CURSO : Microbiología Animal

PROFESOR : TAFUR ZEVALLOS, Lizandro

ALUMNA : BONIFACIO ESPINOZA, Jherson

CICLO : 2014 - I

TINGO MARIA – 2014

I. INTRODUCCION

Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos,

razón por la cual es difícil aislarlas. A menudo nuestro interés es caracterizar

una especie bacteriana, para lo cual debemos estar preparados para aislar,

cultivar e identificar a la misma. Si bien el aislamiento es un paso crucial en

este camino, comenzaremos examinando los medios de cultivo, ya que en

estos últimos se basan muchos de los principios del aislamiento.

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y

otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de

los microorganismos. Es decir, es un soporte que proporciona sustancias

nutritivas que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos. La

diversidad metabólica de los microorganismos es enorme, por ello, la variedad

de medios de cultivo también lo es, no existiendo un medio de cultivo universal

adecuado para todos ellos.

El conocimiento de las necesidades nutritivas y físicas de los microorganismos

es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado.

Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a

reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan.

OBJETIVOS:

Conocer la clasificación, preparación, esterilización y distribución de los

medios de cultivo.

Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación

del medio de cultivo en la práctica microbiológica.

Adquirir práctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir

de sus componentes individuales.

Reconocer la necesidad de evitar la contaminación tanto de los medios

de cultivo como de los demás elementos utilizados en el laboratorio de

microbiología.

II. REVISION BIBLIOGRAFICA.

II.1. TIPOS BÁSICOS DE MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS DE CULTIVO: SÓLIDO Y LÍQUIDO

Una forma muy útil de poder aislar, identificar y conservar los

microorganismos es mediante el uso de medios de cultivo,

inicialmente ideados por Pasteur (que como ya sabemos se

considera el padre de la microbiología), quien se dio

cuenta que los microorganismos podían crecer en soluciones que

tuvieran azúcar y una fuente de nitrógeno.

Fue, Robert Koch, médico alemán dedicado al estudio de los

microorganismos y considerado uno de los autores de la “teoría

microbiana”, quien empezó a cultivar y aislar microorganismos. Koch,

buscando mejorar la técnica utilizada hasta ese momento, decidió

solidificar los medios de cultivo añadiéndoles que puedan haber en

una muestra (medio sólido)

MEDIOS SEMISÓLIDOS

Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un

agente solidificante en una proporción menor que para preparar

medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación de la movilidad

de las bacterias.

Según su utilización:

a) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes

mínimos para que pueda crecimiento de bacterias que no

necesiten requerimientos especiales. El medio más conocido de

agar nutritivo o agar común, que resulta de la adición de agar al

caldo nutritivo. Otros representantes grupo son el agar tripticase

de soja, el agar Columbia, etc.

b) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las

sustancias nutritivas normales, serie de factores indispensables

para el crecimiento de microorganismos exigentes.

c) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el

crecimiento de ciertas bacterias una población polimicrobiana. El

fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente

de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio

selectivo es el caldo selenito, que favorecer el crecimiento de

salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

d) Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un

medio selectivo impiden toda una población microbiana, se

denomina inhibidor. Los medios inhibidores podrían considerarse

variante más restrictiva de los medios selectivos. Los medios

inhibidores se consiguen habitualmente de sustancias

antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el

desarrollo de determinada.

e) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia

características diferenciar géneros o especies. La adición de un

azúcar fermentable o un sustrato metabolizable este fin. El medio

MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los

gérmenes lactosa de aquellos que no lo hacen.

f) Medios de identificación: Son los destinados a comprobar

alguna cualidad específica que para reconocer la identidad de un

microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos

asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato

específico que vaya a ser metabolizado que nos muestre el

resultado.

g) Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran

cantidad de células a partir de un microorganismo aislado.

Seemplean en la obtención de vacunas, en la investigación y en

la industria. Los medios para la multiplicación suelen ser líquidos.

El caldo-infusión cerebro-corazón (BHI), es medios.

h) Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa

que, por diversas razones mantener. Fundamentalmente se

utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos

elLaboratorio de Microbiología.

II.2. ATENDIENDO A SU COMPOSICIÓN:

Según las sustancias que entren a formar parte en su composición,

los medios de cultivo pueden ser clasificados en:

Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los más

empleados se preparan a partir de tejidos animales, y más raramente

de vegetales. Su composición no es exactamente definida, y por

consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos

inconvenientes en condiciones experimentales, donde la

reproductibilidad no podrá ser exacta. En la práctica corriente estos

medios dan excelentes resultados y son los más empleados.

Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición

exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en agua

destilada en proporciones determinadas, resultando un medio de

composición perfectamente definida.

Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento

exigidos para ciertos gérmenes hace que la fabricación de un medio

sintético para estos gérmenes sea imposible o demasiado cara. En

este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un

extracto orgánico complejo (extracto de levadura, extracto de tejidos,

etc.).Ciertos gérmenes no crecen en ningún medio por muy

enriquecido que esté éste, haciéndolo exclusivamente en células

vivas con unas características determinadas. Ejemplos de este tipo

son, aparte de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc.

