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UNIVERSIDAD DE HUÁNUCO
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
E.A.P. ODONTOLOGÍA
EFICACIA ANTIBACTERIANA IN VITRO DEL
EXTRACTO DE HOJA DE COCA EN COMPARACIÓN
CON CLORHEXIDINA FRENTE A STAPHYLOCOCCUS
Y STREPTOCOCCUS
HUANUCO 2011
Presentado por el Bachiller Ricardo A Rojas Sarco.
HUÁNUCO – PERÚ
2011
“Año del Centenario de Machu Picchu para el Mundo”
INDICE
DATOS GENERALES DE LA TESIS
Pág.
RESUMEN
PRESENTACIÓN
INTRODUCCIÓN
CAPITULO I
1. EL PROBLEMA DE INVESTIGACION
1.1 Fundamentación del Problema ………………………………………………. 7
1.2 Formulación del Problema………………...……………………….……….….. 8
Problema General……………………………………………………………… 8
Problema Específico…………………………………………………………... 8
1.3 Justificación………………………………………………………….….……….. 9
1.4 Objetivos. ……………………………………………………………….….…….. 9
Objetivo General………………………………………………….…….….…. 9
Objetivos Específicos………………………………...……………………... 9
1.5 Limitaciones o Dificultades………………………………………………..…..…. 10
CAPITULO II
2. MARCO TEÓRICO
2.1 Antecedentes…………………………………………….……………………...... 11
2.2 Base Teóricas y Científicas……………………………………………….…….. 14
2.2.1 Coca (Erythroxylum)………………………………………………….. 14
2.2.2 Clorhexidina…………………………………………………………….. 19
2.2.3 Staphylococos Aureus y estreptococos mutans.……………………. 22
2.3 Definición de Términos…………………………………………….…………….. 32
2.4 Hipótesis………………………………………………………….……………….. 35
2.5 Identificación de variables………………………………………….………….... 35
2.6 Operacionalización de Variables………….……………….….......…..……… 36
CAPITULO III
3. DISEÑO METODOLOGÍCO
3.1 Tipo de Investigación……………………………………………………………. 37
3.2 Población y Muestra ……….…………………………………………………. 38
3.3 tecnica de recoleccion de instrumentos……………………………………………. 39
3.4 plan de tabulacion y analisis de datos……………………………………………… 40
CAPITULO IV
4. RESULTADOS
4.1resultados De Las Observaciones………………………………………….. 41
4.2 Prueba De Hipótesis………………………………………………………… 44
DISCUSIÓN……………………………………………………………………… 55
CONCLUCIONES……………………………………………………………….. 57
RECOMENDACIONES………………………………………………………………… 58
BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………………… 59
ANEXOS……………………………………………………………………………….. 65
7
CAPITULO I
EL PROBLEMA 1.1 FUNDAMENTACION DEL PROBLEMA
La cavidad oral esta formada por un conjunto de tejidos, con numerosos microorganismos
asociados a ellos, constituyendo un ecosistema. Cuando este sistema ecológico se
encuentra en equilibrio se denomina eubiosis y, en cambio, cuando estas relaciones se han
alterado, pasara a llamarse disbiois, que correspondería a una boca enferma.
La gran mayoría de la población andina del Perú, padecen de enfermedades buco dentales
debido a la carencia de conocimiento sobre la higiene bucal. Pero de manera
compensatoria e inconsciente, el consumo de la hoja de coca en la población, ha
demostrado interferir con el rol del proceso carioso, debido a los componentes beneficiosos
que contiene dicha hoja; al mismo tiempo la excesiva actividad masticatoria a perjudicado
las estructuras dentales produciendo traumas en las estructuras duras del diente y en las que
lo rodean, conllevando ha enfermedades periodontales, ocasionando la perdida dentaria.
Gracias a la investigación realizada por la U.N.M.S.M. sobre la hoja de coca como
antibacteriano sobre microorganismos de la cavidad oral, se pretende comparar la eficacia
antibacteriana de dicha hoja con la clorhexidina en el tratamiento de staphylococcus aureus
8
y streptococcus mutans., y dar una opción en el futuro de revertir la dramática situacional
de la salud bucal de la población andina del Perú. Es por tal motivo que dicha
investigación tiene como propósito principal dar solución a las enfermedades buco dentales
de las personas de bajo recursos económicos y menos accesibilidad a un establecimiento de
salud bucal.
1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
Eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja de coca en comparación con la
clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.
Para este estudio se elabora la siguiente pregunta:
General
• ¿Cuál es la eficacia antibacteriana in vitro del extracto de hoja de coca en
comparación con la clorhexidina 0.12 % en el tratamiento de staphylococcus
aureus y streptococcus mutans?
Especifico
• ¿Será el extracto de hoja de coca un eficaz antibacteriano in vitro frente a
staphylococcus aureus y streptococcus mutans?
• ¿Habrá diferencia entre la eficacia antibacteriana in Vitro de la clorhexidina 0.12%
en comparación con extracto de hoja de coca frente a staphylococcus aureus y
streptococcus mutans?
9
1.3 JUSTIFICACION
Una de las incógnitas que se tratan de explicar de manera, es la causa de los bajos niveles
de lesiones cariosas en personas que practican el hábito de masticar la hoja de coca
crónicamente, pero la mayoría de las investigaciones de la hoja de coca en el área de la
Odontoestomatología no logran explicar, de manera clara dicha eficacia. Es necesario que
se consideren todos los factores que puedan intervenir en la baja incidencia de las lesiones
cariosas en los chacchadores de hoja de coca, y uno de los factores que necesita mayor
importancia de estudio, es la actividad antibacteriana de la hoja de coca, para poder aportar
un mayor conocimiento en el área de la Odontoestomatología y aclarar las incógnitas sobre
el beneficio de dicha planta. Con los resultados positivos que se obtengan de la existencia
de la eficacia antibacteriana del extracto alcohólico de la hoja de coca, se podrá comparar
con otro agente bactericida efectivo que es la clorhexidina y encaminar una planificación
para el tratamiento, tanto preventivo como interceptivo, de enfermedades orales de origen
infeccioso con el uso de extractos de la hoja de coca o con los componentes exactos de la
planta que causen dicho efecto antibacteriano.
1.4 OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN
Objetivo General:
• Determinar la eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja de coca en
comparación con la clorhexidina al 0.12 % en el tratamiento de staphylococcus
aureus y streptococcus mutans
Objetivos Específicos:
• Identificar la eficacia del extracto de hoja de coca como antibacteriano in vitro en
el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.
• Evaluar la eficacia antibacteriana in vitro entre la clorhexidina 0.12% en
comparación con el extracto de hoja de coca en el tratamiento de staphylococcus
aureus y streptococcus mutans.
10
1.5 LIMITACIONES O DIFICULTADES
• Los pocos estudios realizados con la hoja de coca a nivel local, la cual
impide obtener datos importantes para realizar este trabajo.
• El crecimiento inadecuado de la bacteria con la que se esta trabajando.
• Contaminación del los agares con otros microorganismos
11
CAPITULO II
MARCO TEORICO
2.1 ANTECEDENTES
• Según GOICOCHEA, A., en 1954; realizo un estudio en 30 masticadores de la
hoja de coca, que el número de piezas que faltaban y el porcentaje de caries eran
bajos. Mientras que el grado de abrasión dentaria fue alto.1
• Según AYALA, C., en 1963; realiza un estudio a 40 individuos en Puno, en el
cual da como uno de sus resultados, que los chacchadores (masticadores) de la hoja
de coca presentaban lesiones cariosas en un mínimo porcentaje, mientras que la
abrasión dentaria fue elevada.2
• Según ÚNGARO, M., en 1972; realiza un estudio en un grupo de 500
chacchadores de la hoja de coca, que la prevalecía de lesiones cariosas era de un
68%.3
12
• Según CORONEL, M., en 1988; realizó estudios en comunidades de
chacchadores de hoja de coca con un tiempo de hábito mayor de 10 años y edades
comprendidas entre los 30 y 50 años.4
• Según NAVARRO A., Ángel, en 1988; realizo un estudio con 67 sujetos entre 30
y 45 años de edad y con un tiempo del habito mayor a 10 años.5
• Según PANDO, R., en 1988; realiza un estudio en una comunidad de
chacchadores con 60 individuos, con edades comprendidas entre los 30 y 50 años y
con un tiempo de chacchado de la hoja de coca mayor de 10 años.6
• Según LI SING, C., en 1994; estudio las propiedades inhibitorias del
Erythroxylum coca lam. var. coca y del Erythroxylum Novogranatense var.
truxillense contenidos en el filtro de mate de coca frente a las especies de hongos.7
• Según AGUILAR, E. y ENCARNACIÓN, J., en 1995; realizaron un estudio para
observar el comportamiento “in vitro” de algunas especies del género
Mycobacterium frente a Erythroxylum coca-Erythroxylum novogranatense (Mate
de coca).8
• Según CASTRO, P. y CHAVEZ, J., en 1995; realizaron un estudio sobre la
acción inhibitoria in vitro de Erythroxylum coca Lam var. coca y Erythroxylum
Novogranatense var. truxillense contenidas en el filtro de “Mate de Coca” frente a
cepas de uropatógenos Gram negativos multiresistentes.9
• Según CAM, O. y VILLANUEVA, P., en 1996; hicieron un estudio de actividad
inhibitoria del extracto acuoso metanólico de los principios activos totales extraídos
de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) var. truxillense Rugby
frente a cepas bacterianas de bacterias Gram (-), Gram (+) y levaduras aisladas.10
• Según MERTZ, M. y REYES, E., en 1996; realizaron un trabajo de investigación
sobre la propiedad inhibitoria de Erythroxylum coca lam. Y Erythroxylum
novogranatense (Morris) var. truxillense Rugby contenidas en el filtro de “Mate de
coca”, sobre el crecimiento de Enterobacterias, Cocos Gram (+) y Bacillus.11
13
• Según SOLANO, D., en 1996; la presente investigación ha comprendido el estudio
de 40 muestras; correspondientes a placa bacteriana, caries dental, cálculo dental,
absceso radicular y gingivitis, frente a dos extractos de Erythroxylum
Novogranatense (Morris) var. truxillense. Rusby: Acuoso y metanólico de
principios activos totales.12
• Según FLORES MIR, F., en 1997; realizo un estudio para determinar la
prevalencia de lesiones cariosas, enfermedad periodontal y desgaste dentario y su
relación con la presencia, tiempo y frecuencia del habito de masticación de hojas de
coca.13
• Según GALVEZ, O., en 1997; realizó un estudio sobre la acción inhibitoria de
crecimiento del extracto acuoso de Erythroxylum Novogranatense Morris var.
