Usmp Aa y Proteinas
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Aminoácidos y proteínas
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AminoácidosSon estructuras químicas con un grupo amino y otro carboxilo como mínimo.Son estructuras cuaternarias con C, H, O y N. Pueden poseer además azufre.Existen más de 300 de ellos en la naturaleza, pero las proteínas se generan a partir de únicamente 22 de ellos. Diez de los aminoácidos deben estar contenidos en la alimentación por cuanto no se sintetizan en el organismo y se les denomina esenciales.
R – CH – COOH
!
NH2
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Aminoácidos esenciales
La clasificación vigente, disminuye importancia nutricional de aa. no esenciales
Esencialidad otorgada a 8-10 aminoácidos, ade-más a algunos ácidos grasos, minerales y vitami-nas, recayendo toda su presencia en la dieta diaria.
El hombre posee la habilidad necesaria para trans-formar aa y ác. grasos esenciales en otros no esenciales pero igualmente necesarios.
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aminoácidos esenciales y no aminoácidos esenciales y no esencialesesenciales
MetioninaMetionina
ValinaValina
LeucinaLeucina
IsoleucinaIsoleucina
FenilalaninaFenilalanina
TriptofanoTriptofano
Treonina Treonina
LisinaLisina
GlicinaGlicinaAlaninaAlaninaTirosinaTirosinaAsparticoAsparticoAsparraginaAsparraginaGlutámicoGlutámicoGlutaminaGlutaminaHistidinaHistidinaProlinaProlinaHidroxiprolinaHidroxiprolinaCistinaCistinaCisteinaCisteina
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Importancia especial de los aa no esenciales
Síntesis de proteínas y aminoácidos no esenciales.Metabolismo intermediario.Ciclos de Krebs y de la Úrea.Proceso gluconeogenético.Formación de heme, colina, etanolamina, ATP, ADN-ARN, aminas biógenas y otros metabolitos.
Por ello deben obligatoriamente sintetizarse.
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Clasificación de aminoácidos
Aminoácidos hidrofóbicos.Se ubican en el interior de las proteínas.La glicina por ser pequeña se acomoda a todas la curvas proteicas.Glicina rica en el colágeno.
Cadenas laterales alifáticas
H-CH-COOH
NH3
CH-CH-COOH
NH3
CH3
CH3
CH-CH2-CH-COOH
NH3
CH3
CH3
CH-CH-COOH
NH3
CH3
CH3
CH2
Glicina
Alanina
Valina
Leucina
Isoleucina
NH3
CH3-CH-COOH
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Clasificación de aminoácidosLos hidroxilados son hidrofílicos, fosforilables y ocupan la superficie proteica.
La serina se encuentra en el sitio activo de muchas enzimas, no así la treonina
Los aminoácidos azufrados, participan frecuentemente de los enlaces interproteínas que mantienen estructuras terciarias y cuaternarias.
La metionina inicia la síntesis de las proteínas.
NH3
CH2-CH-COOH
OH
NH3 OH
CH3-CH-CH-COOH
Serina
Treonina
NH3
CH2-CH-COOH
SH
NH3
CH2-CH-COOHCH2-
S-CH3
Cisteina
Metionina
Aminoácidos hidroxilados
Aminoácidos azufrados
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Clasificación de aminoácidos
Al ser dicarboxílicos proporcionan cargas eléctricas negativas a las proteínas en solución. Además generan proteinatos al reaccionar con cationes.Sostienen, por participar de los enlaces, la estructura secundaria, terciaria y cuaternaria de la proteína.El glutamato y la glutamina son neurotrasmisores abundantes.
Con grupos ácidos o sus amidas
NH3
COOH-CH2-CH-COOH
NH3
NH2-CO-CH2-CH-COOH
NH3
COOH-CH2-CH2-CH-COOH
NH3
NH2-CO-CH2-CH2-CH-COOH
Ac.aspártico
Asparragina
Ac.glutámico
Glutamina
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Clasificación de aminoácidos
Proporcionan cargas positivas a las proteínas.Participan de los enlaces de hidrógeno y mantienen la estructura secundaria, terciaria y cuaternaria de la proteína.La Histidina se encuentra en los sitios activos de las enzimas.La arginina es necesaria en la síntesis de úrea.
Con grupos básicos
NH3
NH-CH2-CH2-CH2-CH-COOH
C=NH2
NH2
Arginina
NH3
NH3-CH2-CH2-CH2-CH2-CH-COOHLisina
NH3
-CH2-CH-COOH
NH N Histidina
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Clasificación de aminoácidos
Contienen grupo aromáticos, que le confieren carácter hidrofóbico.Se sitúan en el interior de la proteína.Estos aminoácidos dan color a las proteínas.El triptofano es precursor de la niacina.La prolina es rica en el colágeno.
