Taller 5. Normativa de contaminantes biológicos · como control rutinario del polen en el aire,...
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Taller 5. No contaminante Normalización de muestreo y análisis muestreo y análisis Montserrat Gutiérrez Bustillo. Profeso Complutense ormativa de es biológicos e los métodos de s aeropalinológicos. s aeropalinológicos. ora Titular de Botánica. Universidad e de Madrid.
Transcript of Taller 5. Normativa de contaminantes biológicos · como control rutinario del polen en el aire,...
Taller 5. Normativa de contaminantes biológicos
Normalización de los métodos de muestreo y análisis muestreo y análisis
Montserrat Gutiérrez Bustillo. Profesora Titular de Complutense de Madrid.
Taller 5. Normativa de contaminantes biológicos
Normalización de los métodos de muestreo y análisis aeropalinológicos.muestreo y análisis aeropalinológicos.
Montserrat Gutiérrez Bustillo. Profesora Titular de Botánica. Universidad Complutense de Madrid.
� En Europa y también en España, el análisis polínico atmosférico como control rutinario del polen en el aire, viene utilizándose desde 1990 aproximadamente.
� Los métodos de ensayo utilizados en la toma de mues tras y en su posterior análisis generalmente siguen las normas d adas por la
Normalización de los métodos de muestreo y análisis aeropalinológicos
posterior análisis generalmente siguen las normas d adas por la International Association for Aerobiology (IAA).
� En España, las estaciones integradas en la Red Espa ñola de Aerobiología (REA), siguen en sus procedimientos de muestreo y análisis su Manual de Calidad y Gestión
Galán Soldevilla, C., Cariñanos González, P., Alcázar Teno, P. & Domínguez Vilches, E.Domínguez Vilches, E.Española de Aerobiología. 61 pags. + CD. Servicio de Publicaciones. Universidad de Córdoba. ISBN 978
En Europa y también en España, el análisis polínico atmosférico como control rutinario del polen en el aire, viene utilizándose desde 1990 aproximadamente.Los métodos de ensayo utilizados en la toma de mues tras y en su posterior análisis generalmente siguen las normas d adas por la
Normalización de los métodos de muestreo y análisis aeropalinológicos
posterior análisis generalmente siguen las normas d adas por la International Association for Aerobiology (IAA).En España, las estaciones integradas en la Red Espa ñola de Aerobiología (REA), siguen en sus procedimientos de muestreo y análisis su Manual de Calidad y Gestión
Galán Soldevilla, C., Cariñanos González, P., Alcázar Teno, P. & Domínguez Vilches, E.-2007-Manual de calidad y gestión de la Red Domínguez Vilches, E.-2007-Manual de calidad y gestión de la Red Española de Aerobiología. 61 pags. + CD. Servicio de Publicaciones. Universidad de Córdoba. ISBN 978-84-690-6354-5
Hasta el momento son muy pocos los intentos realiza dos parala normativa internacional de calidad a estos ensayos.
En España:
Normalización de los métodos de muestreo y análisis aeropalinológicos
El Laboratorio Municipal de Aranjuez implantó un Sistema de gestión de Calidad, en base a la Norma UNECertificación ISO 9001:2000, nº ES05/1709 para identificación de polen en la atmósfera”
El Laboratorio Normativo de Salud Pública de Bilbao solicitó a ENAC en El Laboratorio Normativo de Salud Pública de Bilbao solicitó a ENAC en 2006 y obtuvo la Acreditación , según la Norma UNE17025:2005 para el ensayo “Identificación y recuento de tipos polínicos en aire ambiente”
Hasta el momento son muy pocos los intentos realiza dos para aplicar la normativa internacional de calidad a estos ensayos.
Normalización de los métodos de muestreo y análisis aeropalinológicos
El Laboratorio Municipal de Aranjuez implantó un Sistema de gestión de Calidad, en base a la Norma UNE-EN ISO 9001, obteniendo la
ISO 9001:2000, nº ES05/1709 para “El recuento e identificación de polen en la atmósfera”
El Laboratorio Normativo de Salud Pública de Bilbao solicitó a ENAC en El Laboratorio Normativo de Salud Pública de Bilbao solicitó a ENAC en , según la Norma UNE-EN ISO/IEC
17025:2005 para el ensayo “Identificación y recuento de tipos polínicos en
En relación a la normalización de la metodología, e l análisis polínico atmosférico puede considerarse un “Ensayo de Labora torio” en el “Sector medioambiental” .
