Curso de Microbiología 2010 – Facultad de

Agronomía

Siembra y aislamiento

Práctico 3

� En la naturaleza los microorganismos crecen en

poblaciones mixtas y complejas, que contienen varias

especies

� Para estudiar un microorganismo en el laboratorio se

requiere tener un cultivo puro, es decir, con un solo

tipo de microorganismo.

� Técnica aséptica: técnica usada para evitar la

contaminación durante la manipulación de

cultivos y de medios de cultivos

Técnica aséptica

a. El ansa se calienta hasta la

incandescencia y se enfría al aire,

cerca del mechero

b. El tubo se destapa cerca del mechero

c. Se flamea el extremo del tubo por la

llama

d. Se extrae la muestra con el ansa

esterilizada

e. Tras tomar la muestra, se vuelve a

flamear el extremo del tubo y la

muestra se deposita en un medio

estéril

f. Se vuelve a tapar el tubo. El ansa se

recalienta de nuevo antes de finalizar

su utilización

Siembra� Es la incorporación a un medio de cultivo de una muestra

(inóculo), con propósitos cuantitativos o cualitativos

� Los propósitos de la siembra pueden ser: obtener un nuevo cultivo

fresco, determinar alguna propiedad del microorganismo u

obtener un cultivo puro (AISLAMIENTO)

� Siembra en placa:

� Por estría

� Por inclusión

� Por extensión o bañado

� Siembra en tubos:

� Con agar inclinado

� Con medio sólido horizontal

� Con medio semisólido

� Con medio líquido

Repiques� Objetivo: hacer crecer el microorganismo en un medio de

cultivo dado para conocer su metabolismo, su producción

de pigmentos o simplemente conservarlo

� Transferencia de cultivos microbianos de medio sólido a

sólido, de medio sólido a medio líquido, de medio líquido

a líquido y de medio líquido a medio sólido

Ejemplo de siembra en tubos Aislamiento

Objetivo: obtener un cultivo puro de un

microorganismo a partir de un cultivo mixto

Métodos:

•Directo-•estrías, •inclusión o •bañado

•Indirecto- enriquecimiento previo

Aislamiento por agotamientoSiembra por estría� Se inocula la muestra sobre un extremo de la placa con

un ansa y se extiende formando estrías sobre la

superficie en varios sentidos, cada célula aislada se

multiplicará formando una colonia independiente, cada

colonia representa un cultivo puro.

Aislamiento por diluciónSiembra en inclusión

Aislamiento por diluciónSiembra por extensión o bañado

� Se extiende el inóculo uniformemente con una varilla

acodada estéril por la superficie del medio de cultivo.

Las células diseminadas sobre la superficie formarán

colonias aisladas

Enriquecimiento� Permite aislar microorganismos que se encuentran en bajo

número en una muestra compleja (ejemplo: suelo, leche,

agua)

� Los métodos de siembra pueden combinarse con el uso de

medios selectivos o diferenciales para enriquecer y aislar

microorganismos poco frecuentes

1er paso: enriquecimiento en

líquido

2º paso: siembra en sólido

Todo aislamiento concluye con la obtención de colonias aisladas � Pueden ser de forma y tamaño variable dependiendo

del organismo, las condiciones de cultivo, suministro

de nutrientes y otros parámetros fisiológicos.