Regulacin de las Uniones Estrechas en el Epitelio de la Va Respiratoria Superior

AbstractoLa barrera de la mucosa del tracto respiratorio superior incluyendo la cavidad nasal, que es el primer sitio de la exposicin a antgenos inhalados, juega un papel importante en la defensa del husped en trminos de la inmunidad innata y est regulado en gran parte por uniones estrechas de clulas epiteliales. Molculas de unin estrecha se expresan tanto en las clulas M y clulas dendrticas, as como clulas epiteliales de la va area superior. Varios antgenos se muestrean, transportados y entregados a los linfocitos a travs de las clulas en la mucosa nasal, mientras que mantienen la integridad de la barrera. Expresin de molculas de unin estrecha y la funcin de barrera en las clulas normales humanos nasales epiteliales (HNECs) se ven afectados por diversos estmulos incluyendo el factor de crecimiento, TLR ligando, y citoquinas. Adems, epiteliales derivadas de linfopoyetina estromal tmica (TSLP), que es un interruptor principal para las enfermedades inflamatorias alrgicas incluyendo rinitis alrgica, mejora la funcin de barrera junto con un aumento de las molculas de unin estrecha en HNECs. Adems, la infeccin por el virus respiratorio sincitial en HNECs in vitro induce la expresin de molculas de unin estrecha y la funcin de barrera junto con la liberacin de citoquinas proinflamatorias. Este documento resume los recientes avances en nuestra comprensin de la regulacin de las uniones estrechas en el epitelio de las vas respiratorias superiores en condiciones normales, alrgicas, y infectados por VRS.1. IntroduccinEl epitelio en el tracto respiratorio superior consiste en clulas epiteliales ciliadas cilndrico pseudoestratificado, incluyendo las clulas M (clulas membranosas o micropliegues), que son especializado para captacin de antgenos y forman una barrera continua contra una amplia variedad de antgenos exgenos [1-5], y dendrticas clulas (DC), que ocupan antgenos transportados a travs de las clulas M y antgenos presentes para clulas T CD4+,mientras que mantienen la integridad de la barrera epitelial de las vas respiratorias [6-8].El epitelio juega un papel crucial como una interfaz de respuestas de adaptacin y las respuestas innatas a travs de las uniones estrechas para evitar la invasin de agentes ambientales inhalados, como los alrgenos y patgenos (Figura 1).Adems, en la mucosa nasal humana de la rinitis alrgica o la infeccin por virus, se han conocido cambios dinmicos de uniones estrechas.

Figura 1Esquema de los espacios intercelulares de sellado putativos por las molculas de unin estrecha en el epitelio de la va area superior, incluyendo clulas epiteliales, clulas M y clulas dendrticas.Go to:2. uniones estrechas en el epitelioEl epitelio de la va area de la mucosa del tracto respiratorio superior humano acta como la primera barrera fsica que protege contra las sustancias y agentes patgenos [inhalados9,10].El epitelio es una barrera altamente regulado e impermeable formada exclusivamente por uniones estrechas [9,10].Las uniones estrechas, el ms apical localizados de los complejos de unin intercelular, inhiben soluto y el flujo de agua a travs del espacio paracelular (denominan la funcin "barrera") [11,12].Tambin separan la apical de los dominios de la superficie celular basolateral para establecer la polaridad celular (llamada la funcin "barrera") [13,14].La evidencia reciente sugiere que las uniones estrechas tambin participan en mecanismos de transduccin de seales que regulan la proliferacin de clulas epiteliales, la expresin gnica, la diferenciacin y la morfognesis [15].Las uniones estrechas se forman no slo las protenas de membrana claudins, ocludina, y los atascos, pero tambin muchas protenas de membrana perifricas integrales, incluyendo las protenas de expresin PDZ andamio zonula occludens (ZO) -1, ZO-2, ZO-3, multi-PDZ molculas de protena-1 dominio (MUPP1), y asociada a la