truxillense (Rugby) frente a bacterias Gram negativas que presentaron resistencia a
5 antibacterianos.14
• Según BORROVIC RAMOS, F., en el 2006; realizo una investigación acerca del
efecto antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de coca frente a la
microflora oral.15
• Según VENTURA G., CASTRO A., ROQUE M., RUIZ J., en el 2009; estudió
la actividad antibacteriana del aceite esencial de la hoja de coca, frente a las cepas
de Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus epidermidis, y Pseudomonas
aeruginosa.16
14
2.2 BASES TEORICAS
2.2.1 COCA (ERYTHROXYLUM):
2.2.1.1 Generalidades:
Etimológicamente la palabra coca proviene del quechua “kuka” o “koka” que debe
interpretarse, según Storni, “ku” o “ko”, parte más destacada o principal de algo, “ka” o
“kau” vivificante, que da vida, vigorosa y fuerte.17
El género Erythroxylum, “familia Erythroxylaceae”. (Anexo 1). Se encuentra ampliamente
distribuido en las regiones tropicales de Sudamérica, principalmente en el Perú y Bolivia y
en menor escala en Colombia, Ecuador, Venezuela y Brasil.18
Actualmente se cultivan varias especies de coca en el país. El Erythroxylum coca, planta
arbustiva de crecimiento silvestre en las laderas de los Andes Peruanos, principalmente
entre los 1000 y 2000 m de altitud, cultivadas desde tiempos remotos en el Perú, Bolivia y
otros países cálidos. En la población andina tradicional, donde el uso más conocido que se
le da a las hojas de coca es el “chacchado”. Sin embargo también las usan como
“lubricante” para la interacción social, como medicina, instrumento para adivinar el futuro
y diagnosticar enfermedades.19, 20
___________________________ 17. BORGHELLI, R.: Revista de la Asociación Odontológica Argentina. 18. BURCHARD, R.: la masticación de la coca. América Indígena. 19. TERRAN, M. y SANDAGORDA, A.: Aspectos socioculturales del consumo de la coca. 20. CARTER, W.; MAMANI, M. y PARKENSON, P.: Coca en Bolivia. Universidad de Florida. Miami.
15
2.2.1.2 Botánica:
Erythroxylum (Erythroxylaceae) es un género de 250 especies que se hallan distribuidos en
las regiones tropicales de Sudamérica. No obstante que la mayoría de las especies contiene
alcaloides relacionados con la cocaína, Erythroxylum Lambran coca y Erythroxylum
Novogranatense son las especies más conocidas y extensamente cultivadas en el Perú.18, 21
De acuerdo al lugar de su probable procedencia, la coca peruana es separada en dos
variedades:
1. Variedad de Huanuco o boliviana: Hojas anchas y gruesas, color verde oscuro,
sabor amargo, con alto porcentaje de cocaína. Derivada de Erythroxylum lambran.
Coca (Anexo 2), es cultivada en los valles tropicales de las faldas occidentales de
los Andes (desde Ecuador hasta Bolivia). Sus hojas son oblongas, elípticas,
grandes, anchas, gruesas y de color verde oscuro. Es la más importante por su
contenido promedio de alcaloide, que presenta el más alto de todas las especies
1.1%.22
2. Variedad de Trujillo: Hojas pequeñas y delgadas, color verde claro, sabor dulce y
aromático. Derivada de Erythroxylum Novogranatense (Anexo 3), cultivada en
áreas secas de Colombia y la variedad truxillense, cultivada en el norte del Perú, su
contenido promedio de cocaína es de 0.56%. Esta coca es de gran comercialización
por el agradable sabor se sus hojas debido a su alto contenido de ácidos grasos
volátiles que son usados como saborizantes en la industria de bebidas gaseosas.22
_____________________________ 18. BURCHARD, R.: Una nueva perspectiva sobre la masticación de la coca. Instituto Indigenista Interamericano. 21. MACHADO, E.: El Género Erythroxylum en el Perú. 22. MACHADO GARZOLA, EDGARDO: “El género Erythroxylum en el Perú”.
16
2.2.1.3 Efectos:
Sobre el Organismo:
Los efectos del hábito de la masticación de la coca sobre el individuo se deben
principalmente a la dosis de alcaloides que ellos ingieren. Se calcula que extraen un
promedio de 86% de los alcaloides y que el 80% de los alcaloides es cocaína, el efecto del
resto de los alcaloides (menores) no puede ir más allá de un planeamiento teórico, pues no
existen estudios farmacológicos adecuados.23, 25
Estos efectos son de diversa índole, pero entre ellos destacan los de carácter fisiológico y
psicológico, tanto agudos como crónicos. Las manifestaciones fisiológicas agudas se
caracterizan por taquicardia, ligero aumento de presión arterial y de la temperatura
corporal, alteraciones respiratorias, aumento de resistencia a la fatiga, entre otros. En
cuanto a las manifestaciones fisiológicas de carácter crónico, su delimitación se ve
obstaculizada por el alcoholismo, la deficiente alimentación y en general por las
desfavorables condiciones higiénicas en que viven los chacchadores, pero generalmente se
asocia a malnutrición, hepatomegalia, linfadenopatias, deficiencias visuales, etc.
Respecto a las alteraciones psicológicas, como de la personalidad, se hicieron diversos
estudios los cuales se contradicen entre sí, además en algunos ellos se usaron técnicas que
ahora no pueden aceptarse como válidas ni fidedignas, por lo tanto tendríamos que esperar
nuevos trabajos acerca del efecto del hábito sobre el estatus mental de los individuos que lo
practican.24, 25, 26
______________________ 23. CABIESES, F.: Apuntes de medicina tradicional. 24. CABIESES, F.: Aspectos etnológicos de la coca y la cocaína. Cocaína 25. DOMIC, Z.: Revisión crítica bibliográfica y consideraciones generales acerca del masticado de coca. 26. ZAPATA O., V.: El problema de la masticación de la coca en el Perú.
17
Sobre la Cavidad Oral:
La mucosa oral, es una de las estructuras de nuestro cuerpo que constantemente está
expuesta a substancias extrañas dependiendo de muchos factores, entre ellos los hábitos de
cada persona, de allí que sustancias como el tabaco, alcohol, café, etc. Han sido motivo de
diversas investigaciones sobre el efecto de dichas sustancias sobre la mucosa oral, en el
caso de la masticación de la hoja de coca y su efecto sobre las estructuras orales, los
estudios son limitados.
Sobre la Mucosa Oral:
El chacchador crónico mantiene el bolo de coca, durante un tiempo promedio de 6 horas
diarias, habiéndose sugerido que la acción irritante y/o friccional de estas sustancias,
causan a largo plazo, alteraciones en la mucosa oral 28, tales como zonas blanquecinas,
rugosas, agrietadas, paraqueratosis, acantosis, hiperqueratosis, leucoedema y leucoplasia.17,
27, 28
Sobre los Dientes y Periodonto:
Según la mayoría de estudios realizados, el desgaste dentario y la enfermedad periodontal
tienden a incrementarse con el hábito del chacchado. Se cree que la primera de ellas es
causada tanto por efectos físicos (abrasión) como químicos (erosión) y la segunda por el
contacto de las sustancias usadas en el chacchado con las estructuras de soporte dentario,
las cuales son debilitadas.1, 3 Pero ninguno de estos estudios tiene un sustento científico con
respecto a la relación entre los componentes de la hoja de coca y la incidencia a caries.
________________________ 1. GOICOCHEA I., A.: Estudio de la cavidad bucal en los sujetos habituados a la masticación de hojas de coca 3. UNGARO, M.: Patología oral en masticadores de hojas de coca. 17. BORGHELLI, R.: Lesiones de la mucosa bucal por el uso de hojas de coca 27. HAMER, J. E : The effect of coca leaf chewing on de buccal mucosa of Aymara and Quechua Indians in Bolivia. 28. BERNAL, J.: Odontoestomatología y Precancerosis oral.
18
2.2.1.4 Composición Química de la Coca:
La hoja de coca (anexo 04, 05, 06), depende de factores intrínsecos y extrínsecos. Entre los
factores extrínsecos, se tiene a la ubicación geográfica, la forma en que ha sido cultivada la
planta y el medio ambiente en el que se desarrolla la especie; como intrínsecos tenemos la
edad de la especie vegetal. La hoja de coca también presenta en su composición química:
Aceites esenciales y son los que le dan a las hoja de coca su aroma especial.10
Propiedades Nutricionales de la Hoja de Coca: Gracias a la investigación realizada por
la Universidad de Harvard, en 1975, titulada “Valor nutricional de la hoja de coca”, se ha
probado que la masticación diaria de 100 gramos de hojas de coca, satisface la ración
alimentaría recomendada tanto para el hombre para la mujer. Su contenido en vitaminas y
determinados oligoelementos hacen que al mismo tiempo el mate de coca constituya un
complemento nutritivo de la dieta diaria. Estos mismos estudios de la Universidad de
Harvard sostienen que en 100 gramos de coca se pueden tener casi dos gramos de potasio
que son necesarios para el equilibrio del corazón y se le atribuyen además propiedades
adelgazantes. Sabiendo que estos mates son tan ricas en estos nutrientes, se convierten en
alimento y medicina. La concentración de cocaína en la hoja es muy baja, según
investigaciones realizadas por médicos farmacólogos de la Universidad de Caldas, y por lo
tanto, ingerida en forma natural, no produce toxicidad ni genera dependencia. Actúa como
estimulante leve, mejora la atención y la coordinación de ideas. ___________________________ 10. CAM ALBUJAR, O. y VILLANUEVA VÍLCHEZ, P. Acción Inhibitoria in vitro del extracto acuoso y extracto metanólico de la hoja de Erythroxylumnovogranatense (Morris) var. truxillense (Rusby) frente a bacterias Gram (-) y Gram (+). Tesis de bachiller para Químico farmacéutico UNMSM. Lima, 1996
19
2.2.2 CLORHEXIDINA (Bucoxidina 0.12%)
INTRODUCCIÓN
La clorhexidina fue desarrollada en la década de los 40 por Imperial Chemical Industries
en Inglaterra por científicos que realizaban un estudio sobre la malaria. En ese momento
los investigadores fueron capaces de desarrollar un grupo de compuestos denominados
polibiguanidas, que demostraron tener un amplio espectro antibacteriano y salió al
mercado en 1954 como antiséptico para heridas de la piel. Posteriormente comenzó a
usarse en medicina y cirugía tanto para el paciente como para el cirujano. En odontología
se utilizó inicialmente para desinfección de la boca y endodoncia.29, 30
2.2.2.1 Concepto:
La clorhexidina es un potente antiséptico del grupo de las biguanidas que actúa eficaz y
rápidamente como bactericidas sobre microorganismos Gram. (+) y (-) 31 ,pero poco eficaz
sobre bacterias acido resistentes hongos o virus. se utiliza para enjuagues bucales en el
tratamiento de la gingivitis y de la enfermedad periodontal y tópicamente en la preparación
de la piel del paciente antes de una operación quirúrgica, lavado de heridas, y tratamiento
del acné vulgar. Otros usos de la clorhexidina incluyen la profilaxis y el tratamiento de las
infecciones de boca, la estomatitis, la estomatitis ulcerativa y la gingivitis aguda ulcerativa
necrotizante. ________________________ 29. BASCONES MARTÍNEZ A. Antisépticos en el tratamiento de la enfermedad periodontal. 30. MARISOL BETANCOURTH, Microorganismos inusuales en surcos y bolsas periodontales. 31. HERNÁN PÉREZ TORRES (2005) Farmacología Y Terapéutica Odontológica..