Normalización de los métodos de muestreo y análisis aeropalinológicos
“Ensayos en el sector medioambiental”químicos, microbiológicos, ecotoxicidadquímicos, microbiológicos, ecotoxicidadque se llevan a cabo sobre aguas,residuos, foliares, biota, así comoy atmósfera laborales, junto conmuestreo.
ALCANCE DE ACREDITACIÓN:Norma de referencia/Reference standarsTítulo/Title: Identificación y recuento de tipos polínicos en air e Título/Title: Identificación y recuento de tipos polínicos en air e ambienteÁREA: CALIDAD DEL AIRECATEGORÍA: Categoría 0 (Ensayos en Laboratorio Permanente)Producto o material a ensayar: Describir el producto o matriz a ensayar, definiéndolo tanto como sea preciso
En relación a la normalización de la metodología, e l análisis polínico atmosférico puede considerarse un “Ensayo de Labora torio” en el
Normalización de los métodos de muestreo y análisis aeropalinológicos
medioambiental” . Incluye ensayos físico-ecotoxicidad, biológicos, toma de muestrasecotoxicidad, biológicos, toma de muestrasaguas, lixiviados, suelos, lodos, sedimentos,como emisiones atmosféricas, aire ambiente
con sus correspondientes soportes de
ALCANCE DE ACREDITACIÓN:standars: UNE-EN ISO/IEC 17025: 2005
Identificación y recuento de tipos polínicos en air e Identificación y recuento de tipos polínicos en air e
Categoría 0 (Ensayos en Laboratorio Permanente)Describir el producto o matriz a ensayar,
definiéndolo tanto como sea preciso
Las muestras diarias son preparaciones microscópicas, que un técnico analiza al microscopio óptico (M.O.), identificando y contando los granos de polen presentes en la muestra. Se trabaja a 400 aumentos (Ocular 10x; Objetivo 40x)
¿Cómo se muestrea y analiza el polen atmosférico?son preparaciones microscópicas, que un técnico analiza al
microscopio óptico (M.O.), identificando y contando los granos de polen presentes en la muestra. Se trabaja a 400 aumentos (Ocular 10x; Objetivo 40x)
¿Cómo se muestrea y analiza el polen atmosférico?
Granos de polen
� La identificación se basa en la morfología de estas partículas, que es específica
Es un análisis cualitativo y cuantitativo
partículas, que es específica para determinados grupos de plantas u hongos productores
� Como resultado del análisis de cada muestra obtenemos una relación de tipos morfológicos de polen (espectro diario) cuantificados mediante el valor medio diario mediante el valor medio diario de estas partículas por metro cúbico de aire.
Es un análisis cualitativo y cuantitativo
Informe de resultados
ALCANCE DE ACREDITACIÓN:
Detallar el parámetro o parámetros a ensayar En nuestro caso los tipos polínicos
ACER AcerALNU AlnusALNU AlnusARTE ArtemisiaBETU BetulaCAST CastaneaCOMP CompositaeCORY CorylusCUPR Cupress/TaxCHEN Chenop/AmarantERIC EricaceaeEUCA EucaliptusEUCA EucaliptusFRAX FraxinusLIGU LigustrumMORA Moraceae
ALCANCE DE ACREDITACIÓN:
Detallar el parámetro o parámetros a ensayar tipos polínicos a identificar y contar
OLEA OleaPINU PinaceaePINU PinaceaePLAN PlantagoPLAT PlatanusPOAC PoaceaePOPU PopulusQUER Quercus RUME RumexSALI SalixULMU UlmusURTI UrticaceaeURTI UrticaceaeOTROS:No identificadosTOTALES:
BROU Brousonetia ssp.MORA MoraceaeMORU Morus ssp.
Definición y delimitación del tipo polínico
MORU Morus ssp.