membrana guanilato quinasa con orientacin invertida-1 (MAGI) -1, MAGI-2, MAGI-3, y la polaridad celular ASIP / PAR-3, PAR-6, PALS-1 y PALS-1 asociados unin estrecha (PATJ), y las protenas no PDZ-expresin, Cingulin, symplekin, ZONAB, GEF-H1, aPKC, PP2A, unin Rab3b, Rab13, PTEN, y 7H6 [16-18].Zonula occludens-1 (ZO-1), ZO-2, y ZO-3 son miembros de la membrana asociada guanilato quinasa (MAGUK) la familia de protenas que muestra una estructura caracterstica multidominio formada por SH3, guanilato quinasa (GUK), y mltiple PDZ (PSD95-Dlg-ZO1) dominios [19].ZO-1 y ZO-2 tambin estn estrechamente relacionados con la polimerizacin de claudins [20].Tricellulin se identific por primera vez en los contactos tricelular donde hay tres clulas epiteliales y se muestra que tiene una funcin de barrera [21].Ms recientemente, receptor de lipoprotena de la liplisis estimulada (LSR) se encuentra como una protena de membrana asociada a la unin apretada tricelular y reclutas tricellulin a tricelular uniones estrechas [22].La familia de la claudina, que consta de al menos 27 miembros, es la nica responsable para la formacin de hebras de unin estrecha y tiene cuatro dominios transmembrana y dos bucles extracelulares [17,23].El primer bucle extracelular es el correceptor del virus de la hepatitis C [24] e influye en la selectividad carga paracelular [25], y el segundo bucle extracelular es el receptor deClostridium perfringensenterotoxina (CPE) [26].Adems, como claudin-4 es tambin un receptor de alta afinidad de CPE [27], CPE de longitud completa con un efecto citotxico directo y el dominio de unin a receptor C-terminal de CPE (C-CPE) sin un efecto citotxico se emplean para el tratamiento selectivo y la administracin de frmacos contra claudin-4 que expresan las clulas [28,29].Occludin, la primera protena de membrana integral descubierto de uniones estrechas, se expresa ms ubicua en las membranas basolateral apicalmost y es el marcador inmunohistoqumico ms fiable para uniones estrechas [17,30].La sobreexpresin de ocludina aumenta la funcin de barrera, indicada como un aumento de la resistencia elctrica transepitelial (TER) aumento de las clulas epiteliales de mamferos [31,32].Sin embargo, las hebras TJ se pueden formar sin ocludina en algunos tipos de clulas, incluyendo las clulas-ocludina deficiente madre embrionarias [33,34].Adems, un modelo de ratn-ocludina deficiente no muestra una perturbacin de la funcin de barrera del epitelio, aunque un complejo fenotipo fisiopatolgico se observa con retraso en el crecimiento, la inflamacin crnica y la hiperplasia del epitelio gstrico, la calcificacin en el cerebro, atrofia testicular, prdida de grnulos citoplasmticos en clulas de los conductos estriados de la glndula salival, y adelgazamiento del hueso compacto [35].Mermeladas (JAM-A, -B, -C, -4) son protenas de la superfamilia de inmunoglobulinas expresadas en uniones de las clulas epiteliales y endoteliales en clulas, as como en las superficies de los leucocitos, plaquetas y eritrocitos [36].Ellos son importantes para una variedad de procesos celulares, incluyendo el montaje apretado de unin, la transmigracin de leucocitos, la activacin de las plaquetas, la angiognesis y la unin adenovirus.La evidencia actual indica que JAM-A dimerizacin es necesaria para la regulacin funcional de la barrera [37].Go to:3. Expresin y localizacin de las molculas Tight Junction y su funcin en el epitelio de las vas respiratorias superioresin vivoein vitroSe investig la expresin y localizacin de molculas de unin estrecha y su funcin en el epitelio de las vas respiratorias superioresin vivoein vitro(Figuras(cifras22yy3)3) [38-44].

Figura 2Imagen SEM (a), la inmunotincin (b) para ocludina, imagen claudin-1 y tricellulin, y congelar-fractura (c) en la mucosa nasal humanain vivo.Microscopa electrnica de barrido (SEM) de la imagen (d), de contraste de fase (e), la inmunotincin (f) para ocludina, claudina-1 y tricellulin,...