20
2.2.2.2 Composición:
Este compuesto es una base fuerte dicatiónica a pH superior a 3,5 con dos cargas positivas
en cada extremo del puente de hexametileno. Es esta naturaleza dicatiónica la que la hace
extremadamente interactiva con los aniones, lo que es relevante para su eficacia, seguridad,
efectos secundarios locales y dificultad para formularla en productos.32
Cada 100 ml de solución contiene:
Clorhexidina gluconato……………...0.12g.
Excipientes csp……………………...100 ml.
2.2.2.3 Mecanismo de Acción:
La clorhexidina desestabiliza y penetra las membranas de las células bacterianas. La
clorhexidina precipita el citoplasma y interfiere con la función de la membrana, inhibiendo
la utilización de oxígeno, lo que ocasiona una disminución de los niveles de ATP y la
muerte celular. En las bacterias Gram-negativas, la clorhexidina afecta la membrana
exterior permitiendo la liberación de las enzimas periplasmáticas. La membrana interna de
estos microorganismos no es destruída, pero sí que es impedida la absorción de pequeñas
moléculas. A bajas concentraciones, la clorhexidina exhibe un efecto bacteriostático,
mientras que a altas concentraciones es bactericida. Los siguientes microorganismos
muestran una alta susceptibilidad a la clorhexidina: Estreptococos, estafilococos, Cándida
albicans, Escherichia coli, salmonellas, y bacterias anaeróbicas.32, 33
________________________ 32. BUCOXIDINA (clorhexidina 0.12%) – colutorio, gianfarma s.a. 33. VADEMECUN FARMACOLOGICO PERUANO. Clorhexidina,
21
2.2.2.4 Reacciones Adversas
Ocasionalmente se puede presentar alteración transitoria en el gusto, efecto cuya
incidencia es reducida por la baja concentración de principio activo.33
2.2.2.5 Concentraciones:
La clorhexidina suele presentarse en dos concentraciones, al 0,12% y al 0,2%, 0.4%.32, 33
2.2.2.6 Indicaciones y Dosificación:
Colutorios: la clorhexidina para enjuagues orales se comercializa en envases que
contienen un vasito o medida de unos 15 ml. Esta es la dosis que se debe mantener en la
boca durante aproximadamente 1 minuto. 34
Clorhexidina para aplicación tópica: utilizar una gasa o algodón para tratar el área
deseada. Evitar el contacto con los ojos, los oídos y la boca. Si esto ocurriera, enjuagar
inmediatamente con agua abundante.
La clorhexidina se debe mantener fuera de la luz, evitando temperaturas extremas. 33, 34
2.2.2.7 Contraindicaciones:
Hipersensibilidad al gluconato de clorhexidina.33
2.2.2.8 Interacciones
Aunque la clorhexidina se absorbe muy poco por el tracto digestivo puede haber una
interacción potencial con el disulfiram, debido al contenido en alcohol de los enjuagues
orales. La ingestión de alcohol en los pacientes tratados con disulfiram puede ocasionar
serios efectos secundarios. Los pacientes tratados simultáneamente con metronidazol y
clorhexidina pueden experimentar una reacción similar a la del disulfiram.33
________________________ 32. BUCOXIDINA (clorhexidina 0.12%) – colutorio, gianfarma s.a. 33. VADEMECUN FARMACOLOGICO PERUANO. Clorhexidina. 34. DRA. MILEYDI. La clorhexidina, bases estructurales y aplicaciones en; la estomatología.
22
2.2.3 STAPHYLOCOCCUS AUREUS Y STREPTOCOCCUS MUTANS. 2.2.3.1 Generalidades: Ecología de la Boca
La boca alberga innumerables microorganismos en un ecosistema de complejidad
considerable que todavía no ha sido investigado en su totalidad y está lejos de ser
comprendido en toda su magnitud. Hasta hace muy poco, la boca se consideraba como un
hábitat simple para los microorganismos pero en la actualidad se reconoce que los dientes,
el surco gingival, la lengua, otras superficies mucosas y la saliva, todos forman habitáis o
sitios diferentes donde los microorganismos se multiplican. Cada zona o hábitat contiene
su propia población característica, a menudo, con muchas especies microbianas distintas,
las cuales pueden complementarse o competir con otras en la misma población, por tanto,
la flora bucal es una entidad dinámica afectada por numerosos cambios durante la vida del
huésped.35
_______________________ 35. JOSE LIÉBANA UREÑA. Microbiología Oral.
23
2.2.3.2 Staphylococcus Aureus
Los estafilococos son células esféricas Gram positivas, generalmente dispuestas en racimos
irregulares parecidos a racimos de uvas; crecen con rapidez sobre muchos tipos de medios
y son metabolitamente activos, fermentan carbohidratos y producen pigmentos que varían
desde el color blanco hasta amarillo intenso. Algunos son miembros de la flora normal de
la piel y de las mucosas de los humanos; otros causan supuración, formación de abscesos,
varias infecciones piógenas e incluso septicemia mortal. Los estafilococos patógenos casi
siempre causan hemólisis y coagulación del plasma; y producen varias encimas y toxinas
extracelulares.37
El tipo más común de envenenamiento alimentario es causado por una enterotoxina
termoestable de los estafilococos. Estos desarrollan con rapidez resistencia a muchos
antimicrobianos y presentan problemas terapéuticos difíciles.37
El genero staphylococcus contiene al menos 30 especies. Las tres de importancia clínica
son staphylococcus aureus, staphylococcus epidermidis, staphylococcus saprophyticus. El
primero es coagulasa – positivo que lo diferencia de las otras especies, el S. aureus es un
patógeno importante para los humanos. Casi toda persona padece algún tipo de infección
por S. aureus durante su vida, que varia en gravedad desde intoxicación alimentaría o
infecciones cutáneas menores hasta infecciones graves potencialmente mortales.37
1. Características del Género:
Los estafilococos son células esféricas de casi 0.5 a 1.5 um de diámetro 36, dispuestas en
grupos irregulares, en líquidos de cultivos también se observan cocos únicos en parejas,
tétradas y cadenas. Los cocos jóvenes son fuertemente Gram positivos; después de
envejecer muchas células se hacen Gram negativas 37. Los cocos están desprovistos de
motibilidad y no forman esporas. Bajo la influencia de fármacos los estafilococos sufren
lisis 37. En la actualidad este género comprende 35 especies o más y junto con otros
géneros integra la familia de micrococcaceae 36. Viven de manera libre en el ambiente y
forman paquetes regulares de 4 u 8 cocos, sus colonias pueden ser de color amarillo, rojo o
naranja 37.
__________________________________ 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets.
24
2. Cultivo:
Los estafilococos crecen con facilidad sobre casi todos los medios bacteriológicos en
condiciones aeróbicas o microaerofilicas. Crecen con mayor rapidez a 37º C, pero el
pigmento se forma mejor a temperatura ambiente (20 a 25 ºC), sobre medios sólidos las
colonias son redondas, lisas prominentes o brillantes. El S. aureus comúnmente forma
colonias de color gris o amarillo dorado intenso 37.
3. Características de Crecimiento:
Los estafilococos producen catalasa que los diferencia de los estreptococos, fermentan
latentemente muchos carbohidratos y producen acido láctico pero no gas. Los estafilococos
son relativamente resistentes a la desecación al calor (resisten 50º C durante 30 min.) y al
cloruro de sodio al 9%, pero se inhiben con facilidad mediante ciertas sustancias químicas,
por ejemplo, hexaclorofeno al 3%. Los estafilococos muestran resistencia a muchos
fármacos por la producción de beta lactamasa baja el control de un plasmido y confiere al
microorganismo resistencia a muchas penicilinas 37.
Composición Antigénica y Factores de Virulencia:
Los estafilococos poseen un antígeno específico de especie, el polisacárido A, unido al
mucopeptido, y por lo tanto, presenta en la pared celular. En dicha pared también se
encuentra la proteína A, que se une a la región Fc. De la IgG, lo que le da actividad
antifagocitica.36
El peptidoglucano de la pared, que actúa como una endotoxina, atrae leucocitos PMN y
activa la lisozima.36
Los ácidos teitoicos favorecen la adhesión, al igual que la capa del limo o slime,
constituida por hidratos de carbono y proteínas extracelulares. Esta capa facilita la
adhesión e inhibe la quimiotaxis y la fagocitosis.36
___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets.
25
Encimas y Toxinas
Catalasa: Los estafilococos producen catalasa, que convierte el peroxido de hidrógeno en
agua y oxigeno. La prueba de catalasa pude diferenciar los estafilococos que positivos, de
los estreptococos, que son negativos.37
Coagulasa y Factor de Agrupamiento: Los S. aureus produce coagulasa, una proteína
parecida a enzima que coagula. La coagulasa de une la con protronbina; juntas se vuelven
activas desde el punto de vista enzimático e inician la polimerización de fibrina. La
coagulasa puede depositar fibrina sobre la superficie de los estafilococos, alterando talvez
su ingestión por células fagocíticas o su destrucción dentro de dichas células. Se considera
que la producción de coagulasa es sinónimo de patógeno potencialmente invasor.37
Otras Enzimas: Otras enzimas producidas por los estafilococos incluyen una
hialuronidasa, o factor de propagación; una estafilocinasa que produce fibrinolisis, pero
actúa de manera mucho mas lenta en comparación con la estreptocinasa, la proteinasa, la
lipasas, y la beta lactamasa.37
Exotoxinas: La hemolisina estafilococica o toxinas alfa, beta, Y, O, se diferencia por los
tipos de eritrocitos que lisan. Estas toxinas también actúan sobre otras células 36:
• Toxina alfa: daña el músculo liso, las células de la piel, los macrófagos y las
plaquetas.
• Toxina beta: degrada esfingomielina.
• Toxina y: disuelve los eritrocitos de humanos y animales.
• Toxinas o: toxina para muchas células polimorfonucleares, macrófagos, linfocitos y
plaquetas.
Leucocidina: esta toxina posee dos compuestos (F y S) que actuan en forma sinérgica para
dañar PMN y macrófagos; si bien su mecanismo de acción no es muy claro, aparentemente
parecería que consiste en alterar la permeabilidad de la membrana celular.36
___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets.
26
Exfoliatina o Toxina Epidermolitica (Exotoxina): Hay dos tipos A y B; son codificadas
por un plasmido y producen una lesión cutánea conocida como dermatitis aguda
exfoliativa.36
Toxina del Síndrome de Shock Toxico (TSSS-I) o Toxina Pirogenica: Se trata de una
toxina semejante a las que producen los estreptococos y se la considera un súper antígeno.