A la familia Moraceae pertenecen los géneros Morus y Brousonetia, con algunas especies utilizadas como ornamentales (M. nigra, M. alba y B. papirifera principalmente). El polen es di-trizonoporado, isopolar y de tamaño pequeño (Broussonetia 14-15 micras) a mediano (Morus 20-24 micras). mediano (Morus 20-24 micras).
Broussonetia
Definición y delimitación del tipo polínico
pertenecen los con
B. El polen es y de tamaño 15 micras) a
Morus
TIPO POLÍNICO TÁXONCEDR Cedrus ssp. (PinaceaePINA Pinaceae
Definición y delimitación del tipo polínico
PINU Pinus ssp. (Pinaceae
Polen de Cedrus, muy grande de 80el de Pinus algo mas pequeño (50
Pinaceae)
Definición y delimitación del tipo polínico
Pinaceae)
muy grande de 80-110 micrasalgo mas pequeño (50-80 micras)
Indicar los límites de detecciónrango de medida en los ensayos cuantitativos, de acuerdo a los siguientes criterios:
Análisis culitativo y cuantitativo
Límite de detección . Para los análisis cualitativos indicar únicamente este límite
Rango de medida. Para análisis cuantitativos indicar siempre el límite Inferior del rango de medida (límite de cuantificación). Además, incluir el límite superior cuando existan limitaciones técnicas debidas a equipos, materiales de referencia o patrones que utiliza el laboratorio
En el caso particular de ensayos microbiológicos y biológicos no será necesario incluir el rango de medida.
límites de detección en los ensayos cualitativos y el en los ensayos cuantitativos, de acuerdo a
Análisis culitativo y cuantitativo
. Para los análisis cualitativos indicar
Para análisis cuantitativos indicar siempre el límite Inferior del rango de medida (límite de cuantificación). Además, incluir el límite superior cuando existan limitaciones técnicas debidas a equipos, materiales de referencia o patrones
ensayos microbiológicos y no será necesario incluir el rango de medida.
Es un análisis cualitativo y cuantitativo
� Los granos de polen son partículas tridimensionales de tamaño y forma variable dispersas de forma no homogénea en el aire
� Durante el muestreo los granos de polen presentes en el aire quedan adheridos a la superficie de la muestra
� En la muestra de polen atmosférico, el análisis al Microscopio Óptico nos permite conocer el número de granos de polen que han quedado permite conocer el número de granos de polen que han quedado adheridos a una parte, estadísticamente representativa, de la superficie total de la muestra (“análisis cuantitativo”)
� Por su morfología adscribimos estos granos de polen a un determinado tipo polínico (“análisis cualitativo)
Los resultados del análisis cuantitativo se expresan mediante dos valores numéricos:1. la concentración media de 1. la concentración media de
a lo largo de un día2. la incertidumbre que está asociada a la dispersión del
resultado o intervalo dentro del cual tenemos cierta fiabilidad de que se encuentra el valor verdadero
Es un análisis cualitativo y cuantitativo
Los granos de polen son partículas tridimensionales de tamaño y forma variable dispersas de forma no homogénea en el aireDurante el muestreo los granos de polen presentes en el aire quedan adheridos a la superficie de la muestraEn la muestra de polen atmosférico, el análisis al Microscopio Óptico nos permite conocer el número de granos de polen que han quedado permite conocer el número de granos de polen que han quedado adheridos a una parte, estadísticamente representativa, de la superficie total de la muestra (“análisis cuantitativo”)Por su morfología adscribimos estos granos de polen a un determinado tipo polínico (“análisis cualitativo)
Los resultados del análisis cuantitativo se expresan mediante dos valores numéricos:
la concentración media de granos de polen/m3 de aire la concentración media de granos de polen/m3 de aire
la incertidumbre que está asociada a la dispersión del resultado o intervalo dentro del cual tenemos cierta fiabilidad de que se encuentra el valor verdadero
Análisis cuantitativo 1. El límite de cuantificación es de 1 grano de polen/ m2. No existe ningún procedimiento idóneo para el cálcu lo de la
incertidumbre de medida en el análisis polínico atm osférico
Guía para la expresión de la incertidumbre en los ensayos cuantitativos
En todos los laboratorios que actualmente realizan análisis polínico atmosférico se utiliza como límite mínimo de detección un grano de
Guía para la expresión de la incertidumbre en los ensayos cuantitativos(G-ENAC-09/Rev. 1 Julio 2005)
“En este documento se considera sólo la incertidumbre de medida en los ensayos cuantitativos. La comunidad científica tiene todavía que formular una estrategia para los resultados de los ensayos cualitativos”.