Figura 3RT-PCR (a) para mRNAs de molculas de unin estrecha en mucosa nasal humanain vivoy dos tipos de clulas epiteliales nasales humanasin vitro(primaria y hTERT-HNECs).M, 100-bp escalera marcador de ADN;Oc, ocludina;CL, claudin.SEM imagen (b) y la inmunotincin para...En mucosa nasal humanain vivoen el que se observ que muchos cilios en la superficie, mRNAs de ocludina, JAM-A, ZO-1, ZO-2, claudin-1, -4, -7, -8, -12, -13 , -14, y tricellulin se detectan [38,41].Occludin, JAM-A, y ZO-1 se encuentran en la capa superior.Se observ Claudin-1 en las capas superiores y basal del epitelio.Se observaron Claudin-4 -7 y en todo el epitelio.En las rplicas de congelacin fractura, lneas continuas de filamentos de unin estrecha formaron redes bien desarrolladas en las membranas subapicales.Se sabe que la proliferacin y el almacenamiento de las clulas epiteliales en los cultivos primarios son muy limitadas.Introdujimos el componente cataltico de la telomerasa, el gen hTERT, en cultivos de clulas epiteliales nasales humanas primarias [39].La expresin ectpica de hTERT en las clulas epiteliales como resultado una mayor potencial de crecimiento y una vida til ms larga de las clulas.Las clulas tenan una pequea aparicin de adoquines, en las imgenes de contraste de fase.Las estructuras cilios, como un marcador de diferenciacin de las clulas epiteliales nasales, se observaron en la superficie de las clulas transfectadas con hTERT (Figura 1).Las propiedades de las clulas hTERT-transfectadas a pases fueron similares a los de las clulas en cultivos primarios [39].Investigamos uniones estrechas en hTERT-HNECs comparacin con las clulas de cultivo primario [39,40].En tanto clulas cultivadas primarias hTERT-HNECs y, mRNAs de claudin-1, -2, -4, -5, -6, -7, -8, -9, y -12, ocludina, y JAM-A se detectaron.Se observaron Claudin-1, -4, ocludina y JAM-A en clulas fronteras celulares.Las lneas continuas de filamentos de unin estrecha formaron redes bien desarrolladas en las membranas subapicales.En HNECsin vitroutilizando cultivos primarios y nuestros sistemas de cultivo establecidas, molculas de unin estrecha y la funcin de barrera se upregulated por diversos estmulos (Tabla 1).Las clulas nasales humanos hTERT-transfectadas epiteliales (hTERT-HNECs) se pueden utilizar como un modelo indispensable y estable para el estudio de la regulacin de uniones estrechas en el epitelio nasal humano.

Tabla 1Los cambios de las protenas de unin estrecha y funcin de barrera en HNECsin vitro.Go to:4. uniones estrechas de clulas M en el epitelio de las vas respiratorias superioresClulas M (clulas membranosas o micropliegues) se conocen como clulas epiteliales especializadas del epitelio del folculo-asociado (FAE), y el papel parece ser la rpida captacin de antgenos y microorganismos particulares a las clulas inmunes del folculo linfoide para inducir una efectiva respuesta inmune [45].La estructura y funcionales peculiaridades de las clulas M se observan en las diferentes especies y en diferentes sitios del tejido linfoide a lo largo del tracto digestivo y respiratorio [46].Las clulas M respiratorias actan como un tejido linfoide asociado a la nasofaringe en el tracto respiratorio superior [3].Adems, claudin-1, -3, y ZO-1 se detectan en las clulas M de epitelio intestinal asociada a folculo ratn (FAE) [47].El epitelio de las adenoides, incluyendo las clulas M, que estn especializadas en la captacin de antgenos, forma una barrera continua contra una amplia variedad de antgenos exgenos [48].Se han propuesto varios marcadores como histoqumica de lectinas y la inmunorreactividad a la vimentina, citoqueratinas, y anexina-V para identificar las clulas M en el ratn, rata, hmster, conejo, cerdo y [45,46,49-51].En la amgdala nasofarngea del caballo, GS-1 lectina B4 (Griffonia simplicifolia 1 isolectina B4) se ha utilizado como un marcador para las clulas M [52].Se inform que cytokeratin20 (CK20) podra servir como un marcador de clulas M de conejo amgdalas palatinas [53].En los seres humanos, la clusterina se expresa en las clulas M y clulas dendrticas foliculares en los sitios inductivos de tejido linfoide asociado a la mucosa humana [54].Beta-tubulina de clase II es un marcador histoqumico especfico para las clulas de las amgdalas M humanos y clulas dendrticas foliculares [55].Sin embargo, an no se han establecido marcadores universales para clulas M humanos.Se identificaron las clulas M-como el uso de un