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Virologa
Dr. Mauricio Bittner O. Dr. Enrique Vins V.
Facultad de Ciencias Biolgicas
Departamento de Ciencias BiolgicasBIO156 - 2010
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Deteccin de
infecciones virales
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Diagnstico de infecciones virales
La tcnica primaria de diagnstico para la mayora de infeccionesvirales es el aislamiento del virus en cultivo de tejidos
Las tcnicas serolgicas son de gran utilidad ya que es una pruebafcil de realizar en un laboratorio clnico (deteccin directa delantgeno en lquidos corporales o en tejidos)
Actualmente el diagnstico molecular es una herramienta rpida yconfiable
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Diagnstico de infecciones virales
Identificacin definitiva de los aislamientos
La combinacin del historial clnico y accin citopatognica proporciona lainformacin suficiente para identificar virus como el Herpes simple, CMV,VZV, adenovirus y sincitial respiratorio.
Adicionalmente las pruebas inmunolgicas proporcionan la informacinnecesaria para detectar el antgeno viral o los anticuerpos dirigidos contraese antgeno.
- Neutralizacin- Hemaglutinacin- Inmunofluorescencia- Aglutinacin- ELISA
- Radioinmunoensayo (RIA)Para el diagnstico por pruebas moleculares se utiliza hibridacin con sondas,
PCR y RT-PCR (este ltimo utilizado principalmente para determinar lacarga viral del paciente).
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Vacunas
Prevencin y tratamiento
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Prevencin y tratamiento
En la actualidad existen vacunas disponibles contra Hepatitis By virus de la influenza
El mecanismo de accin de la mayora de los antiviralesinvolucra la inhibicin de la replicacin viral
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Respuesta Inmune Humoral
Las IgM normalmente reflejan una infeccin reciente
El aumento del ttulo de anticuerpos indica una infeccin reciente
Los ttulos de IgG por s solos suelen indicar una infeccin pasada
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Virologa Oral
FACULTAD DE ODONTOLOGAMAGISTER EN ODONTOLOGAESPECIALIZACIN EN PATOLOGA, DIAGNSTICO Y MEDICINA ORAL
Dr. Mauricio Bittner O. Dr. Enrique Vins V.
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Herpesviridae
8 patgenos humanos
Genoma dsDNA que vara entre 150-220Kpb
Virus largos (150-200 nm), cpside icosahdrica con mantoCodifican enzimas que participan en el metabolismo de c. Nucleicos
Enzima Timidina kinasa es el blanco de numerosos antivirales
Ejemplos:Human Herpesvirus 1 y 2 o Herpes simplex 1 y 2 (HSV-1; HSV-2)
Human Herpesvirus 3 o Varicella-zoster (VZV)
Human Herpesvirus 4 o Epstein-Barr virus (EBV)Human Herpesvirus 5 o Cytomegalovirus (CMV)
Human Herpesvirus 6, 7 y 8 (HHV-6; HHV-7; HHV-8)
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Herpesviridae
Infeccin primaria: Existe replicacin viral y el paciente es infeccioso.Generalmente asintomtica
Latencia: El virus permanece en su clula blanco y no puede sereliminado por las defensas. No existe replicacin viral, el paciente no
es infeccioso y no hay manifestacin clnica de la enfermedad
Reactivacin: Ocurre peridicamente y los pacientes vuelven adesarrollar los sntomas de la enfermedad. Hay replicacin viral y
pacientes son infecciosos
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Herpesviridae
Alpha-herpes virus
HSV1, HSV2 y VZV: Se replican rpidamente en varios tipos
celulares especialmente en el epitelio escamoso estratificado
Beta-herpes virus
CMV, HHV6 y HHV7: Se replican lentamenteGamma-herpes virus
EBV y HHV8: Se replican lentamente y la infeccin est
asociada a linfocitos. Son capaces de inducir la proliferacincelular (cncer)
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1) El manto se fusiona con lamembrana, la nucleocpside esliberada al citoplasma
2) La nucleocpside esenzimticamente
degradada
3) El DNA ingresa alncleo eucarionte y se
transcribe y el RNA estraducido
4) Las protenas seensamblan generandonuevos virus que son
liberados por exocitosis
Replicacin
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Enfermedades asociadas a HSV-1 y 2:
- Gingivoestomatitis herptica (mucosa oral)
- Herpes genital (mucosa genital)
- Queratitis herptica (piel)
- Eczema herpeticum (ojos)
Virus Herpes Simplex 1 (HSV-1):
Infecta mayoritariamente mucosa oral.
