UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA … · 2017. 4. 7. · Universidad Central del...
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERAS Trabajo de Grado presentado como requisito para optar por el Título de Médico Veterinario Zootecnista AUTORA PRISCILA ESTEFANÍA BALSECA MUÑOZ Quito, Marzo 2017
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
DETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERAS
Trabajo de Grado presentado como requisito para optar por el Tiacutetulo de
Meacutedico Veterinario Zootecnista
AUTORA
PRISCILA ESTEFANIacuteA BALSECA MUNtildeOZ
Quito Marzo 2017
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
DETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERAS
Informe final de investigacioacuten presentado como requisito para optar por el
Tiacutetulo de Meacutedico Veterinario Zootecnista
AUTORA
PRISCILA ESTEFANIacuteA BALSECA MUNtildeOZ
TUTOR
Dr JORGE MOSQUERA ANDRADE
Quito Marzo 2017
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ldquoLa vida es una serie de colisiones con el futuro no es una suma de lo que
hemos sido si no de lo que anhelamos serrdquo
Joseacute Ortega y Gasset
iii
DEDICATORIA
A mi padre por haberme forjado como la persona que soy en la actualidad
por motivarme constantemente para alcanzar mis anhelos y por ser parte de
este suentildeo
A mi madre por apoyarme desde el inicio hasta el final
A mi esposo por ayudarme a cumplir mis metas y ser apoyo incondicional
Priscila
iv
AGRADECIMIENTOS
A mi familia por sus palabras de aliento apoyo incondicional y el gran
esfuerzo que realizaron como familia lo que permitioacute cumplir este anhelado
suentildeo
A mi tutor Dr Jorge Mosquera por su paciencia y sabiduriacutea que permitioacute la
realizacioacuten de este estudio
A Felipe Brown duentildeo de la empresa James Brown Pharm por haberme
dado la oportunidad que se realice mi tesis en su prestigiosa empresa
Al Dr Juan Carlos Acosta por toda la ayuda recibida en la parte
experimental y a la Hacienda San Agustiacuten por permitirme realizar el estudio
en sus animales de gran valor
Al Ing Joseacute Vicente Veloz por toda su ayuda recibida en la parte
experimental
A mi compantildeera Mariacutea Beleacuten Caiza por toda su ayuda brindada y por
ayudarme a entrar a esta prestigiosa empresa
A mis amigos por toda su ayuda brindada sin su ayuda no hubiese podido
realizarlo
A la facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia por permitir superarme y
ser parte de ella
v
copy DERECHOS DE AUTOR
Yo Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz en calidad de autor del trabajo de
investigacioacuten ldquoDeterminacioacuten cuantitativa de residuos en leche de
eprinomectina usado como mosquicida en vacas lecherasrdquo autorizo a la
Universidad Central del Ecuador hacer uso de todos los contenidos que me
pertenecen o parte de los que contienen esta obra con fines estrictamente
acadeacutemicos o de investigacioacuten
Los derechos que como autor me corresponden con excepcioacuten de la
presente autorizacioacuten seguiraacuten vigentes a mi favor de conformidad con lo
establecido en los artiacuteculos 5 6 8 19 y demaacutes pertinentes de la Ley de
Propiedad Intelectual y su Reglamento
Asiacute mismo autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice la
digitalizacioacuten y publicacioacuten de este trabajo de investigacioacuten en el repositorio
virtual de conformidad a lo dispuesto en el Art 144 de la Ley Orgaacutenica de
Educacioacuten Superior
En la ciudad de Quito 2017
Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Cd Ndeg 172363611-2
vi
INFORME DEL TUTOR
En mi caraacutecter de Tutor del Trabajo de Investigacioacuten presentado por la
sentildeorita PRISCILA ESTEFANIacuteA BALSECA MUNtildeOZ para optar por el Tiacutetulo
o Grado de Meacutedico Veterinario y Zootecnista cuyo tiacutetulo es
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
considero que dicho trabajo reuacutene los requisitos y meacuteritos suficientes para
ser sometido a la presentacioacuten puacuteblica y evaluacioacuten por parte del jurado
examinador que se designe
Quito Marzo 2017
Dr Jorge Mosquera
CI 170260919-7
vii
CALIFICACIOacuteN DEL TRABAJO ESCRITO FINAL
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IacuteNDICE GENERAL
paacuteg
DEDICATORIAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiii
AGRADECIMIENTOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiv
copy DERECHOS DE AUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipv
INFORME DEL TUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipvi
IacuteNDICE GENERALhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipix
LISTA DE CUADROShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE GRAacuteFICOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxi
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxii
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxiii
INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
CAPIacuteTULOS
I Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
II Marco teoacutericohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Principales funciones de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Estructura dinaacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
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Farmacocineacutetica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Posologiacutea y viacutea de administracioacutenhelliphelliphelliphellip8
Tiempo de retirohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Toxicidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Composicioacuten y calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Importancia de la buena calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Liacutemite maacuteximo de residuoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Residuos de medicamentos en la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
Cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten HPLChelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
Liacutemite maacuteximo para la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
III Metodologiacutea y materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Caracteriacutesticas de la zona de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
Tipo de investigacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Factores en estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Sistema de muestreo de leche bovinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Caracteriacutesticas de las unidades de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
Procedimientoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip22
IV Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip23
V Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip30
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
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CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
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INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
Referencias
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
DETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERAS
Informe final de investigacioacuten presentado como requisito para optar por el
Tiacutetulo de Meacutedico Veterinario Zootecnista
AUTORA
PRISCILA ESTEFANIacuteA BALSECA MUNtildeOZ
TUTOR
Dr JORGE MOSQUERA ANDRADE
Quito Marzo 2017
ii
ldquoLa vida es una serie de colisiones con el futuro no es una suma de lo que
hemos sido si no de lo que anhelamos serrdquo
Joseacute Ortega y Gasset
iii
DEDICATORIA
A mi padre por haberme forjado como la persona que soy en la actualidad
por motivarme constantemente para alcanzar mis anhelos y por ser parte de
este suentildeo
A mi madre por apoyarme desde el inicio hasta el final
A mi esposo por ayudarme a cumplir mis metas y ser apoyo incondicional
Priscila
iv
AGRADECIMIENTOS
A mi familia por sus palabras de aliento apoyo incondicional y el gran
esfuerzo que realizaron como familia lo que permitioacute cumplir este anhelado
suentildeo
A mi tutor Dr Jorge Mosquera por su paciencia y sabiduriacutea que permitioacute la
realizacioacuten de este estudio
A Felipe Brown duentildeo de la empresa James Brown Pharm por haberme
dado la oportunidad que se realice mi tesis en su prestigiosa empresa
Al Dr Juan Carlos Acosta por toda la ayuda recibida en la parte
experimental y a la Hacienda San Agustiacuten por permitirme realizar el estudio
en sus animales de gran valor
Al Ing Joseacute Vicente Veloz por toda su ayuda recibida en la parte
experimental
A mi compantildeera Mariacutea Beleacuten Caiza por toda su ayuda brindada y por
ayudarme a entrar a esta prestigiosa empresa
A mis amigos por toda su ayuda brindada sin su ayuda no hubiese podido
realizarlo
A la facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia por permitir superarme y
ser parte de ella
v
copy DERECHOS DE AUTOR
Yo Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz en calidad de autor del trabajo de
investigacioacuten ldquoDeterminacioacuten cuantitativa de residuos en leche de
eprinomectina usado como mosquicida en vacas lecherasrdquo autorizo a la
Universidad Central del Ecuador hacer uso de todos los contenidos que me
pertenecen o parte de los que contienen esta obra con fines estrictamente
acadeacutemicos o de investigacioacuten
Los derechos que como autor me corresponden con excepcioacuten de la
presente autorizacioacuten seguiraacuten vigentes a mi favor de conformidad con lo
establecido en los artiacuteculos 5 6 8 19 y demaacutes pertinentes de la Ley de
Propiedad Intelectual y su Reglamento
Asiacute mismo autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice la
digitalizacioacuten y publicacioacuten de este trabajo de investigacioacuten en el repositorio
virtual de conformidad a lo dispuesto en el Art 144 de la Ley Orgaacutenica de
Educacioacuten Superior
En la ciudad de Quito 2017
Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Cd Ndeg 172363611-2
vi
INFORME DEL TUTOR
En mi caraacutecter de Tutor del Trabajo de Investigacioacuten presentado por la
sentildeorita PRISCILA ESTEFANIacuteA BALSECA MUNtildeOZ para optar por el Tiacutetulo
o Grado de Meacutedico Veterinario y Zootecnista cuyo tiacutetulo es
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
considero que dicho trabajo reuacutene los requisitos y meacuteritos suficientes para
ser sometido a la presentacioacuten puacuteblica y evaluacioacuten por parte del jurado
examinador que se designe
Quito Marzo 2017
Dr Jorge Mosquera
CI 170260919-7
vii
CALIFICACIOacuteN DEL TRABAJO ESCRITO FINAL
viii
ix
x
IacuteNDICE GENERAL
paacuteg
DEDICATORIAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiii
AGRADECIMIENTOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiv
copy DERECHOS DE AUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipv
INFORME DEL TUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipvi
IacuteNDICE GENERALhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipix
LISTA DE CUADROShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE GRAacuteFICOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxi
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxii
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxiii
INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
CAPIacuteTULOS
I Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
II Marco teoacutericohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Principales funciones de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Estructura dinaacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
xi
Farmacocineacutetica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Posologiacutea y viacutea de administracioacutenhelliphelliphelliphellip8
Tiempo de retirohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Toxicidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Composicioacuten y calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Importancia de la buena calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Liacutemite maacuteximo de residuoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Residuos de medicamentos en la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
Cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten HPLChelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
Liacutemite maacuteximo para la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
III Metodologiacutea y materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Caracteriacutesticas de la zona de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
Tipo de investigacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Factores en estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Sistema de muestreo de leche bovinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Caracteriacutesticas de las unidades de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
Procedimientoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip22
IV Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip23
V Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip30
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
ii
ldquoLa vida es una serie de colisiones con el futuro no es una suma de lo que
hemos sido si no de lo que anhelamos serrdquo
Joseacute Ortega y Gasset
iii
DEDICATORIA
A mi padre por haberme forjado como la persona que soy en la actualidad
por motivarme constantemente para alcanzar mis anhelos y por ser parte de
este suentildeo
A mi madre por apoyarme desde el inicio hasta el final
A mi esposo por ayudarme a cumplir mis metas y ser apoyo incondicional
Priscila
iv
AGRADECIMIENTOS
A mi familia por sus palabras de aliento apoyo incondicional y el gran
esfuerzo que realizaron como familia lo que permitioacute cumplir este anhelado
suentildeo
A mi tutor Dr Jorge Mosquera por su paciencia y sabiduriacutea que permitioacute la
realizacioacuten de este estudio
A Felipe Brown duentildeo de la empresa James Brown Pharm por haberme
dado la oportunidad que se realice mi tesis en su prestigiosa empresa
Al Dr Juan Carlos Acosta por toda la ayuda recibida en la parte
experimental y a la Hacienda San Agustiacuten por permitirme realizar el estudio
en sus animales de gran valor
Al Ing Joseacute Vicente Veloz por toda su ayuda recibida en la parte
experimental
A mi compantildeera Mariacutea Beleacuten Caiza por toda su ayuda brindada y por
ayudarme a entrar a esta prestigiosa empresa
A mis amigos por toda su ayuda brindada sin su ayuda no hubiese podido
realizarlo
A la facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia por permitir superarme y
ser parte de ella
v
copy DERECHOS DE AUTOR
Yo Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz en calidad de autor del trabajo de
investigacioacuten ldquoDeterminacioacuten cuantitativa de residuos en leche de
eprinomectina usado como mosquicida en vacas lecherasrdquo autorizo a la
Universidad Central del Ecuador hacer uso de todos los contenidos que me
pertenecen o parte de los que contienen esta obra con fines estrictamente
acadeacutemicos o de investigacioacuten
Los derechos que como autor me corresponden con excepcioacuten de la
presente autorizacioacuten seguiraacuten vigentes a mi favor de conformidad con lo
establecido en los artiacuteculos 5 6 8 19 y demaacutes pertinentes de la Ley de
Propiedad Intelectual y su Reglamento
Asiacute mismo autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice la
digitalizacioacuten y publicacioacuten de este trabajo de investigacioacuten en el repositorio
virtual de conformidad a lo dispuesto en el Art 144 de la Ley Orgaacutenica de
Educacioacuten Superior
En la ciudad de Quito 2017
Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Cd Ndeg 172363611-2
vi
INFORME DEL TUTOR
En mi caraacutecter de Tutor del Trabajo de Investigacioacuten presentado por la
sentildeorita PRISCILA ESTEFANIacuteA BALSECA MUNtildeOZ para optar por el Tiacutetulo
o Grado de Meacutedico Veterinario y Zootecnista cuyo tiacutetulo es
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
considero que dicho trabajo reuacutene los requisitos y meacuteritos suficientes para
ser sometido a la presentacioacuten puacuteblica y evaluacioacuten por parte del jurado
examinador que se designe
Quito Marzo 2017
Dr Jorge Mosquera
CI 170260919-7
vii
CALIFICACIOacuteN DEL TRABAJO ESCRITO FINAL
viii
ix
x
IacuteNDICE GENERAL
paacuteg
DEDICATORIAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiii
AGRADECIMIENTOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiv
copy DERECHOS DE AUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipv
INFORME DEL TUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipvi
IacuteNDICE GENERALhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipix
LISTA DE CUADROShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE GRAacuteFICOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxi
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxii
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxiii
INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
CAPIacuteTULOS
I Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
II Marco teoacutericohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Principales funciones de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Estructura dinaacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
xi
Farmacocineacutetica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Posologiacutea y viacutea de administracioacutenhelliphelliphelliphellip8
Tiempo de retirohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Toxicidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Composicioacuten y calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Importancia de la buena calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Liacutemite maacuteximo de residuoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Residuos de medicamentos en la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
Cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten HPLChelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
Liacutemite maacuteximo para la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
III Metodologiacutea y materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Caracteriacutesticas de la zona de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
Tipo de investigacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Factores en estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Sistema de muestreo de leche bovinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Caracteriacutesticas de las unidades de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
Procedimientoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip22
IV Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip23
V Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip30
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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Tolerancia y Eficacia de una Solucioacuten Topical Externa sobre la base de
Eprinomectina (Eprimec Zero Pour On) en Bovinos naturalmente infestados
por Neacutematodos gastrointestinales en la Sierra Central Agrovetmarket animal
health Obtenido de Evaluacioacuten de tolerancia y eficacia de una solucioacuten
topical externa sobre la base de eprinomectina (Eprimec Zero Pour On) en
bovinos naturalmente infestados por Nemaacutetodos gastrointestinales en la
Sierra Central
httpwwwagrovetmarketcompublicpdfantiparasitarioEctickol20Pour2
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Sumano amp Ocampo (2006) Antiparasitarios En Sumano amp Ocampo
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Toriz C (2013) Antiparasitarios usados en medicina veterinaria y zootecnia
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lactating Chinese Holstein cows PubMed doi101016 jvetpar201008017
Zhang D Zhang K Gao J Liu J Shahzad M Han Z Li J (2015)
Anthelmintic efficacy plasma and milk kinetics of eprinomectin following
36
topical and subcutaneous administration to yaks (Bos grumniens) PubMed
doi101016 jexppara201502010
37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
iii
DEDICATORIA
A mi padre por haberme forjado como la persona que soy en la actualidad
por motivarme constantemente para alcanzar mis anhelos y por ser parte de
este suentildeo
A mi madre por apoyarme desde el inicio hasta el final
A mi esposo por ayudarme a cumplir mis metas y ser apoyo incondicional
Priscila
iv
AGRADECIMIENTOS
A mi familia por sus palabras de aliento apoyo incondicional y el gran
esfuerzo que realizaron como familia lo que permitioacute cumplir este anhelado
suentildeo
A mi tutor Dr Jorge Mosquera por su paciencia y sabiduriacutea que permitioacute la
realizacioacuten de este estudio
A Felipe Brown duentildeo de la empresa James Brown Pharm por haberme
dado la oportunidad que se realice mi tesis en su prestigiosa empresa
Al Dr Juan Carlos Acosta por toda la ayuda recibida en la parte
experimental y a la Hacienda San Agustiacuten por permitirme realizar el estudio
en sus animales de gran valor
Al Ing Joseacute Vicente Veloz por toda su ayuda recibida en la parte
experimental
A mi compantildeera Mariacutea Beleacuten Caiza por toda su ayuda brindada y por
ayudarme a entrar a esta prestigiosa empresa
A mis amigos por toda su ayuda brindada sin su ayuda no hubiese podido
realizarlo
A la facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia por permitir superarme y
ser parte de ella
v
copy DERECHOS DE AUTOR
Yo Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz en calidad de autor del trabajo de
investigacioacuten ldquoDeterminacioacuten cuantitativa de residuos en leche de
eprinomectina usado como mosquicida en vacas lecherasrdquo autorizo a la
Universidad Central del Ecuador hacer uso de todos los contenidos que me
pertenecen o parte de los que contienen esta obra con fines estrictamente
acadeacutemicos o de investigacioacuten
Los derechos que como autor me corresponden con excepcioacuten de la
presente autorizacioacuten seguiraacuten vigentes a mi favor de conformidad con lo
establecido en los artiacuteculos 5 6 8 19 y demaacutes pertinentes de la Ley de
Propiedad Intelectual y su Reglamento
Asiacute mismo autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice la
digitalizacioacuten y publicacioacuten de este trabajo de investigacioacuten en el repositorio
virtual de conformidad a lo dispuesto en el Art 144 de la Ley Orgaacutenica de
Educacioacuten Superior
En la ciudad de Quito 2017
Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Cd Ndeg 172363611-2
vi
INFORME DEL TUTOR
En mi caraacutecter de Tutor del Trabajo de Investigacioacuten presentado por la
sentildeorita PRISCILA ESTEFANIacuteA BALSECA MUNtildeOZ para optar por el Tiacutetulo
o Grado de Meacutedico Veterinario y Zootecnista cuyo tiacutetulo es
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
considero que dicho trabajo reuacutene los requisitos y meacuteritos suficientes para
ser sometido a la presentacioacuten puacuteblica y evaluacioacuten por parte del jurado
examinador que se designe
Quito Marzo 2017
Dr Jorge Mosquera
CI 170260919-7
vii
CALIFICACIOacuteN DEL TRABAJO ESCRITO FINAL
viii
ix
x
IacuteNDICE GENERAL
paacuteg
DEDICATORIAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiii
AGRADECIMIENTOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiv
copy DERECHOS DE AUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipv
INFORME DEL TUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipvi
IacuteNDICE GENERALhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipix
LISTA DE CUADROShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE GRAacuteFICOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxi
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxii
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxiii
INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
CAPIacuteTULOS
I Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
II Marco teoacutericohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Principales funciones de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Estructura dinaacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
xi
Farmacocineacutetica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Posologiacutea y viacutea de administracioacutenhelliphelliphelliphellip8
