PRÁCTICA 5: RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES. Petrifilm Las placas Petrifilm para Coliformes contienen un indicador rojo que colorea a todas las colonias y la película superior atrapa el gas producido por los coliformes. Los coliformes producen colonias de color rojo asociadas con las burbujas de gas. Los no coliformes producen colonias rojas las cuales no están asociadas con las burbujas de gas. Algunas veces el gas desorganiza las colonias y hace que éstas contorneen la burbuja. Materiales þ Frascos y tubos con diluciones de la muestra þ Incubadora a 30 - 35°C þ Pipetas de 1 ml estériles þ Placas Petrifilm para Recuento de Coliformes Procedimiento

Seleccionar por lo menos 3 diluciones de la muestra preparadas (según el capítulo Homogenización y diluciones)

Colocar la placa Petrifilm en una superficie plana. Levantar el film superior.

Con una pipeta perpendicular a la placa Petrifilm colocar 1 ml de muestra en el centro del film inferior

Bajar el film superior con cuidado evitando introducir burbujas de aire, no dejarlo caer

Con la cara lisa hacia abajo, colocar el aplicador en el film superior sobre el inoculo.

Con cuidado ejercer una presión sobre el aplicador para repartir el inoculo sobre el área circular. No girar ni deslizar el aplicador.

Levantar el aplicador. Esperar un minuto a que se solidifique el gel.

Repetir el proceso con las diferentes diluciones

Incubar las placas Petrifilm cara arriba en pilas de hasta 20 placas

Leer las placas Petrifilm en un contador de colonias. Rango 15-150 UFC/ml

Interpretar los resultados. (Se adjunta guía de interpretación de resultados para el Recuento de Coliformes)

Nota: Según las normas locales de incubación para tiempo y temperatura: 30 a 35ºC 1ºC por

24 2 horas (normas AFNOR, normas IDF) 32 o 35ºC 1ºC por 24 horas 2 horas (métodos estándar para pruebas de productos lácteos, normatizados por la AOAC).

Fuente: 3M Petrifilm, http://www.3m.com/cms/mx/es/0-253/kRecrFS/view.html, Consultado en línea: 15/02/2012