Virus Herpes Simplex 2 (HSV-2):
Infecta mayoritariamente mucosa genital.
Herpes Simplex Virus
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Herpes Simplex Virus
Primoinfeccin en menores de 5 aosIncubacin de 2 a 14 das. Aparicin de signos insidiosa con fiebre de variosdas infarto ganglionar regional salivacin excesiva boca y faringe inflamaday dolorosa inflamacin de las encas vesculas que luego se rompen y dejanlceras que se cubren de una capa amarillenta halitosis.
El virus permanece latente en los ganglios sensoriales regionales (de por vida)
Gingivoestomatitis herptica primaria
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Gingivoestomatitis herptica
Herpes Simplex Virus
Las lesiones producen por dao directo del virus y/oindirectamente por la accin inflamatoria del SI
Herpes labial
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Herpes Simplex Virus
Diagnstico
Generalmente por la manifestacin clnica. Si existen dudas serealiza un cultivo de HSV desde los fluidos obtenidos de lasvesculas o saliva
DeteccinAnticuerpos de tipo IgM o IgG anti HSV (glicoprotena G)
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Reactivacin de la infeccin
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Infeccin latente
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Tratamiento:Anlogos denuclesido
(Aciclovir) queinhiben la replicacin
viral
Tratamiento Herpes Simplex Virus
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Varicella-Zoster
Virus Varicella-Zoster: agente etiolgico de la Varicela (Infeccin primaria)
Virus Varicella-Zoster: herpes oral (lceras)
Reactivacin (estrs,inmunosupresin, etc.)
lceras mltiples con dolor irritanteLesin cutnea facial (frecuente)
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Epstein-Barr virus (EBV)
Causa diferentes enfermedades:
- Mononucleosis
- Linfomas
- Leucoplasia oral pilosa
Una propiedad fundamental del virus es la capacidad deinducir proliferacin celular. Esto hace que EBV estinvolucrado en el desarrollo de cncer
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Mononucleosis
Sntomas: Amigdalitis, faringitis, fatiga, linfadenopatia cervical
Diagnstico: Muestra de sangre queevidenciar conteo anormal deleucocitos y morfologa anormalde los mismos. Bsqueda de
anticuerpos contra EBV (IgM,IgG)
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Linfomas
Burkitt's Lymphoma
Carcinoma nasofarngeo
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Leucoplasia pilosa (HL)
Hiperplasia de las clulas epiteliales que genera lesionesblancas, generalmente en el borde de la lengua.
La aparicin de la lesin essuficiente para eldiagnstico, si existen
dudas se debe tomaruna biopsia
Adems se debe investigar infeccin por HIV
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Cytomegalovirus (CMV)
Causa diferentes sintomatologas asociadas a individuosinmunosuprimidos:
- Sintomatologa similar a la Mononucleosis- lceras en la mucosa oral
- Inflamacin de las glndulas salivales
El diagnstico se basa en la presencia del virus en muestra desangre, tejido u orina (cultivo celular) o por serologa
(deteccin de Ag o Ac)Tratamiento antiviral: Ganciclovir, Foscarnet
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Se debe sospechar una infeccin por CMV si el paciente:
-Tiene sntomas de mononucleosis pero da negativo para EBV
- Muestra signos de hepatitis, pero da negativo para HVA, B y C
Cytomegalovirus (CMV)
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Sarcoma de Kaposi (HHV-8)
Asociado a pacientes inmunosuprimidos
Comienza con una lesin plana de color rojiza, luego esta lesinaumenta de tamao y puede formarse una lcera
SK en paladar
SK nodular
SK mltipleen la piel
Tratamientos: Quimioterapia, radioterapia, terapia laser
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Papovaviridae
Se conocen ms de 70 tipos de Human papillomaviruses (HPV), algunosde los cuales son parte de la flora viral encontrada en la piel
Genoma dsDNA
Virus de 55 nm con cpside icosahdrica sin envoltura
Las clulas blanco son las clulas epiteliales de la dermis
Ejemplos:
HPV-16 y HPV-18 cncer cervical y neoplasias nasofarngeas
HPV-13 y HPV-32 (Focal epithelial hyperplasia or Heck's disease)
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Papovaviridae: Protenas del virus papiloma
Hipersensibilidad retardada
asociada a regresin de lesiones
de neoplasia cervical intraepitelial.