Puede causar una erupción escarlatiniforme. No se la encuentra en todos los casos de
shock séptico estafilococico (SSS).36
CUADROS CLINICOS 36
• Infecciones cutáneas: foliculitis, orzuela, impétigo
• Síndrome del shock toxico: Ataca a mujer en la etapa de menstruación
• Neumonía
• Osteomielitis
• Infecciones de heridas
• Enteritis o enterocolitis
• Infecciones odontológicas: Se han encontrado infecciones endodonticas, y algunos
abscesos periapicales. La osteomielitis de huesos maxilares, parotiditis,
manifestaciones gingivales, periodontitis y estomatitis.
___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets.
27
2.2.3.3 Streptococcus Mutans
Los estreptococos son bacterias esféricas Gram positivas que por lo general forman pares
de cadenas durante su crecimiento. Se distribuyen ampliamente en la naturaleza. Algunos
son miembros de la flora humana normal; otros se asocian con enfermedades humanas
importantes atribuibles en parte a infección por estreptococos y en parte a sensibilización a
ellos. Elaboran varias sustancias extracelulares y enzimas.37
Los estreptococos son un grupo heterogéneo de bacterias y no hay un sistema apropiado
para clasificarlos.37
Morfología e Identificación
1. Características del Género
Los estreptococos son microorganismos sumamente difundidos y, la cavidad bucal alberga
gran número de especies de este género 36. Los estreptococos tienen formas esféricas u
ovoides y se disponen en cadenas, se agrupan en cadenas de longitud variable. Cada uno de
los elementos aisladamente tiene un diámetro que oscila entre 0.6 y 1 a 2 um 36. Los
miembros de esta cadena con frecuencia presentan una aspecto de diplococos. Los
estreptococos son Gram positivos, sin embargo, conforme un cultivo envejece y las
bacterias mueren, pierden su Gram positividad y se tornan Gram negativos; esto puede
ocurrir después de incubación durante una noche.37
Algunos estreptococos elaboran un polisacárido capsular. La mayor parte de las cepas de
los grupos A, B y C producen capsulas compuestos de acido hialuronico. Las capsulas son
mas notables es los cultivos jóvenes. Impiden la fagocitosis. La pared de la célula
estreptocócica contiene proteínas (antígenos M, T, R), carbohidratos (específicos del
grupo) y peptidoglucanos. Los Pili semejantes a vellosidades se prolongan a través de la
capsula de los estreptococos del grupo A. los Pili contienen parte proteína M y están
cubiertos de acido lipoteicoico. Este último es importante para la adhesión de los
estreptococos a otras células epiteliales.37
___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets.
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2. Clasificación de los Estreptococos:
Las clasificaciones que se han propuesto para estas bacterias son innumerables y se basan
en sus distintas características; las más actuales tienen encuesta la biología molecular.37
Según la doctora lancefield (1933), ubico a estas bacterias en grupos identificados con
letras. Estas son 37:
Grupo A: S. pyogenes. Beta hemolítico
Grupo B: S. agalactia. Beta hemolítico.
Grupo D: enterococcus faecalis (y otros enterococos). Alfa hemolítico y no hemolítico.
Grupo C, G: S. dysgalalactiae. Alfa y beta hemolítico.
Grupo D: S. Bovis. No hemolíticos
Grupo F (A, C, G) y no tipicables: S. anginosus (S. intermedius, constellatus, millen).
Alfa y beta hemolíticos y no hemolíticos
No tipificados: S. viridans (S. mutans). Alfa hemolíticos y no hemolíticos.
Sin grupo: S. pneumoniae. Alfa hemolíticos
Sin grupo: peptostreptococcus (muchas especies). Alfa hemolíticos y no hemolíticos.
Factores de Virulencia
Los mayores factores de virulencia son los anfígenos de superficie. La llamada proteína M
se comporta como un factor antifagicitico (hay mas de 80 tipos de proteína M), esta
proteína contribuye a la adhesión y, por lo tanto a la colonización.36
Existen dos proteínas útiles para la identificación, la T (tripsina –resistente) y la R,
pero hasta el momento no a demostrado que confiera virulencia al microorganismo.36
Las fimbrias de los estreptococos, que desempeñan un papel en la adherencia, están
recubiertas por proteína M y acido teitoico. 36
La secreción de una capsula de acido hialuronico les confiere cierto poder
antifagocitico.36
___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets.
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El acido lipoteitoico también actúa como un factor de adherencia y se une la fibronectina
de las células del hospedero. Se ha detectado una proteína F estreptocócica de unión a la
fibronectina que genera una unión mas firme que la del acido lipoteitoico.36
Enzimas y Toxinas
Que no son muy específicas de cada una. Casi todas producen 37:
• Exotoxina Pirogenica Estreptocócica o Toxina Eritrogenica: Esta toxina que es
excretada por la cepas que se encuentran en estado lisogénico, es responsable
citotoxicidad, erupción escarlatina y pirogenicidad, inmunosupresion y alteraciones
de la permeabilidad de las células de la corteza cerebral.36
• Estreptolisina O: Que se llama así por su labilidad frente al oxigeno y que es
segregado por los estreptococos del grupo A y por algunos del grupo C y G,
conduce ala lisis de os glóbulos rojos, y es citotóxica para los neutrofilos, las
plaquetas y las células del tejido cardiaco. Se inactiva con el oxigeno, de ahí la letra
que lo identifica.36
• Estreptolisina S: Que debe su nombre a que la producen algunas cepas en
presencia de suero, sirve para identificar a los estreptococos en agrar sangre, tiene
acción lítica para los leucocitos pero no es un antígeno.36
• Estreptocinasa (Fibrinolisina): Es una proteína natural antigénica que secretan los
estreptococos del grupo A, C y G. esta proteína digiere la fibrina y así impide la
formación de una barrera de esta sustancia por lo que favorece la diseminación.36
• Desoxirribonucleasa: Hay 4 tipos de esta enzima presentes en los de los grupos A,
C y G. las desoxirribunucleasas hidrolizan ácidos nucleicos y nucleoproteínas que
utilizan como nutrientes. Al reducir la viscosidad del pus, facilitan la diseminación
de la infección.36
___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets.
30
• Hialuronidasa: Que es producida por los grupos A, B, C y G, favorece la
disfunción en los tejidos y por eso también se le conoce como factor de
disfunción.36
• NADasa: Se relaciona al efecto leucotoxico y es producido por los estreptococos
del grupo A, C y G.36
• Lipoproteinaza o Factor de Opacidad del Suero: Esta enzima es característica
del grupo A tipo M; la lipoproteinaza esta relacionada con la proteína M, es
antigénica y sirve para identificar a los estreptococos. Los estreptococos del grupo
A también pueden segregar C5a peptidasa; esta enzima inactiva al componente C5a
del complemento que impide que se una a los PMN y altera la efectividad de este
elemento de defensa.36
Fuentes De Infección
Boca (presente en la saliva), colonizan el tracto gastrointestinal, la vagina, el aparato
respiratorio superior.36
CUADROS CLÍNICOS 36
• Erisipela (puede conllevar a una celulitis de la zona)
• Fiebre Puerperal (posparto)
• Sepsis (en heridas y politraumatizados)
• Faringitis
• Impétigo o Piodermia (en niños)
• Facitis Necrotizante
• Miositis
• Sd. de Shock Estreptocócico (Px. HIV)
___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”.
31
Enfermedades Pos-Estreptocócicas: 36
• Fiebre reumática
• Glomerulonefritis
En Odontología: 36
• Lengua afranbuesada
• Palidez peribucal
• Abscesos
• Caries dental
___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”.
32
2.4 DEFINICION DE TERMINOS
o Microorganismos: También llamado microbio, es un ser vivo que sólo puede
visualizarse con el microscopio.42
o Antibacteriano: Relativo a una sustancia que destruye las bacterias o inhibe su
crecimiento y reproducción.42
o Bactericida: Que mata las bacterias./ Poder bactericida: La más débil
concentración de una sustancia capaz de provocar la destrucción definitiva de la
vitalidad de un microbio.42
o Bacteriostático: Concentración mínima de una sustancia capaz de impedir el
desarrollo de una bacteria sin llegar a destruirla.42
o Grampositivo: Que conservan el color violeta de la tinción que se utiliza en el
método de Gram. para teñir microorganismos.42
o Gramnegativo: que posee la coloración rosada de la contra tinción que se utiliza
en el método de Gram. para teñir microorganismos.42
o Carbohidrato: Grupo de compuestos orgánicos entre los que se hallan la glucosa,
la fructuosa, el almidón, la celulosa y la goma.42
o Pigmentos: Cualquier material colorante orgánico producido en el organismo,
como la melanina.42
o Enzimas: Proteína producida por las células vivas que cataliza las reacciones
químicas en la materia orgánica.42
o Toxinas: Veneno o toxico, generalmente producido por una planta o
microorganismo.42
33
o Coagulasa: Enzima producida por bacterias en especial staphylococcus aureus, que
desencadena la coagulación.42
o Lisis: Sufijo que significa degradación o destrucción.42
o Aeróbio: Microorganismo que vive y crece en presencia de oxigeno libre. Los
aerobios se dividen en aerobios facultativos y aerobios obligados.42
o Proteína: Compuesto nitrogenado natural de carácter organico complejo,
constituido por muchos aminoácidos.42
o IgG.: Uno de los 5 tipos de anticuerpos hormonales producido por el organismo. Es
una proteína especializada que se sintetiza como respuesta a la invasión de
bacterias, hongos y virus.42
o Quimiotaxis: respuesta que supone un movimiento positivo, hacia un estimulo
químico, o negativo alejándose del mismo.42
o Fagocitosis: Proceso por el cual determinadas células engullen y desechan
microorganismos y detritus celulares.42
o Protrombina: Proteína plasmática precursora de la trombina. La transformación de
protrombina en trombina para la formación de coagulo.42
o Fibrina: Proteina filamentosa insoluble que proporciona su carácter semisólido al
coagulo sanguíneo y esta producida por la acción de la trombina sobre el
fibrinogeno en el proceso de la coagulación.42
o Patógeno: Cualquier microorganismo capaz de producir una enfermedad.42
o Virulencia: capacidad de un microorganismo para producir una enfermedad.42
34
o Hialuronidasa: Enzima que hidroliza el acido hialuronico.42
o Eficacia: Es la capacidad de lograr un efecto deseado o esperado.42
o Necrotizante: Muerte de una porción de tejido consecutiva a enfermedad o
lesión.42
o Interacción: Modificación del efecto de un fármaco que se produce cuando este se
administra con otro. El efecto puede consistir en el aumento o disminución de la
acción42.
35
2.5 HIPÓTESIS:
Hipótesis de Investigación
La eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja coca es mayor que la eficacia de la
clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de Staphylococos Aureus y estreptococos mutans.
Hipótesis Nula
La eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja coca a las concentraciones de 250
ug / 20ul, 500 ug / 20ul, 1000 ug / 20ul, 1500ug / 20ul, no es mayor que la eficacia de la
clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.
