7/25/2019 Clase 2 Mtodos Fisicoqumicos y Microbiolgicos Para Garantizar La Calidad Del Agua
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Microbiologa del aguaDr. Flix Daniel AnduezaFacultad de Farmacia y Bioanlisis
Universidad de los AndesMrida. Venezuela
Prometeo SENESCYTEscuela de Bioqumica y Farmacia
ESPOCH. Riobamba. Ecuador
San Jos de Costa Rica, Octubre 2014
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Anlisis Microbiolgico
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Mtodos de determinacin demicroorganismos
Siembra en profundidad.Siembra por extensin.
Mtodos del nmero ms probable(NMP).Mtodo por filtracin.Impedancia
Biologa molecular
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RECUENTO DE MICROORGANISMOSTOTALES Y VIVOS
10 ml 1 ml de naranja de acridina o0,2 ml del kit Baclight live/dead
5 min en la oscuridadfiltrar
Microscopio deepifluorescencia
Bacterias vivas:
Bacterias muertas:
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MICROORGANISMOSTOTALES Y VIVOS
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Bacterias aerobias mesfilas
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INCUBAR A 22 C POR 5 DAS INCUBAR A 37 C POR 2 DAS
AGAR R2A AGAR PCA
1 mL
RECUENTO DE BACTERIASAEROBIAS MESOFILAS
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1 ml c/u 1 ml c/u
RECUENTO DE BACTERIAS AEROBIASMESFILAS
PETRIFILM PETRIFILM
INCUBAR A 30 C POR 2 DAS INCUBAR A 37 C POR 2 DAS
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INCUBAR A 22 C POR 5 DAS INCUBAR A 37 C POR 2 DAS
AGAR R2A AGAR PCA
50 mL
RECUENTO DE BACTERIASHETERTROFAS
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250 mL
RECUENTO DE COLIFORMESTOTALES Y FECALES
AGAR CHAPMAN-LACTOSA-TRIFENIL-TETRAZOLIO
AGAR CHAPMAN-LACTOSA-TRIFENIL-TETRAZOLIO
INCUBAR A 30 C POR 24 - 48 h INCUBAR A 44,5 C POR 24 - 48 h
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1 ml c/u 1 ml c/u
RECUENTO DE COLIFORMESTOTALES Y FECALES
PETRIFILM PETRIFILM
INCUBAR A 37 C POR 2 DAS INCUBAR A 44 C POR 2 DAS
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RECUENTO DE COLIFORMES TOTALESPOR EL METODO DEL NUMERO MAS PROBABLE
(NMP)
1 ml 1 ml
Caldo Lactosa Lauril sulfato
INCUBAR A 37 C POR 24-48 horas
SE REALIZA EL RECUENTODE TUBOS CON PRESENCIA
DE GAS
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RECUENTO DE COLIFORMES TOTALESPRUEBA CONFIRMATORIA
0,1 ml
Caldo Bilis Verde Brillante
INCUBAR A 37 C POR 24-48 horas
SE REALIZA EL RECUENTODE TUBOS CON PRESENCIA
DE GAS y SE BUSCA EL
NMP EN LA TABLA
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RECUENTO DE COLIFORMES FECALESPOR EL METODO DEL NUMERO MAS PROBABLE
(NMP)
1 ml 1 ml
Caldo Lactosa Lauril sulfato
INCUBAR A 37 C POR 24-48 horas
SE REALIZA EL RECUENTODE TUBOS CON PRESENCIA
DE GAS
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RECUENTO DE COLIFORMES FECALESPRUEBA CONFIRMATORIA
0,1 ml
Caldo E.C
INCUBAR A 44,5 C POR 24-48 horas
SE REALIZA EL RECUENTODE TUBOS CON PRESENCIA
DE GAS y SE BUSCA EL
NMP EN LA TABLA
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RECUENTO DE ENTEROCOCOS
250 ML
AGAR GLUCOSA-FOSFATO-AZIDA-TRIFENIL TRIAZOLIO
INCUBAR A 37 CPOR 48 HORAS
CONFIRMARCOLONIAS
AGAR BILIS ESCULINAPRECALENTADO A 44 C
COLONIAS MARRONESO NEGRAS (+)
INCUBAR A 44 CPOR 2 HORAS
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RECUENTO DE ENTEROCOCOSPOR EL METODO DEL NUMERO MAS PROBABLE
(NMP)
1 ml 1 ml
CALDO AZIDA DEXTROSA
INCUBAR A 37 C POR 24-48 horas
SE REALIZA EL RECUENTODE TUBOS CON PRESENCIA
DE TURBIDEZ OPRECIPITADO
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RECUENTO DE ENTEROCOCOSPRUEBA CONFIRMATORIA
0,1 ml
Caldo Azida violeta de etilo
INCUBAR A 37 C POR 24-48 horas
SE REALIZA EL RECUENTODE TUBOS CON PRESENCIA
DE PRECIPITADO AZUL
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RECUENTO DE ESPORAS DECLOSTRIDIUM SULFITO-REDUCTORES
CALENTARA 80 C
POR 10MINUTOS
AGAR SULFITO DE HIERROA DOBLE CONCENTRACIN