Anticuerpos asociados a cncer
cervical invasivo en humanos
Previene el arresto del
crecimiento. Inhibe
inhibidores del Factor de
Transcripc in E2F
Nuclear/++IntermediaE7
Previene diferenciacin
celular. Promueve la
degradacin de p53
Nuclear/+IntermediaE6
Previene diferenciacin
celular
Citoplsmica/+TempranaE5
Empaque del virus (?)Citoplsmica/+++TardaE4
Respuesta celular de regresin de
las lesiones en animales infectados
Factor de Transcripc inNuclear/+TempranaE2
DNA helicasaNuclear/+TempranaE1
Protena secundaria de lacpside
Nuclear/++TardaL2
Se presentan anticuerpos en 50% al
100% de los infectados
Protena principal de la
cpside
Nuclear/++++TardaL1
Respuesta inmune naturalFuncinLocalizacin
subcelular/Cantidad
GrupoProtena
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Virus Papiloma. Virus Oncognicos
En CHILE:
Es la cuarta o quinta causa de muerte por cnceren mujeres
25 casos por cada 100000 mujeres (1:1200)
676 pacientes fallecidos en 2004 (en proporcin,
mortalidad 6-8 veces superior a EEUU)
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El virus es trasmitido por relaciones sexuales.
Mientras que el hombre suele ser portador asintomtico, en la mujer
se pueden producir distintos tipos de cuadros, principalmente enel rea genital:
Verrugas, Displasia, Cncer:.
Virus Papiloma. Virus oncognico
Verruga Enfermedad de Heck
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Virus Papiloma. Virus oncognico
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Virus Papilloma. Virus oncognico
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Diagnstico de infecciones virales
Hybrid Capture II HPV
T i P il Vi
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Tratamiento Papiloma Virus
En la actualidad existen dos vacunas: Una Tetravalente (tipos 6, 11,16 y 18) y otra Bivalente (16 y 18)
Ambas generan una respuesta inmune humoral (generan Ac) contrala protena L1 de la cpside del virus
d f l
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Rev Chil Infect 2007; 24 (3): 215-219
Diagnstico de infecciones virales. Resumen
El primer paso es el cuadro clnico
Di i d i f i i l R
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Diagnstico de infecciones virales. Resumen
Virus Herpes Simplex: Principal forma de diagnstico es el cultivo.Adicionalmente se utiliza PCR o PCR en tiempo real y en menormedida la deteccin de Ac IgG contra la glucoprotena G (gG) del
virus
Virus Papiloma Humano: El diagnstico molecular es el enfoque parala deteccin de este virus. nica prueba comercial aprobada por laFDA para diagnstico es el ensayo de captura hbrida (HybridCapture II HPV)
HIV: Las nicas pruebas aprobadas por la FDA para el diagnsticoinicial de infecciones por HIV son las pruebas para Ac. Una vez queya se ha realizado el diagnstico se utilizan pruebas molecularescomo RT-PCR
Vi t l
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Virus que causan patologas
en la cavidad oral
Picornaviridae
Familia que contiene alrededor de 70 virus
Genoma de ssRNA polaridad positiva con alrededor de 10Kpb
Pequeos (25 nm) sin envoltura
Ejemplos:
- Poliovirus
- Virus de la hepatitis A (HAV)
- Coxsackie A16
- Enterovirus 71
Vi t
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Virus presentesen la cavidad oral
Hepatitis B virus (HBV) perteneciente a lafamilia Hepadnaviridae
Genoma circular dsDNA de 3,2Kpb
DNA polimerasa posee transcriptasa reversa
Nucleocpside icosahdrica que est formada por 180 a 240 copias de
una protena denominada Hepatitis B core antigen (HBcAg)La nucleocpside se encuentra rodeada por una envoltura en la que se
reconocen tres protenas virales denominadas small (S), medium(M) y large (L): Estas protenas se conocen como Hepatitis B
surface antigens (HBsAg)
Vi t
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Virus presentesen la cavidad oral
Hepatitis D virus (HDV)
HDV es un virus que requiere la presencia de HBV para
replicarse ya que utiliza la envoltura de HBV. La infeccinpor HDV es prevenida por la vacunacin contra HBV
Hepatitis C virus (HCV)
HCV pertenece a la familia Flaviridae
Virus con envoltura
ssRNA de hebra positiva
Gran variabilidad en su genoma (RNA polimerasa sinactividad correctora) por lo que vacunacin puedeproteger slo contra ciertas cepas
R t i VIH
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Human Immunodeficiency Virus(HIV)
HIV-1, HIV-2 pertenecen a lafamilia Retroviridae
Genoma de dos copias de ssARNde hebra positiva
Tienen enzima transcriptasareversa (RNA a cDNA)
Mide unos 120 nm de dimetro y
es aproximadamente esfrico.Clula blanco Linfocitos CD4.