Hipótesis Alterna
La eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja coca a las concentraciones de 250
ug / 20ul, 500 ug / 20ul, 1000 ug / 20ul, 1500ug / 20ul, es igual que la eficacia de la
clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.
2.6 IDENTIFICACION DE VARIABLES
2.6.1 Variables Independiente
Concentración del extracto alcohólico de la hoja de coca y clorhexidina 0.12%.
2.6.2 Variable Dependiente
Eficacia antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de coca.
36
2.6 OPERACIONALIZACION DE VARIABLES
Variable Definición Indicadores Escala Categoría
Independiente
Concentración del extracto alcohólico de la hoja de coca
y clorhexidina.
Cantidad del extracto
alcohólico de la hoja de coca
contenidos en un volumen
determinado de agua destilada y
alcohol rectificado al 80º
y clorhexidina al 0.12%
250µg/ 20µl.
Numérica
De Razón
500µg/ 20µl.
Numérica
De Razón
1000µg/ 20µl.
Numérica
De Razón
1500µg/ 20µl.
Numérica
De Razón
0.12% Numérica
De Razón
Dependiente
Eficacia antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de coca.
Es la inhibición en el desarrollo o crecimiento
de las bacterias debido a la
presencia del extracto
alcohólico de Hoja de coca.
8 mm. resistencia
11 mm. sensible
Numérica
De Razón
37
CAPITULO III
METODOLOGIA
3.1 TIPO DE ESTUDIO
La presente investigación se realizó con un diseño de tipo experimental y longitudinal.
3.1.1 Tipo De Investigación
Según el propósito: Aplicativa
Según la ocurrencia de hechos: prospectivo
Según el periodo y secuencia: longitudinal
Según el análisis y la secuencia: experimental
Según la participación del investigador: Participativo
3.1.2 Método
Comparativo
38
3.1.3 Nivel De Estudio
Experimental
3.2 POBLACIÓN Y MUESTRA
3.2.1 Población
20 Cepas staphylococcus aureus y 20 cepas streptococcus mutans.de diferentes espécimen
clínicos, adquiridos del banco de bacterias del laboratorio del H.R.H.V.M.
3.2.2 Muestra
Muestreo no probabilístico, intencional por conveniencia (al azar).
CRITERIOS DE INCLUSION Y EXCLUSION
• Criterios de inclusión:
Cepas que pertenezcan al genero staphylococcus aureus y streptococcus mutans.
• Criterios de exclusión:
Cepas que no pertenezcan al genero staphylococcus aureus y streptococcus mutans.
Unidad maestral:
• Cepas de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.
Unidad de análisis:
• Cultivos bacterianos de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.
Diseño experimental
G1 O1 X1 O2
G2 O3 X2 O4
G3 O5 X3 O6
G4 O17 X4 O8
G5 O9 X5 O10
39
G1 Muestra de estudio recibirá tratamiento con 250µg/ 20µl de extracto alcohólico de
hoja de coca.
G2 Muestra de estudio recibirá tratamiento con 500µg/ 20µl de extracto alcohólico de
hoja de coca.
G3 Muestra de estudio recibirá tratamiento con 1000µg/ 20µl de extracto alcohólico de
hoja de coca.
G4 Muestra de estudio recibirá tratamiento con 1500µg/ 20µl de extracto alcohólico de
hoja de coca.
G5 muestra de estudio recibirá tratamiento con 0.12% de clorhexidina.
3.3 TÉCNICA DE RECOLECCIÓN DE DATOS
INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS
• Protocolo de trabajo
• Guía de observación. Para detallar la medición de halos bajo la inspección clínica
Procedimiento para la extracción de los principios activos totales
El medio de extracción utilizado es el método de maceración alcohólica. En un envase de
vidrio estéril (2 litros de capacidad) forrado con papel aluminio, se coloco en su interior ¼
kg de hojas de erythroxylum lambran (coca) previamente cortada, luego se añadio el
alcohol rectificado al 80º, se dejo reposar por 7 días (se agito la botella 3 veces al dia).
Luego se filtro el macerado de hoja de coca a través de un papel estéril y el líquido
obtenido se evaporo en un horno al vacio en 40º, para poder obtener los principios activos
totales de la hoja de erythroxylum lambran (coca de Huanuco).
El insumo de hoja de coca obtenido se diluyó en agua destilada, luego fue impregnado en
discos de papel filtro con las diferentes concentraciones, para simular discos de
sensibilidad. “Ejemplo: 250µg (microgramos), diluido en 20µl (microlitros) de agua
destilada
40
Técnica de Observación Directa.
• Examen De Laboratorio
Con las cepas proporcionadas por el del laboratorio del H.R.H.V.M., se procedio
a realizar el antibiograma en el agar Muller Hinton en el cual se coloco los discos
de sensibilidad preparados con las distintas concentraciones del extracto alcohólico
de la hoja de coca y con la clorhexidina. Los que se incubaron a 37°C por 24 y 48
horas.
Medición del halo inhibición
Las muestras son evaluadas en las primeras, 24 horas, 48 horas, periodo en cual se
realiza las mediciones correctamente estipuladas de los halos de inhibición con una
regla flexible milimetrada para determinar con una escala categórica de sensible
halo > 11 mm , resistente halo <8mm.
3.4 PLAN DE TABULACIÓN Y ANÁLISIS DE DATOS
Procesamiento de Datos
El proceso de recolección de datos se realizo mediante la aplicación una guía de
observación de campo. El procesamiento de datos se realizo de manera automatizada
empleando una computadora utilizando el siguiente software:
• Procesador de texto Microsoft Word XP.
• Programa de Análisis Estadístico SPSS 15.
Análisis de Datos
Prueba U de Mann-Whitney (prueba no paramétrica)
41
CAPITULO IV
RESULTADOS
4.1 RESULTADOS DE LAS OBSERVACIONES
4.1.1 MUESTRA
La muestra de estudio lo constituye 20 cepas de staphylococcus aureus y 20 cepas de
streptococcus mutans de diferentes especimenes clínicos, adquiridos del Banco de
bacterias del Laboratorio del Hospitar Regional Hermilio Valdizan Medrano de Huánuco.
4.1.2 RESULTADOS
Las observaciones se realizaron en cada una de las muestras indicadas anteriormente. El
tratamiento consistió en la aplicación de dos diferentes concentraciones del extracto seco
obtenido por extracción alcoholica; el cual luego se diluyó en agua destilada en las
siguientes concentraciones: 1000 µg/20 µl y 1500 µg/20 µl. Comparándolo con un
antibiótico convencional como clorhexidina al 0.12 %; observándose el tamaño de los
halos como medida de la inhibición bacteriana ante el extracto de coca y el del antibiótico.
Los resultados se presentan en las tablas 1 y 2 respectívamente
42
Tabla 1: Diámetros de los halos de inhibición obtenidos al aplicar extracto de coca y clorhexidina sobre staphylococcus Aureus.
ANTIBIOGRAMA Concentración del Extracto Alcohólico de la Hoja de Coca
Clorhexidina
Staphylococcus Aureus
250µg/20µl 500µg/20µl 1000µg/20µl 1500µg/20µl 0.12%
Cultivo #01 24 horas - - 10mm 12mm 15mm Cultivo #01 48 horas - - 10mm 13mm 15mm Cultivo #02 24 horas - 10mm 10mm 12mm 20mm Cultivo #02 48 horas - 10mm 11mm 12mm 20mm Cultivo #03 24 horas - - 11mm 12mm 23mm Cultivo #03 48 horas - 8mm 11mm 12mm 23mm Cultivo #04 24 horas - - 15mm 17mm 23mm Cultivo #04 48 horas - - 15mm 17mm 23mm Cultivo #05 24 horas - 7mm 13mm 18mm 15mm Cultivo #05 48 horas - 7mm 15mm 18mm 15mm Cultivo #06 24 horas - - 10mm 13mm 24mm Cultivo #06 48 horas - - 11mm 13mm 24mmCultivo #07 24 horas - - 10mm 15mm 20mm Cultivo #07 48 horas - - 10mm 15mm 20mm Cultivo #08 24 horas - - 11mm 12mm 15mm Cultivo #08 48 horas - - 11mm 12mm 15mm Cultivo #09 24 horas - 8mm 11mm 13mm 17mm Cultivo #09 48 horas - 8mm 11mm 13mm 17mm Cultivo #10 24 horas - - 11mm 12mm 15mm Cultivo #10 48 horas - - 11mm 12mm 15mm Cultivo #11 24 horas - - 10mm 15mm 18mm Cultivo #11 48 horas - - 10mm 15mm 18mm Cultivo #12 24 horas - - 12mm 14mm 15mm Cultivo #12 48 horas - - 13mm 14mm 15mm Cultivo #13 24 horas - - 10mm 12mm 20mm Cultivo #13 48 horas - - 11mm 12mm 20mm Cultivo #14 24 horas - - 11mm 12mm 20mm Cultivo #14 48 horas - - 11mm 12mm 20mm Cultivo #15 24 horas - 10mm 15mm 15mm 18mm Cultivo #15 48 horas - 10mm 15mm 15mm 18mm Cultivo #16 24 horas - 8mm 14mm 17mm 22mm Cultivo #16 48 horas - 8mm 14mm 17mm 22mm Cultivo #17 24 horas - - 10mm 13mm 20mm Cultivo #17 48 horas - - 12mm 14mm 20mm Cultivo #18 24 horas - - 10mm 12mm 25mm Cultivo #18 48 horas - - 10mm 12mm 25mm Cultivo #19 24 horas - - 13mm 15mm 25mm Cultivo #19 48 horas - - 13mm 15mm 25mm Cultivo #20 24 horas - - 14mm 15mm 25mm Cultivo #20 48 horas - - 15mm 15mm 25mm
43
Tabla 2: Diámetros de los halos de inhibición obtenidos al aplicar extracto de coca y clorhexidina sobre Streptococcus Mutans
ANTIBIOGRAMA Concentración del Extracto Alcohólico de la Hoja de Coca
Clorhexidina
Streptococcus Mutans 250µg/20µl 500µg/20µl 1000µg/20µl 1500µg/20µl 0.12% Cultivo #01 24 horas - - 15mm 17mm 23mm Cultivo #01 48 horas - - 15mm 17mm 23mm Cultivo #02 24 horas - 10mm 15mm 20mm 25mm Cultivo #02 48 horas - 10mm 15mm 20mm 25mm Cultivo #03 24 horas - - 10mm 20mm 15mm Cultivo #03 48 horas - - 10mm 20mm 15mm Cultivo #04 24 horas - - 10mm 16mm 20mm Cultivo #04 48 horas - - 10mm 16mm 20mm Cultivo #05 24 horas - - 10mm 15mm 17mm Cultivo #05 48 horas - - 11mm 15mm 17mm Cultivo #06 24 horas - - 12mm 14mm 20mm Cultivo #06 48 horas - - 12mm 14mm 20mm Cultivo #07 24 horas - 8mm 11mm 16mm 15mm Cultivo #07 48 horas - 8mm 11mm 16mm 15mm Cultivo #08 24 horas - 8mm 10mm 15mm 17mm Cultivo #08 48 horas - 8mm 11mm 15mm 17mm Cultivo #09 24 horas - 9mm 12mm 15mm 15mm Cultivo #09 48 horas - 9mm 13mm 15mm 15mm Cultivo #10 24 horas - - 12mm 15mm 20mm Cultivo #10 48 horas - - 12mm 15mm 20mm Cultivo #11 24 horas - - 11mm 13mm 20mm Cultivo #11 48 horas - - 11mm 13mm 20mm Cultivo #12 24 horas - - 15mm 18mm 22mm Cultivo #12 48 horas - - 15mm 18mm 22mm Cultivo #13 24 horas - - 10mm 14mm 20mm Cultivo #13 48 horas - - 10mm 14mm 20mm Cultivo #14 24 horas - - 14mm 15mm 19mm Cultivo #14 48 horas - - 15mm 15mm 19mm Cultivo #15 24 horas - - 15mm 15mm 23mm Cultivo #15 48 horas - - 15mm 16mm 23mm Cultivo #16 24 horas - 10mm 12mm 16mm 20mmCultivo #16 48 horas - 10mm 12mm 16mm 20mm Cultivo #17 24 horas - - 12mm 14mm 20mm Cultivo #17 48 horas - - 12mm 14mm 20mm Cultivo #18 24 horas - - 13mm 15mm 25mm Cultivo #18 48 horas - - 13mm 15mm 25mm Cultivo #19 24 horas - 10mm 11mm 13mm 20mm Cultivo #19 48 horas - 10mm 11mm 13mm 20mm Cultivo #20 24 horas - - 15mm 18mm 22mm Cultivo #20 48 horas - - 15mm 18mm 22mm
44
4.2 PRUEBA DE HIPÓTESIS
La hipótesis de investigación plantea la eficacia antibacteriana del extracto de coca,
comparándola con un antibiótico convencional como la clorhexidina al 0.12 %, en el
tratamiento de staphylococcus Aureus y de Streptococcus Mutans.