Tiempo de retirohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Toxicidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Composicioacuten y calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Importancia de la buena calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Liacutemite maacuteximo de residuoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Residuos de medicamentos en la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
Cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten HPLChelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
Liacutemite maacuteximo para la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
III Metodologiacutea y materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Caracteriacutesticas de la zona de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
Tipo de investigacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Factores en estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Sistema de muestreo de leche bovinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Caracteriacutesticas de las unidades de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
Procedimientoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip22
IV Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip23
V Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip30
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
iv
AGRADECIMIENTOS
A mi familia por sus palabras de aliento apoyo incondicional y el gran
esfuerzo que realizaron como familia lo que permitioacute cumplir este anhelado
suentildeo
A mi tutor Dr Jorge Mosquera por su paciencia y sabiduriacutea que permitioacute la
realizacioacuten de este estudio
A Felipe Brown duentildeo de la empresa James Brown Pharm por haberme
dado la oportunidad que se realice mi tesis en su prestigiosa empresa
Al Dr Juan Carlos Acosta por toda la ayuda recibida en la parte
experimental y a la Hacienda San Agustiacuten por permitirme realizar el estudio
en sus animales de gran valor
Al Ing Joseacute Vicente Veloz por toda su ayuda recibida en la parte
experimental
A mi compantildeera Mariacutea Beleacuten Caiza por toda su ayuda brindada y por
ayudarme a entrar a esta prestigiosa empresa
A mis amigos por toda su ayuda brindada sin su ayuda no hubiese podido
realizarlo
A la facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia por permitir superarme y
ser parte de ella
v
copy DERECHOS DE AUTOR
Yo Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz en calidad de autor del trabajo de
investigacioacuten ldquoDeterminacioacuten cuantitativa de residuos en leche de
eprinomectina usado como mosquicida en vacas lecherasrdquo autorizo a la
Universidad Central del Ecuador hacer uso de todos los contenidos que me
pertenecen o parte de los que contienen esta obra con fines estrictamente
acadeacutemicos o de investigacioacuten
Los derechos que como autor me corresponden con excepcioacuten de la
presente autorizacioacuten seguiraacuten vigentes a mi favor de conformidad con lo
establecido en los artiacuteculos 5 6 8 19 y demaacutes pertinentes de la Ley de
Propiedad Intelectual y su Reglamento
Asiacute mismo autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice la
digitalizacioacuten y publicacioacuten de este trabajo de investigacioacuten en el repositorio
virtual de conformidad a lo dispuesto en el Art 144 de la Ley Orgaacutenica de
Educacioacuten Superior
En la ciudad de Quito 2017
Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Cd Ndeg 172363611-2
vi
INFORME DEL TUTOR
En mi caraacutecter de Tutor del Trabajo de Investigacioacuten presentado por la
sentildeorita PRISCILA ESTEFANIacuteA BALSECA MUNtildeOZ para optar por el Tiacutetulo
o Grado de Meacutedico Veterinario y Zootecnista cuyo tiacutetulo es
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
considero que dicho trabajo reuacutene los requisitos y meacuteritos suficientes para
ser sometido a la presentacioacuten puacuteblica y evaluacioacuten por parte del jurado
examinador que se designe
Quito Marzo 2017
Dr Jorge Mosquera
CI 170260919-7
vii
CALIFICACIOacuteN DEL TRABAJO ESCRITO FINAL
viii
ix
x
IacuteNDICE GENERAL
paacuteg
DEDICATORIAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiii
AGRADECIMIENTOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiv
copy DERECHOS DE AUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipv
INFORME DEL TUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipvi
IacuteNDICE GENERALhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipix
LISTA DE CUADROShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE GRAacuteFICOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxi
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxii
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxiii
INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
CAPIacuteTULOS
I Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
II Marco teoacutericohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Principales funciones de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Estructura dinaacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
xi
Farmacocineacutetica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Posologiacutea y viacutea de administracioacutenhelliphelliphelliphellip8
Tiempo de retirohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Toxicidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Composicioacuten y calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Importancia de la buena calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Liacutemite maacuteximo de residuoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Residuos de medicamentos en la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
Cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten HPLChelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
Liacutemite maacuteximo para la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
III Metodologiacutea y materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Caracteriacutesticas de la zona de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
Tipo de investigacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Factores en estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Sistema de muestreo de leche bovinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Caracteriacutesticas de las unidades de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
Procedimientoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip22
IV Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip23
V Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip30
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
v
copy DERECHOS DE AUTOR
Yo Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz en calidad de autor del trabajo de
investigacioacuten ldquoDeterminacioacuten cuantitativa de residuos en leche de
eprinomectina usado como mosquicida en vacas lecherasrdquo autorizo a la
Universidad Central del Ecuador hacer uso de todos los contenidos que me
pertenecen o parte de los que contienen esta obra con fines estrictamente
acadeacutemicos o de investigacioacuten
Los derechos que como autor me corresponden con excepcioacuten de la
presente autorizacioacuten seguiraacuten vigentes a mi favor de conformidad con lo
establecido en los artiacuteculos 5 6 8 19 y demaacutes pertinentes de la Ley de
Propiedad Intelectual y su Reglamento
Asiacute mismo autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice la
digitalizacioacuten y publicacioacuten de este trabajo de investigacioacuten en el repositorio
virtual de conformidad a lo dispuesto en el Art 144 de la Ley Orgaacutenica de
Educacioacuten Superior
En la ciudad de Quito 2017
Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Cd Ndeg 172363611-2
vi
INFORME DEL TUTOR
En mi caraacutecter de Tutor del Trabajo de Investigacioacuten presentado por la
sentildeorita PRISCILA ESTEFANIacuteA BALSECA MUNtildeOZ para optar por el Tiacutetulo
o Grado de Meacutedico Veterinario y Zootecnista cuyo tiacutetulo es
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
considero que dicho trabajo reuacutene los requisitos y meacuteritos suficientes para
ser sometido a la presentacioacuten puacuteblica y evaluacioacuten por parte del jurado
examinador que se designe
Quito Marzo 2017
Dr Jorge Mosquera
CI 170260919-7
vii
CALIFICACIOacuteN DEL TRABAJO ESCRITO FINAL
viii
ix
x
IacuteNDICE GENERAL
paacuteg
DEDICATORIAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiii
AGRADECIMIENTOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiv
copy DERECHOS DE AUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipv
INFORME DEL TUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipvi
IacuteNDICE GENERALhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipix
LISTA DE CUADROShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE GRAacuteFICOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxi
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxii
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxiii
INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
CAPIacuteTULOS
I Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
II Marco teoacutericohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Principales funciones de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Estructura dinaacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
xi
Farmacocineacutetica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Posologiacutea y viacutea de administracioacutenhelliphelliphelliphellip8
Tiempo de retirohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Toxicidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Composicioacuten y calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Importancia de la buena calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Liacutemite maacuteximo de residuoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Residuos de medicamentos en la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
Cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten HPLChelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
Liacutemite maacuteximo para la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
III Metodologiacutea y materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Caracteriacutesticas de la zona de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
Tipo de investigacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Factores en estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Sistema de muestreo de leche bovinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Caracteriacutesticas de las unidades de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
Procedimientoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip22
IV Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip23
V Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip30
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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bovinos naturalmente infestados por Nemaacutetodos gastrointestinales en la
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36
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
vi
INFORME DEL TUTOR
En mi caraacutecter de Tutor del Trabajo de Investigacioacuten presentado por la
sentildeorita PRISCILA ESTEFANIacuteA BALSECA MUNtildeOZ para optar por el Tiacutetulo
o Grado de Meacutedico Veterinario y Zootecnista cuyo tiacutetulo es
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
considero que dicho trabajo reuacutene los requisitos y meacuteritos suficientes para
ser sometido a la presentacioacuten puacuteblica y evaluacioacuten por parte del jurado
examinador que se designe
Quito Marzo 2017
Dr Jorge Mosquera
CI 170260919-7
vii
CALIFICACIOacuteN DEL TRABAJO ESCRITO FINAL
viii
ix
x
IacuteNDICE GENERAL
paacuteg
DEDICATORIAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiii
AGRADECIMIENTOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiv
copy DERECHOS DE AUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipv
INFORME DEL TUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipvi
IacuteNDICE GENERALhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipix
LISTA DE CUADROShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE GRAacuteFICOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxi
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxii
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxiii
INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
CAPIacuteTULOS
I Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
II Marco teoacutericohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Principales funciones de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Estructura dinaacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
xi
Farmacocineacutetica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Posologiacutea y viacutea de administracioacutenhelliphelliphelliphellip8
Tiempo de retirohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Toxicidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Composicioacuten y calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Importancia de la buena calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Liacutemite maacuteximo de residuoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Residuos de medicamentos en la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
Cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten HPLChelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
Liacutemite maacuteximo para la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
III Metodologiacutea y materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Caracteriacutesticas de la zona de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
Tipo de investigacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Factores en estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Sistema de muestreo de leche bovinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Caracteriacutesticas de las unidades de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
Procedimientoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip22
IV Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip23
V Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip30
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
Referencias
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
vii
CALIFICACIOacuteN DEL TRABAJO ESCRITO FINAL
viii
ix
x
IacuteNDICE GENERAL
paacuteg
DEDICATORIAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiii
AGRADECIMIENTOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiv
copy DERECHOS DE AUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipv
INFORME DEL TUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipvi
IacuteNDICE GENERALhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipix
LISTA DE CUADROShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE GRAacuteFICOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxi
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxii
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxiii
INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
CAPIacuteTULOS
I Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
II Marco teoacutericohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Principales funciones de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Estructura dinaacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
xi
Farmacocineacutetica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Posologiacutea y viacutea de administracioacutenhelliphelliphelliphellip8
Tiempo de retirohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Toxicidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Composicioacuten y calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Importancia de la buena calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Liacutemite maacuteximo de residuoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Residuos de medicamentos en la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
Cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten HPLChelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
Liacutemite maacuteximo para la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
III Metodologiacutea y materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Caracteriacutesticas de la zona de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
Tipo de investigacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Factores en estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Sistema de muestreo de leche bovinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Caracteriacutesticas de las unidades de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
Procedimientoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip22
IV Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip23
V Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip30
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
viii
ix
x
IacuteNDICE GENERAL
paacuteg
DEDICATORIAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiii
AGRADECIMIENTOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiv
copy DERECHOS DE AUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipv
INFORME DEL TUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipvi
IacuteNDICE GENERALhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipix
LISTA DE CUADROShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE GRAacuteFICOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxi
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxii
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxiii
INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
CAPIacuteTULOS
I Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
II Marco teoacutericohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Principales funciones de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Estructura dinaacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
xi
Farmacocineacutetica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Posologiacutea y viacutea de administracioacutenhelliphelliphelliphellip8
Tiempo de retirohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Toxicidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Composicioacuten y calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Importancia de la buena calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Liacutemite maacuteximo de residuoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Residuos de medicamentos en la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
Cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten HPLChelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
Liacutemite maacuteximo para la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
III Metodologiacutea y materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Caracteriacutesticas de la zona de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
Tipo de investigacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Factores en estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Sistema de muestreo de leche bovinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Caracteriacutesticas de las unidades de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
Procedimientoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip22
IV Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip23
V Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip30
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
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CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
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INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
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CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
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Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
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Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
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Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
ix
x
IacuteNDICE GENERAL
paacuteg
DEDICATORIAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiii
AGRADECIMIENTOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiv
copy DERECHOS DE AUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipv
INFORME DEL TUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipvi
IacuteNDICE GENERALhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipix
LISTA DE CUADROShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE GRAacuteFICOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxi
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxii
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxiii
INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
CAPIacuteTULOS
I Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
II Marco teoacutericohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Principales funciones de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Estructura dinaacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
xi
Farmacocineacutetica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Posologiacutea y viacutea de administracioacutenhelliphelliphelliphellip8
Tiempo de retirohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Toxicidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Composicioacuten y calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Importancia de la buena calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Liacutemite maacuteximo de residuoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Residuos de medicamentos en la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
Cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten HPLChelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
Liacutemite maacuteximo para la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
III Metodologiacutea y materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Caracteriacutesticas de la zona de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
Tipo de investigacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Factores en estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Sistema de muestreo de leche bovinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Caracteriacutesticas de las unidades de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
Procedimientoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip22
IV Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip23
V Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip30
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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36
topical and subcutaneous administration to yaks (Bos grumniens) PubMed
doi101016 jexppara201502010
37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
x
IacuteNDICE GENERAL
paacuteg
DEDICATORIAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiii
AGRADECIMIENTOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipiv
copy DERECHOS DE AUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipv
INFORME DEL TUTORhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipvi
IacuteNDICE GENERALhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipix
LISTA DE CUADROShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipx
LISTA DE GRAacuteFICOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxi
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxii
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipxiii
INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
CAPIacuteTULOS
I Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
II Marco teoacutericohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Principales funciones de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip6
Estructura dinaacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
xi
Farmacocineacutetica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Posologiacutea y viacutea de administracioacutenhelliphelliphelliphellip8