10 ml c/u
INCUBAR A 37 CPOR 72 HORAS
INCUBAR A 45 CPOR 48 HORAS
(+)
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250 mL
DETECCIN DE AEROMONAS
AGAR ALMIDN-AMPICILINA AGAR ALMIDN-AMPICILINA
INCUBAR A 37 C POR 24 - 48 h INCUBAR A 37 C POR 24 - 48 h
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AGAR PRESTON
250 mL
INVESTIGACIN DE Campylobacter
Caldo Preston de enriquecimiento
INCUBAR A 42 CPOR 12 HORAS. MICROAEROFILIA
INCUBAR A 42 C POR 48 HORAS. MICROAEROFILIA
AISLAR E IDENTIFICAR
http://images.google.co.ve/imgres?imgurl=http://www.b100supply.com/images/products/149.jpg&imgrefurl=http://www.b100supply.com/index.cfm%3Ffuseaction%3DProduct.display%26product_id%3D98&h=250&w=250&sz=11&hl=es&start=32&tbnid=xZHhZZKg_99KiM:&tbnh=111&tbnw=111&prev=/images%3Fq%3DERLENMEYER%26start%3D20%26ndsp%3D20%26svnum%3D10%26hl%3Des%26lr%3D%26sa%3DN7/25/2019 Clase 2 Mtodos Fisicoqumicos y Microbiolgicos Para Garantizar La Calidad Del Agua
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100 mL
INVESTIGACIN DE Legionellapneumophila
AISLARE
IDENTIFICAR
(filtro)
Lavar con 2 ml
de agua estril
Tratamientocido
TratamientotrmicoAgar BCYE-
Incubar a 37 Cpor 15 das
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AGAR CETRIMIDA
250 mL
INVESTIGACIN DE Pseudomonasaeruginosa
INCUBAR A 42 CPOR 24 HORAS
AISLAREIDENTIFICAR
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AGAR BAIRD PARKER
INVESTIGACIN DE Staphylococcusaureus
INCUBAR A 37 C POR 48 HORAS
AISLAR E IDENTIFICAR1 ml de la muestra
muestra
http://images.google.co.ve/imgres?imgurl=http://www.b100supply.com/images/products/149.jpg&imgrefurl=http://www.b100supply.com/index.cfm%3Ffuseaction%3DProduct.display%26product_id%3D98&h=250&w=250&sz=11&hl=es&start=32&tbnid=xZHhZZKg_99KiM:&tbnh=111&tbnw=111&prev=/images%3Fq%3DERLENMEYER%26start%3D20%26ndsp%3D20%26svnum%3D10%26hl%3Des%26lr%3D%26sa%3DN7/25/2019 Clase 2 Mtodos Fisicoqumicos y Microbiolgicos Para Garantizar La Calidad Del Agua
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AGAR BAIRD PARKER
250 mL
INVESTIGACIN DE Staphylococcusaureus
CALDO CASEINA- SOJA
INCUBAR A 37 CPOR 24 HORAS
INCUBAR A 37 C POR 48 HORAS
AISLAR E IDENTIFICAR
http://images.google.co.ve/imgres?imgurl=http://www.b100supply.com/images/products/149.jpg&imgrefurl=http://www.b100supply.com/index.cfm%3Ffuseaction%3DProduct.display%26product_id%3D98&h=250&w=250&sz=11&hl=es&start=32&tbnid=xZHhZZKg_99KiM:&tbnh=111&tbnw=111&prev=/images%3Fq%3DERLENMEYER%26start%3D20%26ndsp%3D20%26svnum%3D10%26hl%3Des%26lr%3D%26sa%3DN7/25/2019 Clase 2 Mtodos Fisicoqumicos y Microbiolgicos Para Garantizar La Calidad Del Agua
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250 mL
INVESTIGACIN DE Salmonella
CALDO CASEINA- SOJA
INCUBAR A 37CPOR 24 HORAS
INCUBAR A 37 C POR 48 HORAS
AISLAR E IDENTIFICAR
tetrationato selenito
Agarbismutosulfito
AgarSS
Agar bilisverde brillante
Incubar a 37 C por 24 horas
Incubar a 37 Cpor 24 horas
http://images.google.co.ve/imgres?imgurl=http://www.b100supply.com/images/products/149.jpg&imgrefurl=http://www.b100supply.com/index.cfm%3Ffuseaction%3DProduct.display%26product_id%3D98&h=250&w=250&sz=11&hl=es&start=32&tbnid=xZHhZZKg_99KiM:&tbnh=111&tbnw=111&prev=/images%3Fq%3DERLENMEYER%26start%3D20%26ndsp%3D20%26svnum%3D10%26hl%3Des%26lr%3D%26sa%3DN7/25/2019 Clase 2 Mtodos Fisicoqumicos y Microbiolgicos Para Garantizar La Calidad Del Agua
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RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS
FILTRAR100 ml
FILTRAR10 ml
IDENTIFICACIN
AGAR SABOURAUD
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1 ml c/u 1 ml c/u
RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS
PETRIFILM MOHOS Y LEVADURAS PETRIFILM MOHOS Y LEVADURAS
INCUBAR A 25 C POR 7 DIAS INCUBAR A 25 C POR 7 DIAS
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ESPECIES DE MOHOS ENCONTRADASEN AGUAS
Penici l l ium sp p. Cladospor ium sp p. Curvular ia spp. Fusar ium spp .
