli y B. fragilis) que favorecen la capacidad invasiva.
Elevada resistencia antimicrobianos: Causa importante de infecciones hospitalarias (ITU, infecciones de heridas quirúrgicas)
Infecciones intraabdominales (polimicrobianas)
50
Enterococcus faecalis
Contenido Página
Clasificación 2
Características Generales 3
Fisiología 4
Pruebas de Identificación 5
Medio de Cultivo 6
Hábitat 8
Patogenicidad 9
Mecanismos de Resistencia 10
Apéndice 11
Bibliografía 12
51
1. Clasificación
• Taxonomía
• Familia: Enterococcaceae
• Género: Enterococcus
• Especie: faecalis
• Tinción de Gram: Positivo
52
2. Características Generales Enterococcus faecalis es una bacteria comensal1, que habita el tracto gastrointestinal de
humanos y otros mamíferos, E. faecalis puede causar infecciones comprometidas en
humanos, especialmente en ambiente de hospital. La existencia de enterococos se potencia
porque ha tenido la habilidad de adquirir resistencia a los antibióticos en uso.
E. faecalis, no puede
sintetizar porfirinas y sólo
expresa una cadena respira-
toria funcional cuando se
le proporciona hematina
exógenos.
En ausencia de hematina, E. faecalis vuelve al metabolismo de la fermentación y produce
dismutasa extracelular que puede dañar el ADN de las células epiteliales. La respuesta
aguda de la mucosa del colon a hematina de E. faecalis fue identificado por la variedad de
genes.
Tinción de Gram en la que se observa E. faecalis
53
3. Fisiología Enterococos que típicamente se disponen en parejas o en cadenas cortas, son anaerobios
facultativos y su temperatura óptima de crecimiento es de 35°C aunque pueden crecer en
un intervalo de 10°c y 45°C.
Requieren vitaminas B, bases de ácidos nucleicos y una fuente de carbono como glucosa.
Se observan colonias blanquecinas de gran tamaño tras un periodo de incubación de 24
hrs., las colonias pueden tener un aspecto no hemolítico o, rara vez, B-hemolítico.
Toleran la exposición a condiciones ambientales adversas (como la presencia de NaCl al
6.5% y sales biliares al 40%)
54
4.Pruebas de Identificación
Prueba Resultado
Growth in 0.1% methylsene blue milk +
Ammonia from arginine +
Reduction of tetrazonlium +
Reduction of posassium tellurite +
Tyrosine decarboxylated +
Acid from L-arabinose —
Acid from arbutin —
Acid from melezitose +
Acid from melibiose —
Acid from sorbitol +
Acid from sorbose —
55
5. Medio de Cultivo
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones
Pluripeptona 5
Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar. Calentar a ebullición durante 2 o 3 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50°C y distribuir unos 20 ml por
placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.
Extracto de carne 5
Lactosa 10
Mezcla de sales biliares 8.5
Citrato de sodio 8.5
Tiosulfato de sodio 8.5
Citrato férrico 1
Agar 13.5
Verde brillante 0.00033
Rojo neutro 0.025
pH final: 7.0 ± 0.2
Agar S-S (Salmonella – Shigella)
56
5. Medio de Cultivo
Siembra:
Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.
Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de
agar E.M.B. (B02-101-05) o de agar Mac Conkey (B02-114-05).
Incubación:
Durante24-48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.
Resultados
Características del medio
Medio preparado: rojo naranja.
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Presentación
x 100g :Código: B02-138-05 X 500g :Código: B02-138-06
Microorganismos Colonias
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento
57
6. Hábitat
El hábitat normal de estos es el tubo digestivo de animales de
sangre caliente.
Son indicadores de contaminación fecal, por lo que su presencia
en los alimentos indica falta de higiene o defectuosas condiciones
de conservación, excepto en alimentos en los que interviene como
flora bacteriana natural de procesos fermentativos, como es el
caso de quesos, embutidos crudos e incluso productos cárnicos
58
7. Patogenicidad
The ability of E. faecalis isolates to cause serious infections has been linked to
the intrinsic ruggedness of the bacterium, which allows the organism to persist in
the hospital environment and survive many host defenses, compounded by the
acquisition of a variety of variable virulence traits by horizontal transfer from
other organisms. Examples of variable traits that are known or suspected of
enhancing the virulence of the organism, include the cytolysin toxin, a
gelatinase, enterococcal surface protein Esp, aggregation substance, a
hyaluronidase, and a bile salt hydrolase. Enterococci employ mechanisms, such
as pheromone- induced plasmid exchange, and contact dependent plasmid and
transposon exchange, to disseminate these traits
E. faecalis puede causar endocarditis, infecciones de vejiga, próstata, epidídimo;
las infecciones de sistema nervioso son menos comunes.
59
8. Mecanismos de Resistencia
E. faecalis resiste aminoglicósidos,
aztreonam, cefalosporina, clindamicina,
las penicilinas semisintéticas (nafcilina,
oxacilina, amoxicilina y
trimetoprim-sulfametoxazole).