atmosférico se utiliza como límite mínimo de detección un grano de polen/m 3 de aire , y en ningún caso se utiliza un
El límite de cuantificación es de 1 grano de polen/ m3 de aireNo existe ningún procedimiento idóneo para el cálcu lo de la incertidumbre de medida en el análisis polínico atm osférico
Guía para la expresión de la incertidumbre en los ensayos cuantitativos
En todos los laboratorios que actualmente realizan análisis polínico límite mínimo de detección un grano de
Guía para la expresión de la incertidumbre en los ensayos cuantitativos
En este documento se considera sólo la incertidumbre de medida en los ensayos cuantitativos. La comunidad científica tiene todavía que formular una estrategia para los resultados de los ensayos cualitativos”.
límite mínimo de detección un grano de caso se utiliza un límite superior
� Dadas las características del muestreo y el análisis, la probabilidad de detectar en la muestra la presencia de un solo grano de polen/mes muy alta
� Es muy frecuente que un tipo polínico alcance niveles de concentración media diaria superiores a los 1000 granos de polen/m
Mediante un cálculo matemático muy simple que relaciona:
Análisis cuantitativo
Mediante un cálculo matemático muy simple que relaciona:• superficie total de captación de la muestra • superficie media de un grano de polen
para que la muestra llegara a estar saturada habría que recoger 640.000 granos de polen, que aproximadamente equivalen a 44 .000 granos de polen/m 3 de aire/día
� Los resultados que habitualmente se obtienen quedan muy lejos de esas � Los resultados que habitualmente se obtienen quedan muy lejos de esas cifras.
Por ello, y por la ausencia de legislación al respe cto, no parece necesario fijar un nivel máximo de detección. Simplemente deb e darse el valor numérico obtenido en el análisis, para cada tipo po línico.
Dadas las características del muestreo y el análisis, la probabilidad de detectar en la muestra la presencia de un solo grano de polen/m3 de aire,
Es muy frecuente que un tipo polínico alcance niveles de concentración media diaria superiores a los 1000 granos de polen/m3
Mediante un cálculo matemático muy simple que relaciona:Mediante un cálculo matemático muy simple que relaciona:superficie total de captación de la muestra (672 x 106 micras 2)superficie media de un grano de polen (35x30= 1050 micras 2)
para que la muestra llegara a estar saturada habría que recoger 640.000 granos de polen, que aproximadamente equivalen a 44 .000 granos de
Los resultados que habitualmente se obtienen quedan muy lejos de esas Los resultados que habitualmente se obtienen quedan muy lejos de esas
Por ello, y por la ausencia de legislación al respe cto, no parece necesario fijar un nivel máximo de detección. Simplemente deb e darse el valor numérico obtenido en el análisis, para cada tipo po línico.
Análisis cualitativo
El resultado de un análisis cualitativo también se caracteriza por dos valores:1. el primero corresponde a la respuesta binaria SI/NO, en nuestro caso
PRESENCIA/AUSENCIA de un determinado “tipo polínico”2. es la probabilidad de error asociada a la decisión que hemos tomado.2. es la probabilidad de error asociada a la decisión que hemos tomado.
En nuestro caso los parámetros de calidad aplicable s, deberían medir el riesgo de identificación errónea, directam ente relacionado con la posibilidad de discriminación de los tipos p olínicos por su particular morfología (comparación con un patrón).
Para que la probabilidad de error sea pequeña es muy importante:Para que la probabilidad de error sea pequeña es muy importante:1. La formación específica de los Técnicos de Laboratorio que realizan
los análisis. Este requisito es el más importante
2. La comparación con los materiales de referencia (Requisitos de calidad) un patrón
El resultado de un análisis cualitativo también se caracteriza por dos
el primero corresponde a la respuesta binaria SI/NO, en nuestro caso PRESENCIA/AUSENCIA de un determinado “tipo polínico”es la probabilidad de error asociada a la decisión que hemos tomado.es la probabilidad de error asociada a la decisión que hemos tomado.