anticuerpo anti-CK20 en los tejidos adenoidea humanosin vivoein vitroy se investig la expresin de las uniones estrechas (Figura 3) [5].En el epitelio de las adenoides humanain vivo,algunas clulas-M similares, caracterizados por microvellosidades irregular, se observaron en la superficie.Algunas clulas CK20 positivas se observaron al azar en el epitelio y apareci como estructuras en forma de bolsillo.En ambas clulas CK20-positivos y negativos del epitelio de las adenoidesin vivo,ocludina, ZO-1, se observaron claudin-1, y -7.En los cultivos primarios, las clulas CK20 positivas tomaron las micropartculas fluorescentesin vitro.En ambas clulas CK20-positivos y negativos de los cultivos primariosin vitro,ocludina, ZO-1, claudin-1, y -7 fueron observados claramente en los bordes de celda.Estos resultados indican que las clulas M en las adenoides podra tomar hasta antgenos manteniendo una barrera continua.Go to:5. uniones estrechas de clulas dendrticas en el epitelio de las vas respiratorias superioresEsta funcin requiere controladores de dominio, las clulas presentadoras de antgeno profesionales que actan como centinelas perifricas especializadas en la captacin, procesamiento y presentacin de material antignico.Rescigno et al.descubierto un nuevo mecanismo para la captacin de patgenos en la mucosa por el cual los pases en desarrollo abren las uniones estrechas entre las clulas epiteliales y enviar dendritas fuera del epitelio de probar directamente el patgeno.DCs expresan protenas de unin estrecha tales como ocludina, claudina-1, ZO-1 y para preservar la integridad de la barrera epitelial [56].La poblacin DC epitelial expresa altos niveles de la clula de Langerhans (LC) langerina marcador y las protenas de unin apretados claudin-1, -7, y ZO-2 [57].Se detecta Claudin-1 en CD207+CL murinos que residan en la epidermis, pero no en otros pases en desarrollo de la piel [58].En humanos THP-1 monocitos, mRNAs de ocludina, tricellulin, JAM-A, ZO-1, ZO-2, y claudin -4, -7, -8, -9 y pueden ser detectados.En DC maduras que tienen dendritas alargadas por el tratamiento con IL-4, GM-CSF,TNF-,y ionomicina, el ARNm y la protena de JAM-A se aument significativamente en comparacin con los monocitos [59].Hemos informado anteriormente de que en XS52 ratn DC, claudina-1, -3, -4, -6, -7, -8, y ocludina, se detectan y se induce la claudina-7 a travs de una ruta deNF-B por linfopoyetina estromal tmica ( TSLP) y ligandos de Toll-like receptor 2 (TLR2), TLR4, o TLR7 / 8 [60].En la mucosa nasal humana de la rinitis alrgica, HLA-DR, y CD11c positivo DCs expresan la protena de unin apretada claudin-1 y penetran ms all de la ocludina protena de unin estrecha apicalmost para minimizar el aumento de la permeabilidad de la barrera epitelial (Figura 3) [38,61].Go to:6. TLR3 ligando reducido uniones estrechas en el epitelio de las vas respiratorias superioresTLRs son un componente del sistema inmune innato [62,63].Permiten el anfitrin de reconocer un gran nmero de patrones moleculares asociados a patgenos tales como los de lipopolisacridos bacterianos (LPS), ARN viral, que contiene CpG de ADN, y la flagelina, entre otros [64].TLRs tambin se expresan en el epitelio de las vas respiratorias superiores y pueden desempear un papel vital en los resultados inmunolgicos en estos tejidos, que producen citocinas proinflamatorias y quimiocinas sobre ligadura [65].En el epitelio nasal humanoin vivoein vitro,para todos los mRNAs 10 TLRs humanos conocidos son detectadosin vivoein vitro[66].TLR3 reconoce viral de doble cadena (dsRNA) y su cido poliinosnico policitidlico anlogo sinttico (poli (I: C)) y estimula la respuesta inmune innata [67].En cultivos primarios de clulas epiteliales humanas que expresa adenoides mRNAs de TLR1, 2, 3, 4, 6, 7, y 10, la estimulacin por el TLR3 ligando poli (I: C), la produccin inducida de TNF no sloy IL-8 sino que tambin redujo JAM-A expresin.Los cambios fueron regulados a travs de distintas vas de transduccin de seales [44].El control de las vas de sealizacin mediadas por TLR3 en el epitelio nasal humano puede ser importante no slo en la infeccin por dsRNA viral sino tambin en las enfermedades autoinmunes causadas por dsRNA endgeno liberado de las clulas necrticas.Go to:7. TSLP inducida uniones estrechas en el epitelio de las vas respiratorias superioresEl factor de TSLP epitelial derivado es una citocina IL-7-como que induce potentemente la desregulacin de las respuestas