En primer lugar vamos a probar que el tratamiento con una concentración de extracto de
coca de 1500 µg/20µl es superior al de 1000 µg/20µl. En la siguiente tabla se comparan los
datos del halo obtenido con las dos concentraciones del extracto de coca.
Tabla 3: Tamaño del halo obtenido (mm) al aplicar extracto de coca sobre staphylococus aureus medido después de 24 horas
Concentración del extracto de coca Cultivo Nº 1000 µg/20 µl 1500 µg/20 µl
1 10 12 2 10 12 3 11 12 4 15 17 5 13 18 6 10 13 7 10 15 8 11 12 9 11 13 10 11 12 11 10 15 12 12 14 13 10 12 14 11 12 15 15 15 16 14 17 17 10 13 18 10 12 19 13 15 20 14 15
45
El planteamiento de nuestra hipótesis lo realizamos utilizando una prueba estadística no
paramétrica que es la U de Mann-Whitney, en previsión a la no normalidad de los datos
1. Hipótesis nula: No hay diferencias entre los dos tratamientos con el extracto de coca. Lo
planteamos matemáticamente por Ho: µ1000, 24 hr = µ1500, 24 hr.
2. HA: µ1500, 24 hr.> µ1000, 24 hr (La concentración a 1500 es superior a la de 1000)
3. α = 0.05 (nivel de significación)
4. Estadística U de Mann Whitney, se utiliza para probar la hipótesis nula de dos muestras
independientes, asumiendo que los datos no son normalmente distribuidos.
5. Utilizaremos el programa SPSS 15. Los resultados del procesamiento de los datos se dan
a continuación:
La U de Mann Whitney es el más pequeño de los valores calculado para los 2 grupos. En
este caso es de 68.5. De tablas se obtiene para n=19, m=19 y α=0.05 prueba de una cola
wα=123. Puesto que 68.5<123; se rechaza la hipótesis nula. Además el valor de Asymp.
Sig (una cola), que es la probabilidad extrema es de 0.005<0.05; por lo que también se
rechaza la hipótesis nula y se conviene que el tratamiento con una concentración de 1500
µg/20 µl, es más eficaz que con 1000 µg/20 µl.
Tabla 4: Salida del SPSS para los datos de la tabla 3
HALO U de Mann-Whitney 68.500
W de Wilcoxon 258.500Z -3.317Sig. asintót. (bilateral) .001
Sig. exacta [2*(Sig. unilateral)]
.001(a)
a No corregidos para los empates.
b Variable de agrupación: CONCENT
46
La contrastación de los datos a 48 horas de tratamiento prácticamente arrojaría el mismo
resultado, ya que no se observan cambios en el halo después de 24 horas.
Por lo tanto utilizaremos la concentración de coca de 1500 µg/20 µl y tiempo de
tratamiento de 24 horas para probar la hipótesis de que es equivalente al tratamiento con
clorhexidina al 0.12 %. A continuación se presenta en las siguientes tablas el diámetro de
halo obtenido con extracto acuoso de coca versus clorhexidina al 0.12 % sobre
staphylococus aureus, así como sobre Streptococcus Mutans, medido después de 24 horas
de aplicación.
Tabla 5: Tamaño del halo obtenido (mm) al aplicar extracto de coca y clorhexidina
sobre staphylococus aureus, medido después de 24 horas
Diametro del halo obtenido (mm) aplicando los siguientes tratamientos
Cultivo Nº Extracto acuoso de coca, 1500 µg/20µL
Clorhexidina al 0.12 %
1 17 23 2 20 25 3 20 15 4 16 20 5 15 17 6 14 20 7 16 15 8 15 17 9 15 15 10 15 20 11 13 20 12 18 22 13 14 20 14 15 19 15 15 23 16 16 20 17 14 20 18 15 25 19 13 20 20 18 22
47
Tabla 6: Tamaño del halo obtenido (mm) al aplicar extracto de coca y clorhexidina
sobre streptococcus mutans, medido después de 24 horas
Diametro del halo obtenido (mm) aplicando los siguientes tratamientos
Cultivo Nº Extracto acuoso de coca, 1500 µg/20µL
Clorhexidina al 0.12 %
1 17 23 2 20 25 3 20 15 4 16 20 5 15 17 6 14 20 7 16 15 8 15 17 9 15 15 10 15 20 11 13 20 12 18 22 13 14 20 14 15 19 15 15 23 16 16 20 17 14 20 18 15 25 19 13 20 20 18 22
48
Gráfico 1: Histograma del diametro del halo de staphylococcus aureusaplicando clorhexidina al 0.12 %
diámetro del halo en mm
25,0022,5020,0017,5015,00
Frec
uenc
ia10
8
6
4
2
0
Media =19,90Desviación típica
=2,989N =20
La distribución de tamaños observada en el gráfico no es normal, observamos una
concentración de los diámetros entre 19 a 21 mm, los datos no son simétricos más bien
están concentrados al lado negativo de la distribución, es decir se tiene una gráfica con
asimetría negativa. Esto significa que la mayoría de tamaños alcanzados serán superiores a
19 mm en el caso de clorhexidina.
El gráfico 2 nos muestra la distribución de tamaños del halo en el caso de utilizar un
extracto de coca sobre staphylococus aureus
49
diametro del halo, mm22,0020,0018,0016,0014,0012,00
Frec
uenc
ia
10
8
6
4
2
0
Histograma
Media =15,70Desviación típica
=2,003N =20
Gráfico 2: histograma del diámetro del halo de staphylococus aureus aplicando extracto de coca
Nuevamente se observa que la distribución de tamaños difiere de la normal, observándose
que la mayoría de los diámetros se concentra en tamaños que oscilan entre 14 y 16 mm;
con una concentración de datos entre 13 y 17 mm, teniendo la distribución una asimetría
positiva.
La observación de los datos nos inducen a sostener que la eficacia de la clorhexina es
superior al del extracto de coca; para probarlo utilizaremos nuevamente la prueba
estadística no paramétrica U de Mann Whitney.
1. Ho : µdiametros clorhexidina = µdiámetros coca
2. HA: µdiámetros clorhexidina> µdiámetros coca
3. Nivel de significación α= 0.05
4. Estadística de prueba: U de Mann Whitney
5. Cálculos obtenidos por el SPSS 15
50
Tabla 7: salida SPSS de la prueba estadística para staphylococus aureus
DIAMET
RO U de Mann-Whitney 53.500W de Wilcoxon 263.500Z -4.029Sig. asintót. (bilateral) .000Sig. exacta [2*(Sig. unilateral)] .000(a)
a No corregidos para los empates. b Variable de agrupación: CULTIVO
Siendo la significación asintótica bilateral 0.00<0.05; concluimos con un nivel de
significancia del 0.05; que la media de los diámetro obtenidos con clorhexidina es mejor
que la obtenida con extracto de coca aplicado a stapylococus aureus; lo que confirma la
distribución de los datos.
En el diagrama de cajas que se presenta a continuación se puede confirmar esta conclusión.
CULTIVOCOCACLORHEX
DIA
MET
RO
24,00
22,00
20,00
18,00
16,00
14,00
12,00
22
23
Gráfico 3: diagrama de cajas de los diámetros del halo para staphylococcus aureus
La mediana del halo para clorhexidina es de 20mm y para coca es de 15 mm; con
clorhexidina el 50 % de los datos oscila entre 18 y 22 mm y en el caso de coca los datos
51
están entre 14 y 17 mm. Nuevamente se puede confirmar la ganancia en eficacia de la
clorhexidina, pero también se debe percibir la eficacia como tratamiento aunque en menor
cuantía del extracto de coca.
En el caso del tratamiento sobre streptococcus mutans, los datos que se presentan a
continuación comparan la eficacia entre el tratamiento con clorhexidina al 0.12 % y
extracto de coca de 1500 µg/20 µl, por medición del halo en mm, donde un tamaño mayor
del halo representa mejor eficacia de tratamiento. Los datos para 24 horas después de su
aplicación son los siguientes:
Tabla 8: Tamaño del halo obtenido (mm) al aplicar extracto de coca y clorhexidina sobre streptococcus mutans, medido después de 24 horas
Diametro del halo obtenido (mm)
aplicando los siguientes tratamientos Cultivo Nº Extracto acuoso de coca,
1500 µg/20µL Clorhexidina
al 0.12 % 1 17 23 2 20 25 3 20 15 4 16 20 5 15 17 6 14 20 7 16 15 8 15 17 9 15 15 10 15 20 11 13 20 12 18 22 13 14 20 14 15 19 15 15 23 16 16 20 17 14 20 18 15 25 19 13 20 20 18 22
52
Gráfico 4: histograma del diámetro del halo de streptococcus mutans
Aplicando extracto de coca
STRPCOC22,0021,0020,0019,0018,0017,0016,0015,0014,0013,0012,00
Frec
uenc
ia
10
8
6
4
2
0
STRPCOC
Media =15,70Desviación típica
=2,003N =20
Gráfico 5: histograma del diámetro del halo de streptococcus mutans
Aplicando clorhexidina
STRPCLR25,0022,5020,0017,5015,00
Frec
uenc
ia
10
8
6
4
2
0
STRPCLR
Media =19,90Desviación típica
=2,989N =20
53
En el gráfico de cajas podemos observar el comportamiento de los datos.