En nuestro caso los parámetros de calidad aplicable s, deberían medir el riesgo de identificación errónea, directam ente relacionado con la posibilidad de discriminación de los tipos p olínicos por su particular morfología (comparación con un patrón).
Para que la probabilidad de error sea pequeña es muy importante:Para que la probabilidad de error sea pequeña es muy importante:La formación específica de los Técnicos de Laboratorio que realizan los análisis. Este requisito es el más importante
materiales de referencia (Requisitos de
Requisitos de calidad del material de referencia
Nuestros materiales de referencia, para la
atmosférico van a ser:
1. Los pliegos de herbario con las muestras de las pla ntas que nos han 1. Los pliegos de herbario con las muestras de las pla ntas que nos han servido para la obtención del polen, debidamente et iquetados.
2. Las preparaciones polínicas para M.O. correspondien tes a los tipos polínicos a identificar y que integran la palinotec a.
1. Debe estar a cargo de un profesional calificado responsable de la compra, recepción y distribución.
Somos nuestros propios proveedores
1. Se debe mantener un registro central o archivo que contenga toda la información relativa a las propiedades del material de referencia.
2. Se debe verificar la calidad del material de referencia cuando las condiciones hayan sido alteradas y rutinariamente, una vez al año.
Requisitos de calidad del material de referencia
Nuestros materiales de referencia, para la identificación del polen
Los pliegos de herbario con las muestras de las pla ntas que nos han Los pliegos de herbario con las muestras de las pla ntas que nos han servido para la obtención del polen, debidamente et iquetados.
Las preparaciones polínicas para M.O. correspondien tes a los tipos polínicos a identificar y que integran la palinotec a.
Debe estar a cargo de un profesional calificado responsable de la compra, recepción y distribución.
Somos nuestros propios proveedores
Se debe mantener un registro central o archivo que contenga toda la información relativa a las propiedades del material de referencia.
Se debe verificar la calidad del material de referencia cuando las condiciones hayan sido alteradas y rutinariamente, una vez al año.
El captador volumétrico succiona un cierto volumen de aire (10 litros en la superficie de captación.Las esporasadheridas a la superficie captadora que se desplaza a
PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO PARA LA TOMA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS CON EL CAPTADOR VOLUMÉTRICO
adheridas a la superficie captadora que se desplaza a una velocidad uniforme de 2 mm/hora mediante un mecanismo de relojería.
� Condiciones para la ubicación del captador� Mantenimiento� Verificación del flujo de succión� Criterios de validación de muestras
El captador volumétrico succiona un cierto volumen de (10 litros ±1 por minuto) que incide directamente
en la superficie de captación.esporas y los granos de polen presentes quedan
adheridas a la superficie captadora que se desplaza a
PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO PARA LA TOMA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS CON EL CAPTADOR VOLUMÉTRICO
adheridas a la superficie captadora que se desplaza a una velocidad uniforme de 2 mm/hora mediante un mecanismo de relojería.
Condiciones para la ubicación del captadorMantenimientoVerificación del flujo de succiónCriterios de validación de muestras
PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO PARA EL RECUENTO E IDENTIFICACION DEL POLEN ATMOSFÉRICO
� El método de recuento que generalmente se utiliza es el de 4 barridos horizontales continuos a lo largo de toda la preparación a 40x10 aumentos
� Estos barridos deben ser equidistantes entre si y del borde de la � Estos barridos deben ser equidistantes entre si y del borde de la preparación en el caso del primer y último barrido
� La superficie analizada corresponde al 10
PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO PARA EL RECUENTO E IDENTIFICACION DEL POLEN ATMOSFÉRICO
El método de recuento que generalmente se utiliza es el de 4 barridos horizontales continuos a lo largo de toda la preparación a 40x10
Estos barridos deben ser equidistantes entre si y del borde de la Estos barridos deben ser equidistantes entre si y del borde de la preparación en el caso del primer y último barridoLa superficie analizada corresponde al 10-12 % de superficie total
Muchas gracias a todos por su Muchas gracias a todos por su atención!
Muchas gracias a todos por su Muchas gracias a todos por su atención!