Th2, una caracterstica distintiva de enfermedades inflamatorias alrgicas tales como asma, dermatitis atpica, y rinitis alrgica [42,68-70].CD11c+DCs TSLP estimulada inducir a las clulas T CD4+vrgenes de diferenciarse en clulas Th2 que producen IL-4, IL-5, IL-13, yTNF-[69].Encontramos una alta expresin de TSLP en el epitelio de los pacientes con rinitis alrgica con el reclutamiento y la infiltracin de CD11c+pases en desarrollo [42].In vitro,TSLP se produjo significativamente en HNECs mediante tratamiento con un ligando de TLR2Pam3Cys-Ser-(Lys)4y una mezcla de IL-1yTNF-.El tratamiento con TSLP potenciar rpidamente la funcin de barrera de HNECs cultivadas junto con un aumento de las protenas de unin estrecha claudin-1, -4, -7, y ocludina.La TSLP epitelial derivado nasal no slo activa DCs pero tambin conserva la barrera epitelial a travs de la regulacin al alza de las protenas de unin estrecha para regular la sensibilizacin de antgeno durante la etapa temprana de la rinitis alrgica.Go to:8. Los efectos de linfocitos en Tight Junctional barrera de las vas respiratorias superioresLa rinosinusitis crnica (CRS) se caracteriza por la inflamacin de la mucosa que involucra tanto la cavidad nasal y senos paranasales [71].Los pacientes con rinosinusitis crnica y plipos nasales tienen un tipo Th2 con predominio de la inflamacin [72].El epitelio fugas est presentein vivoein vitro enpacientes con regulacin a la baja de claudin-4 y mRNA ocludina en las muestras de biopsia [73].Adems, la funcin de barrera en las clulas epiteliales primarias humanas se sinonasales disminuido por la citoquinaIFN-Th1 y Th2 de citoquinas IL-4, mientras que Th17 citoquina no tiene ningn efecto [73].Por otro lado, los linfocitos B que son responsables de la produccin de IgE juegan un papel crucial en las vas respiratorias alrgicas e inflamatorias de la parte superior e inferior [74].Los plipos nasales se han incrementado el nmero de eosinfilos activados, mastocitos, e IgE [75].Nasal epitelio plipo a partir de muestras de tejido humano ha reducido claudin-1 a lo largo del aspecto basal de la capa de la mucosa, mientras que ocludina se reduce en las zonas epiteliales apical y basal [76].Sin embargo, la relacin cerrada entre las clulas B y de barrera de la unin estrecha permanece todava desconocida.Go to:9. RSV inducida uniones estrechas en el epitelio de las vas respiratorias superioresEl epitelio de la va area, que tiene una barrera bien desarrollado regulado por uniones estrechas, es la primera lnea de defensa durante la infeccin por virus respiratorio.Adems, tambin se sabe que las uniones estrechas incluyen objetivos o receptores de virus tales como claudin-1 y ocludina como correceptores de HCV, JAM como un receptor de reovirus, y CAR como un coxsackie y adenovirus receptor [77].En las clulas epiteliales nasales humanas, la infeccin por rinovirus disminuye la expresin de molculas de unin estrecha ZO-1, ocludina y claudina-1 y la reduccin de la funcin de barrera utilizando cultivos primarios [78].Por otra parte, el virus sincitial respiratorio (RSV) es la principal causa de la bronquitis, el asma y la enfermedad del tracto respiratorio inferior grave en lactantes y nios pequeos [79].Para investigar los mecanismos detallados de la replicacin y la gemacin de RSV en clulas humanas epiteliales nasales (HNECs) y las respuestas de las clulas epiteliales incluyendo uniones estrechas, se estableci un modelo de RSV infectadas usando hTERT-transfectadas HNECs [80].Cuando los HNECs fueron infectadas con RSV a MOI 1, se detect la expresin de RSV / G-protenas en la mayora de las clulas por inmunocitoqumica usando un anticuerpo especfico (Figura 4).Hemos encontrado que la expresin, la estructura y la funcin de barrera de molculas de unin estrecha Claudin-4 y ocludina se indujeron marcadamente junto con la produccin de citocinas proinflamatorias IL-8 y TNFen HNECs despus de la infeccin RSV, y la induccin de molculas de unin estrecha posiblemente contribuy a brotacin de VRS (Figura 4) [80].Sin embargo, la cada de claudin-4 y ocludina por siRNAs no afect a la replicacin de RSV.La replicacin y la brotacin de VRS y las respuestas de las clulas epiteliales en HNECs fueron regulados a travs de un PKC/ HIF-1/NF-B va [80].El control de esta va en HNECs puede ser til no slo para la prevencin de la replicacin y la gemacin de RSV, sino tambin en la terapia para la patognesis respiratoria inducida por VRS.