Tiempo de retirohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Toxicidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Composicioacuten y calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Importancia de la buena calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Liacutemite maacuteximo de residuoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Residuos de medicamentos en la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
Cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten HPLChelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
Liacutemite maacuteximo para la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
III Metodologiacutea y materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Caracteriacutesticas de la zona de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
Tipo de investigacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Factores en estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Sistema de muestreo de leche bovinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Caracteriacutesticas de las unidades de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
Procedimientoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip22
IV Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip23
V Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip30
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
Referencias
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
xi
Farmacocineacutetica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Posologiacutea y viacutea de administracioacutenhelliphelliphelliphellip8
Tiempo de retirohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Toxicidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Composicioacuten y calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
Importancia de la buena calidad de la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Liacutemite maacuteximo de residuoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
Residuos de medicamentos en la lechehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
Cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten HPLChelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
Liacutemite maacuteximo para la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
III Metodologiacutea y materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Caracteriacutesticas de la zona de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
Tipo de investigacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Factores en estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Sistema de muestreo de leche bovinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
Caracteriacutesticas de las unidades de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
Procedimientoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
Trabajo en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip22
IV Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip23
V Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip30
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
xii
LISTA DE ANEXOS
ANEXO paacuteg
1 Datos tomados en campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip37
2 Datos tomados en laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip38
3 Resultados de residuos de eprinomectina en la leche bovinahelliphellip39
medidos en cromatografiacutea liacutequida
4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina
medidos en cromatografiacutea liacutequidahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip40
5 Fotoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip42
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
xiii
TABLA DE GRAacuteFICOS
GRAacuteFICO paacuteg
1 Estructura quiacutemica de la eprinomectinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip7
2 Proceso de elaboracioacuten del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip16
3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en la lechehelliphellip25
bovina en los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
xiv
INDICE DE CUADROS
CUADRO paacuteg
1 Ubicacioacuten geograacutefica del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
al peso del animal
4 Residuos de eprinomectina (ugL) en la leche bovina a los diacuteashelliphellip23
0 1 11 21 y 31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectinahelliphelliphelliphelliphellip24
en la leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y 31
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
xv
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ldquoDETERMINACIOacuteN CUANTITATIVA DE RESIDUOS EN LECHE DE
EPRINOMECTINA USADO COMO MOSQUICIDA EN VACAS LECHERASrdquo
Autora Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Fecha Febrero 2017
RESUMEN
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica y un gran impacto en la industria laacutectea la principal causa no respetar los tiempos de espera de algunos productos de uso veterinario El objetivo del estudio fue determinar residuos de eprinomectina en la leche despueacutes de la aplicacioacuten percutaacutenea en bovinos sanos (n=10) Para analizar las muestras de leche se utilizoacute cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten Los bovinos en estudio pertenecieron a la hacienda San Agustiacuten ubicada en la parroquia Pintag perteneciente al cantoacuten Quito provincia Pichincha Se formoacute un grupo experimental (aplicacioacuten toacutepica de 05 mgkg de eprinomectina) se colectoacute la leche manualmente a los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten se procedioacute a evaluar la leche Se utilizoacute t Test pareado como prueba estadiacutestica seguacuten los resultados obtenidos mediante cromatografiacutea liacutequida existe diferencia altamente significativa al 95 de confianza entre el diacutea 0 y los diacuteas 1 y 11 post tratamiento Se determinoacute que a una sola dosis de eprinomectina a nivel toacutepico los residuos en la leche se manifiestan ya al primer diacutea llegando a su pico al diacutea 11 post aplicacioacuten con una media de 1907 ugL cuyo valor se encuentra dentro del rango aceptable (20 ugL) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos Palabras claves residuos de eprinomectina cromatografiacutea liquida HPLC leche Codex Alimentarius
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
xvi
CENTRAL UNIVERSITY OF ECUADOR
FACULTY OF VETERINARY MEDICINE
CAREER OF VETERINARY MEDICINE
QUANTITATIVE DETERMINATION OF EPRINOMECTIN MILK WASTE USED AS
MOSQUICIDA IN DAIRY COWS
Author Priscila Estefaniacutea Balseca Muntildeoz
Tutor Jorge Mosquera
Date Febrary 2017
ABSTRACT
The presence of residues and or contaminants in milk such as antimicrobials antiparasitics growth promoters and inorganic contaminants imply damage to public health and a major impact on the dairy industry The main cause does not respect the waiting times of some products for veterinary use The objective of the study was to determine eprinomectin residues in milk after percutaneous application in healthy cattle (n = 10) High performance liquid chromatography was used to analyze milk samples The cattle in study belonged to the hacienda San Agustiacuten located in the Pintag parish belonging to the canton Quito Pichincha province An experimental group was formed (topical application of 05 mg kg eprinomectin) The milk was collected manually at days 0 1 11 21 and 31 post-application Milk was evaluated Paired test was used as statistical test According to the results obtained by liquid chromatography there is a highly significant difference at 95 confidence between day 0 and days 1 and 11 post treatment It was determined that at a single dose of eprinomectin at the topical level the residues in the milk are already manifested on the first day reaching its peak at day 11 post application with an average of 1907 ug L whose value is within Of the acceptable range (20 ug L) of the maximum limit allowed by the Codex Alimentarius of Residues of Veterinary Drugs in food Keywords Eprinomectin residues liquid chromatography HPLC milk Codex Alimentarius
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
1
INTRODUCCIOacuteN
De acuerdo a la encuesta Agropecuaria realizada por Agrocalidad en el
2016 en el Ecuador existe una poblacioacuten bovina de 4rsquo314699 cabezas
distribuidas en mayor nuacutemero en la Costa con 2rsquo031456 Sierra con
1rsquo756530 y con 526713 en el Oriente (Agrocalidad 2016 no publicado)
Se producen 55 millones de litros de leche cruda cuya cifra solo abastase a
un tercio de la poblacioacuten ya que el consumo per caacutepita es de 110 litros de
lecheantildeo este consumo es muy bajo en relacioacuten a otros paiacuteses como
Argentina con un consumo per caacutepita de 220 litros y Uruguay con 270 litros
personaantildeo (Andes 2014)
La Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN 92012 define la leche como ldquoel
producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales lecheros sanos
obtenida mediante uno o maacutes ordentildeos diarios higieacutenicos completos e
interrumpidos sin ninguacuten tipo de adicioacuten o extraccioacuten destinada a un
tratamiento posterior previo a su consumorsquorsquo
Es de intereacutes mundial la seguridad alimentaria lo que hace que los meacutetodos
de planificacioacuten y control de calidad sean necesarios y deseables en todos
los eslabones que comprende la cadena agroalimenticia por el uso de
productos veterinarios que se utilizan en produccioacuten animal para la
prevencioacuten o tratamiento de enfermedades (Almeida 2013)
El sector ganadero y la industria lechera tienen una gran responsabilidad
sobre la inocuidad de productos de origen animal especialmente de carne y
leche relacionado al tiempo de retiro pos tratamientos como la aplicacioacuten de
endectocidas en el ganado lechero (Piza 2011)
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
2
Seguacuten expresa Sumano amp Ocampo (2006) ldquoel coacutedigo sanitario especifica que
no debe existir residuos de medicamentos u otros compuestos quiacutemicos en
los productos derivados de animales para el consumo humano se ha
comenzado establecer liacutemites maacuteximos de en productos de origen animalrdquo
La presencia de residuos yo contaminantes en la leche como
antimicrobianos antiparasitarios promotores del crecimiento y
contaminantes inorgaacutenicos implican un dantildeo en la salud puacuteblica su impacto
en el procesamiento de productos laacutecteos fermentados ocasiona graves
dantildeos a las exportaciones en la agroindustria internacional (Almeida 2013)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Existe poco control de residuos de dichos faacutermacos en zonas rurales poco
desarrolladas en comparacioacuten de explotaciones industriales que abastecen
a la industria de la alimentacioacuten en los que estos controles sanitarios son
maacutes rigurosos en zonas rurales o de venta ilegal de dichos productos o
subproductos laacutecteos es complicado estimar el dantildeo a la salud a traveacutes del
consumo de estos productos contaminados con residuos de parasiticidas
(Junquera 2015)
Se considera que la leche de buena calidad no debe tener residuos ni
sedimentos o debe considerar los LMR de medicamentos de uso veterinario
debido a que si supera estos liacutemites de residuos conlleva a problemas en la
salud del consumidor provocando resistencia a los faacutermacos alergias
alteracioacuten de la flora intestinal y algunos efectos toacutexicos (Mattar et al 2009)
Los impactos causados por el uso de productos veterinarios en la industria
laacutectea que no respeten dosis administrada tiempo de retiro del faacutermaco y
que sobrepasen el LMR conducen a graves dantildeos en la ganaderiacutea en la
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
Referencias
Adams R (2003) Veterinary Pharmacologya and Therapeutics En G R
Courtney Quimioterapia de las enfermedades parasitarias Zaragoza
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
3
salud del consumidor y peacuterdidas de productividad industrial ya que la
presencia de estos residuos de productos de uso veterinario a nivel de la
leche pueden inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los
resultados del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como la
