Tema propuesto: Identificación de genes potenciales relacionados con el eflujo de membrana de...
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Tema propuesto: Identificación de genes potenciales relacionados con el eflujo de
membrana de Mycobacterium tuberculosis utilizando herramientas bioinformáticas
Título del Proyecto: Identificación de genes homólogos a EmrB (de Escherichia coli) como genes potenciales relacionados con el flujo de salida de Ácido Pirazinóico en Micobacterium
tuberculosis
Pirazinamida Nicotinamida
PZA
Introducción
Resistencia: mutaciones en PZasa Resistencia: sin mutaciones y con actividad intacta
PZA
Introducción
+ H2O + NH4+PZasa
Monica Pajuelo Travezaño:
Prodroga
Enzima PZAsa
Monica Pajuelo Travezaño:
Prodroga
Enzima PZAsa
Antecedentes
1. Mecanismo de acción de la PZA
Mutación en PZasa ¿Bombas de flujo de salida involucradas? M. smegmatis:
Tiene dos PZasas activas Frente a inhibidores de transportadores: reserpina,
valinomicina, las cepas se hacen sensibles
Antecedentes
2. Resistencia a la PZA
Objetivos
Identificar genes homólogos a EmrB de E. coli relacionados con el flujo de salida de ácidos orgánicos débiles o de drogas en M. tuberculosis
Verificar que los posibles genes contribuyan con el flujo de salida de POA en M. tuberculosis
Objetivos
Planteamiento del Experimento
Búsqueda de genes homólogos a Emrb de E. coli
Búsqueda de genes homólogos a Emrb de E. coli
Uso de COG
Búsqueda en TubercuList
Predicción de Segmentos Transmembrana
Predicción de Segmentos Transmembrana
Uso de TMpred
Resultados PreliminaresResultados Preliminares
Planteamiento del Experimento
Acumulación de POA
Acumulación de POA
Uso de sustrato radiactivo marcado con C14
Determinación de la sensibilidad a PZA/POA
Determinación de la sensibilidad a PZA/POA
Determinación de MIC
Knockout de genesKnockout de genesRecombinación genética homóloga
Determinación de la actividad de PZasa
Determinación de la actividad de PZasa
Método de Wayne
Planteamiento del Experimento