Figura 4(A) contraste de fase, la inmunotincin para RSV / G-protena y claudin-4, y la imagen de congelacin-fractura en las clulas epiteliales nasales humanasin vitro(hTERT-HNECs) en 24h despus de la infeccin por el VRS.Las barras de escala: barras blancas = 20m, barras negras...Go to:10. Efectos de la C-CPE va Claudins en el epitelio de las vas respiratorias superioresMedio fragmento COOH-terminal de CPE (C-CPE) es una molcula no txica que interrumpe la funcin de barrera de unin apretada y mejora la absorcin celular [81].Ms recientemente, mediante el cribado de claudina aglutinantes de una biblioteca de C-CPE mutante se presentan mediante el uso de baculovirus brotado claudina se presentan, un mutante C-CPE llamado M19, que une a claudin-1, -2, -4, y -5, est hecho [82].En nuestro estudio reciente, cuando HNECs fueron tratados con el tipo salvaje y m19 de C-CPE, la funcin de barrera se redujo notablemente a la concentracin txica de C-CPE y se recuper sin C-CPE (datos personales).Go to:11. ConclusionesLa barrera de la unin estrecha epitelial del epitelio de la va area superior, incluyendo las clulas M y DCS, se mantiene de forma estable a travs de la regulacin de las molculas de unin estrecha expresadas en las clulas epiteliales, clulas M, y DCS.Varios antgenos se muestrean, transportados y entregados a los linfocitos a travs de las clulas mientras se mantiene la integridad de la barrera (Figura 1).Claudin-4 se conoce como un gen especfico de las clulas de roedores M y la alta capacidad transcittica de las clulas M es un objetivo atractivo para vacunas y terapias [mucosa entregados83,84].Adems, C-CPE que es una pequea molcula no txica que interrumpe apretado funcin de barrera de unin se puede utilizar como vehculo para otras sustancias a claudin-positivo clulas especficos [81].Estos pueden promover el desarrollo de una nueva estrategia para el sistema de administracin de frmacos a travs de claudins dirigidos en el epitelio de la va area superior.Uniones estrechas tricelular se forman en la convergencia de las uniones estrechas bicelular donde tres clulas epiteliales se renen en epitelios polarizada, y tricellulin fue el primer marcador de la unin estrecha tricelular identificado en clulas epiteliales [21].En varios pases en desarrollo, incluidas las clulas humanas THP-1, clulas XS52 ratn, y CL epidrmicas, tambin se detecta tricellulin [59,60].La unin estrecha tricelular puede ser un buen punto de penetracin para los pases en desarrollo en el epitelio [85].Ms recientemente, se ha informado de que los objetivosde Shigellatricelular uniones incluyendo tricellulin para difundir entre las clulas a travs de no cannica dependiente de clatrina endoctica va [86].Por lo tanto, el estudio adicional de tricellulin en las clulas epiteliales y DCS de epitelio de la va area superior puede ser importante para prevenir la invasin de agentes ambientales tales como los alrgenos inhalados y patgenos.Tomados en conjunto, estos estudios de uniones estrechas en el epitelio de la va area superior deben proporcionar nuevos conocimientos no slo en condiciones patolgicas, sino tambin en el contexto de las nuevas vacunas y terapias contra enfermedades infecciosas e inflamatorias de la mucosa en las vas respiratorias superiores.Go to:AgradecimientosLos autores agradecen al Dr. Masuo Kondoh (Universidad de Osaka) para C-CPE.Este trabajo fue apoyado por el programa para el desarrollo del sistema de apoyo para la mejora de la educacin y la investigacin, el Ministerio de Educacin, Cultura, Deportes Ciencia y Tecnologa, y el Ministerio de Salud, Trabajo y Bienestar de Japn.