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida 2013)
En los uacuteltimos antildeos el uso masivo de endectocidas se ha convertido en un
problema debido a la resistencia que adquieren los paraacutesitos tanto internos
como externos (Junquera 2016) Se establece que para la Eprinomectina el
liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a nivel de la leche es de 20 ugl por lo que
es el uacutenico endectocida autorizado para el uso en ganado de carne y leche
ya que produce menos residuos tanto en leche como en carne que los
demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la Salud 2015)
El peligro para el medio ambiente tras el uso de endectocidas es menor en
comparacioacuten con el empleo de insecticidas claacutesicos ya que no existen
grandes cantidades para desechar como es el caso del uso de productos
para bantildeos de inmersioacuten (Paul 2016)
Por lo anteriormente sentildealado y por la revisioacuten bibliograacutefica sustentada la
eprinomectina podriacutea ser el primer endectocida sin tiempo de retiro en leche
ya que este principio activo produce menos residuos en eacutesta ya que solo se
elimina el 01 en leche y por otro lado su liacutemite maacuteximo de residuos es
maacutes alto que los demaacutes endectocidas establecido por la Comisioacuten del Codex
Alimentarius siendo el objetivo de esta investigacioacuten determinar la presencia
de residuos de eprinomectina en leche mediante cromatografiacutea liacutequida
(HPLC) trabajo que no ha sido realizado en nuestro paiacutes
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
4
CAPIacuteTULO I
OBJETIVOS
General
bull Determinar la presencia de residuos de Eprinomectina en leche luego
de la administracioacuten toacutepica como mosquicida en vacas lecheras
Especifico
bull Determinar los valores residuales de Eprinomectina en leche
bull Determinar el tiempo en que los residuos llegan al LMR en leche
establecidos por el Codex Alimentarius
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
5
CAPIacuteTULO II
MARCO TEOacuteRICO
Antecedentes
Los consumidores son mucho maacutes exigentes en cuanto a calidad e inocuidad
de los alimentos que ingieren a diario especialmente los de origen animal
debido a la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario que
pueden traer problemas a nivel de salud puacuteblica e industria laacutectea
(Orejarena 2007)
Una de las principales causas de la presencia de medicamentos de uso
veterinario en alimentos de origen animal previo al consumo humano es el no
respetar los tiempos de espera de dichos productos cuya responsabilidad
cae sobre el productor y el meacutedico veterinario encargado (Coacuteppola sf)
Uno de los principales problemas para los productores es utilizar
antiparasitarios con tiempo de suspensioacuten en leche principal razoacuten de
peacuterdida econoacutemica diaria hasta cumplir el tiempo de espera del producto
veterinario (Coacuteppola sf)
Eprinomectina
Generalidades
La eprinomectina es un endectocida perteneciente al grupo de las lactonas
macroliacuteticas de suma importancia para el control de endoparaacutesitos
(especialmente contra nemaacutetodos gastrointestinales y pulmonares) y
ectoparaacutesitos (aacutecaros piojos larvas y mosca adulta) se usa
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
6
principalmente en el ganado de leche dado que a una dosis de 05 mgkg pv
no excede el nivel maacuteximo de residuos en la leche (Chaacutevez 2013)
Accioacuten farmacoloacutegica de la eprinomectina
La accioacuten que ejerce la Eprinomectina en los artroacutepodos se localiza en la
zona de contacto entre la fibra nerviosa y la fibra muscular estimulando la
liberacioacuten masiva del aacutecido gamma amino butiacuterico tambieacuten conocido como
GABA (Ploog et al 2008) el que actuacutea como neurotransmisor inhibitorio que
bloquea la estimulacioacuten postsinaacuteptica de la neurona adyacente de los
nemaacutetodos y en las fibras musculares de los artroacutepodos (Sumano y Ocampo
2006) La Eprinomectina se une a los canales de cloro los que son
controlados por el glutamato presente en las ceacutelulas nerviosas y musculares
de los invertebrados incrementando la permeabilidad del ion cloro
hiperpolarizando la neurona y generando la interrupcioacuten de los impulsos
nerviosos produciendo la paraacutelisis y muerte de los paraacutesitos (Chaacutevez 2013)
Principales funciones de la eprinomectina
En rumiantes presenta actividad frente a
Endoparaacutesitos
Vermes redondos gastrointestinales (adulto y larva de cuarto estadio)
Haemonchus placei Ostertagia ostertagi (incluyendo L4 inhibidas)
Ostertagia lyrata (adultos solamente) Ostertagia spp Trichostrongylus axei
Trichostrongylus colubriformis Trichostrongylus spp Cooperia spp
(incluyendo L4 inhibidas) Cooperia oncophora Cooperia punctata Cooperia
surnabada Cooperia pectinata Nematodirus helvetianus Oesophagostomun
radiatum Oesophagostomun spp (adulto solamente) Bunostomum
phlebotomum y Dictyocaulus vivaparus (Sumano y Ocampo 2006)
Vermes pulmonares (adultos y larvas de cuarto estadio) Dictyocaulus
viviparusEctoparaacutesitos
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
7
Moscas Hypoderma bovis hypoderma lineatum Dermatobia hominis
Aacutecaros Chorioptes bovis Sarcoptes scabiei var bovis
Piojos Haematopinus eurysternus Linognathus vituli Solenopotes capillatus
Damalinia bovis (Sumano y Ocampo 2006)
Moscas de los cuernos Haematobia irritans
Estructura dinaacutemica de la moleacutecula
La Eprinomectina es producida por la fermentacioacuten del Streptomyces
avermetilis derivada de productos naturales y que es obtenida por
fermentacioacuten de organismos del suelo del geacutenero Streptomyces su
fabricacioacuten no es por siacutentesis quiacutemica claacutesica debido a que se produce en
grandes cantidades por fermentacioacuten de estas grandes cantidades se extrae
el precursor de las sustancias activas y se elabora quiacutemicamente hasta
convertirlo en sustancia activa la diferencia de otras avermectinas B1 es la
sustitucioacuten de un grupo epi-acetilamino en la posicioacuten 4 (Ortiz 2013) se la
conoce tambieacuten como MK-397 que es un soacutelido cristalino cuyo nombre
quiacutemico es (4rdquoR)-4rdquo-epi(acetilamino)-4rdquo-desoxiavermetinaB1 (Adams 2003)
Graacutefico 1 Estructura quiacutemica de la eprinomectina
Fuente (Adams 2003)
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
8
Farmacocineacutetica
Absorcioacuten
La eprinomectina es el primer toacutepico endectocida utilizado exclusivamente
para vacas lecheras tras su aplicacioacuten percutaacutenea ldquopour-onrdquo solo el 46 se
absorbe a traveacutes de la piel estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten
en vacas lecheras es de 095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia
activa se da a los 7-10 diacuteas y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la
administracioacuten cuyos maacuteximos niveles plasmaacuteticos se alcanza de 2-5 diacuteas
tras su administracioacuten (Coumendouros et al 2003)
Distribucioacuten
Tras la aplicacioacuten percutaacutenea su absorcioacuten se da a traveacutes de la piel y se
dirige al torrente sanguiacuteneo pequentildeas cantidades de este principio activo se
metabolizan en los bovinos y se distribuyen por todo el cuerpo alcanzando
una concentracioacuten maacutexima de residuos entre el 86-90 en hiacutegado (tejido
diana) y rintildeones (Toriz 2013)
Excrecioacuten
Se eliminan en forma activa por las heces y pequentildeas cantidades (menos del
1) por viacutea renal (Ortiz 2013)
Posologiacutea y viacutea de administracioacuten
La eprinomectina se usa principalmente en bovinos lecheros a una dosis
recomendada de 05 mgkg pv se aplica percutaacuteneo (pour on) a lo largo de
la liacutenea dorsal en la banda estrecha que se extiende desde la cruz hasta el
nacimiento de la cola (Sumano amp Ocampo 2006)
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
Referencias
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
9
Tiempo de retiro
La eprinomectina es el endectocida de primera eleccioacuten para el uso en
ganado lechero ya que no tiene tiempo de retiro debido a una combinacioacuten
de factores uno de ellos es que solo el 01 se elimina en leche ademaacutes su
liacutemite maacuteximo de residuos permitido es maacutes alto que los demaacutes
endectocidas por lo que la leche sirve para el consumo humano en toda la
etapa del tratamiento (Organizacion Mundial de la Salud 2015) sin embargo
en Nueva Zelanda se recomienda 14 diacuteas de retiro con las mismas
indicaciones de aplicacioacuten (Sumano amp Ocampo 2006)
Toxicidad
Se han realizado estudios de sobredosificacioacuten a terneros de 8 semanas de
edad los que fueron tratados hasta 5 veces la dosis terapeacuteutica (25 mgkg
pv) sin presentar signos de toxicidad (Merial Laboratorios SA 2016)
estudios realizados en hembras en diferentes estados de gestacioacuten y
machos reproductores han demostrado que la eprinomectina tiene un amplio
margen de seguridad a la dosis recomendada
COMPOSICION Y CALIDAD DE LA LECHE
La leche es el producto de la secrecioacuten mamaria normal de animales
lecheros sanos que proporciona una fuente importante de energiacutea
alimentaria aporta con nutrientes esenciales proteiacutenas de alta calidad y
grasas aporta nutrientes como calcio magnesio selenio riboflavina
vitamina B12 y aacutecido pantoteacutenico (FAO 2016) la leche estaacute compuesta por
Agua 87 Lactosa 49 Caseiacutena 29 Alfa lactoalbugravemina 05 Beta
lactoalbugravemina 02 Grasa neutra 37 Fosfoligravepidos 01 y Agravecido ciacutetrico
02 por su alto valor nutritivo y alto grado de digestibilidad es de suma
importancia en la alimentacioacuten humana (Pentildeafiel 2008)
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
10
Se considera que la leche de buena calidad debe tener una adecuada
composicioacuten de proteiacutenas minerales vitaminas grasas y sogravelidos totales
mantener las caracteriacutesticas organoleacutepticas (sabor y olores normales) no
debe contener sustancias extrantildeas (calostro sedimentos) estar libre de
agentes patoacutegenos (brucelosis tuberculosis entre otros) y de residuos
quiacutemicos e inhibidores (antibioacuteticos pesticidas y otros) con un miacutenimo de
carga microbiana y de ceacutelulas somaacuteticas (Parra et al 2003)
IMPORTANCIA DE LA BUENA CALIDAD
La leche es una de las materias primas maacutes importantes en cuanto a su valor
nutritivo y es esencial en la dieta del ser humano desde sus primeros meses
de vida proporcionar una leche de buena calidad determina mayores
rendimientos en la industria vida uacutetil y aceptacioacuten de los productos en el
mercado y lo maacutes importante es la bonificacioacuten por higiene con mejores
ingreso para el productor al aplicar buenas praacutecticas ganaderas obteniendo
una bonificacioacuten de 002ctvsl y tener el certificado de hato libre de
brucelosis y tuberculosis con una bonificacioacuten de 001ctvsl (MAGAP 2013)
LIMITE MAXIMO DE RESIDUOS EN LA LECHE
Los paiacuteses y organizaciones internacionales establecieron los liacutemites
maacuteximos de residuos con el fin de definir un producto libre de residuos
quiacutemicos para la mayoriacutea de los plaguicidas y medicamentos de uso
veterinario que se utilizan en animales con fines productivos como es el
ganado bovino (Orejarena 2007)
El liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) es la concentracioacuten maacutexima de residuos
de un medicamento de uso veterinario expresado en mgkg por lo que
recomienda la Comisioacuten del Codex Alimentarius se permita legalmente su
presencia en los productos de alimentacioacuten para consumo humano y
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
11
piensos para que de esta manera el LMR sea toxicoloacutegicamente aceptable
(Codex Alimentarius 2016)
Norma Teacutecnica Ecuatoriana INEN-CODEX 1932013 fija la tolerancia o liacutemite
residual maacuteximo para garantizar la inocuidad de los alimentos
AGROCALIDAD (2013) adopta los liacutemites de residuos fijados por el Codex o
en su defecto lo fijado por la Unioacuten Europea en su Reglamento (CE)