CULTIVOCOCACLORHEX
DIA
MET
RO
24
22
20
18
16
14
12
22
23
Gráfico 4: Diagrama de cajas del diámetro del halo para streptoccus mutans
Los histogramas obtenidos nos confirman la no normalidad de los datos, siendo más bien
asimétrico positivo en el caso de coca y streptococcus; y en el caso de clorhexidina nos
presenta una ligera asimetría negativa.
Nuevamente se observa que los diámetros obtenidos con clorhexina son superiores a los
obtenidos con el extracto de coca. Los tamaños para el intervalo entre el percentil 25 y el
percentil 75 para la clorhexina es de 18 a 22 mm, teniendo una mediana de 20 mm. Para la
coca oscila entre 14.5 a 16.5, con una mediana de 15 mm. De modo que nuevamente se
determina que que el tratamiento con clorhexina es superior al obtenido con extracto de
coca a esa concentración.
La prueba estadística no paramétrica U de Mann Whitney se proporciona en la siguiente
tabla:
54
Tabla 9: salida SPSS de la prueba estadística para streptococcus mutans
DIAMETROU de Mann-Whitney 53.500W de Wilcoxon 263.500Z -4.029Sig. asintót. (bilateral) .000
Sig. exacta [2*(Sig. unilateral)] .000(a)
Nuevamente la probabilidad extrema es 0.00 < 0.05; lo que nos indica que el diámetro
medio obtenido con clorhexidina es superior al obtenido con el extracto de coca.
Si consideramos que la eficacia de la clorhexidina es del 100%, siendo su mediana 20
mm; entonces la coca con una mediana de 15mm, tendría una eficacia de 75 % en el caso
de streptococcus mutans y en el caso de staphylococcus aureus la efectividad es también de
75 %.
Del análisis de los datos se concluye que la clorhexidina es más eficaz que la coca para el
tratamiento de 2 bacterias, pero que la coca representa el 75 % de la eficacia del
antibiótico.
CONCLUSIONES DE LA PRUEBA DE HIPÓTESIS
1. El aumento de la concentración de extracto de coca aumenta la eficacia del tratamiento;
por ejemplo se ha demostrado que el tratamiento con 1500 µg/20 µL; es mejor que con
1000 µg/20µL.
2. El tratamiento de staphylococcus aureus con clorhexidina al 0.12 % resulta más eficaz,
que con extracto de coca de 1500 µg/20µL(7.5%); donde el extracto de coca tiene una
eficacia del 75 % con respecto a la clorhexidina.
3. El tratamiento de streptococcus aureus con clorhexidina al 0.12 % es más eficaz que con
extracto de coca de 1500 µg/20µL(7.5%); pero el extracto de coca también tiene una
eficacia del 75 % con respecto a la clorhexidina.
55
DISCUSIÓN En la presente investigación se busco evaluar si el extracto de la hoja de Erythroxylum
lambran ejercía una eficacia antibacteriana en el tratamiento de staphylococcus aureus y
streptococcus mutans de la flora oralen comparación con la clorhexidina al 0.12%
normalmente utilizado como colutorio, lo cual quedó demostrado, la existencia de un
efecto de inhibición de desarrollo bacteriano del extracto estudiado, según los resultados
obtenidos; pero no demuestra superioridad para con los resultados obtenidos con la
clorexidina a además se encontró diferencias significativas (según los análisis estadísticos)
con respecto al tamaño de los halos de inhibición en las distintas concentraciones utilizadas
del extracto de Erythroxylum lambran (coca de Huanuco).
Los resultados indican que existe una accion antibacteriana del extracto de la hoja
Erythroxylum lambran, lo cual da sustento a otras investigaciones realizadas en
chacchadores de coca, como son los trabajos de investigación de Goicochea1, Ayala2,
Coronel4, Navarro5 y Pando6, quienes obtuvieron como resultados una disminución en la
prevalencía e incidencia de caries en sus grupos poblacionales que tenían el habito del
chacchado. Además en los resultados de Coronel4, Pando6 y Flores13 sobre la enfermedad
periodontal en personas que presentan el hábito de chacchado de hoja de coca, se observa
una tendencia de aumento en la prevalencia de enfermedad periodontal .
Existen estudios que tratan sobre las propiedades antibacterianas del extracto de
Erythroxylum lambran como en el caso de Castro y Chávez9, Mertz y Reyes11, por el
contrario si hay estudios sobre el mismo genero de la planta pero distinta especie como en
el caso de investigaciones de Can y Villanueva10, Solano12, Gálvez14 los cuales obtienen
resultados positivos del efecto antibacteriano del Erythroxylum Novogranatense var.
truxillense en distintos agentes microbianos como son respectivamente bacterias Gram (-)
y Gram (+), Stretococcus de la cavidad bucal, bacterias Gram (-) resistentes.
Aguilar y Encarnación8, Castro y Chávez9, Mertz y Reyes11 basaron sus estudios sobre el
efecto bacteriano sobre el mate de coca de Erythroxylum coca Lambran-Erythroxylum
Novogranatense var. truxillense sobre agentes microbianos como Mycobacterium
56
tuberculosis, uropatógenos Gram (-) multiresistentes, enterobacterias, obteniéndose
resultados positivos con respecto al efecto antibacteriano del mate de coca estudiado por
los autores antes mencionados. Por los tanto, se observa que los distintos estudios
observados se obtiene un efecto antibacteriano del Erythroxylum, ya sea que la extracción
de los principios activos totales hayan sido bajo el método de la extracción alcohólica (la
utilizada en el presente estudio) o la extracción acuosa (mate de coca), en distintos agentes
microbianos se obtuvieron resultados de un efecto antibacteriano del Erythroxylum (coca).
Pero en ningunos de las investigaciones mencionadas realizan comparaciónes con agentes
bactericidas (clorhexidina 0.12% u otros), como en el caso de la presente investigación.
En el caso de estudios microbiológico de índole oral solo se halló el realizado por
borrovic15, en dicho estudio solo se analizó la flora mixta salival para ello tomo la muestra
solo de origen salival.
borrovic15 utilizo un medio de cultivo enriquecido no selectivo como es el Agar Tripticasa
Soya, para tratar de desarrollar al máximo todas las bacterias presentes en la saliva, con el
fin de observar un efecto antibacteriano de la flora salival, a diferencia de la presente
investigación que se utilizó un medio de antibiograma como es el agar muller hinton con el
fin de observar un efecto eficas frente a las bacterias de staphylococcus aureus y
streptococcus mutans en comparación con la clorhexidina.
Con respecto a los resultados se observo coincidencia en la inhibición bacteriana, sin
embargo, en la presente investigación se encontró un efecto antibacteriano en las
concentraciones (1000 y 1500 μg) pero no una eficacia en la comparación con la
clorhexidina al 0.12%, a diferencia de borrovic15 que hallo efecto antibacteriano a partir de
las concentraciones de (250, 500, 1000 y 1500 μg) con un control negativo sobre la flora
mixta salival.
Cabe resaltar que a mayor sea la concentración utilizada del extracto de hoja de
Erythroxylum (coca), mayor será el halo de inhibición producida sobre las bacterias para
determinar el efecto antibacteriano de dicha planta, motivo que demuestra tal
investigación.
57
CONCLUSIONES • Existe un efecto antimicrobiano positivo a las concentraciones de 1000 y 1500 μg/
20 μl del extracto de Erythroxylum lambran en el tratamiento de staphylococcus
aureus y streptococcus mutans.
• A mayor concentración del extracto de Erythroxylum lambran mayor efecto
antimicrobiano.
• Las concentraciones 1000 y 1500 μg/ 20 μl utilizadas tienen una diferencia
estadísticamente significativa pero no superior con respecto al grupo control.
58
RECOMENDACIONES • Se recomienda continuar con las investigaciones utilizando microorganismos
patógenos de la microflora oral.
• Se recomienda realizar estudios con respecto a la composición de la hoja de coca
con el fin de determinar el o los compuestos químicos que causan la acción
antimicrobiana.
• Se recomienda hacer estudios sobre la posibilidad de una acción sinérgica entre el o
los compuestos antimicrobianos del Erythroxylum lambran y los distintos fármacos
antimicrobianos.
• Se recomienda realizar trabajos comparativos entre las distintas especies de hoja de
coca.
59
BIBLIOGRAFÍA
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cocas silvestres y cultivadas del país. Imprenta de la Universidad Nacional Mayor
de San Marcos. Revista RAYMONDIANA, Vol. V, pág. 101, diciembre. Lima,
1972
23) CABIESES, F.: Apuntes de medicina tradicional. A&B S.A. Lima, 1993.
24) CABIESES, F.: Aspectos etnológicos de la coca y la cocaína. Cocaína 1980-Actas
del Seminario Interamericano sobre Aspectos Médicos y Sociológicos de la Coca y
la Cocaína. Editorial F. R. Jeri. Lima, 1980.
25) DOMIC, Z.: Revisión crítica bibliográfica y consideraciones generales acerca del
masticado de coca. Cocaína 1985-Actas del Seminario Interamericano sobre
Aspectos Médicos de la Coca y la Cocaína. Editorial F. R. Jeri. Lima, 1985.
26) ZAPATA O., V.: El problema de la masticación de la coca en el Perú. Boletín
sobre estupefacientes, Vol. IV N°2, abril-junio. Naciones Unidas. New York, 1952.
27) HAMER, J. E. and VILLEGAS, L. O.: The effect of coca leaf chewing on de
buccal mucosa of Aymara and Quechua Indians in Bolivia. Oral Surg, August
28(2): 287-295. 1969.
28) BERNAL, J.: Odontoestomatología y Precancerosis oral. Tesis de Bachiller
UNMSM. Lima, 1962.
29) BASCONES MARTÍNEZ A. Antisépticos en el tratamiento de la enfermedad
periodontal. Av Periodon Implantol. 2002; 14,3: 101-114.
30) MARISOL BETANCOURTH, Microorganismos inusuales en surcos y bolsas
periodontales. Colomb. Cali.mar Med. 2006; 37(1)
63
31) HERNÁN PÉREZ TORRES. Farmacología Y Terapéutica Odontológica.
Antisépticos Y Desinfectantes Odontológicos – Clorhexidina. Editorial Celsus
2005; Pág. 349.
32) BUCOXIDINA (clorhexidina 0.12%) – colutorio, gianfarma s.a.
33) VADEMECUN FARMACOLOGICO PERUANO. Clorhexidina, ediciones
médicas internacionales, 2004 pag. 523.