NH3
CH2-CH-COOH
NH3
CH2-CH-COOHOH-
NH3
CH2-CH-COOH Fenilalanina
Tirosina
Triptofano
NHCOOH
Prolina
Con anillos aromáticos
Anillo no aromático: Iminoácido
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Cargas eléctricas de los aminoácidos
Los aminoácidos pueden tener carga positiva, negativa o cero.La ionización del carboxilo produce cargas negativas, la captura del protón por parte del grupo amino produce una carga positiva.
A un pH biológico entre 7 y 7,4 los grupos carboxilo son predominantemente COO- y los grupos amino existen como NH3+La carga neta es la suma algebraica de grupos negativos y positivos del aminoácido.
HNHRNHR
HCOORCOOHR
23
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pH isoeléctrico de un aminoácido
Es el pH en el cual el aminoácido presenta cargas positivas y negativas iguales.
Desde un punto de vista práctico resulta de obtener la media entre las
constantes de disociación del carboxilo y del grupo amonio.
CH3-CH-COO-
NH3+
pK1 R-COO- 2,35
pK2 R-NH3+ 9,69
02,6269,935,2
221 pKpKpI
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Propiedades características de cada aminoácido
Muchas de las características físicas y químicas de los aminoácidos dependen de la estructura del grupo R anexo a su carbono alfa.
Grupos tan pequeños como el de la Glicina permiten su presencia en lugares poco accesibles de una estructura proteica.Grupos aromáticos como el de la Tirosina permiten absorción de la luz UV y su medida por procedimientos espectrofotométricos.Grupos básicos o ácidos permiten la formación de enlaces (de hidrógeno) con los de otros compuestos.
CH3-CH-COO-
NH3+
CH=carbono alfa
CH3=grupo R
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Aminoácidos y su centro asimétrico
Casi todos los aminoácidos tienen un centro asimétrico (menos la glicina). Debido al carbono alfa, que tiene cuatro sustituciones distintas.Este genera configurciones L y D. Los L-aminoácidos son los propios de los mamíferos.
Configuración L Configuración D
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CromatografíaProcedimiento de elección para separar e identificar aminoácidos.Se basa en:
partición por solventes.adsorción por el soporte.
Dos elementos básicos en la separación:soporte: papel, sílica gel, resinas.solvente: mezcla de solventes orgánicos y agua.
Diferenciación de acuerdo al Rf
Visualización:coloreado: ninhidrina.fluorescencia : fluorescamina.lectura UV.
solventeelporalcanzadadistanciaaaelporalcanzadadistanciaRf ....
....
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Separación de aminoácidos...
Cromatografía de exclusión molecular.Cromatografía líquida de alta presión.
Tiempo (min)
Flu
ores
cen
cia
Lecho Proteína Proteína
Poroso Pequeña Grande
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Proteínas
Estructura química formada por la unión de aminoácidos mediante diversas formas de enlace.
Se considera :oligopéptidos: de 2 a 10 aminoácidos.
polipéptidos de 10 a 100 aminoácidos.
proteínas : más de 100 aminoácidos.
Clasificación:Por su forma: globulares y fibrosas.
Por su solubilidad: albúminas (solubles en agua) y globulinas (solubles en soluciones salinas diluidas).
Por su composición: simples (sólo aminoácidos), compuestas. (glucoproteínas, lipoproteínas, metaloproteínas ).
Por su densidad: lipoproteínas: LDL,HDL,VLDL .
Por su carga: a pH fisiológico ácidas y básicas.
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Enlaces covalentesPeptídicos y disulfuroEl peptídico es el más importantes de la estructura polipeptídica. Aún el más simple tiene carácter de doble y mantiene la rigidez y además la solidez de la proteína.Genéranse entre el alfa carboxilo de un aminoácido y el alfa amino de otro con eliminación de molécula de agua.La reacción química más importante en el campo clínico - la de Biuret- radica en la presencia del enlace peptídico. El enlace disulfuro se genera por la presencia de radicales -SH de la cisteína, formando uniones disulfuro entre porciones de una misma cadena y entre dos cadenas.Participa de la solidez de la estructura y aún permite la unión de dos polipéptidos como en el caso de la insulina.
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Enlaces no covalentes e interacciones
Como su nombre indica no son enlaces reales sino fuerzas de atracción entre grupos de átomos.
El enlace de H se genera por atracción entre el núcleo de H+ (positivo) y el par de electrones no compartidos de otro átomo. En el caso de una proteína es un oxígeno de otro aminoácido.
El enlace hidrofóbico se genera por la semejanza estruc-tural entre dos aminoácidos (aromáticos, alifáticos ?).
El enlace iónico se genera entre carboxilos libres y amo-nios libres de aminoácidos dicarboxílicos y diamínicos.
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Enlaces no covalentes...
CH2
!
O-H
H2N O
C
CH
CH3 CH3
CH3
(CH2)4
!