ndeg39620053 cuyos liacutemites se encuentran publicado en su base de datos 4 o
en su defecto por el Coacutedigo de Regulaciones federales CFR 40 Seccioacuten
1805
RESIDUOS DE MEDICAMENTOS EN LA LECHE
Es esencial la aplicacioacuten de medicamentos veterinarios durante la crianza de
animales productores de alimentos con la finalidad de favorecer su
crecimiento y de prevenir o tratar enfermedades la presencia de residuos de
medicamentos en los alimentos de origen animal da como resultado
productos de baja calidad y conlleva un riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano amp Arias 2008)
La Comisioacuten del Codex Alimentarius (2016) expresa que los residuos de
medicamentos veterinarios incluyen los compuestos de origen yo sus
metabolitos presentes en cualquier porcioacuten comestible de un producto
animal asiacute como los residuos de impurezas relacionados con el
medicamento veterinario correspondiente
Causas de la aparicioacuten de residuos de medicamentos veterinarios en la leche
(Almeida 2013)
No respetar el periodo de retiro
Sobredosificacioacuten (no consideran indicaciones de la etiqueta)
Utilizacioacuten de sustancias no autorizadas en periodo de lactancia
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
12
Presencia de residuos de medicamentos
1 Riesgos en Salud Puacuteblica
Almeida (2013) anota que la presencia de residuos quiacutemicos en la leche
especialmente los medicamentos de uso veterinario se debe al
incumplimiento del tiempo de espera desde el suministro del uacuteltimo
tratamiento a la vaca en produccioacuten para destinar la leche al consumo
humano Varios problemas que pueden causar al ser humano al consumir
leche con residuos de medicamentos son
Reacciones aleacutergicas
Mutaciones y caacutencer
2 Riesgos en Industrias Lagravecteas
Seguacuten Contero (2008) el 90 de las principales industrias procesadoras de
laacutecteos se encuentran ubicadas en la Sierra y se dedican principalmente a
la produccioacuten de leche pasteurizada quesos y crema de leche ocupando un
plano secundario los otros derivados laacutecteos en el paiacutes son 6 empresas las
productoras maacutes grandes de laacutecteos destacaacutendose a nivel regional por su
produccioacuten diaria de leche en la Sierra NestleacutendashDPA Andina Nutrileche y
Pasteurizadora Quito en la Costa Rey leche y Tony
Varios problemas que se pueden causar en la industria laacutectea al procesar
leche con residuos de medicamentos son
Interferir en el procesado de mantequilla queso y yogurt
Afectar el sabor caracteriacutestico de los subproductos a base de leche
Producir mala maduracioacuten de los quesos
Inhibir la multiplicacioacuten de su microbiota interfiriendo en los resultados
del anaacutelisis de control de calidad en los laboratorios asiacute como en la
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
13
fabricacioacuten de derivados de la leche como el queso y yogurt (Almeida
2013)
CROMATOGRAFIacuteA LIacuteQUIDA DE ALTA RESOLUCIOacuteN HPLC
Para la determinacioacuten de residuos antihelmiacutenticos (eprinomectina) en la
leche se utilizoacute una prueba de validacioacuten La cromatografiacutea liquida de alta
resolucioacuten (HPLC) que es una teacutecnica utilizada para separar los
componentes de una muestra que consiste en la fase moacutevil en la que se
inyecta la muestra en solucioacuten que fluye a traveacutes de una fase estacionaria
no polar (columna) de acuerdo a las interacciones no covalentes estas
interacciones quiacutemicas determinan la separacioacuten cromatograacutefica de los
contenidos en la muestra (Miranda amp Martiacuten 2013) Las muestras de leche
deben ser sometidas a procesos de extraccioacuten y posterior derivatizacioacuten
para luego ser analizadas por HPLC con detector de fluorescencia despueacutes
de la separacioacuten por fase soacutelida seguacuten el procedimiento descrito por
Alvinerie y Col (1993) (Peacuterez et al 2006)
LIacuteMITE MAXIMO DE RESIDUOS PARA EPRINOMECTINA
El Instituto Ecuatoriano de Normalizacioacuten (INEN) (2010) menciona que los
liacutemites maacuteximos de residuos de medicamentos veterinarios para la leche
seraacuten los que determine el Codex Alimentarius CACMRL2
Se establece que para la Eprinomectina el liacutemite maacuteximo de residuo (LRM) a
nivel de la leche es de 20 ugl generando menos residuos tanto en leche
como en carne que los demaacutes endectocidas (Organizacion Mundial de la
Salud 2015)
Seguacuten lo estimado por la Comunidad Europea (1990) en acuerdo con el
Reglamento del Consejo (CEE) No237790 el LRM para la Eprinomectina a
nivel de la leche es de 20ugl tanto para la especie bovina caprina y ovina
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
14
La Agencia Europea de Medicamentos establece el LRM para la
Eprinomectina a nivel de la leche en 30ugl (EMEA 1996)
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
15
CAPITULO III
METODOLOGIA Y MATERIALES
Caracteriacutesticas de la zona de estudio
El presente trabajo se realizoacute en la parroquia de Pintag ubicada en la
provincia de Pichincha en el Distrito Metropolitano de Quito situada al sur
oriente de la Capital cuya superficie es de 49014 km2 Pintag se encuentra
entre los 2400 msnm y los 4500 msnm de altitud cuenta con dos pisos
climaacuteticos entre frio en la parte alta hasta templado en la parte occidental
La precipitacioacuten anual es de 129830 mm observaacutendose la presencia de
frecuentes lluvias en la zona La temperatura variacutea entre los 8degC y 20degC
(GAD 2012)
El trabajo de campo fue realizado en la Hacienda San Agustin ubicada en la
parroquia Pintag con una extensioacuten total de 180 hectaacutereas de las que 60
estaacuten destinadas a la produccioacuten bovina
Cuadro 1 Ubicacioacuten Geograacutefica del estudio
Provincia Pichincha
Cantoacuten Quito
Parroquia Pintag
Lugar de estudio Hacienda San Aguntigraven
Altitud 2720 msnm
Latitud -0366667
Longitud -783833
Fuente (GAD 2012)
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
16
Graacutefico 2 Plan de elaboraciograven del estudio
Elaboracioacuten la autora
Materiales
Animales
10 vacas de razas lecheras en estado productivo
DE CAMPO
Aplicacioacuten Pour -On
Frasco de 1lt de Eprinomectina con tapa dosificadora
Mandil
Cubre bocas
Cofias
Guantes
Botas
Gafas plaacutesticas de proteccioacuten
Para muestreo
Solucioacuten de hipoclorito de sodio al 4
Seleccioacuten de lugar del estudio
Seleccioacuten al azar del marco
muestreal
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo
Primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante
cromatografiacutea liacutequida
Aplicacioacuten de eprinomectina
Extraccioacuten de leche post
administracioacuten y anaacutelsis de la
misma
Caacutelculos estadiacutesticos t test pareado
Anaacutelisis de datos
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
17
Papel desechable
Envases esteacuteriles para recolectar leche
Cooler
Gel refrigerante
Marcadores
DE LABORATORIO
Cromatoacutegrafo liacutequido de alta resolucioacuten HPLC
Reactivos para Eprinomectina
Solventes (metanol aacutecido aceacutetico o acetonitrilo)
DE OFICINA
Computadora
Impresora
Cuaderno
Esfero
Resma de papel bond
Tipo de investigacioacuten
Estudio experimental de campo y laboratorio
Factores en estudio
En esta investigacioacuten se evaluaron el tiempo y la cantidad de residuos en la
leche pos administracioacuten de eprinomectina (pour-on) mediante cromatografiacutea
liacutequida
Sistema de muestreo de leche bovina
El muestreo se realizoacute seguacuten el instructivo dado por Agrocalidad para toma
de muestra de leche cruda (Agrocalidad 2010) siguiendo el siguiente
protocolo
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
18
1 Se deberaacute contar con un envase esterilizado para la muestra
2 Rotular los frascos antes de la toma de leche cruda
3 Lavar con agua y jaboacuten los pezones por 2 minutos para retirar la
suciedad y secar completamente con una toalla de papel
4 Descartar los primeros chorros de leche del pezoacuten
5 Sumergir los pezones en una solucioacuten germicida como hipoclorito de
sodio al 4 por 30 segundos
6 Secar los pezones completamente con toalla de papel
7 Para la toma de la muestra compuesta (de los 4 cuartos en un solo
frasco) comenzar la toma de muestra por el pezoacuten maacutes cercano y
continuar con los pezones maacutes alejados de la ubre tomaacutendo
aproximadamente 10 ml de cada cuarto de la ubre
8 Colocar los frascos con la muestras recolectadas dentro del cooler o
refrigerador y llevarlas inmediatamente al laboratorio para su
respectivo anaacutelisis
Caracteriacutesticas de las unidades de estudio
Bovinos hembras productoras de leche de las razas Holstein friesian y
Jersey comprendidos entre 4 y 7 antildeos de edad
Cuadro 2 Caracteriacutesticas de las unidades experimentales
Nuacutemero de animales 10
Edad Adultos en edad productiva
Peso 400-500kg
Sexo Hembras
Raza Lecheras
Elaboracioacuten la autora
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
19
Procedimientos
Trabajo de campo
Diacutea 0
Identificacioacuten y pesaje de la poblacioacuten objetivo primera extraccioacuten de
leche y anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida y primera aplicacioacuten de
dosis de eprinomectina
Diacutea 1
Primera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 11
Segunda extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 21
Tercera extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Diacutea 31
Cuarta extraccioacuten de leche tras la aplicacioacuten de eprinomectina y
anaacutelisis mediante cromatografiacutea liacutequida
Una vez obtenidas las muestras se llevaron al laboratorio para el
anaacutelisis correspondiente
Entregados los resultados de laboratorio se realizoacute el anaacutelisis e
interpretacioacuten de los mismos
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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topical and subcutaneous administration to yaks (Bos grumniens) PubMed
doi101016 jexppara201502010
37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
20
Cuadro 3 Dosis administrada de eprinomectina de acuerdo al peso del animal
de
Muestras
Identificacioacuten
de Animal
Raza
Edad
(antildeos)
Peso
(kg)
Dosis
(1ml10kg)
1 477 Holstein
friesian 6 435 435
2 Flika Holstein
friesian 7 475 475
3 Amelia Holstein
friesian 7 476 476
4 Rayas Jersey 5 335 335
5 Potra Julia Jersey 4 290 29
6 6835 Jersey 6 358 358
7 12037 Jersey 4 358 358
8 8533 Holstein
friesian 7 475 475
9 Arete Rojo Holstein
friesian 6 457 457
10 8528 Holstein
ffriesian 7 384 384
Elaboracioacuten la autora
Trabajo de laboratorio
Teacutecnica utilizada y descrita por la DraTania Bastidas del laboratorio quiacutemico
y microbioloacutegico (Ecuachemlab)
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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Anthelmintic efficacy plasma and milk kinetics of eprinomectin following
36
topical and subcutaneous administration to yaks (Bos grumniens) PubMed
doi101016 jexppara201502010
37
ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
38
Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
40
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
41
Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
42
Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
43
Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
21
Preparacioacuten del estaacutendar
Pesar 25 mg del estaacutendar de eprinomectina en un baloacuten volumeacutetrico
de 50 ml y disolver con metanol
Ultrasonar por 10 minutos o hasta disolver sacar y enfriar despueacutes
llevar a volumen con metanol
Tomar una aliacutecuota de 1 ml y depositar en un baloacuten aforado de 10 ml
aforar con metanol y micro filtrar en micro filtro de poro de 045 microm y
leer
Preparacioacuten de la muestra
Pesar aproximadamente 5 g de muestra previamente homogenizada
en un baloacuten de 25 ml
Agregar 30 ml de metanol y llevar al ultrasonido por 15 minutos
enseguida retirar y agitar vigorosamente despueacutes volver a poner en
el ultrasonido por 30 minutos
Retirar del ultrasonido dejar enfriar y llevar a volumen con metanol y
microfiltrar por micro filtro de poro de 045 microm y leer