34) DRA. MILEYDI DE LA C. TORRES LÓPEZ, DR. MARCIAL DÍAZ
ÁLVAREZ, DRA. ALINA ACOSTA MORALES. La clorhexidina, bases
estructurales y aplicaciones en; la estomatología. Revista estomatologíca de México
2008.
35) JOSE LIÉBANA UREÑA. Microbiología Oral. Mc Graw Hill – Interamericana
De España 1995. Cáp. 29. Pág.393.
36) MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía
Práctica”. Editorial Médica Panamericana 2009; Pág. 347 - 377.
37) GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE,
PhD., Microbiología medica de jawets, melnick y adelberg. Editorial el manual
moderno2005, Cáp. 14 – 15.
38) PATRICK R. MURRAY, PhD; KEN S. ROSENTHAL, PhD; GEORGE S.
KOBAYASHI, PhD; MICHAEL A. PFALLER, MD., Microbiología Medica,
Cuarta Edición en Español 2002. España
39) ELLEPOLA AN, SAMARANAYAKE LP. Adjunctive use of chlorhexidine in
oral candidoses: a review. Oral Dis 2001 Jan 7
64
40) TRIPATHI. Farmacología Odontología “Fundamentos”. Clorhexidina. Editorial.
Medica Panamericana 2009; Pág. 317, 487, 489.
41) ENACO. Empresa Nacional De La Coca S.A 2011.
42) LUIS MISSOURI USA.: Océano Mosby. MMIV Editorial Océano, milanesat 21 –
23.
43) WALPOLE, MYERS, Probabilidad y estadística, Mexico 1992, cuarta edición,
editorial Mc Graw Hill
44) DANIEL, Bioestadística, Mexico 2004, cuarta edición, Editorial Limusa S.A.
65
ANEXOS
66
ANEXO Nº1
PRINCIPALES ESPECIES ERYTHROXYLUM EN EL PERÚ
REINO : Vegetal DIVISION : Discífloras SUBDIVISION : Displotemonas CLASE : Dicotiledóneas ORDEN : Gerianales FAMILIA : Erythroxylaceae GENERO : Erythroxylum ESPECIE : Erythroxylum coca Lambran (Huanuco) Erythroxylum Novogranatense Var. Truxillense (trijillo)
67
ANEXO Nº2
ERYTHROXYLUM COCA LAMBRAN (HUANUQUEÑA)
68
ANEXO Nº3
ERYTHROXYLUM NOVOGRANATENSE VAR. TRUXILLENSE (TRUJILLO)
69
ANEXO Nº4
PRINCIPAL COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA HOJA DE COCA HUMEDAD 6.5 CALORÍAS 305 cal % PROTEÍNAS 12.99 g % CARBOHIDRATOS 46.2 g % GRASAS 5 g %
VITAMINAS VITAMINA A 11000 UI VITAMINA C 1.46 mg % VITAMINA E 43.50 UI VITAMINA B12 1.05 mg % RIBOFLAVINA 1.90 mg % NIACINA 1.29 mg % ÁCIDO PANTOTENICO 0.6684 mg % PIRIDOXINA 0.503 mg % TIAMINA 0.35 mg % BIOTINA 0.0863 mg %
MINERALES FÓSFORO 911.00 mg % BARIO 4.67 mg % MAGNESIO 213.00 mg % CINC 2.70 mg % FIERRO 45.80 mg % POTASIO 2.02 mg % SODIO 40.60 mg % CALCIO 1.54 mg % ALUMINIO 39.50 mg % COBRE 1.21 mg % ESTRONCIO 9.71 mg % CROMO 0.359 mg % MANGANESO 6.65 mg % YODO 5.0 mg % BORO 5.35 mg %
ALCALOIDES TOTALES 0.25 % A 2.25 % COCAÍNA TROPOCAINA BENZOILECGONINA ALFA-TRUXILLENSE CINNAMOILCOCAINA BETA-TRUXILLENSE BENZOILTROPINA HYGROLINA CUSCOHIGRINA METILCOLINA DIHIDROXITROPINA METILECGONIDINA HIGRINA NICOTINA
OTROS TANINOS SAPONINAS FLAVONOIDES ACEITES ESENCIALES FENOLES GLICOSIDOS
70
ANEXO Nº5
COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LAS HOJAS DE COCA (HUANUCO)
CONTENIDO EN 100 gr.
71
ANEXO Nº6
Alcaloides Naturales de la Hoja de Coca Cocaína Es el éter metílico de la benzoilegnonina, tiene propiedades anestésicas y
analgésicas. Egnonina Es un derivado carboxilado de la atropina, tiene propiedades de metabolizar
grasas, glúcidos y carbohidratos. Adelgaza la sangre. Atropina. O escopolamina
es anestésico que produce sequedad en el árbol respiratorio.Pectina. Es absorbente y antidiarreico, junto a la Vitamina E, regula la producción de melanina para la piel.
Pectina Es absorbente y antidiarreico, junto a la Vitamina E, regula la producción de melanina para la piel
Papaína Esta proteasa, que en mayor proporción contiene la papaya, es muy parecida a la catepsina animal, es una especie de fermento que acelera la digestión.
Higrina Excita las glándulas salivares cuando hay deficiencia de oxígeno en el ambiente
Globulina Es un cardiotónico que regula la carencia de oxígeno en el ambiente, mejorando la circulación sanguínea. Evita el sorojche (mal de altura)
Piridina Acelera la formación y funcionamiento del cerebro, aumenta la irrigación sanguínea a la hipófisis y las glándulas, traduciéndose en una mejoría del cuerpo en general
Quinolina Evita la formación de la caries dental junto al fósforo y al calcio. Conina Es un anestésico poderoso. Cocamina Es un analgésico que junto a la anterior, ayuda a aumentar las propiedades
anestésicas y analgésicas de la cocaína natural. Benzoína Acelera la formación de células musculares y evita la putrefacción de
alimentos, de ahí sus propiedades terapéuticas para gastritis y úlceras. Reserpina Regula la presión arterial en hipo e hipertensión y ayuda a la formación de
células óseas. Inulina Refresca y mejora el funcionamiento del hígado, la secreción de la bilis y su
acumulación a la vesícula. Es diurético, Es un polisacárido, muy parecido a las vitaminas B-12, que produce aumento de células de la sangre.
Estos 14 alcaloides, los aminoácidos que contienen, los ácidos y las vitaminas A, B1, C y E, la tiamina, niacina y riboflavina, la convierten en la planta más completa del universo en Nitrógeno No Proteico, que es el que elimina las toxinas y patologías del cuerpo, obteniendo combinaciones óptimas con frutas y plantas medicinales
72
ANEXO Nº7
Materiales para el proceso de maceración alcohólica de la hoja de coca Erythroxylum Coca Lambran (Huanuqueña)
Botella de vidrio transparente alcohol rectificado al 80º
Papel aluminio para forrar la botella de vidrio
Hoja de coca huanuqueña
73
ANEXO Nº8
Procesamiento de filtrado y evaporación en horno al vacio de extracto alcoholico de hoja de coca
Laboratorio de biotecnología de la UDH
74
ANEXO Nº9
Dilución y preparación de las concentraciones del extracto de hoja de coca de pasta sólida
75
ANEXO Nº10
Impregnado de la solución de extractote hoja de coca con la s concentraciones en los discos de papel filtro
76
ANEXO Nº11
Los discos de sensibilidad
77
Anexo nº12
Discos de sensibilidad insertados en los agares Muller Hinton ya sembrados con las bacterias en cultivo y verificación de la formación de halos
78
ANEXO Nº13
Lecturas de las láminas al microscopio
79
80
ANEXO Nº14
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
ACTIVIDADES
Elaboración del anteproyecto de investigación.
Elaboración del proyecto de investigación
Aprobación del proyecto de investigación
Ejecución del proyecto de investigación
Análisis e interpretación datos (estadísticos, tablas y gráficos).
Presentación del informe final.
Sustentación de la tesis
Setiembre 2010
Octubre 2010
Noviembre 2010
Diciembre 2010
Enero 2011
Febrero 2011
Marzo 2011
Abril 2011
Mayo 2011
Junio 2011
X x X X
x x x
x
x
x
x x
x
81
1.‐ FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
2.‐ OBJETIVOS 3.‐ JUSTIFICACIÓN 4.‐ HIPÓTESIS 5.‐VARIABLES
GENERAL ‐ ¿Cuál es la eficacia antibacteriana in vitro del extracto de la hoja de coca en comparación con la clorhexidina 0.12 % en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans?
GENERAL ‐ Determinar eficacia antibacteriano in Vitro del extracto de la hoja de coca en comparación con la clorhexidina al 0.12 % en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans
Aclarar las incógnitas sobre el beneficio de dicha planta. Con los resultados positivos que se obtengan de la existencia de la eficacia antibacteriana del extracto alcohólico de la hoja de coca, se podrá comparar con otro agente bactericida efectivo que es la clorhexidina y encaminar una planificación para el tratamiento, tanto preventivo como interceptivo, de enfermedades orales de origen infeccioso con el uso de extractos de la hoja de coca o con los componentes exactos de la planta que causen dicho efecto antibacteriano.
Hipótesis de Investigación La efectividad antibacteriana in Vitro del extracto de la hoja coca es mayor que la efectividad de la clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de Staphylococos Aureus y estreptococos mutans.
VARIABLE INDEPENDIENTE (Vi) Concentración del extracto alcohólico de la hoja de coca y clorhexidina 0.12%. INDICADORES ESCALA CATEGORIA250µg/ 20µl. Numérica De Razón
500µg/ 20µl. Numérica De Razón
1000µg/ 20µl. Numérica De Razón
1500µg/ 20µl. Numérica De Razón
0.12% Numérica De Razón
ESPECÍFICOS ‐ ¿Será el extracto de la hoja de coca un eficaz antibacteriano in vitro frente a staphylococcus aureus y streptococcus mutans? ‐ ¿Habrá diferencia entre la eficacia antibacteriana in Vitro de la clorhexidina 0.12% en comparación con extracto de la hoja de coca frente a staphylococcus aureus y streptococcus mutans?
ESPECÍFICOS ‐ Identificar la eficacia del extracto de la hoja de coca como antibacteriano in vitro en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans. ‐ Evaluar la eficacia antibacteriano in vitro entre la clorhexidina 0.12% en comparación con el extracto de la hoja de coca en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.
Hipótesis NulaLa efectividad antibacteriana in Vitro del extracto de la hoja coca a las concentraciones de 250, 500, 1000, 1500ug / 20ul, no es mayor que la efectividad de la clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans. Hipótesis Alterna La efectividad antibacteriana in Vitro del extracto de la hoja coca a las concentraciones de 250, 500, 1000, 1500ug / 20ul, es igual que la efectividad de la clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.
VARIABLE DEPENDIENTE (Vd) Eficacia antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de coca. INDICADORES ESCALA CATEGORIA
8 mm. resistencia
11 mm. sensible
Numérica
De Razón