La exposición a las cefalosporinas es un riesgo particularlmente importante en la
colonización e infección con enterococos.
Aztreonam
CefalosporinaClindamicina
Neisseria
Familia Neisseriaceae Gram – Diplococos Aerobios estrictos Saprófitas o patógenas de la
especie humana y animales. Oxidasa y catalasa positivos
Neisseria. Especies más importantes.
Neisseria meningitidis (meningococo) Producen meningitis
Neisseria gonorrhoeae (gonococo) Producen gonorrea.
Neisseria spp saprófitas. Habituales de rinofaringe y aparato genital, no patógenas.
----------------------------------------------- Las neiserias saprófitas son poco exigentes, fáciles de cultivar en
medios comunes y crecen entre 22 y 35 ºC. N. meningitidis y N. gonorrhoeae son muy exigentes, dificiles de
cultivar y solo crecen entre 35 y 37 ºC
Neisseria meningitidis: Acción patógena
Diplococos en granos de café Afecta a vías respiratorias superiores y causa
meningitis epidémica (sobre todo en niños con alta tasa de mortalidad).
Factores de virulencia: La cápsula que le confiere gran resistencia Proteínas de membrana con acción muy tóxica. Fimbrias para adherirse al epitelio que invade
La cápsula presenta un polisacárido con distintas propiedades antigénicas que permiten clasificar al menigococo en serogrupos (las cepas más patógenos pertenecen a los serogrupos A, B, y C).
Los serogrupos más frecuentes en España son el B y el C
Neisseria meningitidis: Cuadro clínico
Comienza con rinofaringitis leve que evoluciona a más severa y posible bronquitis.
Puede pasar a sangre y de allí a piel dando petequias, fiebres altas y artralgias.
Puede pasar a líquido cefalorraquídeo y meninges (meningitis): Fiebres muy altas, cefaléa, rigidez de nuca, vómitos, diarreas, etc. que pueden acabar en muerte si no se trata rápidamente.
El examen de líquido cefalorraquídeo es turbio, purulento y con abundantes meningococos.
Neisseria gonorrhoeae: Acción patógena
Diplococos con afinidad por las mucosas urogenitales.
Produce la Gonorrea de transmisión por contacto sexual.
Factores de virulencia: Proteínas de membrana con diferentes
características antigénicas. Fimbrias (adherencia y dificultad
para ser fagocitadas) Endotoxina que inactiva anticuerpos
próximos.
Neisseria gonorrhoeae: Acción patógena
Tras el contacto sexual: A las pocas horas los gonococos se
adhieren a las mucosas mediante las fimbrias
Penetran a tejidos subepiteliales, se multiplican y liberan endotoxinas con efecto sobre uretra, cuello uterino, ano, etc. con destrucción de células epiteliales, formación de procesos supurativos purulentos, dolor a la micción por uretritis, afectando también a cuello de útero y vaginitis en mujeres.
Sobre el 50% son asintomáticos cronificación (al no ser tratado).
Neisseria meningitidis. Aislamiento. Caracteres bioquímicos.
TOMA DE MUESTRAS: De LCR por punción lumbar Examinar rápidamente (sensible)
A la muestra de LCR turbio y purulento se le realiza: Examen directo: Se centrifuga:
Sedimento Frotis para tinciones (gram, tinta china, etc.)
Sobrenadante: Técnicas inmunológicas para detectar Polisacáridos capsulares y proteínas.
Siembra en Agar sangre, agar chocolate, etc. Puede realizarse también un hemocultivo.
Neisseria meningitidis. Aislamiento. Caracteres bioquímicos.
Pruebas bioquímicas: Catalasa (+) Oxidasa (+) O/F con glucosa y maltosa
(oxidativo) Reducción de NO3 a NO2 (-) Estudios serológicos del LCR
o del Suero.
Neisseria gonorrhoeae. Aislamiento. Caracteres bioquímicos.
TOMA DE MUESTRA: En el laboratorio a primera hora antes de la
primera micción (si es posible) De uretra, recto y cuello de útero.
EXAMEN DIRECTO: Frotis y tinción de gram. CULTIVO: en medios enriquecidos (agar
sangre, agar chocolate, Thayer Martin modificado, NYC medium)
Incubar a 35 – 37 ºC, humedad al 70 % y 5 – 10 % de CO2.
Pruebas bioquímicas: O/F, oxidasa, catalasa, etc.
Pruebas serológicas (ELISA).
PUNCIÒN LUMBAR
Pleocitosis
2000Leucocitos/L
2/3 Neutrófilos
Células mononucleares
Proteínas
1/3 100mg/dL
Glucosa
LCRLiquidoClaro
PresiónLigeramente
Cultivo BacterianoNegativo
Cultivo BacterianoNegativo
Cultivo BacterianoNegativo
Cultivo BacterianoNegativo
Gracias…Gracias…Gracias…Gracias…
Top Related