Condiciones cromatogragraveficas
Columna columna C18 3microm EAFQ-054
Temperatura 30ordmC
Fase moacutevil Acetonitrilo agua grado I (8020)
Flujo 1 mlmin
Deteccioacuten 220 nm
Volumen de inyeccioacuten 20 microl
Reporte de resultados
Calcular los mg de eprinomectina en la hoja de caacutelculo respectivo
22
Del anaacutelisis se reportan los resultados como microgL en el registro de
resultados aacuterea fiacutesico-quiacutemico R-03-41 de la orden de trabajo
correspondiente
Anaacutelisis estadiacutestico
Para comparar los resultados de los diferentes diacuteas post tratamiento se
colocaron los datos en el programa IBM SPSS Statistics 20 y se realizoacute t test
pareado para determinar si existe diferencia significativa entre ellas con un
intervalo de confianza del 95 para la diferencia
23
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
Residuos de eprinomectina en leche bovina
Cuadro 4 Residuos de eprinomectina (ugl) en leche bovina a los diacuteas 0 1 11 21 y
31 medidos en cromatografiacutea liacutequida
Diacuteas del
muestreo
N de
muestras
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tiacutep
Error tiacutepico
de la media
Liacutemite
maacuteximo de
residuos
(LMR) (ugl)
Diacutea 0 10 000 000ordf 000
20
Diacutea 1 10 080 107 034
Diacutea 11 10 1906 131 041
Diacutea 21 10 000 000ordf 000
Diacutea 31 10 000 000ordf 000
Elaboracioacuten la autora
En el cuadro 4 se observa que al diacutea 1 despueacutes de la aplicacioacuten de
eprinomectina los residuos de este principio activo se ven reflejados con una
media de 080 ugl la media de residuos de eprinomectina sube hasta el diacutea
11 hasta 1906 ugl lo que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
establecido por el Codex Alimentarius (20ugI) estos niveles residuales se
encuentran ausentes del diacutea 21 hasta el teacutermino del estudio diacutea 31
24
Cuadro 5 Comparacioacuten de los niveles residuales de eprinomectina en leche bovina
los diacuteas 0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea
Residuos de
Eprinomectina
Diferencias relacionadas
t
p-
valor
LMR
(ugl)
Media
(ugl)
Desviacioacuten
tip
Error
tip de
la
media
95 Intervalo de
confianza para la
diferencia
Inferior Superior
Diacutea 0 vs Diacutea 1
-079
107
034
-155
-022
-232
004
20
Diacutea 1 vs Diacutea 11
-1827
138
044
-1926
-1728
-4189
000
Diacutea 11 vs Diacutea 21
1906
131
041
1812
1999
4594
000
Elaboracioacuten la autora
Los resultados obtenidos reflejan un aumento altamente significativo (p=000)
despueacutes de la aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina al realizar prueba t test
pareado para comparar los residuos de eprinomectina en la leche de los
diferentes diacuteas post tratamiento refleja que una sola dosis de eprinomectina
de 05 mgkg pv aumenta en mayor concentracioacuten en la leche bovina a los 11
diacuteas post tratamiento
En el antildeo 2006 en Senegal Bengone et al realizan un estudio de la
excrecioacuten de la eprinomectina en leche el que se analizoacute en un modelo de
un solo compartimento detectando eprinomectina en la leche desde el
primer tiempo de muestreo hasta los 8 diacuteas post aplicacioacuten toacutepica de 05
mgkg en bovinos cebuacute Gobra permitiendo su uso en ganado vacuno en
cualquier periodo de lactancia debido a su bajo grado de excrecioacuten mamaria
25
Graacutefico 3 Curva de niveles residuales de eprinomectina en leche bovina en los diacuteas
0 1 11 21 y 31 post aplicacioacuten percutaacutenea en ugl
Elaboracioacuten la autora
En la graacutefico 3 se observa la curva de residuos de eprinomectina en la leche
en los diferentes diacuteas post aplicacioacuten del producto obteniendo residuos a las
24 horas con una media de 080 ugl lo que concuerda con lo mencionado
por Coumendouros et al (2003) solo el 46 se absorbe a traveacutes de la piel
estableciendo que el tiempo medio de absorcioacuten en vacas lecheras es de
095 diacuteas la maacutexima absorcioacuten de esta sustancia activa se da a los 7-10 diacuteas
y continuacutea hasta los 17-21 diacuteas tras la administracioacuten
En Francia el trabajo de Alvinerie et al (1999) tras la aplicacioacuten toacutepica de
eprinomectina a una dosis de 05 mgkg pv en bovinos los residuos de esta
en la leche se detectaron desde el primer muestreo hasta los 15 diacuteas
obteniendo valores inferiores a 30 ugl lo que corrobora con los datos
obtenidos en esta investigacioacuten
El pico maacutes alto obtenido en nuestro trabajo se establecioacute al diacutea 11 con una
media de 1906 ugl promedio que no supera el liacutemite maacuteximo de residuos
0
5
10
15
20
25
0 1 11 21 31
RE
SID
UO
S (
UG
L)
TIEMPO (DIAS)
LMR
26
establecido por el Codex alimentarius ademaacutes se observa una disminucioacuten
draacutestica al diacutea 21 en el que no hubo residuos continuando asiacute hasta el final
del estudio diacutea 31
En el antildeo 2008 en Slovenia Hodoscek y colaboradores mencionan que
eprinomectina al ser un compuesto semisinteacutetico derivado de la Abamectina
cuya diferencia de otras avermectinas B1 es la sustitucioacuten de un grupo epi-
acetilamino en la posicioacuten 4 con una mezcla de dos componentes
homoacutelogos no menos del 90 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-avermectina
B1a) marcador residual y no maacutes del 10 de (4rdquo-epi-acetilamino-4rdquo-desoxi-
avermectina B1b) dichos homoacutelogos difieren solo por un metileno (-CH2-) en
la posicioacuten C25 esta modificacioacuten quiacutemica facilita la raacutepida absorcioacuten y baja
permeabilidad en la leche
En Francia Alvinerie et al (1999) especifican que la eprinomectina al ser
una avermectina biosinteacutetica su metabolismo es limitado en ganado lechero
solo el 01 de la dosis total se recupera en la leche
En la investigacioacuten realizada por Dupuy et al (2001) en Suiza cuyo tiacutetulo es
ldquoEprinomectin in dairy goats dose influence on plasma levels and excretion
in milkrdquo recuperaron en la leche la cantidad de 03 a 05 de la dosis total
administrada tras su aplicacioacuten toacutepica de eprinomectina a dosis de 05 mgkg
y 10 mgkg respectivamente
Alvinerie et al (1999) mencionan que solo el 11 de eprinomectina se une a
las lipoproteiacutenas eacutesto explica el bajo reparto del principio activo en la leche
a diferencia de las demaacutes Lactonas Macrociacuteclicas que se encuentran entre el
96-99 unidas a lipoproteiacutenas
En una investigacioacuten similar realizada por Baoliang et al (2006) en China
de residuos de eprinomectina en leche bovina tras la aplicacioacuten subcutaacutenea
a una dosis de 02 mgkg pv y el anaacutelisis de las muestras por HPLC se
27
obtuvieron resultados al segundo muestreo con una concentracioacuten maacutexima
de 90 ngml por debajo del liacutemite maacuteximo de residuos (LMR) de
eprinomectina en leche establecido en el antildeo 2000 por el Comiteacute mixto de
expertos en aditivos alimentarios FAOOMS obteniendo un promedio menor
al de esta investigacioacuten 11 diacuteas despueacutes de aplicacioacuten toacutepica del producto
En China Zhang et al (2015) recomiendan el uso de eprinomectina en
bovinos Yak (Bos grunniens) tras investigar la farmacocineacutetica a diferentes
dosis 05 mgkg en aplicacioacuten toacutepica obtuvo concentraciones maacuteximas en la
leche de 374 ngml a los 3 diacuteas post aplicacioacuten y a una dosis de 02 mgkg
viacutea subcutaacutenea obteniendo concentraciones maacuteximas en la leche de 910
ngml al 161 diacuteas post aplicacioacuten dichos resultados dan un perfil bajo de
residuos en la leche no superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido
por el Codex Alimentarius
Dupuy et al (2008) Italia en su investigacioacuten dieron a conocer el uso
permitido de eprinomectina en buacutefalos de agua en periodo de lactancia
despueacutes de su administracioacuten toacutepica de 05 mgkg pues obtuvieron
concentraciones maacuteximas en la leche de 340 ngml en 849 diacuteas no
superando el liacutemite maacuteximo de residuos establecido por el Codex
Alimentarius
En el antildeo 2010 en China Wen realiza un estudio donde determina que a
una dosis de 02 mgkg por viacutea de administracioacuten toacutepica obteniendo
concentraciones maacuteximas de eprinomectina en la leche de 228 ngkg en
348 diacuteas y a una dosis de 05 mgkg viacutea oral alcanza concentraciones
maacuteximas a los 140 diacuteas con 314 ngml en la leche favoreciendo el uso de
eprinomectina en vacas Holstein chinas tanto para su administracioacuten toacutepica
como oral
Los niveles residuales obtenidos en nuestra investigacioacuten desde el diacutea 1
hasta el diacutea 21 post aplicacioacuten no producen impacto al consumidor debido a
28
que la Ingesta Diaria Admisible (IDA) es de 0-10 ugkg de peso corporal
(Codex Alimentarius 2016) para que produzca un efecto toacutexico por otro
lado la French Agency For Veterinary Medicinal Products ANSES (2014)
recomienda una (IDA) de 5 ugkg es decir 300 ugpersona de igual manera
los niveles residuales obtenidos no sobrepasan los 20 ugl establecido por el
Codex Alimentarius
European public MRL assessment report (EPMAR) (2015) establece que el
Committee for Medicinal Products for Veterinary Use (CVMP) ha evaluado
previamente la seguridad del consumidor de eprinomectina y ha establecido
un IDA de 5 ugkg peso corporal basada en midriasis en perros es decir 300
ugpersona tomando en cuenta el nivel de dosis sin efecto (NOEL) de 10
mgkg peso corporal
29
CAPITULO V
Conclusiones
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche
mediante cromatografiacutea liquida de alta resolucioacuten (Hplc) tras la
aplicacioacuten percutaacutenea del producto sin embargo estos no superan los
(20ugl) del liacutemite maacuteximo permitido por el Codex Alimentarius de
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
El pico maacutes alto de residuos de eprinomectina en la leche se
establecioacute a los 11 diacuteas post aplicacioacuten con un promedio de 1906 ugl
existiendo una diferencia altamente significativa (p=000) con el diacutea 1 y
diacutea 21 del tratamiento
Se determinoacute la presencia de residuos de eprinomectina en la leche a
las 24 horas post aplicacioacuten existiendo diferencia estadiacutesticamente
significativa (p=0045) en relacioacuten al diacutea 0 lo que concuerda con la
farmacocineacutetica del principio activo sin embargo al diacutea 21 y 31 post
aplicacioacuten no se detectaron residuos de eprinomectina en la leche el
principio activo al ser de cineacutetica de primer orden alcanza sus
concentraciones plasmaacuteticas de manera raacutepida y de igual manera su
eliminacioacuten es raacutepida
30
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topical and subcutaneous administration to yaks (Bos grumniens) PubMed
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ANEXOS
Anexo 1 Datos tomados en campo
DATOS TOMADOS EN CAMPO
Hacienda Propietario
Provincia Cantoacuten Parroquia
Nuacutemero de muestra
Identificacioacuten del Animal
Raza Edad Peso kg
Dosis Eprinomectina
ECTOPARASITOS SINO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
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Anexo 2 Datos tomados en laboratorio
DATOS TOMADOS EN LABORATORIO
Nuacutemero de
muestra
Identificacioacuten del animal
Raza Edad Residuos de eprinomectina Resultado
˃20ug100ml ˂20ug100ml Positivo Negativo
1
2
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4
5
6
7
8
9
10
39
Anexo 3 Resultados de residuos de eprinomectina en leche bovina medidos
en cromatografiacutea liacutequida
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Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
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Anexo 4 Ejemplo de resultados de residuos de eprinomectina en leche
bovina medidos en cromatografiacutea liacutequida
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Anexo 5 Fotografiacuteas
Producto pour on a base de Eprinomectina y cinta meacutetrica para pesaje de
ganado
Aplicacioacuten pour on a base de Eprinomectina
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Lavado y secado de las ubres
Toma de muestras de leche
44
Muestras de leche colocadas en el cooler maacutes gel refrigerante