SEGÚN SU ORIGEN:

NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de

origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y

cuya composición química no se conoce exactamente.

SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición

química definida cuali ycuantitativamente. Se utilizan para obtener

resultados reproducibles.

SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factores

de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo,

como por ejemplo extracto de levadura.

II.3. MEDIOS DE CULTIVOS COMUNES.

II.3.1. Agar nutritivo:

El Agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina

para todo tipo de bacteria. Es muy util porque permanece solido incluso a

relativas altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este

agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias

pequeñas.

En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como

una sustancia espesa, con colonias difícilmente observables. El agar

nutritivo contiene normalmente (w/v).

0.5 % Peptona 0.3 % extracto de carne/extracto de levadura 1.5 % agar 0.5% NaCl Agua destilada pH casi neutro (6.8) a 25 °C.

Agar sangre:

• Medio de cultivo sólido

• Medio general enriquecido de aislamiento

• Compuesto por Agar base

• Columbia+Sangre de carnero o caballo

• Se añade la sangre después de esterilizar

-Aislamiento de bacterias exigentes

-Detección de hemólisis Es un medio de aislamiento especialmente

diseñado para facilitar el crecimiento de microorganismos exigentes.

-Está adaptado para el cultivo de la mayoría de las especies bacterianas,

con independencia de su metabolismo.

Agar chocolate.

• Medio de cultivo enriquecido

Se añade sangre de carnero o caballo antes de esterilizar

• Aislamiento de bacterias exigentes

Estreptococo alfa-hemolítico en medio Agar sangre

El agar chocolate se usa para cultivo de bacterias respiratorias fastidiosas como por ejemplo Haemophilus influenzae

II.3.2. Agar Selectivo.

AGAR MACCONKEY

• Lleva cristal violeta, lo que hace que sea selectivo y diferencial

• Inhibe el crecimiento de m.o Gram +

• Las colonias sospechosas de Shigella no fermentan a la lactosa

• Son incoloras y transparentes

• Otros microorganismos que fermentan a la lactosa (coliformes) son

colonias rosas o rojizas( Ejem: E.coli).

AGAR HEKTOEN

• Medio sólido

• Medio de aislamiento Selectivo

• Ideal para Salmonella y Shigella

Colonias verde-azuladas con o sin punto negro Salmonella

AGAR SABOURAUD

• Aislamiento selectivo de levaduras y hongos

• El pH del agar es ligeramente ácido, lo que favorece el crecimiento

fúngico más que el crecimiento bacteriano.

AGAR UREA CHRISTENSEN

• Es un medio sólido, diferencial y de identificación

• Se utiliza para diferenciar bacterias que hidrolizan o no la urea

Resultados:

-Positivo: de color rosa contienen la enzima ureasa.

-Negativo: de color amarillo no contienen la enzima ureasa.

AGAR KIA

• Medio sólido diferencial

• Se utiliza para diferenciar bacterias gram – especialmente

enterobacterias

• En base a la fermentación de glucosa y lactosa

• Posee un color anaranjado.

• Utiliza como indicador de pH el rojo fenol .

RESULTADOS

• 1-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el

microorganismo es no fermentador de azúcares.2-Pico ácido/fondo

ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta

glucosa, y lactosa.

• 2-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el

microorganismo solamente fermenta la glucosa.3-4,4A-La presencia de

burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo

produce gas.5-El ennegrecimiento del medio indica que el

microorganismo produce ácido sulfhídrico.

Agar Salmonella Shigella

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial

Es utilizado para el aislamiento de especies de Salmonella y Shigella a

partir de muestras clínicas y de alimentos

El color del medio preparado es rojo-naranja

AGAR MANITOL SAL

Medio sólido

Medio de cultivo selectivo y diferencial

Aislamiento selectivo de estafilococos

. En este medio las colonias de otros microorganismos que fermentan la lactosa son colonias rojizas y mucosas

El color del medio preparado es rojo-naranjaLas colonias son transparentes translúcidas u opacas y suelen ser lisas

AGAR CETRIMIDA

Medio sólido

Medio de aislamiento Selectivo

Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas

aeruginosa y de otras especies del género Pseudomonas

Los estafilococos que fermentan el manitol se visualizan como colonias amarillas

rodeadas de una zona del mismo color.

Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas,

rodeadas de una zona del mismo color o púrpura.

Las colonias características presentan una

pigmentación verde pálido espontánea y

fluorescencia verde bajo luz ultravioleta

III. MATERIALES Y METODOS

III.1. Lugar y fecha de la práctica

La presente práctica se realizó laboratorio de Sanidad Animal de la

Facultad de Zootecnia en la Universidad Nacional Agraria de la Selva

(UNAS) - Tingo María, Perú. Geográficamente, esta zona se

encuentra situada entre las cordilleras Central y Oriental. Esta

considerada como Bosque Tropical Húmedo Pre - montañoso,

ubicado en una latitud Sur 9° 17´ 58” y longitud Oeste 76° 01´ 07” a

665 m.s.n.m. El clima que presenta es tropical húmedo, la

temperatura media anual es de 24 °C.