Asperg i l lus s pp. Chrysospor ium spp. Cladospor ium sp p. Acremon ium s pp.
Microscopio de contraste
de fase. Objetivo 40 x
RECUENTO DE
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RECUENTO DEMICROORGANISMOS HALFILOS
MODERADOS
10 ml
100 ml
INCUBAR A 30 CPOR 10 DAS
AISLAR EIDENTIFICAR
AGAR HALFILO
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100 mL
INVESTIGACIN DE ALGAS YCIANOBACTERIAS
MEDIO PARA ALGASY CIANOBACTERIAS
INCUBAR A 24 CPOR 30 DAS CON
ILUMINACIN
OBSERVAR EIDENTIFICAR
http://images.google.co.ve/imgres?imgurl=http://www.b100supply.com/images/products/149.jpg&imgrefurl=http://www.b100supply.com/index.cfm%3Ffuseaction%3DProduct.display%26product_id%3D98&h=250&w=250&sz=11&hl=es&start=32&tbnid=xZHhZZKg_99KiM:&tbnh=111&tbnw=111&prev=/images%3Fq%3DERLENMEYER%26start%3D20%26ndsp%3D20%26svnum%3D10%26hl%3Des%26lr%3D%26sa%3DN7/25/2019 Clase 2 Mtodos Fisicoqumicos y Microbiolgicos Para Garantizar La Calidad Del Agua
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CIANOBACTERIAS Y ALGAS
Synechocyst is spp
Chlorococcum spp
Microscopio de contrastede fase y de fluorescencia.
Objetivo 40 x
TAPETES Y BIOFILMES
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Adaptacin fisiolgica inespecfica:
secreccin exopolmeros capacidad de dividirse
(SVNC)
patogenicidad
TAPETES Y BIOFILMES
Science 2000; 2905m
LTSEM-BSE, Microscopa Electronica de
Barrido a Bajas Temperaturas en lamodalidad de Electrones Retrodispersados
5m
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PCROf 16S
rDNA genes16S
rDNAamplicons
Ligation Transformation
InsertPCR
Analysis
Sequencing
Total DNA:
(Giuseppe dAuria)
Secuenciamiento genes ARN 16S
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E E E
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Ecosistemas de las aguas minerales muestran elevada diversidad microbianafenotpica y genotpica
DIVERSIDAD MICROBIANA Y ESPECIFICIDAD
16S rRNA
RFLPRestriction Fragment Length Polimorphism
Microbiota autctona deaguas minerales
890 cepas: 378 ribotipos
no
de polimorfismos con inequvoca resolucin de bandas en todosgrupos, sp en cepas productoras pigmentos fluorescentes: 174 cepas: 72 rbt
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Cabina de flujo laminar
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Identificacin de cepas microbianas
Observaciones de cultivo Observaciones microscpicas Evaluacin bioqumica Evaluacin fisiolgica
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Aguas de uso farmacutico
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Agua para uso farmacutico
Se basan en las farmacopeas Buenas prcticas de manufactura (GMP) Aseguramiento de la calidad
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Tipos de agua de uso farmacutico
Agua purificada Agua altamente purificada Agua para inyectables
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Limites microbiolgicos
Agua purificada BH Menor de 100 UFC/ml (USP 30-FE-2007) Endotoxina menor 0,25 EU/ml (FE-2007)
Agua para inyectables Menor de 10 UFC/ml (USP 30-FE-2007) Endotoxinas menor 0,25 EU/ml (USP 30-FE-2007)
Agua altamente purificada
Menor 10 UFC/ml (FE-2007) Endotoxina menor 0,25 EU/ml (FE-2007)
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Pirogenos
Prueba del LAL Test de coagulacin
a 37 C por 1 hora
Serie de dilucionesreactivo LAL(Lymulus amebocitelysate)
Test Pyrosate,Combrex y Pirgeno
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Limites microbiolgicos del agua en laindustria farmacutica
Ufc ml
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Tratamiento del agua
Aguacruda
Cribado Sedimentacin
Cmara demezcla del
floculante
Cmara defloculacin
Canales desedimentacin
Clarificador
Cloracin Almacenamiento Distribucin
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Desinfeccin de los sistemas de agua enla industria farmacutica
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Bibliografa
OMS (2004). Guapara la calidad delagua potable. OMS
WHO (2005). Good
manufacturingpractices. Serie(Report 39)
USP (2007).
Pharmacopeia.
EuropeanPharmacopeia. 6thedition, 2007
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