Universidad de CaraboboFacultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Medicina“Dr. Witremundo Torrealba"

Departamento de Fisiología y Bioquímica

Tema 3

Técnicas en BioquímicaElectroforesis

Br. Pérez José Br. Pérez EleannyBr. Pérez Ana

Marzo, 2012

Objetivos Específicos

Analizar los fundamentos teóricos de la electroforesis y su utilidad.

ContenidoMovimiento iónico en un campo eléctrico.Proceso electroforético.Cámara electroforética.Materiales de soporte.Utilidad de cada una de ella:

Electroforesis en geles de acrilamida.Electroforesis en geles de acrilamida SDS.Electroforesis bidimensional.Electroforesis en geles de agarosa.

Es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico

Electroforesis

Desventajas

Afecta la estructura de las proteínas por lo tanto, también afecta a la función de la misma.

Ventajas

Separación, visualización y cuantificación del numero de proteínas de una solución.

Movimiento iónico en un campo electromagnético.

http://www.micruxfluidic.com/es/tecnologia.html

Las moléculas de soluto con carga neta positiva se desplazan hacia el cátodo y las moléculas con carga neta negativa se desplazan hacia el ánodo.

La movilidad depende de la carga de la partícula que, a su vez, depende del pH del medio en el que se encuentre. Por esta razón es necesario indicar el electrolito o el pH utilizado para determinar la movilidad.

La movilidad μ expresada en cm2 por Volt-s de una molécula en un campo eléctrico, viene dada por la velocidad de emigración V expresada en cm/s, respecto de la fuerza del campo E, expresada en voltios/cm.

Movimiento iónico en un campo electromagnético.

Proceso electroforético

En la electroforesis libre una disolución tamponada de la mezcla de proteínas se coloca en una célula de observación en forma de U mayúscula, depositando una capa de tampón (buffer) puro sobre la disolución de proteínas.

Unidades Horizontales:

Unidades Horizontales:

Unidades Horizontales:

Cámaras electroforéticas.

Tipos de electroforesis

Es aquella en la cual las partículas se mueven de forma libre en el medio en que se encuentran dispersas.

Electroforesis de frente móvil

La muestra esta obligada a desplazarse sobre un soporte

solido tal como el papel o ciertos geles.

ELECTROFORESIS DE ZONA

¿Qué se necesita para realizar

una electroforesis de zona?

FACTORES QUE EFECTAN LA

ELECTROFORESIS

CARGA NETA

TAMAÑO Y FORMA

POTENCIAL DEL CAMPO ELÈCTRICO

MECANISMOS DE SOPORTE

NO RESTRICTIVOS

PAPEL

• Separación de sustancia de bajo peso molecular

ACETATO CELULOSA

• Se usa en análisis biológicos

• Débil resolución

AGARASO

• Es un polisacárido

• Se usa para la separación de ácidos nucleicos

ELECTROFORESIS CON PAPEL

ELECTROFORESIS CON

AGAROSA

RESTRICTIVOS

GELES DE ALMIDÒN

• Proviene de diversas fuentes naturales

POLIACRILAMIDA

• El mas usado en la electroforesis

• Son geles completamente inertes, estables y transparentes

ELECTROFORESIS DE POLIACRILAMIDA

Electroforesis en geles de acrilamida

Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición

Proteínas presentes en el extracto

celular

Enzima RNA polimerasa de la bacteria E coli

• Son químicamente inertes.

• Son transparentes • Son estables en un amplio

intervalo de valores de pH, temperatura y fuerza

iónica• Son resistentes a los

agentes desnaturalizantes.

• Pueden prepararse con tamaños de poro muy

variados.

Electroforesis en geles de acrilamida SDS

Compuesto de gran carga negativa.

Utilizado para estimar la pureza y la masa molecular.

Se une a las proteínas en una cantidad proporcional a la masa molecular.

Confiere a todas las proteínas un cociente Carga/Masa similar.

Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición

SDS - PAGE

Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición

• Separa a las proteínas casi exclusivamente en función de su masa molecular

Electroforesis bidimensional

Es la combinación secuencial del enfoque isoeléctrico y la electroforesis en gel con SDS.

SDS - PAGE

Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición

Electroforesis en geles de Agarosa

Los geles se comportan

como un tamiz molecular y

permiten separar

moléculas cargadas en

función de su tamaño y forma.

Resumen Los procedimientos de fraccionamiento se usan

para purificar las proteínas sobre la base de sus solubilidades, cargas, tamaños y especificidades de unión.

La electroforesis separa las moléculas según su tamaño y su carga.

La SDS-PAGE las separa principalmente por su tamaño.

La electroforesis en gel con SDS y el Enfoque Isoeléctrico se pueden utilizar por separado o combinados para obtener una mayor resolución.

La electroforesis bidimensional (2D) puede separar cientos de proteínas.

Bibliografía http://www.uco.es/organiza/departamentos/

bioquimica-biol-GELES%20AGAROSA.pdfhttp://idibam.blogspot.com/2008/09/

electroforesis-en-gel-de-agarosa.htmlLehninger. Principios de bioquímica Cuarta

Edición.Harold A .Harper .Manual de química

Fisiológica Sexta Edición.Biochemistry (3rd Edition) by Christopher K.

Mathews Kensal E. van Holde Kevin G. Ahern

Las grandes obras no son hechas con

la fuerza, sino con la perseverancia.