III.2. Materiales

Placas petri

Agar universal

Agar Mac Conkey

Caldo de enriquecimiento

Baño maria

Mechero

III.3. Metodología

La práctica consistió en una breve explicación teórica por parte del

técnico encargado del laboratorio, adelantándonos de como iba a

realizarse la práctica, habiendo participación directa de los alumnos

para hacer la siembra de bacterias.

IV. RESULTADOS

Medio de cultivo

MOOS Importancia MOOS

E.M.B. Agar

Es utilizado para aislamiento selectivo de bacilos Gram

negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias

nutriciales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan

enfermedades. Los cocos Gram-negativos causan la gonorrea

(Neisseria gonorrhoeae), meningitis (Neisseria meningitidis)

y síntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre

otros. Los bacilos Gram-negativos incluyen un gran número de

especies. Algunos de ellos causan principalmente enfermedades

respiratorias (Haemophilus influenzae, Klebsiella

pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa), enfermedades

urinarias (Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae,

Serratia marcescens) y enfermedades gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella

enteritidis, Salmonella typhi). Otros están asociadas a

infecciones nosocomiales (Acinetobacter baumanii).

Mac Conkey agar

Se utiliza para el aislamiento de basilos Gram negativos de

fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos.

Estafilococo 110 Agar

Para el aislamiento y diferenciación preseuntiva de

estafilococos, en base a la producción de pigmentos, la fermentación de manitol y la hidrólisis de gelatina, a partir

de alimentos y otras muestras.

Staphylococcus (del griego σταφυλή, staphylē, "racimo de

uvas" y κόκκος, kókkos, "gránula") es un género de bacterias

estafilococáceas de la clase Cocci. Comprende microorganismos que están presentes en la mucosa y en la piel de los humanos y de otros

mamíferos y aves, incluyendo a 35 especies y 17 subespecies, muchas de las cuales se encuentran en los

humanos. Las especies que se asocian con más frecuencia a las enfermedades en humanos son

Staphylococcus aureus (el miembro más virulento y conocido

del género), Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus

saprophyticus, Staphylococcus capitis y Staphylococcus

haemolyticus

Sal y manitol agar

Medio de cultivo selectivo y diferencia, utilizado para el

aislamiento y diferenciación de estafilococos.

Caldo tetranionato

Utilizado para el enriquecimiento selectivo de

salmonella spp. A partir de heces, orina, alimentos y otros

materiales de importancia sanitaria.

Salmonella shigella agar

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. Y de algunas especies de

Shigella spp. A partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su

presencia.

Mueller hinton agar

Ha sido recomendado universalmente para la prueba

de sensibilidad a los antimicrobianos.

Un antimicrobiano es una sustancia que mata o inhibe el crecimiento de microbios, tales

como las bacterias, hongos, parásitos o virus. Basado en ello, los siguientes pueden referirse a

agentes microbianos: Antibióticos, Antifúngicos, Antiparásitos entro

los cuales están los: Antihelmínticos, Antivirales.

Urea

Medio utilizado para la identificación de

microorganismos en base a la actividad ureásica. Es

particularmente útil para diferenciar Proteus spp. De

otros miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Las infecciones de vías urinarias son causadas por una especie

bacteriana única en más de 95% de los casos. Existe una gran

diferencia entre la flora bacteriana urinaria en los pacientes con un episodio inicial y la observada en

los pacientes con infecciones recurrentes. Escherichia coli es

común en el primer grupo, Proteus

VI. DISCUSION

En la preparación de medios de cultivos en forma líquida (caldo nutritivo) y

sólida (gelificantes) se trata es de conseguir un medio que reúna las

condiciones fisiológicas necesarias para que las células se desarrollen. Los

parámetros más importantes a tener en cuenta son la presencia de agua, la

temperatura, el pH y el oxígeno. Los medios de cultivo pueden ser sólidos,

semisólidos o líquidos, con composición química conocida o indefinida.

VII. CONCLUCION

Al finalizar el trabajo práctico estamos en capacidad y condiciones de: Preparar

adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a partir de

medios de cultivo deshidratados. El medio de cultivo líquido (caldo nutritivo) y

gelificante fue preparado específicamente para el aislamiento de salmonella

shigella bacteria estudiada y posteriormente aislada.

VII. BIBLIOGRAFIA

BANKS W. HISTOLOGÍA VETERINARIA APLICADA. Editorial el manual

moderno. México. 1986

Biblioteca de Consulta Microsoft ® Encarta ® 2005 © 1993-2004 Microsoft

Corporation. Reservados todos los derechos.

http://www.ucv.ve/Farmacia/Micro_web/Catedras02/medicult.pdf

http://www.geocities.com/CapeCanaveral/Hall/3081/natural/caldo.htm