“Año de la Diversificación Productiva y del Fortalecimiento de la Educación”

CITOLOGÍA SANGUINEA

INFORME PRÁCTICO

TEMA: TINCION DE WRIGTH

DOCENTE :Blgo. Alfonso Bernuy Rodríguez

ALUMNO :Sáenz Mayanchi Sergio

ESPECIALIDAD :Laboratorio Clínico

SEMESTRE :V

Iquitos – Perú2015

PRACTICA Nº 01

TINCION DE WRIGTH

INTRODUCCIÓN

Para el estudio satisfactorio del frotis sanguíneos, es necesario colorearlos. En la mayoría de los laboratorios los colorantes más empleados para la tinción hematológica se basan en el de Romanowsky constituido fundamentalmente con la mezcla de eosina (ácido) y azul de metileno (básico). Además se han incorporado el empleo de derivados por oxidación del azul de metileno que se conoce con el nombre de azures (A, B, C). Son los azures los responsables de la coloración púrpura o roja de ciertas estructuras.

Tanto la eosina como el azul de metileno son muy sensibles a las variaciones de pH de las diferentes estructuras celulares, de forma que las que tienen carácter básico fijan la eosina mientras que las que poseen propiedades ácidas fijan principalmente el azul de metileno. Esto explica que las estructuras basófilas se tiñan de color azul mientras que los competente acidófilas adquieren un color rosado. La diferente afinidad de ciertas granulaciones citoplasmáticas por dichos colorantes permite clasificar a los leucocitos polimorfonucleares.

TINCIÓN DE WRIGHT

Esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios colores. Es una solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro básico (azul de metileno). El alcohol sirve como un fijador del frotis sanguíneo al portaobjetos. El amortiguador, que consiste en una solución tamponada, mantiene el pH del colorante y favorece la mejor absorción por los diferentes componentes celulares.

La tinción de Wright. Es de gran trascendencia clínica ya que gracias a ella es capaz de identificarse diversas estructuras en una célula así como la morfología y en su caso patología celular no solo de las células del sistema inmunológico sino de todas aquellas que componen la sangre ya sea en un paciente sano o con un estado patológico.

OBJETIVO

Identificar diversas células del Sistema Inmunológico. Realizar el diferencial leucocitario del paciente al que se le realizó el frotis sanguíneo

Conocer las propiedades de las diferentes tinciones usadas para realizar el frotis sanguíneo.

Conocer y entender cada uno de los pasos necesarios para realizar el frotis sanguíneo.

Familiarizarse con el material de laboratorio y aprender su manipulación.

MATERIALES

Colorante Wright Laminas porta objeto Laminas cubre objetos Aceite de inmersión Agua destilada Gotero Rejilla

Materiales extracción de muestra:

Guantes Algodón Ligadura Jeringa Tubo lila con EDTA Plumón Alcohol Capilar

EQUIPO

o Microscopio óptico con luz incorporada.

MUESTRA

Sangre periférica

PRACTICA Nº 01

TINCION DE WRIGTH

EXTRACCIÓN DE LA MUESTRA SANGUÍNEA.

Cuando el paciente esté cómodo echamos un vistazo a sus brazos para decidir un sitio para la punción. El brazo debe ser extendido y lo relajado posible. 

Palpamos la vena para averiguar sus características (tamaño, elasticidad o rigidez, determinar si de desplaza o no) y su curso.

Limpiamos con alcohol la zona elegida para la punción. Colocamos el torniquete, este puede ayudarnos para decidir dónde pincha, pedir

al paciente de cerrar el puño para aumentar el volumen de sangre intravenosa (Un tiempo de compresión demasiado largo causa la acumulación de sangre y ciertas sustancias en la vena que pueden alterar el resultado de algunas de las pruebas.) 

Tomamos la aguja con el bisel hacia arriba y puncionamos la piel muy suave y rápido movimiento. Pedimos al paciente que abra la mano.

Cuando hemos llenado y quitado el tubo, soltamos el torniquete y colocamos una gaza o algodón sobre el sitio de la punción. Retiramos con cuidado la aguja. Cuando ésta haya salido del brazo del paciente ejercemos presión en la gaza para impedir que salga la sangre.

Por ultimo rotulamos adecuadamente el tubo y lo llevamos al laboratorio.

PRACTICA Nº 01

TINCION DE WRIGTH

METODOLOGÍA

Obtenida la muestra sanguínea procedemos a:

Preparar todo nuestro material y equipos de trabajo. Limpiamos la lámina porta objeto para evitar grasas. Con un gotero o un capilar obtenemos la muestra, y procedemos a colocar una

gota sobre el porta objeto Con otra lámina (biselada) realizamos el frotis de esta. El extendido debe tener

cabeza, cuerpo y cola. Rotulamos la lamina Dejamos secar la lámina con el extendido sobre ella a medio ambiente Ya seca la lámina colocamos sobre una rejilla la lámina y con el gotero

absorbemos el colorante Wright y cubrimos toda la superficie de la lámina. Realizado esto, colocamos de 1 a 3 gotas de agua destilada sobre el colorante,

hasta que este forme un verde metálico. Esperamos 10 minutos. Luego lavamos con agua de grifo la lámina con chorro leve. Sin tratar de que el

chorro dañe la tinción. Dejamos secar. Ya seco. Colocamos una gota de aceite de inmersión sobre la tinción y ponemos

a observar al microscopio con el objetivo de inmersión 100x, condensador abierto y diafragma arriba.

OBSERBACIONES EN EL MICROSCOPIO

RESULTADOS:

o Los eritrocitos se observarán de color naranja o rosado. o El citoplasma de los monocitos presentarán una tonalidad azul grisácea con

gránulo rojizos bastante finos y sus vacuolas características. El citoplasma de los linfocitos presentará varias tonalidades azules. Los núcleos de los linfocitos y neutrófilos aparecerán de color púrpura oscuro. Los núcleos de los monocitos de color púrpura algo más claros (lila).

o Los gránulos de los eosinófilos son de color rojo-anaranjado intenso. Los gránulos de los basófilos púrpura azulado muy oscuro. Los gránulos de los neutrófilos se aprecian de color lila, bastante finos.

o Las plaquetas toman coloración violeta o púrpura.

OBSERVACIONES:

Los tiempos varían de acuerdo a cada lote o tiempo de maduración del colorante. De ahí que si los frotis recién teñidos resultan demasiado pálidos se corrige aumentando el tiempo de tinción o disminuyendo el tiempo de lavado.

Si en la preparación se observa precipitados de colorante puede ser debido a varias causas: lavado insuficiente al final del proceso, utilización de porta o cubreobjetos sucios, mala filtración del colorante, mala distribución del colorante a lo largo de la extensión por no mantenerse en posición horizontal.

Durante la tinción el tampón fosfato controla el pH del colorante. Si el colorante es demasiado ácido la extensión resultará demasiado rojiza y si por el contrario es demasiado alcalina la precipitación presentará un aspecto azulado.