Retrovirus. VIH
Retrovirus VIH
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HIV-1
Responsable de la pandemia.
Gran variabilidad gentica.
Evolucin rpida y mas agresiva.
HIV-2
Endmico en frica oriental.
Sumamente raro en Amrica.
Enfermedad menos agresiva y de Evolucin lenta.
Retrovirus. VIH
Tratamiento VIH
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Inhidores Anlogos de Nuclesidos (INTR)
Inhidores NO Anlogos de Nuclesidos (INNTR)
Inhibidores de la Proteasa (IP)
Tratamiento VIH
Triterapia
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1.Inhibidores de la transcriptasa inversa
Nombre comercial Nombre genrico Abreviatura
_______________________________________________
Retrovir Zidovudina AZT
Vdex Didanosina ddIHvid Zalcitabina ddC
Epivir Lamivudina 3TC
Zerit Stavudina d4T
Viramune Nevirapina NVP
2. Inhibidores de la proteasa
Nombre comercial Nombre genrico Abreviatura
_________________________________________________
Invirase Saquinavir SAQ (HGC)Fortavase Saquinavir SAQ (HGC)
Norvir Ritonavir RIT
Crixivan Indinavir IND
Viracept Nelfinavir NLF
Triterapia
Retrovirus VIH
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Fase primaria tasa de replicacin elevada y
una respuesta inmune an no constituida.
Fase de cronicidad replicacin muy
disminuida con una alta tasa de latencia,
adems de una respuesta inmunitaria activapero incapaz de eliminar el virus.
Fase terminal escaso control inmunolgico
debido al agotamiento del sistema inmune.
Evolucin de la infeccin
Retrovirus. VIH
Retrovirus VIH
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Curso tpico de la infeccin por VIH. Los detalles, en particular los plazos,varan ampliamente de un infectado a otro. En azul, evolucin delrecuento de linfocitos T CD4+. En rojo, evolucin de la carga viral.
Retrovirus. VIH
Diagnstico de infecciones virales
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Diagnstico de infecciones virales
Determine HIV-1/2
Diagnstico de infecciones virales
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Diagnstico de infecciones virales
Organizacin Criterios
Association of Stateand Territorial PublicHealth Laboratory
Directors/CDC
Dos cualquiera de:- p24- gp41
- gp120/gp160
Prueba Du Pont (FDA) p24 y p31 y p41 ogp120/gp160
Cruz Roja Americana 3 bandas. 1 de cadagrupo de productos
genticos:- GAG- POL- ENV
Consortium forRetrovirus Serology
Standarization
2 bandas: p24 op31 ms gp41 o
gp120/160
Virus Hepatitis B
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Virus Hepatitis B
Hepatitis B virus (HBV) perteneciente a lafamilia Hepadnaviridae
Genoma circular dsDNA de 3,2KpbDNA polimerasa posee transcriptasa reversa
Nucleocpside icosahdrica que est formada por 180 a 240 copias deuna protena denominada Hepatitis B core antigen (HBcAg)
La nucleocpside se encuentra rodeada por una envoltura en la que sereconocen tres protenas virales denominadas small (S), medium(M) y large (L): Estas protenas se conocen como Hepatitis Bsurface antigens (HBsAg)
Tratamientos Virus Hepatitis B
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Interfern Lamivudina Adefovir
Va
administracin
Subcutnea Oral Oral
Efectos
secundarios
Elevados Mnimos Nefrotoxicidad
a dosis altas
Contraindicaciones Numerosas Escasas Escasas
Resistencia al
frmaco
Ninguna 20% al ao
60% a los 4
aos
Excepcional
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p
Hepatitis C virus (HCV)
HCV pertenece a la familia Flaviridae
Virus con envoltura
ssRNA de hebra positiva
Gran variabilidad en su genoma (RNA polimerasa sinactividad correctora) por lo que vacunacin puedeproteger slo contra ciertas cepas
Virus Hepatitis C
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p
Estructuragenmica
Replicacin