NH3+
O-
C
O
Enlace de
Hidrógeno
Enlace
Hidrofóbico
Enlace
Hidrofóbico Enlace
iónico
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Estructura proteica: estructura primaria
La conformación nativa de una proteína se define como la estructura tridimensional que es biológicamente activa. Se mantiene sobre la base de los enlaces covalentes y no covalentes anteriormente explicados.
La estructura primaria está definida por la secuencia de aminoácidos unidos por los enlaces peptídicos.
Su carácter de doble enlace fija una estructura rígida, incapaz de girar sobre su eje, y el movimiento se trasmite a los enlaces del carbono alfa. Esto mantiene una estructura fija coplanar (en un mismo plano).
CO CH NH CO
CH NH CO CH NH
R
R
RLibre
Rígido
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Secuencia de aa. en las proteínas
La estructura primaria de una proteína está dada por la secuencia de aminoácidos.Los pasos del estudio de esta secuencia son:
Composición de polipéptidos por hidrólisis y cromatografía.Aminoácido N terminal, con DNPB y aa. C terminal con Hidrazina.Ruptura en pequeños fragmentos con tripsina, quimo tripsina, bromuro de cianógeno.Reconstrucción de la secuencia.
insulinaCadena A
Cadena B Aminoácidos de la insulina
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Insulina de varios orígenes.....
Origen A8 A9 A10 B30Humano Thr Ser Ile Thr
Vaca Ala Ser Val AlaCerdo Thr Ser Ile Ala
Carnero Ala Gly Val AlaCaballo Thr Gly Ile AlaPerro Thr Ser Ile AlaPollo His Asn Thr AlaPato Glu Asn Pro Thr
![Page 24: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/24.jpg)
Estructura secundaria
Las rotaciones permitidas en el esqueleto del polipéptido generan una estructura repetitiva denominada secundaria, la cual puede ser:
alfa helicoidal
estructura beta u hoja plegada
Esta estructura es mantenida por los puentes de hidrógeno de la pro-teína. En el alfa hélix los puentes son intracatenarios y en la estructura beta intercatenarios.
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Alfa hélice de las proteínas
La doble ligadura virtual, del enlace peptídico limita las conformaciones de una cadena obligando al giro alrededor de un eje (alfa hé-lice).
Sus medidas son:3,6 residuos / giro
0,54 nm / giro
0,15 nm /átomo equivalente
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Estructura secundaria de las proteínas
La hélice alfa es la posición más estable para los ami-noácidos.
Se estabiliza por puentes de hidrógeno entre el H+ de un NH3+ y el O= de un COO- del cuarto residuo anterior.
![Page 27: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/27.jpg)
Hoja plegada de las proteínas
La conformación beta o de hoja plegada se presenta en algunas proteínas o en alguna porción de ellas.La estructura es estabi-lizada por puentes de hidrógeno entre varias cadenas.Puede ser paralela y antiparalela.
![Page 28: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/28.jpg)
Estructura terciaria y cuaternaria
La estructura terciaria se refiere a la disposición tridimensional de la cadena polipeptídica en una proteína, permitiendo la disposición globular o fibrosa de la misma.La mantienen todos los enlaces no covalentes y aún el enlace disulfuro.La interacción proviene de aminoácidos que pueden estar alejados en la secuencia pero cerca en la disposición tridimensional.La proteína está plegada de forma tal que los grupos hidrofílicos ocupan el exterior de la misma y los hidrofóbicos el interior.
La estructura cuaternaria se produce en aquellas proteínas que tienen dos o más cadenas polipeptídicas, las que se estabilizan por enlaces no covalentes.
![Page 29: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/29.jpg)
Estructura terciaria de la Hemoglobina
Tanto la Hys F8 como la Hys E7 sostienen el grupo Hem de la Hemoglobina
Ése a su vez sostiene al Fe
![Page 30: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/30.jpg)
Estructura cuaternaria de la Hemoglobina
Las cuatro cadenas (dos alfa y dos beta) se acomodan, creando una estructura globular con cuatro bolsillos.
![Page 31: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/31.jpg)
Otras proteínas …..
PROTEINA G TRANSDUCTINA
![Page 32: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/32.jpg)
PORINA ESPECIFICA PARA LA SUCROSA
![Page 33: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/33.jpg)
APOLIPOPROTEINA HUMANA A1
![Page 34: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/34.jpg)
Figure 6-6 Ion exchange
chromatography using stepwise elution.
Pag
e 13
4
![Page 35: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/35.jpg)
Figure 6-9 Gel filtration chromatography.
Pag
e 13
7
![Page 36: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/36.jpg)
Figure 6-16 Experimental
arrangement for paper chromatography.
Pag
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3
![Page 37: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/37.jpg)
Figure 6-18 Paper electrophoresis.
Pag
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![Page 38: Usmp Aa y Proteinas](https://reader038.fdocuments.mx/reader038/viewer/2022103115/5571f1fe49795947648bf006/html5/thumbnails/38.jpg)
Figure 6-32 Isopycnic ultracentrifugation.
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Figure 6-30 Zonal ultracentrifugation.
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